Name: Testes Animal ansiedade em ratos: efeitos de bordas de braço aberto e fechado do braço de parede transparência em elevados além de teste de labirinto (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-29T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 54 s
Description: Aprenda a medir ansiedade em ratos usando o labirinto em cruz elevado com diferentes designs de braços abertos e fechados. Este método ajuda pesquisadores a configurar o aparelho adequadamente para detectar efeitos de drogas ansiolíticas com maior sensibilidade e confiabilidade nos dados.

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Os autores desejam agradecer Sr. Akihiro Hirano por sua assistência em produzir o aparelho personalizado. Os autores gostaria de agradecer o Sr. Kosuke Takahashi e Sr. Shingo Nakajima para sua assistência técnica. Este trabalho foi apoiado pela pesquisa sobre o risco das substâncias químicas, saúde e bolsas de investigação do laboratório de Ciências, Ministério da saúde, trabalho e bem-estar, Japão (H25-KAGAKU-IPPANN-003) e A concessão do projeto de pesquisa por Instituto de ciência e tecnologia de Meiji University, Japão.

Todos os procedimentos experimentais descritos aqui foram aprovados pelo cuidado institucional do Animal e uso Comitê da Universidade de Meiji (IACUC 14-0002(1)). Animais utilizados nos resultados representativos foram preparados como segue: ratos machos Sprague-Dawley foram comprados de uma empresa de animais de laboratório e alojados em grupos de 4 animais por jaula de rato padrão (W200 × D410 × H250 mm) pelo menos uma semana antes do início da experimento comportamental. O quarto de alojamento dos animais foi mantido nas condições normais de ambientes para a luz (12:12 horário de claro/escuro com luzes acesas no 10:00 h), temperatura (25,0 ± 0,5 ° C), umidade (55 ± 10%) e ventilação (10 vezes / h), e os animais tinham acesso ad libitum a comida ( Oriental fermento co. Ltd., Tóquio, Japão) e água. Os animais foram mantidos em uma gaiola de rato padrão (W410 x D250 x H200 mm, Toyoriko co., Ltd., Aichi, Japão) com papel do fundamento (alfa-dri, LSG Corporatin, Tóquio, Japão).
1. elevada e mais teste de labirinto
<ol><li>Configurar o plus elevado labirinto aparelhos em um contêiner personalizado (W1, 500 × D1, 500 × H2, 000mm) (figura 1A) com um quadro metálico em forma de mais 500 mm acima do piso para apoiar a execução braços forma (figura 1B), iluminação no teto para contêiner Ilumine a superfície do labirinto para a intensidade da luz exigida (Figura 1) e uma câmera de vídeo digital no teto centro para permitir o monitoramento de vídeo ao vivo dos testes comportamentais (Figura 1).</li>
	<li>Os braços (L500 x W100 mm) na estrutura em forma de mais e em seguida sujeite a plataforma quadrado central (W100 x D100 mm) no centro dos quatro braços (Figura 1 -F). Nota: Em nosso laboratório, temos dois tipos de braços abertos (L500 x W100 mm) e dois tipos de braços fechados (L500 x x H450 W100 mm) (Figura 1). Os braços fechados têm paredes ou transparentes ou opacas (Figura 1), e os braços abertos são projetados com ou sem uma borda curta (H5 mm, Figura 1E). A plataforma quadrado central (W100 × D100 mm) é colocada no centro dos quatro braços (Figura 1 -F). Assim, as seguintes quatro combinações de braços podem ser preparadas de acordo com finalidade experimental: abre braços com bordas + braços fechados com paredes transparentes (lajes/transparente), braços abertos, com bordas + braços fechados com paredes opacas (lajes/opaco), de braços abertos sem bordas + braços fechados com paredes transparentes (não-bordas/transparente) e braços abertos sem bordas + braços fechados com opaco paredes (não-bordas/opaco). A superfície da pista de braço é preta, para permitir melhor animal rastreamento pelo software de análise do comportamento automatizado, como descrito na secção 2, análise comportamental.</li>
	<li>Ajuste a intensidade de iluminação na superfície da parte distal da extremidade de cada braço e uma plataforma central para aproximadamente 100 Lux.</li>
	<li>Antes de cada ensaio, limpe todo o aparelho com solução de etanol 70% e limpe com água destilada.</li>
	<li>Clique no botão"gravar" no gravador de disco rígido para iniciar a câmera de vídeo digital que vai gravar o comportamento do rato para o vídeo descrito na secção 2, análise comportamental de análise de imagem.</li>
	<li>Coloque um animal na plataforma central, enfrentando um braço aberto e permitir a livre exploração em cima da aparelho por 5 min.</li>
	<li>Clique no botão"parar" no gravador de disco rígido, para terminar a gravação.</li>
	<li>Conte o número de fezes e micções após retornar o animal testado para o quarto de alojamento dos animais.</li>
