Name: Preparação do hidrogel injetável à base de quitosana e sua aplicação em cultura de células 3D (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Aprenda a preparar hidrogéis injetáveis à base de quitosana usando química de imina dinâmica para cultura celular 3D. Este método permite ajustar a resistência mecânica e demonstra propriedades de autorreparação para aplicações em terapia celular.

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Esta pesquisa foi apoiada pelo National Science Foundation da China (21474057 e 21604076).

atenção: favor consultar todas as fichas de dados de segurança (MSDS) antes do uso. Por favor, use as práticas de segurança adequadas ao realizar experimentos de química, incluindo o uso de uma coifa e equipamento de protecção pessoal (óculos de segurança, luvas de proteção, jaleco, etc.). O protocolo exige célula padrão manipulação técnicas (esterilização, recuperação da célula, célula passagem, congelamento de célula, coloracao celular, etc).
 1. preparação do hidrogel <ol><li>síntese do benzaldeído finalizado di-acrescida de polietileno glicol (PEG DF) <ol><li>pré-dessecação de PEG polímero <ol><li>pesar 4,00 g PEG (4.000 MW, 1.00 mmol), transferir para um balão de fundo redondo (250 mL) e adicionar tolueno (100 mL). 
			Nota: Outras PEGs com diferentes pesos moleculares pode trabalhar para a formação de hidrogel, mas levará a rigidez diferente.</li>
			<li>Aquecer a solução por uma pistola de calor (ou um prato quente em torno de 40 ° C) ligeiramente para ajudar a dissolver todos os polímeros. Depois de dissolvem todos os polímeros, use um evaporador para remover todos os solventes. Repita esse processo seco e dissolver duas vezes tornar o PEG secado polímeros. 
			Atenção: Esta deve ser executada em uma coifa com extremo cuidado. Tolueno é inflamável.</li>
		</ol></li> <li>Reação de terminação benzaldeído de PEG <ol><li>Adicionar um agitador magnético e tetrahidrofurano (THF, 100 mL) no balão e dissolver PEG, utilizando um agitador. Adicionar 4-carboxybenzaldehyde (0,90 g, 6,0 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (0,07 g, 0,6 mmol) em sequência para as soluções para dissolver todos os sólidos completamente.</li>
			<li>Add N, N &#39;-dicyclohexylcarbodiimide (DCC, 1,25 g, 6,0 mmol) para a solução e adicionar um tubo de secagem que é preenchido com anidro CaCl 2 para o balão. Manter a reação sob agitação à temperatura ambiente (~ 20 ° C) por cerca de 12 h.</li>
		</ol></li> <li>Processo de pós-reação <ol><li>filtrar os sólidos brancos gerados na solução por vácuo, depois que a reação é terminada. Despeje a solução em éter dietílico frio (500 mL) sob agitação para precipitar os sólidos brancos. Reunir todos os sólidos brancos pelo filtro e seque os sólidos em uma coifa.</li>
			<li>Dissolver os sólidos brancos em THF novamente, filtrar qualquer sólidos insolúveis brancos, despeje a solução de éter dietílico frio fresco para precipitar os sólidos brancos e secá-lo. Repita este processo de duas a três vezes e em seguida, coloque os sólidos brancos em um forno de secagem a vácuo (20 ° C, 0.1 mbar) para secá-los completamente. Recolher o pó branco como o produto final: benzaldeído finalizado PEG DF.</li>
		</ol></li></ol></li> <li>Preparação do hidrogel <ol><li>pesar quantidades diferentes de PEG DF (0,11 g, 0,028 mmol g 0,22, 0.055 mmol; 0,44 g, 0.110 mmol) em um tubo (10 mL), adicionar água desionizada (5,0 mL) e use um vórtice ou agitador magnético para ajudar dissolver o polímero.</li>
		<li>Dissolver glicol quitosana (0,495 g, 6.18 x 10 -3 mmol) em água desionizada (15,0 mL) em um tubo (50 mL) e usar um vórtice por alguns minutos para homogeneizar a solução de quitosana (3% em peso).</li>
