Name: Indução e Micro-CT Imaging de malformações cavernosas cerebrais no modelo de Mouse (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Aprenda a induzir malformações cavernosas cerebrais em camundongos neonatais e medir a carga da doença usando micro-CT. Este método avança a pesquisa em doenças cerebrovasculares.

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Os autores reconhecem as instalações e a assistência científica e técnica de a Sydney microscopia &amp; microanálise Research Facility (AMMRF) e o centro australiano para microscopia &amp; microanálise (ACMM) na Universidade de Sydney. Estes estudos foram apoiados pela Australian National Health e projeto de Conselho de pesquisa médica (NHMRC) conceder 161558 e APP1124011 (XZ).

todos os protocolos e ética animal foram aprovados pelo The Sydney Local Saúde Animal Welfare Comissão distrital e institucional Cuidado Animal e Comissão de utilização (IACUC) da Universidade de medicina de Tianjin. Todos os experimentos foram conduzidos em Diretrizes/Regulamento do centenário Instituto, Universidade de Sydney e a Universidade de medicina de Tianjin 1. Indução de malformações cavernosas cerebrais em modelos de Mouse <ol><li>Cruz Cdh5-CreErt2; Ccm2 fl/fl ratos com Ccm2 fl/fl para gerar ninhadas com Cdh5-CreErt2; Ccm2 fl/fl filhotes (Ccm2 iECKO) e controles littermate (Ccm2 fl/fl). Cdh5-CreErt2 e Ccm2 fl/fl animais têm sido descritas anteriormente 19.</li>
	<li>Dissolver 4HT em 100% de etanol e armazenar a-80 ° C, em alíquotas de 30 µ l (4HT concentração: 10 mg/mL). No dia do uso, diluir aliquotadas 4HT em óleo de milho (0,5 mg/mL).</li>
	<li>Intragastrically injetar 50 µ l de 4HT (0,5 mg/mL) para filhotes neonatais em P1 para induzir lesões CCM experimentais utilizando uma seringa de insulina.</li>
</ol> 2. Preparação para Micro-CT Scans da amostra <ol><li>eutanásia neonatais filhotes no P8 através de dióxido de carbono asfixia.</li>
	<li>Realizar a perfusão intra cardíaca através da inserção de uma agulha de calibre 29 com 3 mL de 2% paraformaldeído em PBS em uma seringa de 10 mL para o ventrículo do coração do mouse. 
	Cuidado: Paraformaldehyde é tóxico; usar proteção adequada.</li>
	<li>Separar a cabeça do corpo usando uma tesoura. Remova toda a pele se a cabeça usando uma tesoura e descolar o crânio usando fórceps para dissecar o cérebro todo.</li>
	<li>Tirar fotos do cérebro com duas oculares em 7,82 x ampliação, 1 x ganho, 0,6 gama e tempo de exposição de 20 ms.</li>
	<li>Consertar o cérebro dissecado com paraformaldeído 4% em solução de PBS durante a noite. 
	Cuidado: Paraformaldehyde é tóxico; usar proteção adequada.</li>
	<li>No dia seguinte, desanexar hindbrains usando uma pinça e lavar com solução de PBS.</li>
	<li>Incubar os hindbrains no Lugol &#39; s solução de iodo por 48 h.</li>
	<li>Após a incubação, brevemente ar seco os hindbrains para remover o excesso Lugol &#39; solução de iodo de s.</li>
	<li>Pack o Lugol &#39; iodo s manchado hindbrains em 0,65 mL microcentrifuge tubos e selo completamente com filme plástico parafina para evitar o encolhimento do tecido ( Figura 2).</li>
	<li>Coloque microcentrifuga tubos em tubos de plástico de 5 mL com esponjas para impedir a movimentação durante a verificação ( Figura 2 B).</li>
</ol> 3. Micro-CT Scan do CCM no cérebro do rato <ol><li>verticalmente, montar o rombencéfalo embalado em um tubo em um suporte de alumínio no sistema de micro-CT.</li>
	<li>Definir os parâmetros de digitalização para 540 projeções e tempo de exposição 2 s com condições de fonte de 50 kV e 10 W para adquirir os conjuntos de dados tomográficos (imagem resolução 9,5 μm/pixel).</li>
	<li>Radiografias do exame são reconstruídas automaticamente pelo software de reconstrução de projeção baseada em hardware fornecido pelo sistema micro-CT, produzindo uma série de imagem de 16 bits fatias axiais (&#34; TXM &#34; arquivo).</li>
</ol> 4. Análise de conjuntos de dados Micro-CT <ol><li>abrir o arquivo de imagem reconstruída (&#34; TXM &#34; arquivo) do software de análise em 3D e visualizar o cérebro usando o &#34; renderização de volume &#34; função.</li>
	<li>Transformar o rombencéfalo à orientação desejada usando o &#34; caixa delimitadora &#34; e &#34; plano de recorte &#34; funções.</li>
	<li>Resample na imagem transformada em modo estendido e preservar o tamanho de voxel.</li>
	<li>Criar &#34; editar novo rótulo de campo &#34; na imagem transformada (4.3) e destacar apenas o rombencéfalo usando intensidade greyscale.</li>
	<li>Adicionar as áreas destacadas e executar &#34; etiqueta análise &#34; para obter medições do rombencéfalo inteira (ou seja, total volume e área). Exportar as medições em um arquivo Excel.</li>
	<li>Visualizar o rombencéfalo usando o &#34; isosuperfície renderização &#34; função.</li>
	<li>Criar outro &#34; editar novo rótulo de campo &#34; sobre as áreas de imagem e destaque transformadas com lesões usando a escala de cinzentos intensidade.</li>
	<li>Adicionar as áreas destacadas e executar &#34; rótulo &#34; análise para obter medições das lesões dentro do rombencéfalo (i.e., volume total e área). Exportar as medições em um arquivo Excel.</li>
	<li>Visualizar as lesões utilizando o &#34; gerar superfície &#34; e &#34; vista de superfície &#34; funções.</li>
	<li>As imagens do rombencéfalo em orientações desejados de instantâneo ou gerar um filme para visualização em 3D das lesões.</li>
</ol>

