Name: Etapas de preparação para medição de reatividade no Mouse arteríolas retina Ex Vivo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: Aprenda a medir a reatividade arterial em arteríolas retinianas de camundongos usando microscopia de vídeo ex vivo. Este método de alta resolução auxilia na investigação da fisiopatologia de doenças oculares.

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Este trabalho foi apoiado por concessões do und Ernst Berta Grimmke Stiftung e da Deutsche Ophthalmologische Gesellschaft (cão).

Os procedimentos experimentais deste estudo foram aprovados pelo Animal conta Comissão de Renânia-Palatinado, Alemanha. Cuidados com animais em conformidade com as orientações institucionais e a associação para pesquisa em visão e oftalmologia (ARVO) instrução para o uso de animais em oftalmologia e visão pesquisa. Animais foram tratados de acordo com a directiva da União Europeia 2010/63/UE para experiências em animais. Masculinos camundongos C57BL/6J (The Jackson Laboratory, Porto da barra, ME, EUA), com 3-4 meses de idade foram utilizados para os experimentos. Os animais estavam alojados em condições normais (temperatura de 23 ± 2 ° C, umidade gama 55 ± 10% e 12 h ciclos de claro/escuro) e tinham acesso ao mouse padrão chow e água ad libitum.
1. isolamento da Retina do rato
<ol><li>Coloque os instrumentos de dissecção na mesa de preparação e verificar se todos os instrumentos são completos para permitir uma rápida preparação.</li>
	<li>Sacrifica o mouse por inalação de CO2 .</li>
	<li>Decapitar o mouse com uma tesoura de aço, corte sagitally o crânio em duas metades, usando o mesmo par de tesouras e retire a pele e o cérebro usando tesouras de olho (Figura 1).</li>
	<li>Corte o osso do crânio para deixar somente o osso orbital usando tesouras de olho.</li>
	<li>Transferi a órbita em um prato de dissecação com gelada tampão Krebs-Henseleit.</li>
	<li>Mantenha o prato de dissecação no gelo ou altere o buffer de cada 10 min.</li>
	<li>Corte o osso orbital usando tesouras de olho e remova cuidadosamente o globo de olho, juntamente com o tecido orbital usando pinças de precisão 4 tipo e estudante Vannas para primavera (Figura 2).</li>
	<li>Remova cuidadosamente a glândula Harderian, tecido conjuntivo e os músculos extraoculares usando pinças de precisão 5 tipo e Vannas para Capsulotomia, tomando cuidado para não danificar o principal ramo da artéria oftálmica.</li>
	<li>Ligate orbitais ramos da artéria oftálmica e, eventualmente, a extremidade proximal do principal ramo da artéria oftálmica usando suturas de Nylon 10-0 (Figura 3).</li>
	<li>Transferi o globo de olho em uma placa de Petri contendo etanol a 70% para 10 s usando tipo 4 pinças de precisão. Coloque o prato de dissecação do globo do olho e substituir o buffer com solução de Krebs fresca. A córnea aparecerá esbranquiçada após exposição ao etanol.</li>
	<li>Perfurar a córnea periférica com uma agulha de 30 calibre e dissecar a córnea usando Vannas para Capsulotomia. Cortar o tecido da íris suavemente, coloque uma ponta afiada das Vannas para Capsulotomia entre a coroide e retina e cortou a coroide e a esclera. Deixe algum tecido scleral em torno do nervo óptico (Figura 4).</li>
</ol>2. montagem da Retina na câmara de perfusão
Nota: A câmara de perfusão utilizada para experimentos de arteríola retinal é feito em casa. Consiste em um reservatório transparente com um tubo dentro e vazão (Figura 5). Uma extremidade de um tubo de silicone está colada ao fundo da câmara com adesivo de histoacryl e a outra extremidade anexado a uma torneira de três vias. Conecte uma seringa com solução tampão de Krebs fresco para a torneira de três vias e preencher o tubo com buffer.
<ol><li>Leve uma micropipeta de vidro com um porta-agulha e empurre-a para a extremidade do tubo na parte inferior da câmara de perfusão. Então quebre a ponta da micropipeta com tesouras tipo 4 para obter uma gorjeta de 100 µm de diâmetro.</li>