		<li>Adicionar a solução de quitosana glicol (0,2 mL, 3% em peso) e soluções DF PEG (0,2 mL) sequencialmente em um tubo (2,0 mL). Use um vórtice para misturar as soluções homogênea de hidrogel forma em vários minutos. Siga as proporções na tabela 1 tornar hidrogel de forças mecânicas diferentes. 
		Nota: Use o método do tubo-invertendo para determinar se o hidrogel já formou.</li>
	</ol></li> <li>Análises de reologia <ol><li>efectuar análises de reologia em um rheometer rotatória com uma placa de aço paralela (diâmetro: 20 mm). Para o teste de gelificação, espalhe o glicol solução de quitosana (0,2 mL, 3% em peso) em uma placa inferior. Em seguida, adicionar DF PEG soluções aquosas (0,2 mL, 2% em peso) gota uniformemente sobre a superfície da solução de quitosana e misture rapidamente com uma pipeta. Abaixe a placa superior e iniciar para teste</li>
		<li>De hidrogel &#39; s teste de rigidez, cortar um círculo um hidrogel (diâmetro: 20 mm) e medir o módulo de armazenamento (G &#39;) valores contra as análises de frequência na estirpe de 1%. G típico &#39; valores a 6,3 rad s &#8722; 1 estão listados na tabela 1. 
		Nota: Efectuar as análises de reologia do hidrogel 0,5 h após a formação de hidrogel para assegurar a estabilização de vínculo dinâmico do hidrogel.</li>
		<li>Para o hidrogel &#39; s auto reparáveis Propriedade testar, cortar um hidrogel em pedaços e juntar os pedaços de auto-recuperação de uma peça integrante. Em seguida, corte a peça de hidrogel para fazer um círculo (diâmetro: 20 mm) e colocá-lo sobre o rheometer para realizar a análise de reologia.</li>
	</ol></li></ol> 2. cultivo de célula 3D em hidrogel <ol><li>preparação de soluções de gelificação de hidrogel <ol><li>pesar DF PEG (0,44 g, 0.11 mmol) em um tubo estéril (4,0 mL), adicionar em meios de cultura celular (RPMI-1640, 2.0 mL) e usar um vórtice ou agitador para ajudar a dissolver o polímero para obter a solução de polímero (20% em peso). Carregar a solução em uma seringa (10,0 mL) e então ele esterilizar por passagem através de um filtro de bactérias-retentiva mícron (0,22 µm).</li>
		<li>Pesar a quitosana de glicol (0,165 g, 2,06 x 10 -3 mmol) em um tubo estéril (15,0 mL), adicionar em meios de cultura celular (RPMI-1640, 4,0 mL) e o vórtice para ajudar a dissolver o polímero para obter a solução de quitosana glicol (4,0% em peso). Carregar a solução em uma seringa (10,0 mL) e filtrá-la com um filtro de 0,22 µm bactérias-retentiva.</li>
	</ol></li> <li>Cultivo celular em hidrogel atenção: executar todos os procedimentos relacionados em uma capa de cultura de tecidos de células. Conhecimentos básicos de técnica estéril é esperado.
	<ol><li>Preparação da suspensão de células <ol><li>células L929 cultura RPMI-1640, suplementado com 10% FBS, 5% de penicilina (10 mL) em uma Petri prato (diâmetro 10 cm) e incubar a 37 ° C, 5% de CO 2. Mudar o meio todos os dias antes de usar.</li>
			<li>Colher as células L929 com PBS contendo tripsina (0,025% do w/v) e EDTA (0,01% w/v), centrifugar (70 x g, 5 min) e ressuspender as células em meio RPMI-1640 (1,0 mL). Realize a contagem de células usando a operação padrão da placa de contagem de sangue. Ressuspender as células para ajustar a concentração de células para ~ 3,75 × 10 6 células/mL.</li>
		</ol></li> <li>Encapsulamento de célula em hidrogel <ol><li>misturar as suspensões de células L929 (0,4 mL, 3,75 x 10 6 células mL -1) com solução de quitosana glicol (0,4 mL) em um tubo (4,0 mL) pelo vórtice. Pipetar a solução de quitosana L929/glicol (0,8 mL) para o centro de um prato de Petri confocal (diâmetro 2,0 cm). Pipetar as DF PEG soluções (0,2 mL) para o mesmo prato e pipetar delicadamente para misturar a solução e induzir a formação de hidrogel. 
