Name: Laminotomy para acesso de gânglio lombar Dorsal raiz e injeção em suínos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Aprenda a técnica de laminotomia para acesso ao gânglio da raiz dorsal lombar e injeção intraganglionar em suínos. Este método padronizado permite entrega precisa de agentes terapêuticos com confirmação histológica.

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O estudo foi realizado com o apoio pela Fundação da família de Schulze (para A.S.B.).

todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo cuidado institucional do Animal e Comissão de utilização (IACUC) da clínica Mayo.
 1. pré-requisitos de Rigor e reprodutibilidade <ol><li>para garantir o rigor do desenho, siga os padrões nacionais de laboratório boa práticas estão em todos os momentos e obterem aprovação interna por IACUC (ou comitê semelhante) antes de qualquer animal envolvimento em experiências. 
	Nota: Este protocolo foi projetado para manter uma abordagem clinicamente fiel. Assim, os materiais, instrumentos e técnicas envolvidas são descritas de forma idêntica para os mais altos padrões clínicos em seres humanos. Por exemplo, técnica asséptica estrita é seguida e nunca devem ser utilizados materiais expirados.</li>
	<li>Para oferecer suporte a reprodutibilidade desta metodologia em um ambiente experimental, desenvolver procedimentos internos habituais de funcionamento e de controle para variabilidade na raça suína, peso, sexo e idade entre coortes separadas. 
	Nota: O design deste protocolo foi baseado na utilização de suínos com peso kg. 38-53</li>
</ol> 2. Pré-operatório Cuidado Animal <ol><li>administrar profilaxia intramuscular (IM) ceftiofur, dado em 5 mg/kg, 1 dia antes do procedimento.</li>
	<li>Rápido animais de alimentos sólidos e restringir os animais de tratamentos cosméticos, ou seja, os banhos de óleo, 12 h antes do procedimento.</li>
	<li>Induzir anestesia geral até 1 horas após o procedimento, usando IM tiletamina e eficiente, dado como Telazol em 5 mg/kg e IM xilazina, dada em 2 mg/kg.</li>
	<li>Uma vez que induzida, administrar subcutânea liberação sustentada a buprenorfina (SC) (SR), dada em 0,18 mg/kg.</li>
	<li>Coloque um cateter de orelha-veia e realizar intubação de rápida sequência para colocar um tubo endotraqueal.</li>
	<li>Anexar um oxímetro de pulso com função de língua para monitorar a frequência cardíaca e oxigenação de controlo do ritmo cardíaco.</li>
	<li>Colocar o animal na posição de bruços e cortar a pele sobre o dorso usando uma tosquiadeira elétrica. Grampo de cabelo sobre uma área grande, bilateral, estende-se da linha média sagital ao plano coronal mediana longitudinalmente o ápice sacral para os espinhos escapulares. Use fita adesiva para remover o cabelo e pele flutuante.</li>
	<li>Esfregue a área cortada até 3 vezes com água morna e sabão e seque a pele com uma toalha de pano sem.</li>
	<li>Pontos anatômicos bilaterais Mark, usando uma caneta de marcação cirúrgica. Marcar a última costela, cristas ilíacas, processos espinhosos e processos transversos. 
	Nota: Marcando a última costela, cristas ilíacas e processos transversos, a coluna lombar é demarcada ao longo de seus limites laterais, superiores e inferiores, respectivamente. Este protocolo foi projetado para orientar o acesso e a injeção de qualquer DRG lombar de interesse. Para referência, a crista ilíaca superior alinhar-se com o nível vertebral L3 ou L4.</li>
	<li>Cobrir o animal com um cobertor quente para o transporte para a suíte operativa.</li>
</ol> 3. Posicionamento na suíte operativa <ol><li>suavemente do elevador e a posição do animal propenso num grande animal humano modificado sling com abertura abdominal acolchoada. 
	Nota: A abertura abdominal permite a diminuição da pressão abdominal semelhante ao quadro Wilson utilizado durante a cirurgia humana da coluna vertebral. Por sua vez, isso diminui o sangramento intra-operatório de vasos sanguíneos da coluna vertebral. O sling é vantajoso, porque as pernas são permitidas para pendurar-se livremente através das aberturas acolchoadas que proteger o animal de choque do nervo periférico. No entanto, porque o frame do sling é feito de metal, que deve ser acolchoada com isolamento para evitar curto-circuitos elétricos e queimadura animal inadvertida. Um rolo de manta pode ser colocado para posicionar a cabeça e o pescoço em uma posição confortável, dependendo do tamanho do animal.</li>
	<li>Manutenção de anestesia geral usando 1-3% inalado isoflurano (IH), titulado para o efeito. Umedecer os olhos com pomada oftálmica e suavemente fita eles.</li>
	<li>Linhas de lugar para monitoramento de sinais vitais para documento de temperatura, pressão arterial, frequência cardíaca e oxigenação. Monitor de ventilação por capnografia.</li>
	<li>Coloque um eletrodo dispersivo eletrocirúrgico descartável, adesivo sobre a escápula esquerda ou direita.</li>
	<li>Administrar aquecido de lactato de Ringer &#39; s como fluidos de manutenção através do cateter de orelha-veia. Dar líquidos a uma taxa de 5-10 mL/kg/h.</li>
	<li>Coloque um dispositivo de aquecimento de ar forçado sobre a região cervical e torácica e evitar cobrindo as últimas costelas.</li>
</ol> 4. Preparação estéril do campo operatório para uma injeção de lado esquerdo Nota: a partir daí, proceder de forma estéril rigorosa.
<ol><li>Preparar a pele sobrejacente o início da coluna lombar com ampla aplicação de 0,7% iodo povacrylex e 74% álcool isopropílico de acordo com o fabricante &#39; instruções s. Para assegurar que a agulha guia mais tarde pode ser colocada de forma estéril, lateralize aplicação para o lado da injeção planejada, estendendo a anti-sepsia para o plano coronal mediana passado as apófises transversas marcados.</li>
	<li>Colocar toalhas cirúrgicas descartáveis em forma retangular para delinear o local da incisão planejada, que é sobre a linha média ao longo do marcado processos espinhosos lombares.</li>
	<li>Aplicar um adesivo antimicrobiano incise disponha sobre as toalhas operativas e expostos a pele. Braçadeira de cortinas no lugar e estender a borda do drapery fora do campo operatório.</li>
	<li>Garantir um caimento vertical para polos na cabeça do sling, entre o campo operatório e o acompanhamento técnico.</li>