	<li>Repita da etapa 1.4 até o final do experimento. Nota: Uma execução de teste seco é sempre efectuada antes de iniciar cada experimento para verificar que todas as configurações experimentais estão corretamente configuradas antes de quaisquer animais experimentais estão expostos a condições experimentais. Caso contrário, alguns animais, especialmente o primeiro animal pode experimentar diferentes condições ambientais (por exemplo, ruídos, possivelmente induzidos pelo experimentador durante pistas de manipulação e/ou animal, eventualmente deixadas pelo animal previamente testado). Nota: Os experimentadores estão perto do recipiente quando um animal está sendo testado. Assim, mesmo que os experimentadores não são visíveis o rato pode ainda ser capaz de senti-los através do cheiro e/ou som.</li>
</ol>2. análise comportamental
Nota: Análise comportamental é realizado pela observação manual e automatizada de software de análise.
<ol><li>
Observação do manual
	<ol>
<li>Depois que o animal é colocado no peitoril, observar o seguinte: número de entradas (uma entrada para um braço é definida como qualquer instância quando todas as 4 patas no braço), o tempo gasto em cada braço, e número de esticada-atendente Postures posturas enfrentando um braço aberto , ao afastar a plataforma central para um braço fechado.</li>
		<li>Medir a duração e a frequência dos comportamentos definidos acima pelo cronômetro e contagem de 5 min, a partir de quando as portas do recipiente estão fechadas.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Análise automatizada
	<ol>
<li>Usando o programa de software disponíveis, gravar o seguinte: a distância percorridas, tempo gasto em diferentes posições de braços abertos (segmentos proximais, médios e distais da plataforma central), e uma análise de minuto a minuto do tempo gasto em aberto e fechado braços.</li>
		<li>Clique no botão"Iniciar" do software análise automatizada ao mesmo tempo, como a observação manual começa (a gravação irá parar automaticamente se a duração de gravação é definido). Nota: O software de análise comportamental utilizado neste estudo rastreia o animal através do seu contraste com o campo de fundo; o animal, que é atribuído a um tamanho fixo, é identificado como o objeto mais brilhante e a locomoção de seu ponto central, portanto, pode ser usada para rastreamento de animais.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Nestler, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+Brain%27s+Reward+Circuitry+in+Depression%3A+Transcriptional+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Role of the Brain's Reward Circuitry in Depression: Transcriptional Mechanisms.</a> Int Rev Neurobiol. 124, 151-170 (2015).</li>
<li>Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+mouse+behavior%3A+interactions+with+laboratory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment.</a> Science. 284 (5420), 1670-1672 (1999).</li>
<li>Handley, S. L., Mithani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+alpha-adrenoceptor+agonists+and+antagonists+in+a+maze-exploration+model+of+%27fear%27-motivated+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn+Schmiedebergs+Arch+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behaviour.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 327 (1), 1-5 (1984).</li>
<li>Pellow, S., Chopin, P., File, S. E., Briley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+open%3Aclosed+arm+entries+in+an+elevated+plus-maze+as+a+measure+of+anxiety+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat.</a> J Neurosci Methods. 14 (3), 149-167 (1985).</li>
<li>Violle, N., Balandras, F., Le Roux, Y., Desor, D., Schroeder, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+illumination%2C+closed+wall+transparency+and%2For+extramaze+space+influence+both+baseline+anxiety+and+response+to+diazepam+in+the+rat+elevated+plus-maze%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Variations in illumination, closed wall transparency and/or extramaze space influence both baseline anxiety and response to diazepam in the rat elevated plus-maze.</a> Behav Brain Res. 203 (1), 35-42 (2009).</li>
<li>Hogg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+validity+and+variability+of+the+elevated+plus-maze+as+an+animal+model+of+anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">A review of the validity and variability of the elevated plus-maze as an animal model of anxiety.</a> Pharmacol Biochem Behav. 54 (1), 21-30 (1996).</li>