	<li>Concentre-se na ponta da micropipeta a e eliminá-la através da seringa conectada ao tubo. Cuide-se que o capilar não é obstruído por detritos. Em caso de oclusão, removê-lo, lave o tubo e inserir mais uma micropipeta.</li>
	<li>Encha a câmara de perfusão com frio tampão Krebs e colocar a câmara sob um microscópio estéreo.</li>
	<li>Coloque uma plataforma de plástico transparente para a câmara de perfusão. Esta plataforma tem um recuo de 1,8 mm de largura para o nervo óptico e artéria oftálmica e é colocada em dois fios de aço de diâmetro de 1,6 mm. Em seguida, coloque um anel de aço inoxidável de diâmetro 2,8 mm e 4,0 mm diâmetro externo para a plataforma.</li>
	<li>Transferi a retina com o nervo óptico e artéria oftálmica anexada da câmara de dissecação na câmara de perfusão com extremo cuidado, usando uma colher. Este passo é importante para evitar a potencial alongamento dos tecidos, como pode ser prejudicial para o experimento.</li>
	<li>Cortar a parte suturada da extremidade proximal da artéria oftálmica, coloque duas alças pré-formadas de sutura de nylon 10-0 para a micropipeta e Canule a artéria oftálmica com a micropipeta. Amarrar a artéria para a micropipeta (Figura 6) e coloque a retina para a plataforma transparente usando pinças-multa-ponto.</li>
	<li>Delicadamente te abrir a capsula de lente anterior com duas pinças de ponta fina, retire a lente e cortar a capsula de lente inteira usando micro-tesouras.</li>
	<li>Posteriormente, fazer quatro incisões radiais na retina metade a distância entre a pars plana para o nervo óptico e coloque um anel de aço inoxidável na retina para corrigi-lo para o fundo. A retina está agora pronta para o experimento (Figura 7).</li>
</ol>3. preparação de arteríolas da retina para o experimento
<ol><li>Coloque a câmara de perfusão sob um microscópio de luz. O objetivo é uma lente de objetiva de imersão de água X 100.</li>
	<li>Conectar as duas tubulações para em - e out - flow para uma bomba pericíclica e circulam na câmara com tampão Krebs oxigenado com 95% O2 e carbonatadas com 5% CO2 a 37 ° C. Use uma taxa de fluxo entre 100 e 120 mL/min.</li>
	<li>Conecte o tubo de silicone, que é conectado com a micropipeta, um reservatório do silicone mangueira através de uma torneira de três vias. Em seguida, encher o reservatório com tampão Krebs para uma altura correspondente a 50 mm Hg, mas não abra a torneira de três vias ainda.</li>
	<li>Olhe através dos objectivos do microscópio e foco na superfície da retina. Busca de vasos sanguíneos ou células vermelhas do sangue. É possível que os vasos sanguíneos são completamente recolhidos, às vezes apenas que algumas células vermelhas do sangue são visíveis.</li>
	<li>Quando um vaso sanguíneo encontra-se, concentre-se nele e abra a torneira de três vias. O diâmetro do vaso deve aumentar imediatamente e os glóbulos vermelhos também mover centrifugamente, se for uma arteríola, ou centripetamente em caso de uma Vénula. As arteríolas são menores em diâmetro, em comparação com vênulas da mesma ordem.</li>
	<li>Uma vez que encontra-se um vaso sanguíneo com uma parede bem visível, pode ser empregado para experiências após um período de equilíbrio de 30 min (Figura 8). Durante o período de equilíbrio, as arteríolas desenvolvem apenas fraco tom intrínseco, resultando em menos de 10% de redução de diâmetro luminal.</li>
</ol>4. realizando o experimento
<ol><li>Teste a viabilidade dos navios com o tromboxano mimética 9,11-dideoxy-9, 11α-methanoepoxy prostaglandina F2α (U46619), adicionando-o para a solução de banho. Este agente contrai as arteríolas retina do rato por cerca de 50% do diâmetro de repouso em concentrações ≥ 10-6 M.</li>
	<li>Uma vez que o navio está confirmado viável, lave o agonista fora da banheira pela bomba de circulação e fornecer fresco tampão Krebs para o banho.</li>
</ol>

