Laser Microirradiation para estudar na Vivo respostas celulares ao dano de DNA simples e complexos

O objetivo geral deste protocolo é descrever como usar a microirradiação a laser para induzir diferentes tipos de danos ao DNA, incluindo quebras simples de fitas e danos complexos, para estudar a sinalização de danos ao DNA e a montagem do fator de reparo in vivo. Nas décadas de 1960 e 70, focamos um feixe de laser através de um microscópio que você pode ver atrás de mim e conseguimos danificar uma pequena região de um cromossomo. A célula se dividiu, sobreviveu e não conseguíamos entender o porquê.

Bem, 40 anos depois, agora estamos usando esse método para estudar seletivamente o reparo do DNA, e é isso que você verá hoje. Esse método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo de reparo do DNA, como como o dano ao DNA é reconhecido e processado e como o sinal de dano se propaga na célula. A microirradiação a laser permite a análise em tempo real, de alta resolução, de célula única da dinâmica macromolecular em resposta a danos no DNA confundidos com uma região de vários micrômetros dentro do núcleo da célula.