<li>Martinez, J. C., Cardenas, F., Lamprea, M., Morato, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+vision+and+proprioception+in+the+aversion+of+rats+to+the+open+arms+of+an+elevated+plus-maze%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Processes%22%5BJournal%5D)">The role of vision and proprioception in the aversion of rats to the open arms of an elevated plus-maze.</a> Behav Processes. 60 (1), 15-26 (2002).</li>
<li>Anseloni, V. Z., Brandao, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethopharmacological+analysis+of+behaviour+of+rats+using+variations+of+the+elevated+plus-maze%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ethopharmacological analysis of behaviour of rats using variations of the elevated plus-maze.</a> Behav Pharmacol. 8 (6-7), 533-540 (1997).</li>
<li>Anseloni, V. Z., Motta, V., Lima, G., Brandao, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+pharmacological+validation+of+the+elevated+plus+maze+constructed+with+transparent+walls%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+J+Med+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral and pharmacological validation of the elevated plus maze constructed with transparent walls.</a> Braz J Med Biol Res. 28 (5), 597-601 (1995).</li>
<li>Hagenbuch, N., Feldon, J., Yee, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+elevated+plus-maze+test+with+opaque+or+transparent+walls+in+the+detection+of+mouse+strain+differences+and+the+anxiolytic+effects+of+diazepam%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Use of the elevated plus-maze test with opaque or transparent walls in the detection of mouse strain differences and the anxiolytic effects of diazepam.</a> Behav Pharmacol. 17 (1), 31-41 (2006).</li>
<li>Fernandes, C., File, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+open+arm+ledges+and+maze+experience+in+the+elevated+plus-maze%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">The influence of open arm ledges and maze experience in the elevated plus-maze.</a> Pharmacol Biochem Behav. 54 (1), 31-40 (1996).</li>
<li>Horii, Y., Kawaguchi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Higher+detection+sensitivity+of+anxiolytic+effects+of+diazepam+by+ledge-free+open+arm+with+opaque+walled+closed+arm+elevated+plus+maze+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Higher detection sensitivity of anxiolytic effects of diazepam by ledge-free open arm with opaque walled closed arm elevated plus maze in male rats.</a> Behav Brain Res. 294, 131-140 (2015).</li>
<li>Santos, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+effect+of+acute+sibutramine+in+female+rats+in+the+elevated+T-maze+and+elevated+plus-maze+tests%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Clin+Pharmacol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the effect of acute sibutramine in female rats in the elevated T-maze and elevated plus-maze tests.</a> Basic Clin Pharmacol Toxicol. 114 (2), 181-187 (2014).</li>
<li>Lynn, D. A., Brown, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ontogeny+of+anxiety-like+behavior+in+rats+from+adolescence+to+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">The ontogeny of anxiety-like behavior in rats from adolescence to adulthood.</a> Dev Psychobiol. 52 (8), 731-739 (2010).</li>
<li>Horii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+Hatano+high-avoidance+rats+show+high+avoidance+and+high+anxiety-like+behaviors+as+compared+with+male+low-avoidance+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Male Hatano high-avoidance rats show high avoidance and high anxiety-like behaviors as compared with male low-avoidance rats.</a> Exp Anim. 61 (5), 517-524 (2012).</li>
<li>Walf, A. A., Frye, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+the+elevated+plus+maze+as+an+assay+of+anxiety-related+behavior+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents.</a> Nat Protoc. 2 (2), 322-328 (2007).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+pharmacological+investigation+of+anxiety+and+maternal+responsiveness+of+postpartum+female+rats+in+a+pup+elevated+plus+maze%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral and pharmacological investigation of anxiety and maternal responsiveness of postpartum female rats in a pup elevated plus maze.</a> Behav Brain Res. 292, 414-427 (2015).</li>
<li>Albani, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavior+in+the+elevated+plus+maze+is+differentially+affected+by+testing+conditions+in+rats+under+and+over+three+weeks+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavior in the elevated plus maze is differentially affected by testing conditions in rats under and over three weeks of age.</a> Front Behav Neurosci. 9, 31(2015).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