	<li>Secure linhas de sucção e eletrocirurgia dentro do campo operatório, fixando o drapejam estéril. Passe as extremidades livres dos tubos e fios para fora do campo estéril.</li>
</ol> 5. Incisão e dissecção Subperiosteal de pele <ol><li>palpar os processos espinhosos lombares ao longo da linha mediana e identificar 3 níveis vertebrais consecutivos.</li>
	<li>Usar um bisturi #15 para abrir uma incisão sagital mediana de 8-12 cm através a cortina entalha diretamente posterior para os processos espinhosos. Manter a hemostasia utilizando gaze de tamponamento e eletrocirurgia monopolar. 
	Nota: Tenha cuidado para não se desviar da linha média, como a incisão é avançada na direção anterior, porque isso limita a sangrar dos músculos paraspinal. Palpação periódica para os processos espinhosos facilita avanço. Auto retenção afastadores Weitlaner, Fi ou Gelpi pode ser colocado e reposicionado conforme necessário para facilitar a dissecação. Sucção é usada para manter a visibilidade.</li>
	<li>Dissecar o tecido subcutâneo e gordura usando eletrocirurgia monopolar até atingir a fáscia toracolombar. Palpar os processos espinhosos profundamente à fáscia toracolombar e cortar a fáscia ao longo da linha mediana para expor o ligamento supra-espinhal abrangendo entre processos espinhosos. 
	Nota: A fáscia toracolombar é identificada como uma bainha aponeurótico, organizada com um grão de tecido conjuntivo que entrelaça em um oblíquo, lateral de direção medial. Neste ponto, a incisão pode ser alongada na direção superior ou inferior para garantir que 3 processos espinhosos são totalmente visíveis, com o processo espinhoso centermost alinhado no centro do campo de dissecação.</li>
	<li>Usar uma lâmina #15 para colocar uma incisão profunda parasagital 2mm através do ligamento supra-espinhal posterior para cada processo espinhoso. Coloque cada incisão ao longo do terceiro esquerdo da superfície posterior do processo espinhoso.</li>
	<li>Gentilmente liberar o ligamento supra-espinhal em cada nível ao longo de cada incision usando um elevador mais livre de 5 mm.</li>
	<li>Identificar o avião subperiosteal e dissecar dentro daquele avião ao longo da superfície lateral de cada processo espinhoso.</li>
	<li>Faz dissecação subperiosteal em cada processo espinhoso de forma paralela para assegurar que um gentil, dissecação mesmo é alcançada.</li>
	<li>Incise a fixação muscular paraspinal ao longo dos espaços interespinhoso usando eletrocirurgia monopolar em concerto com dissecação subperiosteal.</li>
	<li>Identificar a lâmina em cada nível e continuar subperiosteal dissecação lateralmente para atingir a borda lateral do zygapophyseal 2 articulações que conectam as 3 vértebras expostas e para atingir a borda lateral da lâmina entre as articulações, chamado os pars interarticularis. 
	Nota: O interarticulares é a borda posterior do Forame intervertebral, no qual reside o DRG. Ocasionalmente, uma pequena veia surge de um forame localizado na superfície posterior da lâmina. Estas veias têm uma tendência a se romper durante a dissecção subperiosteal. Hemostasia é facilmente conseguida usando uma combinação de eletrocirurgia bipolar e cera para osso aplicado ao forame.</li>
</ol> 6. Nível único Laminotomy <ol><li>identificar o alvo de laminotomy como a lâmina de centermost localizada entre e medial para as 2 juntas zygapophyseal.</li>
	<li>Rastrear a lâmina de sua borda inferior, a um ponto apenas medial ao processo articular inferior contíguo da articulação zygapophyseal caudal.</li>
	<li>Usar um elevador mais livre de 5 mm ou cureta para palpar a transição entre a borda da lâmina e canal central de caudalmost. 
	Nota: Cuidado para não forçar o instrumento palpating anterior como isto entrará em contato com o saco dural e a medula espinhal. Observe que a medula espinhal em suínos ultrapassa a coluna lombar 18. Um rongeur do disco intervertebral pode ser usado para remover a sobrejacente nesta área para facilitar a palpação de tecidos moles adicionais.</li>
	<li>Uso um 2-mm até morder, 45º Kerrison rongeur para extrair o osso de forma piece-wise. Remover o osso ao longo da base do processo espinhoso superiormente para um nível apenas caudal à superfície caudal do pedículo e sair lateralmente para toda a sua extensão.</li>
	<li>Uso angulado ruginas osso para ajudar com a remoção de osso. Deixe o processo articular inferior que foi conectado com a lâmina no lugar até o laminotomy é em grande parte concluída.</li>
	<li>Confirmar que o processo articular inferior é livremente móvel e anexado apenas pela cápsula articular zygapophyseal. Incise a cápsula usando uma lâmina 15 # ou #11.</li>
	<li>Remover o processo articular inferior de forma piece-wise, mas deixar o processo articular superior adjacente intacta. 
	Nota: Como o laminotomy é concluída, hemostasia é realizada com eletrocirurgia bipolar. Eletrocirurgia monopolar não é usada por causa da proximidade de estruturas neurais. Cera para osso pode ser colocada ao longo de sítios de sangramento do osso exposto e esponjas de gelatina absorvível podem ser usadas para obter hemostasia perto de tecidos moles. Cottonoid é uma ferramenta útil para fluido seroso de pavio e sangue longe a dissecação.</li>
</ol> 7. Dissecação de DRG <ol><li>evacuar a gordura peridural em uma forma piece-wise de superficial para profunda começando medialmente e prosseguindo lateralmente. Remover a gordura por dissecação suave, usando a pinça bipolar e sucção com 6-10 dicas de aspiração Frazier francês. 
	Nota: Lupa ampliação ou o uso de um microscópio de dissecação é útil para fornecer o nível de detalhamento necessário seguramente evacuar a gordura epidural e obter hemostasia meticulosa do plexo venoso epidural usando eletrocirurgia bipolar.</li>
	<li>Identificar o saco dural ao longo da linha mediana correndo em uma direção superoinferior, paralela ao eixo da incisão da pele. Remova a gordura epidural ao longo o saco dural, até o saco dural pode ser visto a dar origem a manga de raiz de nervo dural.</li>
	<li>Rastrear a manga dural lateralmente e inferiormente pela evacuação de gordura epidural até é visto para ampliar em torno da DRG. 
	Nota: Identifica o DRG para sua forma oval e amarelo, a cor laranja. Da espinha lombar médio, DRG é geralmente 4-6 mm de tamanho, maior a medial para lateral direção e localizado diretamente inferior ou 2-3 mm medial para seu respectivo pedículo. Um gancho de nervo romba, direito-angular pode ser usado para palpar delicadamente para pedículo.</li>
