Name: Medir o efeito de produtos químicos sobre o crescimento e a reprodução de Caenorhabditis elegans (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Aprenda a avaliar a toxicidade de produtos químicos em Caenorhabditis elegans para toxicologia e desenvolvimento farmacêutico. Este método econômico permite testar compostos em sistemas não mamíferos.

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Este estudo foi suportado pela bolsa de investigação intramural Instituto de Coreia da ciência e tecnologia (2E27513) e o elevado valor acrescentado alimentos tecnologia desenvolvimento programa (IPET) financiado pelo Ministério de agricultura, alimentação e Assuntos rurais (315067-03).

Nota: todo o experimento deve ser realizado em um laboratório isolado limpo a 20 ° C, com a poeira baixa e com a minimização da contaminação durante o worm e manipulação bacteriana. Para essa finalidade, devem ser realizados experimentos sob a chama de uma lâmpada de álcool ou usando uma bancada limpa.
 1. manutenção de c. elegans e ovo de preparação para o teste químico <ol><li>manutenção c. elegans N2 (var. Bristol) sobre uma placa de ágar NGM alimentada com live Escherichia coli OP50 a 20 ° C 12 , 13.</li>
	<li>Preparar ovos de idade-sincronizado usando um alvejante solução tratamento 5 ou o tempo de ovo postura método 6 , 14 , 15. 
	Nota: antes de preparação do ovo, casaco placa contendo etoposido NGM com calor-inativado Escherichia coli OP50 conforme descrito abaixo. Inactivados por calor E coli OP50 é usado para minimizar a atividade metabólica de Escherichia coli 6 , 16.</li>
</ol> 2. Preparação de calor-inativado Escherichia coli OP50 feed C. elegans durante o ensaio de toxicidade <ol><li>preparar 500 mL de meio de duplo levedura triptona (DYT) conforme descrito na tabela 1 e inocular uma única colônia de Escherichia coli OP50 cultivadas na um ágar Luria-Bertani (LB) placa 5.</li>
	<li>Incubar a Escherichia coli OP50 numa incubadora tremendo para 14 h a 37 ° C e 150 rpm.</li>
	<li>Após a centrifugação por 30 min no 3.220 x g e 20 ° C, retire todo o sobrenadante médio DYT e adicionar uma pré-mistura de 25 mL de tampão-S e 250 µ l de 1m MgSO 4 25 µ l de colesterol de 5 mg/mL (dissolvido em etanol). Todas essas soluções são estéreis.</li>
	<li>Ressuspender as bactérias e transfira para um tubo de plástico descartável de 50 mL.</li>
	<li>Para a calor-inactivação, incubar a ressuspensão OP50 de Escherichia coli em banho-maria por 30 min no 65 ° C.</li>
	<li>Esfriar até a temperatura ambiente e loja a 4 ° C até o uso. Isso pode ser armazenado por até um mês.</li>
</ol> 3. Preparação de NGM placas contendo ou 1% DMSO ou 750 µM Etoposide <ol><li>Prepare duas garrafas de vidro de 200ml limpa. Adicione 0,6 g de NaCl, 0,5 g de peptona, 3,4 g de ágar-ágar, 195 mL de água destilada e um agitador magnético para uma garrafa. Adicionar um agitador magnético para a outra garrafa vazia.</li>
	<li>Garrafas de autoclave estes dois por 15 min a 121 ° C e em seguida esfriar os frascos em banho-maria por 30 min a 55 ° C.</li>
	<li>Adicionar 0,2 mL de 1 M CaCl 2, 0,2 mL de colesterol de 5 mg/mL, 0,2 mL de 1 M MgSO 4 e 5 mL de 1 M KPO 4 (todas essas soluções são estéreis) e em seguida, misturá-los por agitação magnética, um prato quente em 55 ° C.</li>
	<li>Dividir o meio NGM misto em duas garrafas com o mesmo volume (100 mL cada uma). Em seguida, adicionar 1 mL de DMSO para uma garrafa, misture-o novamente usando a agitação magnética. Armazene o outro frasco num banho de água a 55 ° C até o próximo passo. Alíquota 3 mL do meio a cada 35 x 10 mm 2 placa de Petri contendo DMSO. Aproximadamente 33 placas contendo DMSO NGM podem ser feitas desta etapa.</li>
	<li>Misturar o outro frasco usando a agitação magnética, adicionar 1 mL de 75mm etoposide (estoque dissolvido em DMSO), misturar novamente e repita o procedimento de alíquota (passo 3.4). Aproximadamente 33 etoposide (750 µM)-com NGM chapas pode ser feita desta etapa. 
	Nota: No correlata anterior papel 6, nós testamos 0, 250, 500 e 1.000 µM de etoposide. Com base nos dados do, escolhemos a 750 µM de etoposide dose neste trabalho.</li>