À medida que aumenta o número de pacientes que sofrem de transtornos psiquiátricos, incluindo transtorno de ansiedade, é importante desenvolver estudos de ponta para melhorar a compreensão do mecanismo básico de ansiedade. Para conseguir isso, é também importante otimizar os procedimentos experimentais. Portanto, para melhorar a aplicação da elevada além de teste de labirinto, temos demonstrado o efeito das características de braço em resultados experimentais utilizando ratos.
A elevada mais l...

O número de pacientes que sofrem de transtornos do humor, incluindo transtorno de ansiedade e depressão, está aumentando. Embora o desenvolvimento destes transtornos envolve fatores genéticos e ambientais, os mecanismos de patogenicidade detalhados ainda não estão totalmente compreendidos1. Portanto, pesquisa deve centrar-se em desvendar os mecanismos subjacentes de transtornos do humor, bem como o desenvolvimento de medicamentos eficazes que têm menos efeitos colaterais.
Testes comportamentais para animais de laboratório são úteis para investigar a função superior do cérebro, incluindo a emoção. Como comportamento animal é altamente variável, resultados experimentais diferem frequentemente entre laboratórios, mesmo se uma estirpe de pura idêntica foi usado2. Assim, os pesquisadores também precisam entender as características básicas dos dispositivos experimentais adoptarem a fim de fornecer resultados fiáveis, precisos no laboratório.
A elevada além de teste de labirinto foi originalmente criado para examinar a reatividade emocional em roedores3,4. Todo o aparelho é normalmente localizado 500 mm acima do piso e consiste de dois abertos e dois braços fechados que fazem de uma forma mais. Medições de exploração do braço (incluindo a duração e a frequência de entradas em cada braço), distância viajados e especificados comportamentos como postura esticada-atendente de animais sujeitos são registados durante os períodos de observação. Por essas medidas, estima-se como um resultado experimental animal ansiedade.
A elevada além de teste de labirinto é usado em todo o mundo, mas nem todos os laboratórios usam o mesmo aparelho design5,6, e estas diferenças podem afectar os resultados experimentais. Por exemplo, diferenças incluem a presença ou ausência de saliências ao longo de braços abertos e/ou o uso de paredes transparentes ou opacos para braços fechados5,6. As bordas ao longo de braços abertos e o uso de paredes transparentes para braços fechados foram desenvolvidos para evitar animais cair o aparelho7e para facilitar as observações comportamentais dentro os braços fechados, respectivamente de8,9. Embora tenha havido alguns estudos que examinaram as diferenças de estrutura de braço como individuais podem afectar a capacidade de detectar animais ansiedade1,2,5,10,11 , os efeitos combinados de open (com/sem borda curta) e características de braço fechado (transparente/opaco paredes) sobre o comportamento do animal ainda não tenha sido investigada.
Num relatório recente, discutimos o efeito destas combinações de designs de braço no comportamento de ansiedade em ratos12. Em breve, bordas de braço aberto aumentaram significativamente comportamento de ansiedade em ratos, enquanto braços transparentes também podem ter diminuído esse comportamento. Além disso, verificamos a maior sensibilidade de detecção do efeito de um medicamento ansiolítico em uma combinação de braço aberto não-ledged + opaco braço fechado murado em comparação com uma combinação de ledged braço aberto + braço fechado murado transparente. Neste relatório, podemos apresentar nosso protocolo para a elevada mais labirinto teste, juntos com a discussão dos principais resultados do relatório anterior. Acreditamos que este relatório fornecerá informações úteis para aqueles que têm empregado ou quem planeja usar a elevada mais de labirinto em seus estudos.

