Metodologia para desenvolvimento de tabelas de vida para insetos sésseis no campo utilizando a mosca branca, Bemisia tabaci, em algodão como um modelo de sistema

O objetivo geral dessa abordagem de tabela de vida baseada em coorte é quantificar diretamente a taxa de mortalidade de uma população de insetos no campo e identificar a fonte de mortalidade. Esse método pode nos ajudar a responder a perguntas-chave na dinâmica populacional, como entender os fatores que contribuem para a mortalidade nas populações e, finalmente, a taxa na qual as populações crescem e diminuem. A principal vantagem dessa técnica é que ela mede diretamente as fontes e taxas de mortalidade por causas múltiplas em condições realistas no campo.

Tivemos a ideia desse método pela primeira vez quando aprendemos que o inseto é imóvel em seus estágios imaturos. Isso nos permite seguir diretamente o destino de insetos individuais. Demonstrando o procedimento estarão Isadora Bordini, uma estudante de pós-graduação, e Francisco Bojorquez, um técnico de laboratório.

Prepare tabelas de vida a qualquer momento durante o crescimento da cultura, uma vez que os insetos estejam presentes. A escolha de quando iniciar os estudos dependerá das metas e objetivos da pesquisa. Selecione duas fileiras de culturas perto do centro da parcela para minimizar os efeitos de borda das parcelas vizinhas ou áreas não cultivadas.

Marque a cabeça de cada linha com uma bandeira de arame ou uma estaca de madeira. Escolha um local de amostragem de três a quatro metros na linha. Para simplificar as observações posteriores, selecione uma linha para estabelecer coortes de ovos e a segunda para estabelecer coortes de ninfas.

Uma coorte de óvulos deve incluir pelo menos 50 ovos. Como consequência do comportamento e do crescimento das plantas, os estágios de vida de Bemisia tabaci são geralmente distribuídos verticalmente no dossel com os ovos próximos ao topo e os estágios ninfais progressivamente mais velhos abaixo. Use uma lente de mão 8x para procurar ovos recém-postos na parte inferior das folhas.

Idealmente, a lente da mão deve ter um orifício na lateral por onde a caneta possa passar. Encontre uma folha com ovos para cada planta no estudo. Em seguida, use uma lente de 15x para fazer um exame mais cuidadoso.

Os ovos escurecem para uma cor bronzeada à medida que amadurecem, de modo que os ovos frescos terão uma coloração branca brilhante e se destacarão dos ovos mais velhos. O aspecto mais crítico deste protocolo é identificar corretamente os ovos recém-postos e as ninfas de primeiro ínstar recém-estabelecidas. É vital que as observações da tabela de vida comecem no início de cada estágio da vida para obter resultados precisos.

Depois de encontrar um ovo, use um marcador permanente preto de ponta ultrafina não tóxico para desenhar um pequeno círculo ao redor do ovo. Mantenha o círculo pequeno para que nenhum outro ovo seja colocado dentro dele. Na mesma folha, marque até quatro ovos nos quatro setores diferentes.

Em uma folha de algodão, existem quatro setores divididos pelas principais nervuras das folhas. Selecione apenas um ovo por setor de folha. Identifique a folha marcada usando uma pequena etiqueta de papelão leve ao redor do pecíolo da folha com anotação para o número da parcela ou tratamento, dependendo do projeto experimental.

Em seguida, anexe uma bandeira altamente visível perto do topo da planta. Agora, passe a encontrar ovos na próxima planta mais adiante na linha. Estabeleça a coorte em um único dia.

Em condições normais de verão no Arizona, as folhas estarão prontas para serem coletadas em oito a 10 dias porque os ovos eclodem em cinco a sete dias. Ajuste o tempo de coleta para garantir que todos os ovos saudáveis tenham eclodido. No campo, os ovos são muito pequenos para avaliar claramente a mortalidade e as causas de morte in situ.

Portanto, as causas de mortalidade, como deslocamento, predação ou inviabilidade, são determinadas em laboratório sob um microscópio de dissecação. É fundamental identificar corretamente a causa da morte do ovo ou ninfa, pois isso afeta as inferências ecológicas que podem ser feitas sobre os fatores que afetam o crescimento e a regulação da população. Se o ovo estiver faltando devido ao clima ou à predação da mastigação, ele foi desalojado.