	<li>Evacuar gordura epidural lateralmente, passado o DRG, até que o nervo espinhal adjacente é visto. 
	Nota: Se ocorrer durotomy, repará-lo pelo fechamento estanque usando sutura nylon 6-0 e condutor de agulha micro suave em uma simples execução stich.</li>
</ol> 8. Injeção de DRG <ol><li>uso uma agulha espinhal 22 para guiar a trajetória da agulha calibre 32 convecção entrega aprimorada (CED). Punção da agulha de calibre 22 guia através dos músculos, pele e paraspinal. 
	Nota: A agulha CED é projetada para alcançar a convecção fluida em tecido, também conhecido como fluxo de granel, devido a gradientes de pressão 19 , 20.</li>
	<li>Aponta a agulha guia ao longo de uma trajetória que se aproxima do eixo longitudinal da RDG e resulta na ponta da agulha emergentes da parede lateral paraspinal do campo dissecação.</li>
	<li>Fine tune o caminho da agulha até o lúmen da agulha se alinha com o centro da RDG. 
	Nota: A agulha guia nunca devem entrar em contato com a DRG.</li>
	<li>Elaborar injectate estéril para uma seringa estéril e conecte a seringa para o tubo de infusão estéril.</li>
	<li>Fixar o tubo na agulha do CED e a seringa para fora do campo estéril. Conecte a seringa de uma bomba de seringa programável. 
	Nota: Tubulação está preparada para um comprimento de 5 pés para garantir a manutenção de esterilidade e mobilidade. Além disso, é de suma importância que nenhuma bolha de ar ser introduzido na solução.</li>
	<li>Avançar o injectate até expressão é visto da ponta de agulha CED.</li>
	<li>Coloque a agulha CED dentro do lúmen da agulha guia e avance lentamente a agulha de CED, até que surge a partir da ponta da agulha guia. Certifique-se de que o DRG não é perfurado durante o alinhamento da agulha.</li>
	<li>Fine tune guia da posição da agulha ao longo do eixo longo de sua trajetória para determinar a localização final da ponta da CED.</li>
	<li>Secure guia de agulha e agulha de CED juntos usando cubos de agulha bloqueio depois de profundidade e alinhamento do guia e agulhas CED é alcançado.</li>
	<li>Confirmar que todas as conexões de aparelhos de injeção estão plenamente garantidas, incluindo o guia agulha, agulha de CED, e tubulação conectada carregado com injectate.</li>
	<li>Fazer avançar a agulha guia ao longo de seu eixo longo para aproximar a ponta da agulha CED e DRG.</li>
	<li>Punção RDG com a ponta da agulha CED.</li>
	<li>Mergulhe a ponta da agulha CED no centro tridimensional da RDG. <br / &gt; Nota: porque o DRG é uma estrutura tridimensional, de tamanho variável e forma, DRG exposição deve ser completa para colocar com precisão a ponta da agulha CED no verdadeiro centro da RDG. O verdadeiro centro DRG está localizado na interseção de seus três eixos anatômicos, ou seja, o anterior para posterior, lateral para medial e superior aos eixos inferiores.</li>
	<li>Entregar 100 μL de injectate pelo CED usando uma taxa graduada e um volume de 3 passos.</li>
	<li>Entregar 4 μl a 2 µ l/min para a primeira etapa. Entrega 8 μL em 4 µ l/min. para a segunda etapa. Entregar 88 μL em 8 µ l/min para a terceira e última etapa. 
	Nota: Permitir que uma pausa de 3 min entre etapas e após a etapa final para permitir o equilíbrio de pressão.</li>
	<li>Retirar o aparelho de injeção após a etapa de injeção final e 3-min pausa ao longo de seu eixo longo com um movimento suave e gentil. 
	Nota: Para soluções injetáveis são incolores, tintura colorida está incluída na solução em uma concentração de 0,1% peso/volume para auxiliar na avaliação visual da distribuição de injectate 12. Além disso, o corante vital 4 &#39;, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) está incluído na solução em uma concentração de 0,25 μg/μL, quando o projeto de estudo requer avaliação histológica da distribuição de injectate 5.</li>
</ol> 9. Encerramento <ol><li>aplicar 3 rodadas de irrigação salina quente para o sítio cirúrgico antes da sutura para mobilizar e liberar o site de detritos, ou seja, fragmentos de ossos. Usar sucção para recuperar a solução salina e detritos. 
	Nota: Hemostasia meticulosa é assegurada quando a irrigação permanece clara. Agentes hemostáticos (esponja de gelatina) e cottonoid são removidas neste momento. Certifique-se de que todos os materiais e instrumentos foram desminados do local da incisão antes da sutura.</li>
	<li>Usar uma técnica de 3 camadas para o encerramento.</li>
	<li>Sutura da fáscia toracolombar usando sutura 0 de uma forma simples, interrompida, noninverted. Coloque um stich cada 5-8 mm para atingir fechamento estanque.</li>
	<li>Sutura do tecido subcutâneo usando sutura 2-0, de forma simples, interrompida, invertida, com um ponto colocado cada 5 a 8-mm para alcançar a força adequada.</li>
	<li>Fechar a pele usando sutura 0 de uma forma simples, funcionando ou interrompido moda.</li>
	<li>Usar um contador de agulha para garantir que nenhum farelos estão desaparecidos há</li>
	<li>Irrigar pele com soro fisiológico, secar a pele e coloque as tiras de bandagem adesiva a incisão perpendicular.</li>
	<li>Lugar de tiras de gaze em cima do curativo e anexar um adesivo final antimicrobiano incise drape.</li>
</ol> 10. Cuidado pós-operatório do Animal <ol><li>os tubos, cobrir com cobertores e transportar o animal para recuperação.</li>
	<li>Siga os procedimentos operacionais institucionais padrão para acompanhamento pós-operatório e a recuperação da cirurgia de sobrevivência. No mínimo, observar o animal cada 15 min até o retorno da consciência, por hora, até que a recuperação anestésica completa é alcançada e duas vezes por dia daí em diante.</li>
	<li>Gestão de dor pós-operatória fornecer ao administrar IM ou oral carprofeno, dada em 4 mg/kg, uma vez ao dia durante 5 dias, começando no dia pós-operatório 0. Administrar SC buprenorfina SR, dado em 0,18 mg/kg, uma vez no 2º dia pós-operatório.</li>
	<li>Administrar anti-sepsia pós-operatória, dando a IM ceftiofur, dado a 5 mg/kg, uma vez no dia pós-operatório 4.</li>
	<li>Remover o curativo no pós-operatório dia 5-7. Remover as suturas quando a cicatrização estiver completa, geralmente no pós-operatório dia 10-14.</li>
	<li>Humanamente eutanásia do animal de acordo com os procedimentos operacionais padrão institucionais, uma vez atingido o ponto de extremidade do estudo.</li>
</ol>