<table><tbody><tr><td>Recipiente personalizado (W1500 &times; D1500 e vezes; H2000 mm)</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Feito à mão pelo Sr. Akihiro Hirano</td></tr><tr><td>Iluminação</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Feito à mão pelo Sr. Akihiro</td></tr><tr><td>Hirano Aparelho de labirinto elevado NA</td><td></td><td>NA</td><td>Feito à mão pelo Sr. Akihiro Hirano</td></tr><tr><td>Câmera de vídeo digital</td><td>Watec</td><td>WAT-250D2</td><td>Qualquer câmera de vídeo adequada pode ser conectada a um gravador de disco rígido para gravar perfis de rastreamento.</td></tr><tr><td>Gravador de disco rígido</td><td>TOSHIBA</td><td>RD-R200</td><td>Qualquer gravador de disco rígido adequado pode ser conectado à câmera de vídeo digital.</td></tr><tr><td>Ratos Sprague-Dawley</td><td>Charles River Laboratories Japan, Inc.</td><td>NA</td><td>Qualquer rato adequado pode ser usado para o seu estudo</td></tr><tr><td>Gaiola de rato padrão</td><td>Toyoriko</td><td>TP-105</td><td>Qualquer gaiola de rato adequada pode ser usada para o seu estudo</td></tr><tr><td>Instrumento para medir a intensidade da luz</td><td>AS ONE</td><td>1-5818-02</td><td>Qualquer instrumento adequado para medir a intensidade da luz</td></tr><tr><td>EthoVision XT versão 8.0</td><td>Noldus</td><td>NA</td><td>Qualquer software adequado para medir o comportamento animal</td></tr><tr><td>Diazepam</td><td>Taiyo Pharmaceutical Industry</td><td>1124402A2061</td><td>Qualquer medicamento adequado pode ser usado para o seu estudo</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>9005-65-6</td><td>Qualquer medicamento adequado pode ser usado para o seu estudo</td></tr></tbody></table>

testes animal ansiedade em ratos: efeitos de bordas de braço aberto e fechado do braço de parede transparência em elevados além de teste de labirinto

Testing Animal Anxiety in Rats: Effects of Open Arm Ledges and Closed Arm Wall Transparency in Elevated Plus Maze Test