Se um ovo foi transformado em um córion colapsado, isso é classificado como predação. Os ovos chocados também parecem colapsados, mas têm uma fenda vertical no córion que pode ser encontrada usando um pequeno alfinete. Se um ovo não eclodiu, categorize-o como inviável.

Use uma lente de mão 8x para procurar ninfas de primeiro ínstar recém-instaladas na parte inferior das folhas. Essas folhas estarão cerca de três a cinco nós abaixo do topo de uma planta de algodão. Quando alguma ninfa for encontrada, verifique seu estágio usando uma lente de 15x.

Encontre pelo menos 50 ninfas para cada estudo. Selecione plantas que estejam bem distribuídas ao longo da linha e estabeleça a coorte em um único dia. Como antes, desenhe um pequeno círculo ao redor da ninfa identificada.

Marque até quatro ninfas por folha cada em um setor diferente e depois prossiga para a próxima planta. Esteja ciente de que as ninfas de primeiro ínstar recém-nascidas podem se mover vários centímetros antes de se estabelecerem e isso pode levar algumas horas. As ninfas estabelecidas podem ser distinguidas das ninfas rastejantes porque são imóveis, são mais pressionadas contra a folha e têm uma cor âmbar mais translúcida.

As ninfas mais velhas do primeiro ínstar parecem inchadas e túrgidas à medida que se aproximam da muda. Marque uma etiqueta com anotação para o número da parcela ou tratamento e prenda-a no pecíolo da folha. Em seguida, anexe uma bandeira altamente visível perto do topo da planta.

Faça anotações detalhadas da posição da ninfa, incluindo informações do setor foliar. Depois de uma ou duas horas de identificação de ninfas, verifique-as novamente para garantir que as ninfas rastejantes não foram circuladas. Observe as ninfas assentadas conforme necessário.

Um a dois dias após o estabelecimento da coorte, use uma lente de 15x para avaliar o desenvolvimento de ninfas e atribuir uma causa de mortalidade se estiver morta. Faça observações pelo menos três vezes por semana ou em dias alternados. A morte é caracterizada como deslocamento, parasitismo, predação ou desconhecido, dependendo do ínstar.

Uma tábua de vida típica de uma coorte fornece as taxas marginais de mortalidade para cada fator em cada estágio da vida. Ao converter essas taxas em valores K, a mortalidade específica do estágio em todos os fatores e a mortalidade específica do fator em todos os estágios podem ser facilmente estimadas, assim como a mortalidade geracional total. Usando essas técnicas em um estudo de três anos, descobriu-se que as taxas marginais de predação por predadores sugadores diminuíram significativamente quando inseticidas de amplo espectro foram aplicados.

Os padrões de mortalidade insubstituível foram semelhantes. Normalmente, a predação forneceu o mais alto nível de mortalidade insubstituível, mas isso diminuiu significativamente com o uso de inseticidas. O parasitismo também forneceu baixos níveis de mortalidade insubstituível.

A análise fatorial-chave feita a partir dos dados em quatro parcelas replicadas foi combinada em um total de nove coortes ao longo do estudo de três anos. Em última análise, a predação foi mais intimamente associada a mudanças na mortalidade geracional. Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em cerca de 30 minutos por parcela, mas isso pode variar muito dependendo da densidade de insetos.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de minimizar o estresse na folha que está sendo manipulada para que a qualidade da planta não seja alterada. Além disso, um único observador deve ser usado por réplica para bloquear os efeitos do observador e todos os observadores devem se reunir com frequência para aumentar a uniformidade dos critérios observacionais. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como montar uma tabela de vida para um inseto imóvel no campo, incluindo localizar, marcar e observar insetos para determinar as causas da morte.

Não se esqueça de que trabalhar no campo por longos períodos, especialmente durante os meses de verão, pode ser difícil e que roupas e hidratação adequadas são necessárias para realizar o trabalho com segurança.