			Nota: Avaliar a formação de hidrogel inclinando o prato de petri.</li>
			<li>Para cultura de células direta, adicionar quantidades adicionais de meios de cultura RPMI-1640 (1,0 mL) em cima do hidrogel. Colocar a célula incorporada hidrogel (1,0 mL, 1.5 wt % glicol quitosana, 4,0 wt % DF PEG, 1,5 × 10 6 células mL -1) em uma incubadora (37 ° C, 5% CO 2) e altere o meio todos os dias. Prepare-se para a imagem latente de célula no dia 1, 3, 5 e 7 após encapsulamento celular.</li>
		</ol></li> <li>Para a pós-cultura de células 3D em hidrogel após a injeção, preparar celular carregado hidrogel (1,0 mL, consulte a etapa 2.2.2) numa seringa (10,0 mL, agulha 48 G). Após as formas de hidrogel, injetar o hidrogel lentamente em uma placa de Petri para a imagem latente confocal. Adicionar um montante adicional de meios de cultura (1,0 mL) em cima do hidrogel e alterá-lo todos os dias. Coloque o prato de Petri em uma incubadora (37 ° C, 5% CO 2) e prepare-se para a imagem latente depois. 
		Atenção: Verifique e seguir o protocolo de operação de segurança de uma seringa.</li>
	</ol></li> <li>Análise de viabilidade de células <ol><li>Confocal observação <ol>
			<li>Enxaguar o hidrogel com PBS (1,0 mL) por duas vezes. Mancha o hidrogel com diacetato de fluoresceína (FDA, 0,5 mL, 0,05 mg/mL) e soluções de propidium iodeto (PI, 0,5 mL, 0,08 mg/mL) por 15 min. Depois da coloração, remover todos os solventes.</li>
			<li>Observar o hidrogel usando um microscópio confocal em comprimentos de onda de excitação de 488 nm e 543 nm a visualização ao vivo e mortos células, respectivamente. Leva pilhas através de cada profundidade de 2 µm do hidrogel para validar uma distribuição uniforme de células ao longo de z. 
			Nota: FDA manchas de células vivas enquanto PI manchas de células mortas.</li>
		</ol></li> <li>Degradar o hidrogel (1,0 mL) com ácido acético (HAc, 3% de v, 1,0 mL) por 5 min e pipetar para um tubo (4,0 mL). Coletar as células por centrifugação (70 x g, 5 min) e ressuspender as células em meio de cultura RPMI 1640 celular (1,0 mL). Executar célula contagem usando um sangue contagem placa.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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<li>Yang, C., Tibbitt, M. W., Basta, L., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+memory+and+dosing+influence+stem+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Mater%22%5BJournal%5D)">Mechanical memory and dosing influence stem cell fate.</a> Nat. Mater. 13 (6), 645-652 (2014).</li>
<li>Geerligs, M., Peters, G. W., Ackermans, P. A., Oomens, C. W., Baaijens, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linear+viscoelastic+behavior+of+subcutaneous+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Biorheology%22%5BJournal%5D)">Linear viscoelastic behavior of subcutaneous adipose tissue.</a> Biorheology. 45 (6), 677-688 (2008).</li>
<li>Banerjee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+hydrogel+modulus+on+the+proliferation+and+differentiation+of+encapsulated+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The influence of hydrogel modulus on the proliferation and differentiation of encapsulated neural stem cells.</a> Biomaterials. 30 (27), 4695-4699 (2009).</li>
<li>Benoit, D. S., Schwartz, M. P., Durney, A. R., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+functional+groups+for+controlled+differentiation+of+hydrogel-encapsulated+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Mater%22%5BJournal%5D)">Small functional groups for controlled differentiation of hydrogel-encapsulated human mesenchymal stem cells.</a> Nat. Mater. 7 (10), 816-823 (2008).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