A elevada além de labirinto é um teste comportamental para avaliar ansiedade animal em roedores. Embora este teste é aplicado extensamente no campo da ciência comportamental, resultados conflitantes são fornecidos frequentemente de laboratórios diferentes. Para identificar razões para os diferentes resultados, enfocamos anteriormente características de braço, que diferem entre laboratórios, mais notavelmente a presença/ausência de bordas para os lados de braços abertos e a opacidade/transparência das paredes de braço fechado. Em um relatório anterior, usamos um contêiner personalizado projetado para comparar o comportamento de ratos em diferentes combinações de desenhos de braço abertos e fechados, em condições experimentais idênticas e mostrou diferenças de características de braço interferem experimental resultados. Em breve, bordas de braço aberto aumentaram significativamente comportamento de ansiedade em ratos, enquanto braços transparentes também podem ter diminuído esse comportamento. Além disso, verificamos uma maior sensibilidade de detecção do efeito de um medicamento ansiolítico em uma combinação de braço aberto não-ledged + opaco braço fechado murado em comparação com uma combinação de ledged braço aberto + braço fechado murado transparente. Neste relatório, nós apresentamos o nosso protocolo para a elevada plus teste de labirinto, juntamente com a discussão dos principais resultados do relatório anterior e nossa experiência experimental. Acreditamos que este relatório fornecerá informações úteis para pesquisadores que têm empregado ou quem planeja usar a elevada mais de labirinto em seus estudos.

No estudo anterior, comparamos os efeitos combinados de bordas de braço aberto e transparência das paredes de braço fechado sobre os comportamentos exploratórios no labirinto12. Ratos, significativamente, gastou muito menos tempo em braços abertos sem bordas do que de braços abertos, com bordas (F [1, 60] = 13.49, P = 0,0005) (Figura 2A). Resultados semelhantes foram encontrados também para o número de entradas nos braços aber...

Ansiedade-como o comportamento dos ratos testados da elevada mais labirinto altamente varia de acordo com o ambiente de teste. Aqui nós mostramos como configurações do aparelho, especialmente a estrutura de braço, afetam o comportamento no labirinto, e explicamos um protocolo confiável para detectar os efeitos dos ansiolíticos. Este relatório irá contribuir para a investigação de ansiedade.

Testes Animal ansiedade em ratos: efeitos de bordas de braço aberto e fechado do braço de parede transparência em elevados além de teste de labirinto

The elevated plus maze test is a behavioral test for assessing animal anxiety in rodents. Although this test is widely applied in the field of behavioral ...