<ol><li>Toda, N., Nakanishi-Toda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide%3A+ocular+blood+flow%2C+glaucoma%2C+and+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide: ocular blood flow, glaucoma, and diabetic retinopathy.</a> Prog Retin Eye Res. 26 (3), 205-238 (2007).</li>
<li>Schuster, A. K., Fischer, J. E., Vossmerbaeumer, C., Vossmerbaeumer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography-based+retinal+vessel+analysis+for+the+evaluation+of+hypertensive+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography-based retinal vessel analysis for the evaluation of hypertensive vasculopathy.</a> Acta Ophthalmol. 93 (2), e148-e153 (2015).</li>
<li>Cherecheanu, A. P., Garhofer, G., Schmidl, D., Werkmeister, R., Schmetterer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+perfusion+pressure+and+ocular+blood+flow+in+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ocular perfusion pressure and ocular blood flow in glaucoma.</a> Curr Opin Pharmacol. 13 (1), 36-42 (2013).</li>
<li>Faraci, F. M., Sigmund, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+biology+in+genetically+altered+mice+%3A+smaller+vessels%2C+bigger+insight%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Vascular biology in genetically altered mice : smaller vessels, bigger insight.</a> Circ Res. 85 (12), 1214-1225 (1999).</li>
<li>Kornfield, T. E., Newman, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+Retinal+Blood+Flow+Using+Fluorescently+Labeled+Red+Blood+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Measurement of Retinal Blood Flow Using Fluorescently Labeled Red Blood Cells.</a> eNeuro. 2 (2), (2015).</li>
<li>Guevara-Torres, A., Joseph, A., Schallek, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label+free+measurement+of+retinal+blood+cell+flux%2C+velocity%2C+hematocrit+and+capillary+width+in+the+living+mouse+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Label free measurement of retinal blood cell flux, velocity, hematocrit and capillary width in the living mouse eye.</a> Biomed Opt Express. 7 (10), 4229-4249 (2016).</li>
<li>Schallek, J., Geng, Y., Nguyen, H., Williams, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+and+topography+of+retinal+pericytes+in+the+living+mouse+retina+using+in+vivo+adaptive+optics+imaging+and+ex+vivo+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Morphology and topography of retinal pericytes in the living mouse retina using in vivo adaptive optics imaging and ex vivo characterization.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (13), 8237-8250 (2013).</li>
<li>Gericke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtype+mediating+cholinergic+vasodilation+in+murine+retinal+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Identification of the muscarinic acetylcholine receptor subtype mediating cholinergic vasodilation in murine retinal arterioles.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (10), 7479-7484 (2011).</li>
<li>Gericke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+role+of+alpha1-adrenoceptor+subtypes+in+murine+ophthalmic+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Functional role of alpha1-adrenoceptor subtypes in murine ophthalmic arteries.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (7), 4795-4799 (2011).</li>
<li>Bohmer, T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24749494">The alpha(1)B -adrenoceptor subtype mediates adrenergic vasoconstriction in mouse retinal arterioles with damaged endothelium.</a> Br J Pharmacol. 171 (16), 3858-3867 (2014).</li>
</ol>

Os autores têm sem interesses financeiros concorrentes.

A medição das respostas vasculares na retina do rato é um desafio devido ao pequeno tamanho de vasos da retina. Com a técnica apresentada, arteríolas retina são visualizadas por microscopia de luz transmitida. Isso é possível, porque a retina isolada é translúcida. A vantagem da técnica é a alta resolução óptica. A resolução espacial calculada é 11 px/µm. No entanto, a resolução real para este sistema óptico que utiliza a luz branca é entre 200 e 300 nm, que é explicado pelo limite de difração de Abbe. Desde o primeiro r...