	<li>Cool para baixo as placas NGM que contenham produtos químicos à temperatura ambiente por deixá-los em temperatura ambiente por cerca de 3 h e armazená-los em 4 ° C até o uso. 
	Nota: No caso de produtos químicos sensíveis à luz, bloqueie a luz para minimizar a decomposição induzida por luz. 
	Nota: Opcionalmente, fazer uma placa NGM normal sem produtos químicos para o ensaio, que pode ser realizado usando duas condições diferentes de tratamento químico, conforme descrito abaixo de postura de ovos.</li>
	<li>Adicione 100 µ l de calor-inativada Escherichia coli OP50 (como descrito na seção 2) e espalhe sobre cada placa NGM. Deixe secar durante a noite em uma incubadora de c. elegans, a 20 ° C para o teste de química</li>
</ol> 4. Medição do crescimento de c. elegans <ol><li>transferência a idade-sincronizado c. elegans ovos à placa NGM suplementada com 1% DMSO ou 750 µM etoposide.</li>
	<li>Incubar c. elegans em uma incubadora a 20 ° C por 4 dias. Observem os vermes, usando um microscópio estéreo e tomar imagens microscópicas todos os dias. Geralmente, ampliação de 20 X (1 X objectiva, ampliação de zoom X 2 e 10 X ocular lente) é apropriado para a observação do crescimento de c. elegans. Também levar uma imagem microscópica de micrômetro de palco o microscópio para a calibração de tamanho worm. 
	Nota: A fome afeta o ensaio de toxicidade. Portanto, alimentar com bactérias suficientes ou ajustar o transferidos c. elegans números no início de ovo. Observar até 3 dias para excluir a possibilidade de fome.</li>
	<li>Medir o comprimento de corpo de c. elegans, tratados com DMSO ou etoposide em cada ponto de tempo usando software ImageJ. 
	Nota: Para cada medição de amostra, 50 vermes são suficientes para a análise estatística.
	<ol><li>No ImageJ, abra a imagem de micrômetro de palco de microscópio (&#39; arquivo &#39; &#8594; &#39; abrir &#39;). 
		Nota: A imagem de micrômetro e imagens de worm (etapa 4.2) devem ser a mesma ampliação.</li>
		<li>Arrastar uma linha de 1.000 µm na imagem de calibração de micrômetro usando &#39; linha reta &#39; ferramenta.</li>
		<li>Clique &#39; Analyze &#39; &#8594; &#39; definir escala de &#39; e entrada de 1.000 e µm para a &#39; conhecida a distância &#39; caixa e &#39; unidade de comprimento &#39; caixa, respectivamente. Verificar &#39; Global &#39; e clique em &#39; Okey &#39;.</li>
		<li>Abrir as imagens de worm (&#39; arquivo &#39; &#8594; &#39; Open &#39;). Desenhar uma linha ao longo da característica de cada worm usando &#39; Freehand linha &#39; ferramenta. Obter os dados de comprimento de corpo clicando &#39; Analyze &#39; &#8594; &#39; medida &#39;.</li>
		<li>Repita essas etapas para 50 vermes.</li>
	</ol></li></ol> 5. C. elegans ovo deitado ensaio <ol><li>incubar a idade-sincronizado ovos sobre a NGM placa contendo DMSO ou etoposide para 64 h (antes do nascimento de primeiro) até a fase adulta jovem em 20 ° C. 
	Nota: É opcional usar os vermes das experiências de medição de crescimento. É conveniente fazer a medição de crescimento e postura ensaio de ovo juntos.</li>
	Placas de <li>transferir 5 vermes adultos para a nova NGM sem produtos químicos (condição 1, tratamento químico dentro de um determinado período de tempo, de ovos para fase adulta jovem) ou nova placa NGM, contendo o mesmo pré-tratamento químico (condição 2, a exposição contínua de produtos químicos durante o período experimental em geral) e então eles incubar por 24 h. 
	Nota: É aconselhável fazer réplicas usando placas NGM de 3-5 para cada tratamento; Estas repetições podem ser usadas para análise estatística.</li>
	<li>Transferir para a nova chapa NGM como descrito acima e contar o número de ovos todos os dias. Contar os vermes que rastejou fora, morreram e foram internamente escotilhaEd.</li>
	<li>Repita estes passos até os vermes ovos sem mais, geralmente em 5 dias.</li>
	<li>Calcular o número de ovos postos por worm de cada prato e somar esses valores todos os dias durante 5 dias determinar o número total de ovos postos. 
	Nota: Excluir o número de minhocas que rastejou fora e internamente eclodiram no cálculo de.</li>
</ol>