O objetivo geral deste experimento é medir a ansiedade em ratos, usando o labirinto em cruz elevado apropriado. O principal achado deste estudo é que a sensibilidade de detecção do efeito da droga ansiolítica pode mudar dependendo das características do aparelho de labirinto cruzado elevado. Este estudo pode ajudar os pesquisadores a montar o aparelho de labirinto em laboratório, apropriado para seu objetivo experimental, e garantir um ótimo registro de dados.Demonstrando o procedimento estará um pesquisador convidado do meu laboratório. Para começar, configure o aparelho de labirinto em cruz elevado em um recipiente de armário personalizado. A estrutura metálica em forma de mais do labirinto deve ser elevada a cerca de meio metro do chão.Mantenha um brilho consistente em todo o labirinto na intensidade necessária. No ponto central suspenso, monte uma câmera de vídeo digital para gravar e monitorar os testes. Agora fixe os braços do labirinto na estrutura.Existem dois tipos de braços abertos, com ou sem bordas de 5 MM nas laterais. Existem também dois tipos de braços fechados. As paredes podem ser translúcidas ou opacas.Prenda a plataforma central quadrada entre os braços. A plataforma central e as superfícies da pista do braço do labirinto são coloridas de preto para melhor rastreamento dos animais pela análise comportamental automatizada. Agora, com os braços no lugar, ajuste a intensidade da iluminação, de modo que haja aproximadamente 100 lux na superfície da parte final distal de cada braço e na plataforma central.Antes de cada teste, limpe todo o aparelho com solução de etanol a 70% e, em seguida, limpe-o com água destilada. Clique no botão de gravação no gravador de disco rígido para começar a coletar imagens da câmera de vídeo digital. Se o equipamento estiver funcionando, faça o teste.Comece o teste colocando o rato na plataforma central, de modo que fique de frente para o braço aberto, e feche as portas do armário. Em seguida, deixe a exploração livre no aparelho por cinco minutos. O resultado experimental pode variar, dependendo se o rato é avaliado de frente para um braço aberto ou cruzado.É melhor sempre colocar os ratos, apoiados no braço aberto para evitar o congelamento, na primeira entrada do braço fechado. Após cinco minutos, pare a gravação para encerrar o teste. Em seguida, devolva o rato à gaiola e conte o número de fezes e micções no labirinto antes de limpá-lo.Sempre execute a análise comportamental usando a observação manual e o software de análise automatizada. A partir do vídeo, registre manualmente o número de entradas que o rato faz nos braços do labirinto. Uma entrada é definida como qualquer instância em que todas as quatro patas estão no braço.Registre também o tempo gasto em cada braço e o número de posturas alongadas feitas enquanto o rato está na plataforma central voltado para um braço aberto e recuando em um braço fechado. Realize essas medições usando um cronômetro e um contador durante o teste de cinco minutos. Para realizar uma análise automatizada, abra a gravação de vídeo em um programa de software comercial.O software rastreia o animal no labirinto, usando o contraste entre o animal e o chão escuro. Primeiro, atribua o animal a uma bolha de contraste de um tamanho específico e, em seguida, atribua o centro da bolha como o ponto de rastreamento. Em seguida, para o teste completo de cinco minutos, faça com que o software registre a distância percorrida, o tempo gasto em diferentes posições com os braços abertos e fechados e o tempo total gasto com os braços abertos e fechados.Às vezes, a análise automatizada não consegue distinguir entre entradas e não entradas em armas. Portanto, recomendamos que a observação manual seja sempre realizada além da análise automatizada. Os resultados do comportamento exploratório de ratos no labirinto em cruz elevado com diferentes designs de braços abertos e fechados mostram que os ratos passam mais tempo de braços abertos com bordas do que de braços abertos sem bordas.Eles também fizeram mais entradas nesses braços, portanto, as saliências provavelmente aumentam o comportamento exploratório em braços abertos. Os ratos apresentaram postura significativamente menos alongada em braços fechados com paredes transparentes do que em braços fechados com paredes opacas. Sugerindo que as paredes transparentes do braço fechado diminuíram o comportamento semelhante à ansiedade.Os ratos também passaram mais tempo nos segmentos distais dos braços abertos quando os braços fechados tinham paredes transparentes do que quando os braços fechados tinham paredes opacas. Além disso, a exploração distal de braço aberto foi significativamente menor em labirintos sem bordas e combinações de braços opacos do que em bordas e combinações de braços transparentes. Portanto, a sensibilidade de detecção pode ser alterada, dependendo da combinação de designs de braço usados.Para verificar as diferenças na sensibilidade de detecção entre os diferentes tipos de desenho do braço, um novo experimento foi realizado usando o medicamento ansiolítico Diazepam. Resumindo, o efeito do tratamento com altas doses de Diazepam foi detectado no aparelho de parede opaco sem bordas, mas não no aparelho de parede transparente com bordas. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de tratar todos os animais nas mesmas condições experimentais e certificar-se de que todos os animais sejam colocados de frente para o mesmo braço aberto ou fechado no início de cada teste.Depois de assistir a este vídeo, você deve entender como configurar o aparelho de labirinto cruzado elevado. É importante lembrar que os resultados experimentais podem variar dependendo do design do braço. Portanto, recomendamos o uso de braços apropriados para seus objetivos experimentais.

testing-animal-anxiety-rats-effects-open-arm-ledges-closed-arm-wall

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

O teste de labirinto em cruz elevado é um dos testes mais utilizados para medir a ansiedade-como o comportamento em camundongos. Aqui, apresentamos um filme mostrando os procedimentos detalhados para a realização do ensaio.

Labirinto elevado para Ratos

As medidas labirinto ansiedade-como o comportamento em roedores. Existem dois oposta fechada e dois braços abertos opostos; roedores ansiosas evitar os braços abertos. A área central é nem completamente aberta nem fechada, assim que o tempo gasto aqui é ambígua e difícil de interpretar. Aqui uma modificação do protocolo de labirinto eliminar esta área é descrito.

