Técnica de constrição da aorta minimamente invasiva transversal em camundongos para indução de Hipertrofia Ventricular Esquerda

O objetivo geral deste protocolo é estabelecer constrição aórtica transversa minimamente invasiva em camundongos. Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave sobre a implementação da constrição aórtica transversa em camundongos, como criar uma passagem sob o arco aórtico. As principais vantagens dessa técnica são que ela é simples, fácil de usar e elimina a necessidade de intubar e ventilar os camundongos.

Estarei demonstrando o procedimento com nossa pós-doutoranda Simona Nemska, que realizará as etapas de preparação pré-cirúrgica do animal e vigilância pós-operatória. No dia do procedimento, raspe o pescoço e o tórax de um camundongo anestesiado e desinfete a pele exposta com etanol a 70%. Depois de confirmar o nível adequado de sedação por pinça do dedo do pé, prenda o animal em decúbito dorsal em uma almofada de trabalho de cortiça limpa.

Em seguida, use uma lâmina de faca número 11 para fazer uma incisão cervical longitudinal de 10 milímetros da linha média do entalhe supraesternal até o meio do tórax para expor o esterno. Usando um porta-agulha Crile-Wood, passe uma sutura de polipropileno monofilamento 4-0 para retrair a tireoide. E prenda a sutura na almofada de trabalho.

Em seguida, mova a almofada de trabalho sob um microscópio cirúrgico e use uma pinça microcirúrgica para separar sem rodeios os músculos pré-traqueais para descobrir a traqueia. Deslize suavemente as pontas fechadas de um par de pinças microcirúrgicas curvas sobre a traqueia e atrás do esterno e abra e feche cuidadosamente a pinça curva para dissecar a pleura sem rodeios. Use a pinça microcirúrgica reta para agarrar os músculos supraclaviculares direitos e puxe suavemente o peito.

Deslizando a ponta inferior da pinça óssea sob o esterno, faça uma esternotomia parcial superior de três a quatro milímetros, direcionando a parte inferior da mini esternotomia ligeiramente para a esquerda. Usando um porta-agulha microcirúrgico, passe uma sutura de polipropileno monofilamentar 7-0 de dentro para fora do segundo espaço intercostal de cada lado da mini esternotomia. Use suturas de polipropileno monofilamento 7-0 para espalhar as bordas esternais de cada lado.

E use a pinça curva para mover suavemente os músculos pré-traqueais, a gordura mediastinal e o timo para o lado para visualizar o arco aórtico sob baixa ampliação de potência. Para expor o tecido mole sob o arco aórtico, insira uma pinça de amarração sob o arco com as pontas fechadas e abra suavemente a pinça. Use uma segunda pinça de amarração para fazer um túnel no tecido mole sob o arco aórtico, abrindo e fechando suavemente a pinça no tecido mole.

Em seguida, passe um pedaço de ligadura de seda 6-0 enfiado no olho de um auxiliar de ligadura sob o arco aórtico, usando uma pinça de amarração para recuperar a sutura entre a origem das artérias carótidas comum direita e esquerda. A etapa mais difícil do procedimento é inserir a sutura sob o arco aórtico. Tomar os devidos cuidados ao criar o túnel sob o arco facilitará a colocação da sutura subsequente

Agora use a pinça reta para posicionar uma agulha embotada de calibre 27 ao lado do arco aórtico e use as duas pinças de amarração para amarrar a sutura confortavelmente ao redor da agulha e da aorta entre as artérias carótidas comum inominada direita e esquerda. Quando a sutura estiver presa, remova a agulha com rapidez, mas com cuidado, para obter um estreitamento de 0,4 milímetros de diâmetro e uma constrição aórtica transversal reprodutível de 65 a 70%. Após confirmar a hemostasia, remova as suturas de polipropileno monofilamentar 7-0 usadas para espalhar as bordas esternais.

Use um porta-agulha microcirúrgico para passar uma sutura simples de polipropileno monofilamentar 6-0 de fora para dentro do segundo espaço intercostal esquerdo e de dentro para fora do segundo espaço intercostal direito. Use o porta-agulha Crile-Wood para unir as bordas esternais com uma sutura de polipropileno monofilamentar 6-0. E feche a pele com uma sutura contínua de polipropileno monofilamento 5-0 em uma camada com um porta-agulha Crile-Wood.

Em seguida, coloque o animal de volta em sua gaiola em decúbito ventral sob aquecimento com monitoramento até a recuperação total. A eficácia da indução de hipertrofia ventricular esquerda pode ser validada comparando as relações peso cardíaco/peso corporal dos animais simulados com as dos animais experimentais nos dias três, sete, 14 e 28 pós-operatórios. A proporção aumenta significativamente nos animais anilhados em comparação com os grupos simulados a partir do sétimo dia de pós-operatório, permanecendo significativamente maior nos animais contraídos até o 28º dia pós-operatório.

O aumento observado na relação entre o peso do coração e o peso corporal deve-se apenas a um aumento na relação entre o peso corporal do ventrículo esquerdo, uma vez que a relação entre o peso corporal do ventrículo direito permanece comparável entre a constrição transversa da aorta e os animais operados simuladamente durante todo o período de observação. Além disso, a expressão de mRNA do peptídeo natriurético cerebral, um controle positivo para hipertrofia cardíaca nos ventrículos esquerdos, é significativamente maior nos animais com banda aórtica em comparação com os animais controlados por simulação no dia 14, validando ainda mais a eficiência da técnica. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em 20 minutos se for executada corretamente.

Ao tentar este procedimento, é importante usar um auxiliar de ligadura e pinça de amarração semelhantes aos usados em nosso protocolo. Após seu desenvolvimento, essa técnica forneceu um modelo confiável e simplificado para explorar os mecanismos envolvidos na gênese da hipertrofia ventricular esquerda induzida por sobrecarga de pressão. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar a constrição aórtica transversa minimamente invasiva em camundongos, com ênfase especial na passagem sob o arco aórtico.

Não se esqueça de que criar a passagem sob o arco aórtico é a etapa mais crítica do procedimento, e usar um auxiliar de ligadura e amarrar uma pinça reduz consideravelmente o risco de lesão no arco.