<ol><li>Blomme, E. A., Will, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicology+strategies+for+drug+discovery%3A+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Res.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Toxicology strategies for drug discovery: present and future.</a> Chem. Res. Toxicol. 29 (4), 473-504 (2016).</li>
<li>Lilienblum, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+methods+to+safety+studies+in+experimental+animals%3A+role+in+the+risk+assessment+of+chemicals+under+the+new+European+Chemicals+Legislation+%28REACH%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Alternative methods to safety studies in experimental animals: role in the risk assessment of chemicals under the new European Chemicals Legislation (REACH).</a> Arch. Toxicol. 82 (4), 211-236 (2008).</li>
<li>Honnen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans+as+a+powerful+alternative+model+organism+to+promote+research+in+genetic+toxicology+and+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans as a powerful alternative model organism to promote research in genetic toxicology and biomedicine.</a> Arch. Toxicol. , In Press (2017).</li>
<li>Hunt, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+C.+elegans+model+in+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The C. elegans model in toxicity testing.</a> J. Appl. Toxicol. 37 (1), 50-59 (2017).</li>
<li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Ceron, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+Caenorhabditis+elegans+methods%3A+synchronization+and+observation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> J. Vis. Exp. (64), e4019(2012).</li>
<li>Lee, S. Y., Kim, J. Y., Jung, Y. J., Kang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicological+evaluation+of+the+topoisomerase+inhibitor%2C+etoposide%2C+in+the+model+animal+Caenorhabditis+elegans+and+3T3-L1+normal+murine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Toxicological evaluation of the topoisomerase inhibitor, etoposide, in the model animal Caenorhabditis elegans and 3T3-L1 normal murine cells.</a> Environ. Toxicol. 32 (6), 1836-1843 (2017).</li>
<li>Imanikia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+the+comet+assay+to+assess+the+genotoxicity+of+environmental+pollutants+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The application of the comet assay to assess the genotoxicity of environmental pollutants in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Environ. Toxicol. Pharmacol. 45, 356-361 (2016).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfluorooctane+sulfonate+exposure+causes+gonadal+developmental+toxicity+in+Caenorhabditis+elegans+through+ROS-induced+DNA+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Perfluorooctane sulfonate exposure causes gonadal developmental toxicity in Caenorhabditis elegans through ROS-induced DNA damage.</a> Chemosphere. 155, 115-126 (2016).</li>
<li>Allard, P., Kleinstreuer, N. C., Knudsen, T. B., Colaiacovo, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+C.+elegans+screening+platform+for+the+rapid+assessment+of+chemical+disruption+of+germline+function%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">A C. elegans screening platform for the rapid assessment of chemical disruption of germline function.</a> Environ. Health Perspect. 121 (6), 717-724 (2013).</li>
<li>Singh, S., Sharma, B., Kanwar, S. S., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lead+phytochemicals+for+anticancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Lead phytochemicals for anticancer drug development.</a> Front. Plant Sci. 7, 1667(2016).</li>
<li>Kang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+topoisomerase+inhibitor%2C+daurinol%2C+suppresses+growth+of+HCT116+cells+with+low+hematological+toxicity+compared+to+etoposide%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">A novel topoisomerase inhibitor, daurinol, suppresses growth of HCT116 cells with low hematological toxicity compared to etoposide.</a> Neoplasia. 13 (11), 1043-1057 (2011).</li>
<li>Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+introduction+to+worm+lab%3A+from+culturing+worms+to+mutagenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An introduction to worm lab: from culturing worms to mutagenesis.</a> J. Vis. Exp. (47), e2293(2011).</li>
<li>Zarse, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+insulin%2FIGF1+signaling+extends+life+span+by+promoting+mitochondrial+L-proline+catabolism+to+induce+a+transient+ROS+signal%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Impaired insulin/IGF1 signaling extends life span by promoting mitochondrial L-proline catabolism to induce a transient ROS signal.</a> Cell Metab. 15 (4), 451-465 (2012).</li>
<li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+on+solid+media%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Measuring Caenorhabditis elegans life span on solid media.</a> J. Vis. Exp. (27), e1152(2009).</li>
<li>Weimer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D-Glucosamine+supplementation+extends+life+span+of+nematodes+and+of+ageing+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">D-Glucosamine supplementation extends life span of nematodes and of ageing mice.</a> Nat. Commun. 5, 3563(2014).</li>
<li>Schmeisser, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+ROS+signaling+rather+than+AMPK%2Fsirtuin-mediated+energy+sensing+links+dietary+restriction+to+lifespan+extension%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Neuronal ROS signaling rather than AMPK/sirtuin-mediated energy sensing links dietary restriction to lifespan extension.</a> Mol. Metab. 2 (2), 92-102 (2013).</li>
<li>Parodi, D. A., Damoiseaux, R., Allard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+assessment+of+germline+chemical+toxicity+using+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Comprehensive assessment of germline chemical toxicity using the nematode Caenorhabditis elegans.</a> J. Vis. Exp. (96), e52445(2015).</li>
<li>Hahm, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+maximum+velocity+correlates+with+healthspan+and+is+maintained+in+worms+with+an+insulin+receptor+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">C. elegans maximum velocity correlates with healthspan and is maintained in worms with an insulin receptor mutation.</a> Nat. Commun. 6, 8919(2015).</li>
<li>Nussbaum-Krammer, C. I., Neto, M. F., Brielmann, R. M., Pedersen, J. S., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+spreading+and+toxicity+of+prion-like+proteins+using+the+metazoan+model+organism+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Investigating the spreading and toxicity of prion-like proteins using the metazoan model organism C. elegans.</a> J. Vis. Exp. (95), e52321(2015).</li>
<li>Schmidt, B. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+acute+and+developmental+neurotoxicity+screening%3A+an+overview+of+cellular+platforms+and+high-throughput+technical+possibilities%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">In vitro acute and developmental neurotoxicity screening: an overview of cellular platforms and high-throughput technical possibilities.</a> Arch. Toxicol. 91 (1), 1-33 (2017).</li>
<li>Fey, S. J., Wrzesinski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+drug+toxicity+using+3D+spheroids+constructed+from+an+immortal+human+hepatocyte+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Determination of drug toxicity using 3D spheroids constructed from an immortal human hepatocyte cell line.</a> Toxicol. Sci. 127 (2), 403-411 (2012).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Neste artigo, descrevemos a avaliação da toxicidade de produtos químicos em c. elegans, um nematódeo de solo, usando etoposide como um exemplo tóxica. Para este fim, usamos duas condições experimentais. No primeiro set, c. elegans foram cultivadas na etoposide contendo placas de ovos para a fase de adulta jovem, e então os vermes foram autorizados a colocar ovos em placas NGM normais sem produtos químicos. No segundo conjunto experimental, c. elegans continuamente foram tratados com etoposide d...

