Estabelecimento de um mímico valioso de doença de Alzheimer em modelo Animal de rato por injeção Intracerebroventricular de proteína Beta amiloide compostos

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo das doenças neurodegenerativas, como a doença de Alzheimer. A principal vantagem desta técnica é que ela mimetiza a doença de Alzheimer no modelo animal de rato por injeção intracerebroventricular de A-beta 25 a 35, combinada com tricloreto de alumínio e fator de crescimento transformador humano recombinante beta um. Ele também fornece um protocolo experimental rápido e relativamente simples com uma alta taxa de sobrevivência animal, alta taxa de sucesso do modelo, bem como uma alta taxa de duplicação, que se mostrou mais econômica.

As implicações dessa técnica se estendem à eficácia da triagem do medicamento contra a DA, pois esse modelo animal possui deficiências de memória e distúrbios neuronais próximos aos estados dos pacientes com DA. Demonstrando o procedimento estará Cheng Jianjun, um técnico do meu laboratório. Em um rato anestesiado, comece cortando o pelo no vértice da cabeça com uma tesoura cirúrgica e desinfete com iodóforo.

Em seguida, faça uma incisão na pele da cabeça ao longo da calvária longitudinal mediana com bisturias cirúrgicas e tesouras. Separe o tecido subcutâneo e a fáscia, limpe a calvária do crânio com peróxido de hidrogênio a 0,3% e marque o bregma com uma caneta marcadora. Em seguida, marque três pontos, o núcleo talâmico anterodorsal para injeção de RHTGF beta um e fixação de um parafuso, o ventrículo lateral, ou VE, área para injeção de A-beta 25-35 e AICI3 e, por último, o segundo local de fixação do parafuso.

Faça suavemente três furos de um milímetro de diâmetro com uma broca óssea flexível nos três pontos marcados no crânio. Pare o sangramento e limpe a superfície do crânio repetidamente com algodão seco estéril. Em seguida, insira uma agulha ligada à bomba de microinjeção no cérebro a 4,2 milímetros de profundidade e injete suavemente um microlitro RHTGF beta one na área de anúncio.

Manter a microinjeção dois minutos após a injeção. Em seguida, puxe-o lentamente para fora. Fixe os dois parafusos no crânio, designados nos pontos marcados anteriormente, com uma pequena chave de fenda.

Após a colocação do parafuso, monte o sistema de implantação da cânula inserindo primeiro a cânula fictícia na cânula guia após a desinfecção com imersão em álcool a 75% por 24 horas. Em seguida, insira a cânula guia do tubo de aço inoxidável no cérebro a 4,6 milímetros na área do VE através do orifício do crânio, com a ajuda de um porta-cânula no aparelho estereotáxico do rato. Em seguida, misture o material da base da prótese com água da base da prótese a uma proporção de 1,5 gramas por mililitros.

Coloque a pasta para cobrir a cânula guia pedestal de plástico e dois parafusos para imobilizar a cânula guia. Cubra toda a incisão da pele para evitar infecção da pele. No dia seguinte, retire a cânula fictícia e insira a cânula interna na cânula guia.

Aperte o parafuso de fixação para imobilizar a cânula interna. Defina o tubo de polietileno que liga a bomba de microinjeção à cânula interna e regule a velocidade de injeção para um microlitro por minuto. Microinjete o A-beta 25-35 no LV.Aguarde cinco minutos após terminar a injeção e retire suavemente a cânula interna.

Em seguida, insira a cânula fictícia novamente na cânula guia. No 15º dia pós-operatório, desmonte o sistema de implantação da cânula removendo o material da base da prótese sólida com tesoura cirúrgica e pinça e desinfetando a ferida com iodóforo. Finalmente, preencha o orifício do crânio com cimento ósseo e suture a pele com um método simples de sutura interrompida.

Comece escurecendo a água da piscina com um pouco de corante alimentício preto. Mantenha a profundidade da água em 31,5 centímetros e a temperatura em 23 graus Celsius para mais ou para menos. Em seguida, coloque uma plataforma de plexiglass transparente circular de 1,5 centímetro abaixo da superfície da água.

Em seguida, divida o pool em quatro quadrantes iguais por linhas imaginárias para coleta de dados descritivos. Coloque a plataforma escondida no primeiro quadrante, ou Q, do labirinto aquático. Finalmente, capture os comportamentos de natação de ratos por meio de uma câmera de vídeo, sobre o labirinto aquático vinculado a um software analítico gráfico baseado em computador.

Esses resultados indicam que o grupo de ratos operados de forma simulada sempre nadou livremente, enquanto os ratos do grupo tratados com A-beta composto sempre nadaram ao redor do perímetro da piscina em natação adaptativa no labirinto aquático de Morris. Ao longo dos quatro dias de triagem para ratos modelo de comprometimento da memória, todos os ratos tiveram tempos progressivamente declinantes para encontrar a plataforma oculta. Além disso, as latências do grupo tratado com A-beta composto para encontrar a plataforma oculta foram significativamente mais longas do que as do grupo operado de forma simulada, demonstrando que o A-beta composto pode elevar o comprometimento do reaprendizado da memória em ratos.

No teste de retenção de memória de um dia, o grupo composto tratado com A-beta levou menos tempo de natação, distância de natação e número de cruzamentos em 60 segundos, em comparação com os do grupo operado de forma simulada. Por fim, além das alterações patológicas, o número de neurônios também foi significativamente reduzido no hipocampo e no córtex cerebral no grupo tratado com A-beta composto em comparação com o grupo operado de forma simulada. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em 20 a 30 minutos se for executada corretamente.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de evitar que a cânula guiada caia do parafuso cerebral. Seguindo este procedimento, outros métodos, como o teste do labirinto, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais, como se o modelo AD imitado foi bem-sucedido. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo da neurociência explorarem doenças neurodegenerativas in vivo.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como configurar modelos animais de imitação de DA bem-sucedidos por meio de injeção intracerebroventricular de A-beta 25 a 35 combinada com tricloreto de alumínio e fator de crescimento transformador humano recombinante beta um em ratos. Não se esqueça de que trabalhar com polimetilmetacrilato pode ser extremamente perigoso, e precauções como o uso de máscaras e luvas devem sempre ser tomadas ao realizar este procedimento.