O hidrogel apresentado neste protocolo (Figura 1) tem dois componentes principais: a polímero natural quitosana de glicol e um sintético benzaldeído encerrado gelator polímero PEG do DF, que são ambos os materiais biocompatíveis. Síntese do DF PEG é apresentado utilizando uma reação de modificação de uma etapa. PEG, de peso molecular 4.000 foi escolhida no presente protocolo em preocupações de solubilidade, eficiência de modificação, bem como rigidez de hidrogel. Uma série de hidrogel com di...

Hidrogel é materiais de polímero reticulado com grandes quantidades de água e propriedades mecânicas macias, e eles têm sido usados em muitas aplicações bio-medical1,2. Hidrogel pode oferecer um ambiente suave e molhado, que é muito semelhante ao ambiente fisiológico para células em vivo. Portanto, hidrogel tornaram-se uma das plataformas mais populares para cultura de células 3D3,4. Em relação à cultura de pilha do prato de Petri 2D, cultura de células 3D avançou rapidamente para oferecer que uma matriz extracelular (ECM) imitou o microambiente para células de contato e montar para fins de proliferação e diferenciação5. Além disso, o hidrogel contendo polímeros naturais poderia oferecer biocompatível e promovendo ambientes para as células a proliferar e diferenciar3. Hidrogel derivado de polímeros sintéticos é preferidos para seus componentes simples e claras, que excluem influências complexas como as proteínas de origem animal ou vírus. Entre todos os candidatos de hidrogel para cultura de células 3D, hidrogel que facilmente é preparados e têm uma propriedade consistente é sempre preferidos. A facilidade para ajustar propriedades do hidrogel para atender necessidades diferentes pesquisas é importante como bem6.
Aqui apresentamos uma preparação superficial de um hidrogel de glicol baseado em quitosana usando química imina dinâmico, que se torna uma plataforma versátil de hidrogel para cultura de células 3D7. Neste método, conhecido biocompatível glicol quitosana são usados para estabelecer quadros de redes do hidrogel. Seus grupos aminoácidos são reagiu com um glicol de polietileno benzaldeído encerrado como o gelator de polímeros que formam ligações de imina dinâmico como crosslinkages de hidrogel8. Obrigações de imina dinâmico podem formar e decompor reversível e responsiva ao redor, dotando o hidrogel com quitosana mecanicamente ajustável redes9,10,11. Devido ao seu conteúdo de água de alto, materiais biocompatíveis e forças mecânicas ajustáveis, o hidrogel é aplicado com sucesso como um andaime para células L929 em cultura de células 3D12,13. O protocolo aqui detalha os procedimentos, incluindo a síntese de polímeros gelator, preparação de hidrogel, incorporação de célula e cultivo celular 3D.
O hidrogel também mostra várias outras características devido a sua crosslinkages de imina dinâmico, incluindo sua multi responsivo aos vários estímulos bio-(ácido e pH, piridoxal derivados de vitamina B6, papaína de proteína, etc), indicando que o hidrogel pode ser induzido a decompor-se sob condições fisiológicas8. O hidrogel é também auto reparáveis e injetável, o que significa que o hidrogel pode ser administrado através de um método de injeção invasiva mínima e ganhar uma vantagem em droga e célula entregas14,15. Pela adição de aditivos funcionais ou gelators de polímero preconcebidos específico, o hidrogel é compatível para obter propriedades específicas como magnética, temperatura, pH-responsivo, etc.16,,17, que pudesse cumprir um ampla gama de requisitos de pesquisa. Essas propriedades revelaram capacidade potencial do hydrogel ser um injetável várias transportadoras para drogas e células em ambos in vitro e em vivo pesquisa biomédica e aplicações.