Avaliação toxicológica é essencial para o desenvolvimento de produtos farmacêuticos, nutracêuticos e cosmecêuticos, bem como a avaliação de risco de várias toxinas ambientais. O modelo de roedor é um dos mais populares na vivo sistemas experimentais para o estudo de toxicologia; Alternativamente, organismos não-mamíferos, tais como c. elegans são também amplamente utilizados. Modelos de avaliação toxicológica mamiferas são benéficos devido não só animais questões éticas, mas também sua conveniência e utilidade, considerando a relação custo-eficácia, facilidade de manutenção, velocidade e reprodutibilidade1,2 ,3,4.
C. elegans, um solo redonda worm, tem sido explorada como um animal modelo em várias pesquisas básicas e aplicadas biologia e química. É um 1 mm de comprimento, o nematódeo transparente, que é simplesmente mantido em sólido ou líquido nematódeo crescimento Media (NGM) alimentados com a estirpe bacteriana Escherichia coli OP50. C. elegans tem um ciclo de vida curto, e o selvagem-tipo N2 c. elegans põe aproximadamente 300 ovos. Portanto, ela é facilmente propagada para serem utilizados como materiais experimentais3,4,5. C. elegans também tem sido amplamente utilizada nos estudos toxicológicos de muitas drogas e poluentes ambientais6,7,8,9.
Porque muitas drogas anticâncer alvo rapidamente dividindo as células cancerosas, podem também danificar dividindo rapidamente as células normais como as células do folículo piloso, epitélio intestinal e medula óssea. Por exemplo, drogas anticâncer inibidores de topoisomerase alvo o processo de replicação do DNA de células cancerosas; Portanto, eles também inibem dividindo rapidamente as células normais. Todos os organismos vivos tem topoisomerases e estes topoisomerase inibidores mais provável impacto ambiental de ecossistemas6,10,11. Assim, uma plataforma de avaliação toxicológica de drogas usando um animal modelo é valiosa para tanto no desenvolvimento de fármacos e avaliação dos riscos ambientais.
Neste artigo, descrevemos os protocolos detalhados para testar a toxicidade de etoposide, que é um agente anticâncer clínico que alvos topoisomerase II, como um produto químico tóxico de modelo em c. elegans. Para este fim, descreveremos o método de medição do tamanho do corpo e o número total de ovos postos em c. elegans , tratados com etoposide.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Affymetrix, EUA</td><td>10906</td><td></td></tr><tr><td>Caenorhabditis elegans N2</td><td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td><td></td><td>Wild type</td></tr><tr><td>Cholesterol Sigma</td><td>, EUA</td><td>C3045</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Sigma, EUA</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli OP50</td><td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etoposídeo</td><td>Sigma, EUA</td><td>E1383</td><td></td></tr><tr><td>Image J software (ver 1.4)</td><td>Natinoal Institute of Health, EUA</td><td></td><td>https://imagej.nih.gov/ij/</td></tr> <tr><td>Câmera de microscópio</td><td>Jenopitk, Progress Gryphax, Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Peptone</td><td>Merck, EUA</td><td>107213</td><td></td></tr><tr><td>placa de Petri de 35 e 10 mm</td><td>SPL Life Sciences, Coreia do Sul</td><td>10035</td><td></td></tr><tr><td>90 &vezes; placa de Petri de 15 mm</td><td>SPL Life Sciences, Coreia do Sul</td><td>10090</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio estéreo</td><td>Nikon, Japão</td><td>SMZ800N</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de levedura</td><td>Becton Dickinson, EUA</td><td>212750</td><td></td></tr></tbody></table>