O Becos Teste sucessiva de ansiedade em camundongos e ratos

Comprometimento cognitivo decorrentes da gestão radioterápico de tumores cerebrais representa uma condição clinicamente intratáveis ​​que impacta negativamente a qualidade de vida. A capacidade de avaliar criticamente potenciais intervenções para amenizar induzida por radiação decrementa cognitivo depende em última instância a capacidade de realizar rigorosa avaliações quantitativas da cognição.

Diminui quantificar cognitivos causados ​​pela radioterapia craniana

O dry-terra Barnes labirinto é amplamente utilizado para medir a capacidade de navegação espacial em resposta a estímulos aversivos levemente. Nos dias consecutivos, o desempenho (por exemplo, a latência para localizar gaiola escape) de indivíduos do grupo controle melhora, indicativo de aprendizagem normal e memória. As diferenças entre ratos e camundongos exigem aparelhos e metodologia mudanças que estão detalhadas aqui.

Barnes Estratégias Teste Labirinto com pequenas e grandes roedores Modelos

Um protocolo é fornecido para usar um labirinto de campo aberto para acessar a atividade locomotora geral, ansiedade e emocionalidade em um modelo de camundongo de laboratório.

A utilização do campo aberto Maze medir Locomotor e Ansiedade-like Comportamento no Mice

Aqui, apresentamos um protocolo para investigar as alterações do nível de ansiedade de modelos animais roedores. O elevado e mais labirinto teste (EPM), usado em conjunto com um vídeo, software de monitoramento, fornece um método confiável para documentar o efeito de diversos tratamentos potenciais do ansiolítico em cenários laboratoriais pré-clínicos.

Elevado, mais teste combinado com vídeo que segue o Software para investigar o efeito ansiolítico dos suplementos cetogênica exógenos de labirinto

Com a manipulação optogenética de populações neuronais específicas ou regiões cerebrais, o comportamento pode ser modificado com alta resolução temporal e espacial em animais em movimento livre. Usando diferentes ferramentas optogenéticas em combinação com fibras ópticas cronicamente implantadas, uma variedade de modulações neuronais e testes comportamentais podem ser realizados.

Manipulação optogenética da atividade neuronal para modular o comportamento em camundongos em movimento livre

Apresentamos aqui um modelo de rato de ansiedade induzido por isolamento social (SI) que utiliza camundongos selvagens do tipo C56BL/6J para induzir estresse e comportamento semelhante à ansiedade com manuseio mínimo e sem procedimentos invasivos. Este modelo reflete os padrões da vida moderna de isolamento social e é ideal para estudar ansiedade e distúrbios relacionados.

Modelo de Isolamento Social: Um Modelo de Roedores Não Invasivo de Estresse e Ansiedade

Este manuscrito apresenta um conjunto de testes comportamentais altamente reprodutíveis para validar um modelo de camundongo com síndrome de Angelman.

Caracterização comportamental de um modelo de camundongo com síndrome de Angelman

Este protocolo descreve um modelo de estresse leve imprevisível crônico (CUMS) para depressão baseado na teoria médica mongol, juntamente com métodos para validar testes comportamentais.

Estresse Leve Imprevisível Crônico em Ratos com base na medicina mongol

Aprenda a medir ansiedade em ratos usando o labirinto em cruz elevado com diferentes designs de braços abertos e fechados. Este método ajuda pesquisadores a configurar o aparelho adequadamente para detectar efeitos de drogas ansiolíticas com maior sensibilidade e confiabilidade nos dados.

Testes Animal ansiedade em ratos: efeitos de bordas de braço aberto e fechado do braço de parede transparência em elevados além de teste de labirinto (Vídeo) | JoVE Journal

Testes Animal ansiedade em ratos: efeitos de bordas de braço aberto e fechado do braço de parede transparência em elevados além de teste de labirinto

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