<table><tbody><tr><td>Glicol quitosana</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>39280-86-9</td><td>90% grau de desacetilação</td></tr><tr><td>4-Carboxibenzaldeído</td><td>Shanghai Aladdin&nbsp; Bio-Chem Technology Co., LTD</td><td>619-66-9</td><td>99%</td></tr><tr><td>N, N'-diciclohexilcarbodiimida</td><td>Shanghai Aladdin&nbsp; Bio-Chem Technology Co., LTD</td><td>538-75-0</td><td>99%</td></tr> <tr><td>Cloreto de cálcio anidro</td><td>Shanghai Aladdin&nbsp; Bio-Chem Technology Co., LTD</td><td>10043-52-4</td><td>96%</td></tr><tr><td>4-dimetilamiopryidina</td><td>Shanghai Aladdin&nbsp; Bio-Chem Technology Co., LTD</td><td>1122-58</td><td>99%</td></tr> <tr><td>Polietilenoglicol</td><td>Reagente Químico Sino-pharm</td><td>5254-43-7</td><td>99%</td></tr> <tr><td>Reagente Químico Sino-pharm</td> <td>Tetrahidrofurano</td><td>109-99-9</td><td>99%</td></tr> <tr><td>Reagente Químico Sino-pharm</td> <td>Tolueno</td><td>108-88-3</td><td>99%</td></tr> <tr><td>Éter etílico</td><td>Reagente Químico Sino-pharm</td><td>60-29-7</td><td>99%</td></tr><tr><td>Reagente químico de ácido acético</td><td>Sino-pharm</td><td>64-19-7</td><td>99%</td></tr><tr><td>CaCl2 anidro</td><td>Reagente químico Sino-pharm</td><td>10043-52-4</td><td>99%</td></tr><tr><td>Diacetato de fluoresceína</td><td>Sigma</td><td>596-09-8</td><td>99%</td></tr><tr><td>Iodeto de propídio&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>25535-16-4</td><td>94%</td></tr> <tr><td>RPMI-1640 meio de cultura</td><td>Gibco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Gibco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA</td><td>Gibco</td><td></td><td>0,25%</td></tr> <tr><td>PBS</td><td>Solarbio</td><td></td><td>0,01 M</td></tr><tr><td>Solução de estreptomicina de penicilina</td><td>Hyclone</td><td></td><td>10.000 U / mL</td></tr><tr><td>Reômetro</td><td>TA Instrumento</td><td></td> Microscópio confocal <td>AR-G2</td></tr><tr><td></td><td>Zeiss</td><td></td><td>710-3channel</td></tr><tr><td>L929 células</td><td>ATCC</td><td></td><td>NCTC clone 929; Célula L, L929, derivada do Evaporador Strain L</td></tr><tr><td></td><td>EYELA</td><td></td><td>N-1100</td></tr><tr><td>agulha de calibre 48</td><td>Microscópio ShanghaiZhiyu Medical Material Co., LTD</td><td></td><td>Microscópio de 48 calibres</td></tr><tr><td></td><td>Leica</td><td></td><td>DM3000 B</td></tr><tr><td>Software de microscópio</td><td>Imaris</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pistola de calor</td><td>Confu</td><td></td><td>KF-5843&nbsp;</td></tr><tr><td>placa de Petri</td><td>NEST</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

preparação do hidrogel injetável à base de quitosana e sua aplicação em cultura de células 3d

Preparation of Chitosan-based Injectable Hydrogels and Its Application in 3D Cell Culture