Distúrbios na perfusão da retina têm sido implicados na patogênese de várias doenças oculares, como retinopatia diabética, retinopatia hipertensiva e glaucoma1,2,3. Assim, estudos que visam medir a reatividade vascular na retina são importantes para compreender a fisiopatologia dessas doenças, e desenvolver novo tratamento se aproxima.
Devido à possibilidade de manipulação genética no genoma murino, o mouse tornou-se um modelo animal utilizado para estudos do sistema cardiovascular4. No entanto, por causa do pequeno tamanho dos vasos sanguíneos da retina (≤ 30 µm), medição de reatividade vascular na retina do rato é um desafio. Por exemplo, stereomicroscopic técnicas para a medição na vivo são limitadas em sua resolução óptica e, portanto, só permitem exatamente detectar alterações no fluxo de diâmetro ou sangue no sangue pequeno de menos de 30 µm de diâmetro ≤ quando equipado com dispositivos adicionais de sofisticados, tais como um microscópio confocal usando corantes fluorescentes ou a óptica adaptativa digitalização luz oftalmoscópio5,6. Além disso, a interpretação das medições na vivo vista identificar locais sinalização mecanismos nos vasos da retina podem ser confundidos por anestésicos, altera na pressão arterial sistêmica e a influência dos vasos sanguíneos de retrobulbar.
Portanto, nós desenvolvemos um método para medir respostas de rato dos vasos sanguíneos da retina com alta resolução óptica ex vivo. A técnica apresentada neste documento permite visualização das arteríolas retina através de transmitidas microscopia de luz. Esse método, que também pode ser usado em ratos, fornece acesso às vantagens do gene segmentação tecnologia na investigação vascular ocular.

<table><tbody><tr><td>Tesoura de aço</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>3576.1</td><td>1x 140 mm</td></tr><tr><td>Tesoura de olho</td><td>Geuder</td><td>G-19390</td><td>1x reta, 10,5 cm</td></tr><tr><td>Pinça de precisão, reta com pontas finas</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>LH68.1</td><td>2x tipo 4</td></tr><tr><td>Pinça de precisão, reta com pontas extra finas</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>LH53.1</td><td>2x tipo 5</td></tr><tr><td>Tesoura de capsulotomia Vannas</td><td>Geuder</td><td>19760</td><td>1x reta, 77 mm</td></tr><tr><td>Tesoura de mola Student Vannas</td><td>Ferramentas de ciência fina</td><td>91501-09</td><td>1x curvado,</td></tr><tr><td>Barraquer porta-agulha</td><td>Geuder</td><td>G-17500</td><td>1x curvado, agulha de 120 mm</td></tr><tr><td></td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305128</td><td>1x 30 G</td></tr><tr><td>capilares de vidro (para produção de micropipetas)</td><td>Drummond Scientific Company</td><td>9-000-1211</td><td>1x (1,2 x 0,8 mm; diâmetro externo/interno)</td></tr><tr><td>Sutura de nylon</td><td>Alcon</td><td>198001</td><td>1x 10-0</td></tr><tr><td>Placa de cultura de células Nunclon</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>153066</td><td>1x 35 mm de diâmetro</td></tr><tr><td>Placa de cultura de células Nunclon</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>172931</td><td>1x 100 mm de diâmetro</td></tr><tr><td>Discofix C</td><td>Braun</td><td>16500C</td><td>10 cm</td></tr><tr><td>Histoacryl adesivo</td><td>B. Braun Surgical, S.A.</td><td>1050052</td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa<</td><td>strong>Número de Catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bomba pericíclica&nbsp; (CICLO II)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>EP76.1</td><td>1x</td></tr><tr><td>Extrator de pipeta vertical Modelo 700C</td><td>David Kopf Instruments</td><td></td><td>1x</td></tr><tr><td>Microscópio (Vanox-T AH-2)</td><td>Olympus</td><td></td><td>1x</td></tr><tr><td>Objetiva de imersão em água LUMPlanFL, 1.0 NA</td><td>Olympus</td><td></td><td>1x</td></tr><tr><td>Câmera digital (TK-C1381)</td><td>JVC</td><td></td><td>1x</td></tr><tr><td>Câmara de perfusão</td><td>de fabricação</td><td></td> própria<td>1x</td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Drugs and Solutions</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>K928.4</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio di-hidratado (CaCl2)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>5239.1</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio (KCl)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>6781.1</td><td></td></tr><tr><td>Dihidrogenofosfato de cálcio (KH2PO4)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>3904.2</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de magnésio (MgSO4)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>261.2</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio (NaCl)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>9265.2</td><td></td></tr><tr><td>Hidrogenocarbonato de sódio (NaHCO3)</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>0965.3</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-(D)-(+)- Glicose mono-hidratada</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>6780.1</td><td></td></tr><tr><td>9,11-dideoxi-9&alfa;,11&alfa;-metanoepoxi prostaglandina F2&alfa; (U-46619)</td><td>Cayman Chemical</td><td>16450</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de acetilcolina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6625-25G</td><td></td></tr></tbody></table>