medir o efeito de produtos químicos sobre o crescimento e a reprodução de caenorhabditis elegans

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

Avaliação toxicológica é crucial para entender os efeitos das substâncias químicas sobre organismos vivos nos campos da ciência biológica básica e aplicada. Um solo não-mamíferos redondo verme Caenorhabditis elegans, é um organismo modelo valioso para estudos de toxicologia, devido à sua conveniência e a falta de questões de ética animal, em comparação com sistemas de animais mamíferos. Neste protocolo, é descrito um procedimento detalhado de avaliação toxicológica de substâncias químicas em c. elegans . Uma droga anticancerígena clínica, etoposide, quais destinos humano topoisomerase II e inibe a replicação do DNA de células cancerosas humanas, foi selecionada como um modelo de testes químicos. Idade-sincronizado c. elegans ovos foram expostos a dimetilsulfóxido (DMSO) ou etoposide, e então o crescimento de c. elegans foi monitorado diariamente por 4 dias pela observação de microscópio estéreo. O número total de ovos assente de c. elegans , tratados com DMSO ou etoposide foi também contada usando o microscópio estéreo. Tratamento de Etoposide afetado significativamente o crescimento e a reprodução de c. elegans. Por comparação do número total de ovos de vermes com períodos de tratamento diferentes de produtos químicos, pode decidir-se que a toxicidade reprodutiva de produtos químicos na reprodução de c. elegans é reversível ou irreversível. Estes protocolos podem ser úteis para tanto no desenvolvimento de várias drogas e avaliação de riscos de tóxicos ambientais.

O tratamento de etoposide (24-96 h) retardado significativamente o crescimento de c. elegans. Após 96 horas de incubação, vermes etoposide-tratados cresceram 0,86 mm de comprimento, enquanto os vermes de veículo-tratados cresceram a 1,04 mm (Figura 1). Retardo de crescimento também aparentemente foi observado sob observação microscópio estéreo (Figura 2). Começamos a ver os ovos do veículo-tratados vermes a 72 h de incub...

Um protocolo básico para avaliar a toxicidade de produtos químicos em um animal modelo, Caenorhabditis elegans, é descrito. O método é conveniente e útil para o desenvolvimento de produtos farmacêuticos, bem como para a avaliação de risco de diversos poluentes ambientais.

Medir o efeito de produtos químicos sobre o crescimento e a reprodução de Caenorhabditis elegans

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A ...