O protocolo apresenta um método fácil, eficiente e versátil para preparar hidrogel baseado em quitosana usando química imina dinâmico. O hidrogel é preparado misturando-se soluções de glicol quitosana com um gelator de polímero sintetizado benzaldeído finalizado e hidrogel com eficiência é obtidos em vários minutos à temperatura ambiente. Por razões diferentes entre quitosana glicol, gelator de polímero e conteúdo de água, obtêm-se versátil hidrogel com tempos diferentes de gelificação e rigidez. Quando danificadas, o hidrogel pode recuperar suas aparições e módulo de elasticidade, devido a reversibilidade das obrigações imina dinâmico como crosslinkages. Esta auto reparáveis propriedade permite que o hidrogel ser injetável, uma vez que pode ser auto curado de peças espremidas de um hidrogel em massa integral após o processo de injeção. O hidrogel é também multi sensível a muitos estímulos bio-ativos devido ao status de equilibração diferente das obrigações imina dinâmico. Este hidrogel foi confirmado como bio-compatível e células de fibroblasto de rato L929 foram incorporados procedimentos padrão e a proliferação das células foi facilmente avaliada por um processo de cultivo de células 3D. O hidrogel pode oferecer uma plataforma ajustável para diferentes pesquisas onde um mímico fisiológico de um ambiente 3D para as células é lucrou. Juntamente com suas propriedades multi responsivos, auto reparáveis e injetáveis, o hidrogel potencialmente pode ser aplicados como várias transportadoras para drogas e células em futuras aplicações biomédicas.

Uma apresentação esquemática do presente protocolo na preparação do hidrogel e seu uso como cultura de células 3D é oferecida na Figura 1. Informações do hidrogel conteúdo e rácios, preparados com diferentes forças mecânicas estão resumidas na tabela 1. O hidrogel é auto reparáveis e reologia Propriedade apresenta rigidez do hidrogel por módulo de armazenamento versus teste de frequência na Figura 2. As imagens confocal de célula e números de te...

Aqui nós descrevemos uma preparação superficial de hidrogel injetável à base de quitosana usando química imina dinâmico. São apresentados métodos para ajustar a força mecânica do hidrogel e sua aplicação em cultura de células 3D.

Preparação do hidrogel injetável à base de quitosana e sua aplicação em cultura de células 3D

The protocol presents a facile, efficient, and versatile method to prepare chitosan-based hydrogels using dynamic imine chemistry. The hydrogel is ...

O objetivo geral deste protocolo é preparar um hidrogel injetável de quitosana para cultura celular tridimensional, com aplicação futura em tratamentos terapêuticos. Este método pode responder perguntas na área de hidrogéis autorregeneráveis, como, por exemplo, como produzir um hidrogel autorregenerável por um processo totalmente imerso e como utilizá-lo para cultura celular 3D. A principal vantagem desta técnica é que um hidrogel autorregenerável biocompatível pode ser preparado de maneira muito simples, além de permitir o uso em cultura celular tridimensional.Este hidrogel também é injetável, podendo ser usado como vetor para terapia celular. Agora, o Sr. Yongsan Li mostrará como preparar o hidrogel e como realizar o cultivo celular tridimensional utilizando este hidrogel. Yongsan Li é nosso aluno de pós-graduação no laboratório.Para produzir os hidrogéis, primeiro sintetize o PEG DF. Em uma capela, pese quatro gramas de PEG de peso molecular 4.000 em um balão de fundo redondo e adicione 100 mililitros de tolueno. Em seguida, aqueça a solução para dissolver os polímeros.Após todos os polímeros se dissolverem, utilize um evaporador para remover todos os solventes. Em seguida, repi

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Research

JoVE Journal

Chemistry

Química

Um grande obstáculo em terapias com células-tronco atuais é determinar o método mais eficaz para entregar essas células para tecidos do hospedeiro. Aqui, nós descrevemos um método de entrega de quitosana-base que é eficiente e simples na abordagem, ao mesmo tempo permitindo que as células-tronco adiposas para manter a sua multipotency.

Construindo um hidrogel de colágeno para a entrega de células-tronco carregado microesferas

Um bioprinter foi usada para criar hidrogéis modeladas com base num molde de sacrifício. O molde foi poloxâmero backfilled hidrogel com um segundo e, em seguida eluiu-se, deixando espaços vazios que foram preenchidos com uma terceira hidrogel. Este método utiliza eluição rápida e boa capacidade de impressão de poloxamero para gerar arquiteturas complexas de biopolímeros.