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<li>Shen, J., Wang, H. Y., Chen, J. Y., Liang, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologic+analysis+of+normal+human+lumbar+dorsal+root+ganglion+by+3D+MR+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22AJNR+Am+J+Neuroradiol%22%5BJournal%5D)">Morphologic analysis of normal human lumbar dorsal root ganglion by 3D MR imaging.</a> AJNR Am J Neuroradiol. 27 (0195–6108 (Print)), 2098-2103 (2006).</li>
<li>Pleticha, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+convection-enhanced+delivery+of+biologics+into+dorsal+root+ganglia%3A+validation+in+the+pig+model+and+prospective+modeling+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive convection-enhanced delivery of biologics into dorsal root ganglia: validation in the pig model and prospective modeling in humans.</a> J Neurosurg. 121 (4), 851-858 (2014).</li>
</ol>

Nenhum; os autores têm sem conflitos de interesse relacionados com este estudo.

Procuramos descrever um método de exposição cirúrgica de DRG através de laminotomy e injeção de intraganglionic em uma espécie animal saudável, especificamente, a suína. Em roedores, um método semelhante foi detalhada 12 e usado para entregar agentes farmacológicos convencionais 8,10 e vetores virais 6,7,9,12<...

Gânglios da raiz dorsal (DRG) são coleções anatomicamente discretas, neuronais, localizadas ao longo da coluna vertebral. Cada DRG contém os neurônios sensoriais primários que codificam e transmitir estímulos periféricos ao sistema nervoso central (SNC) de regiões específicas do corpo. Por exemplo, a dor da osteoartrite começa quando os receptores de dor localizados sobre uma articulação percebem estímulos nocivos. Este processo é denominado de nocicepção. Consciência a longo prazo dos estímulos nocivos leva à dor crônica 1.
Dor crônica é um tema frequente de estudo pré-clínicos 2 onde um dos objetivos é desenvolver métodos úteis para entrega alvo de analgésicos a DRG, tais como a injeção de intraganglionic 3. No entanto, DRG são difíceis de acesso porque eles residem dentro dos limites magrela do Forame intervertebral 4. Vários grupos superaram com êxito este obstáculo através do uso de cirurgia da coluna vertebral em roedores 5,6,7,8,9,10.
Na clínica, laminectomia é uma operação comum da coluna vertebral e refere-se a remoção cirúrgica da lâmina vertebral, desse modo unroofing o canal vertebral 11. Incorporação de técnicas cirúrgicas para permitir acesso direto de DRG tem sido bem sucedida em roedores 5,12, no entanto, a tradução pode ser irrealistas considerando diferenças no tamanho das estruturas relevantes e como isso influencia farmacocinética ou viabilidade técnica 13,14. Por exemplo, um estudo determinou o diâmetro transversal da medula espinhal em T10 ser 3.0, 7.0 e 8,2 mm para humanos, respectivamente, 15, porco e rato. Assim, o animal grande modelos melhor humanas aproximadas de estruturas nervosas.
Em suínos, et al . Raore usado laminectomia multi-nível para obter acesso à medula espinhal cervical por múltiplas injeções intraspinal 16. O procedimento foi bem tolerado e levou a uma fase I ensaio clínico onde os resultados cirúrgicos comparáveis foram documentados 17. Estes resultados encorajam uso continuado de modelos pré-clínicos de animais grandes como preditores de viabilidade técnica e de segurança em humanos.
Até à data, nenhuma metodologia detalhada existe para acesso cirúrgico e injeção de DRG em uma espécie animal. Para diminuir esse fosso translacional, relatamos um protocolo para exposição DRG e injeção através de laminotomy em suínos. Materiais, instrumentos e técnicas neurocirúrgicas padrão foram utilizados e o método foi projetado para imitar a prática cirúrgica moderna. Demonstramos a injeção intraganglionic utilizando uma solução aquosa de DRG lombar e confirmar entrega bem sucedida através de histologia após dia pós-operatório 21.