O objetivo geral deste procedimento é medir o efeito de produtos químicos, como o inibidor da topoisomerase etoposídeo, no crescimento e reprodução do animal modelo Caenorhabditis elegans. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da toxicologia, como avaliação toxicológica para o desenvolvimento de medicamentos e avaliação de risco de tóxicos ambientais. A principal vantagem dessa técnica é que a toxicidade de vários produtos químicos pode ser verificada em sistemas não mamíferos, portanto, essa técnica é conveniente e econômica.Demonstrando o procedimento estará So Young Lee, um estudante de pós-graduação do meu laboratório. Para começar, prepare duas garrafas de vidro limpas de 200 mililitros adicionando 0,6 gramas de cloreto de sódio, 0,5 gramas de peptona, 3,4 gramas de ágar, 195 mililitros de água destilada e um agitador magnético a uma garrafa. Em seguida, adicione um agitador magnético à outra garrafa vazia.Autoclave as garrafas por 15 minutos a 121 graus Celsius e, em seguida, resfrie as garrafas em banho-maria por 30 minutos a 55 graus Celsius. Em seguida, ao frasco cheio, adicione 0,2 mililitros de cloreto de cálcio molar, 0,2 mililitros de cinco mili

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Medição dos Efeitos de bactérias em<em&gt; C. Elegans</em&gt; Comportamento Usando um Retenção Ensaio Egg

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C. elegans é um modelo útil para estudar os efeitos do etanol no comportamento. Apresentamos um ensaio comportamental que quantifica os efeitos do etanol na velocidade de locomoção de vermes rastejantes; tanto a sensibilidade inicial quanto o desenvolvimento de tolerância funcional aguda ao etanol podem ser medidos com este ensaio.

Um ensaio para medir os efeitos do etanol sobre a velocidade de Locomotion<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Aqui detalhamos protocolos projetados especificamente para monitorar defeitos morfogênicos que ocorrem durante as fases inicial e tardia do alongamento embrionário do nematóide Caenorhabditis elegans. Em última análise, esses protocolos são projetados para identificar genes que regulam essas fases e caracterizar suas necessidades diferenciais ao longo do eixo ântero-posterior do embrião.

Novas métricas para Caracterizar Embryonic Alongamento do nemátodo<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Um método quantitativo foi desenvolvido para identificar e prever a toxicidade aguda de substâncias químicas, analisando automaticamente a caracterização fenotípica de Caenorhabditis elegans. Este protocolo descreve como tratar vermes com produtos químicos em uma placa de 384, capturar vídeos e quantificar toxicológicos fenótipos relacionados.

Um ensaio de alta produtividade para a predição da toxicidade química por Automated Caracterização fenotípica de Caenorhabditis elegans

Os efeitos trans e multigeracionais dos produtos químicos persistentes são essenciais para julgar as suas consequências a longo prazo no ambiente e na saúde humana. Nós fornecemos métodos detalhados novos para estudar efeitos trans e multi-Generational usando elegans da Caenorhabditisdo nematóide da livre-vida.

Usando Caenorhabditis elegans para estudar trans-e multi-Generational efeitos de toxicants

Este protocolo descreve como medir a permeabilidade intestinal de Caenorhabditis elegans. Este método é útil para a pesquisa biológica básica sobre a saúde intestinal relacionada à interação entre bactérias intestinais e seu hospedeiro e para triagem para identificar agentes probióticos e químicos para curar a síndrome do intestino com vazamento e doenças inflamatórias intestinais.

Medindo os efeitos de bactérias e produtos químicos sobre a permeabilidade intestinal de Caenorhabditis elegans

Os nematoides de caenorhabditis para jovens adultos são expostos a diferentes concentrações de pesticidas comerciais ou outros tóxicos por 2-24 h. Em seguida, diferentes neurônios podem ser visualizados usando cepas fluorescentes. Este artigo demonstra como expor nematoides a pesticidas e avaliar danos aos neurônios.

Examinando o efeito dos pesticidas em Caenorhabditis elegans Neurônios

Aqui, apresentamos um método geral para determinar a viabilidade embrionária e o número total de embriões produzidos (ninhada) usando o organismo modelo C. elegans.

Mensuração da Viabilidade Embrionária e do Tamanho da Ninhada em Caenorhabditis elegans

Aprenda a avaliar a toxicidade de produtos químicos em Caenorhabditis elegans para toxicologia e desenvolvimento farmacêutico. Este método econômico permite testar compostos em sistemas não mamíferos.

Medir o efeito de produtos químicos sobre o crescimento e a reprodução de Caenorhabditis elegans

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