Impressão de Moldes reversa Thermoresponsive para a Criação de Patterned hidrogéis de dois componentes para Cultura de Células em 3D

O reparo da cartilagem representa um desafio médico não atendido e as abordagens baseadas em células para projetar a cartilagem articular humana são uma solução promissora. Aqui, descrevemos os hidrogéis biomiméticos tridimensionais (3D) como uma ferramenta ideal para a expansão e maturação de condrócitos articulares humanos.

3D Hidrogel Andaimes para articular de condrócitos Cultura e Geração de cartilagem

Um andaime engenharia de tecidos injectáveis ​​compostas de poli (N-isopropilacrilamida), sulfato de condroitina--graft (PNIPAAm-g-CS) molecular contendo micropartículas de alginato foi preparada. A força de aderência, propriedades e inchaço na biocompatibilidade in vitro são analisadas neste estudo. As técnicas de caracterização desenvolvidos aqui podem ser aplicados a outros sistemas termogelificantes.

Síntese de termogelificantes poli (N-isopropilacrilamida) -graft-condroitina Composites Sulfato com alginato micropartículas para Engenharia de Tecidos

Este é um método para criar uma estrutura de suporte de cultura de células 3-dimensional a partir da matriz extracelular pulmonar. pulmão intacto é transformado em hidrogéis que podem suportar o crescimento das células em três dimensões.

Sintonizável hidrogéis a partir de Pulmonar Matriz Extracelular para Cultura Celular 3D

Diferentes métodos para manipular a arquitetura tridimensional em hidrogel à base de proteínas são avaliados aqui com respeito a propriedades do material. As redes se são acrescidas com um peptídeo de célula-adesivo, e sua viabilidade na cultura de pilha é avaliada usando duas linhas de células de modelo diferente.

Fácil manipulação das arquiteturas em hidrogel à base de proteínas para aplicações de cultura de células

Este protocolo descreve a fabricação de microcryogels elástica 3D se integrando microfabrication com tecnologia cryogelation. Durante o carregamento com células, microtissues 3D são gerados, que pode ser facilmente injetado em vivo para facilitar a terapia regenerativa ou montadas em matrizes para em vitro triagem de drogas de alto rendimento.

Microtissues 3D para terapia regenerativa injetável e triagem de drogas de alto rendimento

Aqui, apresentamos um protocolo para obter sistemas 3D-cultura na auto montagem de andaimes de peptídeo para promover a diferenciação de condrócitos articulares humanas condrossarcoma em tecido de cartilagem, como.

Cultivo de células de mamíferos em andaimes tridimensionais do Peptide

Hidrogel engenharia de proteínas recombinantes é vantajosos para cultura celular 3D, já que permitem completo pré-definido a espinha dorsal do polímero e, portanto, o microambiente celular. Aqui, descrevemos o processo de purificação de proteínas recombinantes de elastina, como e sua aplicação no encapsulamento de célula de hidrogel 3D.

Produção de elastina, como proteína hidrogel para encapsulamento e imunocoloração de células em 3D

Aqui, nós apresentamos protocolos de cultivo de esferoides da pilha do ligamento periodontal humano (PDL) por películas do quitosana. A cultura de esferoides celulares tridimensionais (3D) fornece uma alternativa ao sistema convencional da cultura do poliestireno da cultura do tecido (TCPs).

Formação de esferóides da célula do ligamento periodontal humano em filmes de quitosana

O presente protocolo descreve um método não baseado emulsão para a fabricação de microgéis de genipin quitosano. O tamanho desses microgésis pode ser precisamente controlado, e eles podem exibir inchaço dependente de pH, degradar in vivo, e ser carregados com moléculas terapêuticas que liberam ao longo do tempo de forma sustentada, tornando-os altamente relevantes para aplicações de engenharia de tecidos.

Fabricação de microgéis chitosan-genipin controlados por tamanho e sem emulsão para aplicações de engenharia de tecidos

Aprenda a preparar hidrogéis injetáveis à base de quitosana usando química de imina dinâmica para cultura celular 3D. Este método permite ajustar a resistência mecânica e demonstra propriedades de autorreparação para aplicações em terapia celular.

Preparação do hidrogel injetável à base de quitosana e sua aplicação em cultura de células 3D

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