<table><tbody><tr><td>Estilingue animal humano grande</td><td>Britz & amp Empresa</td><td>002539</td><td>Modificado para incluir abertura abdominal</td></tr><tr><td>Eletrodo adesivo de retorno do paciente - sistema</td> de aquecimento de sangue e fluidos <td>Medtronic</td><td>E7506-Ranger</td><td></td> de 9 polegadas</tr> <tr><td></td><td>3M</td><td>24500-Fluido</td><td></td></tr> de <tr><td>Ringer com lactato</td><td>Hospira</td><td>0409-7953-09-Force</td><td></td></tr> <tr><td>dispositivo de aquecimento de ar</td><td>3M</td><td>77500</td><td>-</td></tr><tr><td>Solução Duraprep com aplicador, 26 mL (0,7% de iodo povacrylex, álcool isopropílico 74%)</td> <td>3M</td><td>8630-Toalhas</td><td></td></tr> <tr><td>cirúrgicas descartáveis estéreis</td> Campo cirúrgico de incisão <td>Medline</td><td></td> <td>MDT2168286-Ioban</td></tr> <tr><td>2</td><td>3M</td><td>6651EZSB</td> <td>-</td></tr> <tr><td>Recipiente e tubo de sucção descartáveis</td><td>Medline</td><td>DYND44703H</td> Interruptor <td>de</td></tr> <tr><td>botão lápis monopolar</td> <td>eletrocirúrgicoPinça</td> eletrocirúrgica bipolar reta fina e fina <td>E2450H-Fine</td><td></td></tr><tr>, lâmina <td>Bovie</td><td>A826</td><td>-</td>#15 <td>de 4 1/2 polegadas</td></tr> <tr><td></td><td>Lâmina Miltex</td><td>4-315</td><td>-</td></tr><tr><td>#11</td> Gaze cirúrgica <td>Miltex</td><td>4-311-4</td><td></td></tr> <tr><td>x 4 Afastador</td> auto-retentor <td>Dynarex</td><td>3262-Weitlaner</td><td></td></tr><tr><td>, 8 polegadas</td><td>Miltex</td><td>11-618</td><td>-</td></tr><tr><td>Afastador auto-retentor Meyerding, 1 x 2 3/8 polegadas</td><td>Sklar</td><td>42-2078-Gelpi</td><td></td></tr> <tr><td>afastador auto-retentor,</td> elevador <td>Sklar</td><td>60-6570-Freer</td> <td>de</td></tr> <tr><td>7 polegadas, 5 mm</td><td>Medline</td><td></td> <td>MDS4641518F-Cera</td></tr> óssea <tr><td></td><td>Ethicon</td><td>W31G-Spurling</td><td></td></tr> <tr><td>rongeur do disco intervertebral, 3 mm</td><td>Sklar</td><td>42-2852</td><td>-</td></tr><tr><td>Rongeur Kerrison de 45 graus, mordedor ascendente,</td> rongeur angular <td>Medline</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>MDS4052802-Leksell de 2 mm, Sklar</td><td></td><td>40-4097-Gelfoam</td><td></td> de 2 mm</tr><tr><td>, tamanho 50</td> Ponta de sucção <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>8004007-Frazier</td> <td>Medtronic AZL32301-Cottonoid patty</td></tr> da Pfizer<tr><td>, 6 Fr</td><td>Sklar</td><td>50-2006-Frazier</td> ponta <td>de</td></tr> <tr><td>sucção, 10 Fr</td><td>Sklar</td><td>50-2010-Dandy</td><td></td></tr> <tr><td>gancho nervoso de ângulo reto rombudo</td><td>Medline</td><td></td> <td>MDS4005220-Nylon</td></tr> <tr><td>sutura, 6-0</td><td>Ethicon</td><td>697G-Castroviejo</td><td></td></tr> <tr><td>suporte de micro agulha suave</td><td>Medline</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>MDG2428614-22 gauge Quinke point agulha espinhal</td><td>Halyard Health</td><td>18397-32</td><td></td></tr> <tr><td>gauge CED agulha com cubo Luer de travamento</td><td>Veja os comentários</td><td>n / a</td><td>Como em: Pleticha, J., Maus, T.P., Christner, J.A., Marsh, M.P., Lee, K.H., Hooten, W.M., Beutler, A.S. Entrega minimamente invasiva de produtos biológicos aprimorados por convecção nos gânglios da raiz dorsal: validação no modelo de porco e modelagem prospectiva em humanos. Nota técnica. J Neurosurg. 121(4), 851-8 (2014).</td></tr><tr><td>Tubulação de polietileno, 5 pés</td><td>Seringa de Commodities</td><td>Científicas BB31695-PE/05-Monoject</td><td></td></tr><tr><td>, 3 mL</td> Bomba de seringa <td>Kendall</td> <td>SY15352-NanoJet</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Chemyx</td><td>10050-DAPI</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542-Fast</td><td></td></tr> <tr><td>Green FCF</td><td>Seringa de irrigação Sigma-Aldrich</td><td>F7252-Bulb</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Medline</td><td></td><td>DYND20125-Pinça</td></tr> <tr><td>Adson de dentes finos</td><td>Medline</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>MDS1000212-Vicryl sutura, 0</td><td>Ethicon</td><td>J603H-Vicryl</td><td></td></tr> <tr><td>sutura, 2-0</td><td>Ethicon</td><td>J317H-Needle</td><td></td></tr> <tr><td>counter</td><td>Medline</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>NC20FBRGS-Steri-strip skin closure, 1/2x4 polegada</td><td>3M</td><td>R1547</td><td>-</td></tr></tbody></table>