etapas de preparação para medição de reatividade no mouse arteríolas retina ex vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Insuficiência vascular e alterações na perfusão retiniana normal estão entre os fatores principais para a patogênese de várias doenças oculares visão em risco, tais como retinopatia diabética, retinopatia hipertensiva e, possivelmente, glaucoma. Portanto, preparações microvasculares da retina são ferramentas cruciais para estudos fisiológicos e farmacológicos delinear os mecanismos fisiopatológicos subjacentes e a concepção terapias para as doenças. Apesar da ampla utilização de modelos de rato em pesquisa oftálmica, estudos sobre a reatividade vascular da retina são escassos nesta espécie. Das principais razões para esta discrepância é os desafiante procedimentos de isolamento devido ao tamanho pequeno destes vasos sanguíneos da retina, que é ~ ≤ 30 µm de diâmetro luminal. Para contornar o problema de isolamento direto destes microvessels da retina para estudos funcionais, estabelecemos uma técnica de isolamento e preparação que permite ex vivo estudos de vasoactivity da retina do rato sob condições fisiológicas perto . Embora as preparações experimentais presentes irão se referir especificamente as arteríolas retina do rato, esta metodologia prontamente pode ser empregada para microvessels de ratos.

U-46619 produziu respostas vasoconstritor dependente da concentração em arteríolas da retina de ratos do selvagem-tipo do fundo C57Bl/6J. Em uma concentração de 10-6 M, diminuição do diâmetro luminal foi ≈50% do diâmetro de descanso. Figura 9A mostra uma curva concentração-resposta representativa de uma arteríola retinal. Em arteríolas preconstricted com U46619, cumulativa administração de acetilcolina evocados dependente da concentração aumenta no...

Muitas doenças oculares visão em risco estão associadas com microvessels da retina disfuncional. Portanto, a medição das respostas arteríola retinal é importante para investigar os mecanismos fisiopatológicos subjacentes. Este artigo descreve um protocolo detalhado para isolamento de rato arteríola retinal e preparação para avaliar os efeitos de substâncias vasoativas no diâmetro vascular.

Etapas de preparação para medição de reatividade no Mouse arteríolas retina Ex Vivo

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

O objetivo geral deste método de preparação da retina é utilizar microscopia de vídeo para medir a reatividade arterial retiniana em camundongos. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área da regulação do fluxo sanguíneo retiniano e pode contribuir para aprofundar o entendimento da fisiopatologia de diversas doenças oculares. A principal vantagem desta nova técnica é que ela permite medir a reatividade dos vasos sanguíneos retinianos com resolução óptica extremamente alta.E, ao mesmo tempo, não exige muito equipamento sofisticado. Geralmente, indivíduos novos neste método podem ter dificuldades, pois pode ser difícil localizar a artéria oftálmica e seus ramos. Demonstrarei este procedimento juntamente com Jenia Kouchek Zadeh e Wael Omran, estudantes de pós-graduação do meu laboratório.Prepare-se para os procedimentos experimentais disposto os instrumentos necessários. Em seguida, use uma tesoura de aço para cortar o crânio do camundongo sagitalmente em duas metades e use a tesoura de olho para remover a pele e o cérebro. Use a tesoura de olho para remover o osso do crânio até que apenas o osso orbital permaneça e transfira a órbita para uma placa de dissecaç

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Para investigar a permeabilidade da barreira hemato-retiniana e a integridade da membrana limitante interna em modelos animais de doença da retina, usamos várias variantes de vírus adeno-associados (AAV) como ferramentas para rotular neurônios da retina e glia. A expressão gênica repórter mediada por vírus é então usada como um indicador da permeabilidade da barreira retiniana.