laminotomy para acesso de gânglio lombar dorsal raiz e injeção em suínos

Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

Gânglios da raiz dorsal (DRG) são estruturas anatomicamente bem definidas que contêm todos os neurônios sensoriais primários abaixo da cabeça. Este fato faz DRG alvos atraentes para injeção da novela terapêutica visa tratamento de dor crônica. Em modelos animais pequenos, laminectomia tem sido usada para facilitar injeção DRG porque envolve a remoção cirúrgica do osso vertebral cercam cada DRG. Vamos demonstrar uma técnica para injeção intraganglionic de DRG lombar em uma espécie de animal grande, ou seja, a suína. Laminotomy é executada para permitir acesso direto a DRG utilizando materiais, instrumentos e técnicas neurocirúrgicas padrão. Comparado com a remoção de osso mais extensa através de laminectomia, implementamos laminotomy para conservar a anatomia da coluna vertebral ao conseguir acesso suficiente DRG. Progresso no intra-operatório de injeção DRG é monitorado usando uma tinta atóxica. Após eutanásia no pós-operatório dia 21, o sucesso da injeção é determinado pela histologia para distribuição intraganglionic de 4' 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). Injetamos uma solução biologicamente inativa para demonstrar o protocolo. Esse método pode ser aplicada no futuro pré-clínicos estudos para soluções terapêuticas alvo de DRG. Nossa metodologia deve facilitar a Traduzibilidade dos paradigmas animais pequenas intraganglionic próprios de teste em uma espécie animal. Além disso, este protocolo pode servir como um recurso fundamental para os estudos pré-clínicos de injeção DRG em suínos de planejamento.

Avaliação histológica de propagação injectate Sucesso na entrega de injectate de DRG é determinado pela avaliação histológica de DAPI se espalhou. A técnica envolve o posicionamento da ponta da agulha no centro tridimensional da RDG. Portanto, entrega bem sucedida é determinada pela avaliação da extensão da DAPI coloração de secções histológicas ambos perto (seções DRG centrais) e distante (seções DRG periféricas) para a ponta da agulha. Figura 1A e f...

Nós descrevemos um método para laminotomy em suínos que fornece acesso aos gânglios lombares raiz dorsal (DRG) para injeção intraganglionic. Progresso de injeção é monitorado no intraoperatório e histologicamente confirmado acima de 21 dias após a cirurgia. Este protocolo pode ser usado para futuros estudos pré-clínicos envolvendo injeção DRG.

Laminotomy para acesso de gânglio lombar Dorsal raiz e injeção em suínos

Dorsal root ganglia (DRG) are anatomically well defined structures that contain all primary sensory neurons below the head. This fact makes DRG attractive ...

O objetivo geral deste procedimento é fornecer acesso cirúrgico de um gânglio da raiz dorsal lombar em suínos para injeção intraganglionar de uma solução usando uma agulha de entrega aprimorada por convecção. Este método pode ajudar a responder a questões-chave nos campos da neurociência básica e translacional sobre o efeito de um novo medicamento nas células DRG quando administrado diretamente ao parênquima DRG. A principal vantagem dessa técnica é que ela fornece os dados técnicos necessários para confirmar que uma solução foi entregue com sucesso ao DRG e comparar os resultados entre as réplicas biológicas.Esta técnica será o padrão de referência para o parto intraganglionar. O objetivo final é a entrega guiada por imagem. Com este padrão de referência, podemos caracterizar de forma única a eficácia terapêutica dos agentes e a eficiência da entrega.Anestesiar um suíno para cirurgia e, em seguida, posicioná-lo em uma grande tipoia humana modificada com uma abertura abdominal acolchoada. Certifique-se de que as peças metálicas sejam acolchoadas para evitar a criação de curtos-circuitos. Para preparar a pele que recobre a coluna lombar, esfregue a região de acordo com as instruções do fabricante usando uma quantidade generosa de solução.Continue a esfoliação cirúrgica em direção ao plano coronal da linha média, passando pelos processos transversos marcados, usando a mesma técnica. Em seguida, coloque toalhas cirúrgicas ordenadamente ao redor do local da incisão sobre a linha média ao longo dos processos espinhosos lombares marcados. Em seguida, cubra toda a região muito além da periferia do local da operação.Uma vez totalmente preparado para a cirurgia, comece usando um bisturi número 15 para abrir uma incisão sagital da linha média de oito a 12 centímetros através do campo incisivo diretamente posterior aos processos espinhosos. Mantenha a hemostasia usando tamponamentos de gaze e eletrocirurgia monopolar. Em seguida, use a eletrocirurgia monopolar para dissecar o tecido subcutâneo e a gordura que recobre a fáscia lombar torácica.Em seguida, palpe os processos espinhosos profundamente até a fáscia lombar torácica e corte a fáscia ao longo da linha média para expor o ligamento supraespinhoso estendido entre os processos espinhosos. Neste ponto, a incisão pode ser alongada em qualquer direção para tornar três processos espinhosos totalmente visíveis. Agora, faça uma incisão parassagital de dois milímetros de profundidade através do ligamento supraespinhoso posterior a cada processo espinhoso usando uma lâmina número 15.Faça as incisões ao longo do terço esquerdo da superfície posterior dos processos espinhosos. Em seguida, use um elevador Freer de cinco milímetros para liberar suavemente o ligamento supraespinhoso em cada nível ao longo de cada incisão. Agora, identifique o plano subperiosteal e disseque dentro desse plano ao longo da superfície lateral de cada processo espinhoso.Em seguida, realize três dissecções subperiosteais de forma paralela para fazer uma dissecção suave e uniforme. Em seguida, identifique a lâmina em cada nível e faça uma dissecção subperiosteal lateralmente. Estenda a dissecção até a borda lateral das duas articulações zigapofisárias que conectam os três vertebrados expostos na borda lateral da lâmina entre as articulações.Esta lâmina é a pars interarticularis. Ele demarca a borda posterior do forame intervertebral onde reside o DRG. Com cuidado, use um elevador Freer ou cureta de cinco milímetros para palpar a transição entre a borda mais caudal da lâmina e o canal central.Não force o elevador anterior. Em seguida, usando rongeurs, extraia o osso por partes. Remova o osso ao longo da base do processo espinhoso superiormente a um nível imediatamente caudal à superfície caudal do pedículo e lateralmente em toda a sua extensão.Exponha o periósteo liso e brilhante por completo. Corte com uma lâmina número 11 e exponha a gordura epidural. Deixe o processo articular inferior que foi conectado à lâmina no lugar durante a maior parte da laminotomia.Em seguida, remova o processo articular inferior por partes, mas deixe o processo articular superior adjacente intacto. Agora, disseque o DRG com o auxílio de ampliação de loop ou um microscópio de dissecação. Primeiro, evacue a gordura peridural de forma fragmentada, começando medialmente e prosseguindo lateralmente.Faça uma dissecção suave com pinça bipolar e sucção por meio de seis a 10 pontas de sucção French Frazier. Em seguida, identifique o saco dural ao longo da linha média correndo em uma direção superior inferior paralela ao eixo da incisão na pele. Em seguida, remova a gordura peridural ao longo do saco dural até que o saco dural possa ser visto dando origem à manga da raiz do nervo dural.Agora, continuando a evacuação da gordura epidural, trace a manga dural lateral e inferiormente até que ela aumente ao redor do DRG. O DRG é oval e amarelo-laranja com cerca de quatro a seis milímetros de largura. Prossiga lateralmente com a remoção de gordura passando pelo DRG até que o nervo espinhal adjacente seja visto.Use uma agulha espinhal de calibre 22 para guiar a trajetória de uma agulha CED de calibre 32. Perfure a agulha guia através da pele e dos músculos paraespinhais. Com muito cuidado, aponte a agulha-guia ao longo de uma trajetória que se aproxime do acesso longitudinal do GRD.Avance gradualmente a agulha-guia até que a ponta saia da parede paraespinhal lateral do campo de dissecção. Em seguida, avance a agulha guia ao longo de seu eixo longo para aproximar a ponta da agulha CED do DRG. Agora, perfure o DRG com a ponta da agulha CED e submerja a ponta no centro tridimensional do DRG.É fundamental considerar novamente o tamanho e a forma exclusivos do DRG exposto. O objetivo é obter uma punção suave e submergir a ponta da agulha para alcançar o centro tridimensional do DRG sem ultrapassar ou errar o alvo. Agora, entregue 100 microlitros de injetado por CED a uma taxa graduada nos próximos 24 minutos.Após a última etapa, um descanso de três minutos, retire o aparelho de injeção ao longo de seu eixo longo em um movimento suave e suave. Por fim, feche o sítio cirúrgico conforme descrito no protocolo de texto. Após o fechamento, limpe a pele e aplique tiras adesivas perpendiculares à incisão, seguidas de gaze e, em seguida, um campo adesivo antimicrobiano.A administração bem-sucedida do injetado no DRG pode ser avaliada histologicamente por exame. Idealmente, o DAPI visto em azul acabará se distribuindo para fora em todas as direções. Quando uma injeção é bem-sucedida, o DAPI é disperso uniformemente através do parênquima central e periférico do DRG visto em vermelho.Quando a injeção é abaixo do ideal, a coloração será inconsistente. Por exemplo, haverá coloração mínima ou coloração focal ao longo da borda externa, mas nenhuma no aspecto interno do parênquima DRG. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar, comece pequeno e vá devagar.Você sempre pode alargar a laminotomia mais tarde na dissecção, mas nunca pode colocar o osso de volta.