Usando vírus adeno-associado como uma ferramenta para o estudo da retina Barreiras na Doença

Este manuscrito descreve um protocolo simples para o isolamento de arteríolas da retina rato que podem ser usados em, cálcio imaging e pressão miografia Estudos eletrofisiológicos.

Isolamento de arteríolas retina para estudos de fisiologia celular Ex Vivo

Esta técnica descreve a gravação em tempo real do consumo de oxigênio e taxas de acidificação do extracelular nos tecidos da retina explantados rato, usando um analisador de fluxo extracelular.

Medição do metabolismo energético, no tecido da retina explantado, usando análise de fluxo extracelular

A retinopatia induzida pelo oxigênio (OIR) pode ser usada para modelar doenças isquêmicas da retina, como a retinopatia da prematuridade e a retinopatia diabética proliferativa e servir de modelo para estudos de prova de conceito na avaliação de drogas antiangiogênicas para doenças neovasculares. O OIR induz a neovascularização robusta e reprodutível na retina que pode ser quantificada.

Modelo de Retinopatia Induzida por Oxigênio para Doenças Isquêmicas da Retina em Roedores

Este protocolo descreve um método detalhado para a preparação e a coloração da imunofluorescência de montagem e análise plana de retina de camundongos. O uso de fluoresceína fundus angiography (FFA) para filhotes de camundongos e processamento de imagem também são descritos em detalhes.

Monitoramento do crescimento dinâmico dos vasos retinais no modelo de rato de retinopatia induzido pelo oxigênio

Descrito aqui é um protocolo detalhado para a realização de ensaios de estresse mitocondrial e ensaio de taxa glicólítica em amostras de tecido de retina ex vivo usando um bioanalzer comercial.

Determinação da respiração mitocondrial e glicolise em amostras de tecido retinal ex vivo

A retinopatia diabética é uma das principais causas de cegueira. Histologia, ensaio de quebra da barreira hemorrânica e angiografia de fluorescência são técnicas valiosas para entender a fisiopatologia da retina, o que poderia aumentar ainda mais o rastreamento eficiente de drogas contra a retinopatia diabética.

Avaliação fisiofisiológica da retina em um modelo de rato

Este artigo descreve um ensaio bem estabelecido e reprodutível de manchas de lectina para toda a preparação da retina do montagem e os protocolos necessários para a medição quantitativa dos parâmetros vasculares frequentemente alterados em retinopatias proliferativas e não proliferativas.

Quantificação de Parâmetros Vasculares em Retinas inteiras de Camundongos com Retinopatias Não Proliferativas e Proliferativas

Aqui, apresentamos três protocolos de análise de dados para angiografia fluoresceína (AF) e tomografia de coerência óptica (OCT) no estudo da Oclusão da Veia Retiniana (RVO).

In vivo Leituras de lesões vasculares na retina de camundongos para promover a reprodutibilidade

A vasculatura da retina de camundongos é particularmente interessante na compreensão dos mecanismos de formação do padrão vascular. Este protocolo mede automaticamente o diâmetro dos vasos retinianos de camundongos a partir de imagens de fundo de angiografia fluorescente a uma distância fixa do disco óptico.

Medindo o diâmetro do vaso retiniano a partir de imagens de angiografia fluorescente de camundongo

Recentemente, identificamos o enrijecimento capilar da retina como um novo paradigma para a disfunção retiniana associada ao diabetes. Este protocolo elabora as etapas para o isolamento dos capilares retinianos de camundongos e da matriz subendotelial das culturas endoteliais da retina, seguidas de uma descrição da técnica de medição da rigidez usando microscopia de força atômica.

Isolamento de capilares retinianos de camundongos e matriz subendotelial para medição de rigidez usando microscopia de força atômica

Aprenda a medir a reatividade arterial em arteríolas retinianas de camundongos usando microscopia de vídeo ex vivo. Este método de alta resolução auxilia na investigação da fisiopatologia de doenças oculares.

Etapas de preparação para medição de reatividade no Mouse arteríolas retina Ex Vivo

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