laminotomy-for-lumbar-dorsal-root-ganglion-access-injection

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Transplante precursoras neurais é uma estratégia promissora para a proteção e / ou substituição perdido / cervical disfuncional neurônios motores frênicos em lesão medular (SCI) e do neurônio motor doença, a esclerose amiotrófica laterais (ALS). Nós fornecemos um protocolo para entrega celular para chifre da medula espinhal cervical ventral em modelos de roedores da ALS e SCI.

Intra Transplante de Células de Segmentação Chifre Cervical Ventral em Esclerose Lateral Amiotrófica e lesão medular traumática

Imagens ao vivo de axônios da raiz dorsal após rizotomia

Curta descrição visual da técnica cirúrgica e um dispositivo usado para a entrega de gene (e celular) terapias para a medula espinhal. A técnica é demonstrada no animal, mas é completamente traduzíveis e sendo utilizado para a aplicação em seres humanos.

Técnica cirúrgica para entrega da Medula Espinhal de Terapias: Demonstração de Processo em Göttingen porquinhos

Fonte: Unger, M. D., et al., Laminotomia para acesso e injeção do gânglio da raiz dorsal lombar em suínos. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra um procedimento de laminotomia em um porco anestesiado para acessar o gânglio da raiz dorsal lombar para entrega neuroterapêutica direcionada usando entrega aprimorada por convecção.

Laminotomia para injeção direcionada no gânglio da raiz dorsal lombar em um modelo de porco

Fonte: Cheah, M., et al. Injeção do gânglio da raiz dorsal e lesão por esmagamento da raiz dorsal como modelo para regeneração sensorial do axônio. J. Vis. Exp. (2017). Este vídeo demonstra um procedimento passo a passo para injetar uma suspensão viral nos gânglios da raiz dorsal (DRGs) e induzir uma lesão axonal controlada por meio de um esmagamento da raiz dorsal em um rato anestesiado. O protocolo envolve a exposição dos DRGs, a entrega de um vetor viral promotor de crescimento para...

Modelagem da regeneração sensorial do axônio em um rato usando injeção do gânglio da raiz dorsal e lesão por esmagamento da raiz dorsal

Este protocolo apresenta o uso de uma injeção de gânglio da raiz dorsal (DRG) com um vetor viral e uma lesão concomitante por esmagamento da raiz dorsal em um rato adulto como modelo para estudar a regeneração sensorial do axônio. Este modelo é adequado para investigar o uso da terapia gênica para promover a regeneração sensorial do axônio.

Dorsal Root Injection gânglio da raiz dorsal e lesão por esmagamento como um modelo para Sensorial Axon Regeneração

O presente protocolo descreve imagens de cálcio in vivo para medir as respostas de conjuntos de neurônios lombares-6 DRG a estímulos somáticos e viscerais. Comparações completas podem ser feitas entre neurônios que respondem a diferentes estímulos. Este protocolo é valioso para investigar mecanismos de dor visceral e estimulação somática, como a acupuntura.

in vivo Imagem de cálcio da resposta dos neurônios dos gânglios da raiz dorsal a estímulos somáticos e viscerais

Este protocolo cirúrgico é um guia passo a passo para inserir um cateter intratecal no espaço subdural espinhal de um roedor para fornecer tratamento direcionado.

Acessando o espaço subdural da medula espinhal de roedores para administração de tratamento

Este protocolo fornece um guia passo a passo para a realização da foraminotomia endoscópica total transforaminal sob anestesia local. Esta técnica de preservação de movimento é apresentada como uma alternativa cirúrgica minimamente invasiva à extensão de fusão para o tratamento da estenose foraminal L5/S1 em pacientes com doença do segmento adjacente.

Foraminotomia lombar endoscópica total transforaminal sob anestesia local para estenose foraminal do segmento adjacente L5/S1

Este artigo detalha métodos de administração intratecal para terapias direcionadas ao SNC em camundongos adultos, focando na precisão do protocolo e na possibilitade de injeções repetidas. Inclui descobertas de um estudo de validação em que oligonucleotídeos antissenso reduziram a expressão mutante de SOD1 em camundongos modelo SOD1-ALS, apoiando a utilidade da abordagem em pesquisas pré-clínicas sobre doenças neurodegenerativas.

Injeção intratecal lombar de SOD1-ASOs para direcionamento preciso do SNC e eficácia preditiva em camundongos humanos SOD1-G93A ALS

Aprenda a técnica de laminotomia para acesso ao gânglio da raiz dorsal lombar e injeção intraganglionar em suínos. Este método padronizado permite entrega precisa de agentes terapêuticos com confirmação histológica.

Laminotomy para acesso de gânglio lombar Dorsal raiz e injeção em suínos

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