<ol><li>Fischer, A., Zalvide, J., Faurobert, E., Albiges-Rizo, C., Tournier-Lasserve, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+cavernous+malformations%3A+from+CCM+genes+to+endothelial+cell+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Cerebral cavernous malformations: from CCM genes to endothelial cell homeostasis.</a> Trends Mol Med. 19 (5), 302-308 (2013).</li>
<li>Liquori, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+a+gene+encoding+a+novel+protein+containing+a+phosphotyrosine-binding+domain+cause+type+2+cerebral+cavernous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in a gene encoding a novel protein containing a phosphotyrosine-binding domain cause type 2 cerebral cavernous malformations.</a> Am J Hum Genet. 73 (6), 1459-1464 (2003).</li>
<li>Laberge-le Couteulx, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Truncating+mutations+in+CCM1%2C+encoding+KRIT1%2C+cause+hereditary+cavernous+angiomas%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Truncating mutations in CCM1, encoding KRIT1, cause hereditary cavernous angiomas.</a> Nat Genet. 23 (2), 189-193 (1999).</li>
<li>Sahoo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+the+gene+encoding+KRIT1%2C+a+Krev-1%2Frap1a+binding+protein%2C+cause+cerebral+cavernous+malformations+%28CCM1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in the gene encoding KRIT1, a Krev-1/rap1a binding protein, cause cerebral cavernous malformations (CCM1).</a> Hum Mol Genet. 8 (12), 2325-2333 (1999).</li>
<li>Denier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+within+the+MGC4607+gene+cause+cerebral+cavernous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations within the MGC4607 gene cause cerebral cavernous malformations.</a> Am J Hum Genet. 74 (2), 326-337 (2004).</li>
<li>Bergametti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+within+the+programmed+cell+death+10+gene+cause+cerebral+cavernous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations within the programmed cell death 10 gene cause cerebral cavernous malformations.</a> Am J Hum Genet. 76 (1), 42-51 (2005).</li>
<li>McDonald, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+cerebral+cavernous+malformations+based+on+the+two-hit+mutation+hypothesis+recapitulates+the+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of cerebral cavernous malformations based on the two-hit mutation hypothesis recapitulates the human disease.</a> Hum Mol Genet. 20 (2), 211-222 (2011).</li>
<li>Boulday, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+timing+of+CCM2+loss+influences+cerebral+cavernous+malformations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Developmental timing of CCM2 loss influences cerebral cavernous malformations in mice.</a> J Exp Med. 208 (9), 1835-1847 (2011).</li>
<li>Chan, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+2+distinct+genetic+pathways+result+in+cerebral+cavernous+malformations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Mutations in 2 distinct genetic pathways result in cerebral cavernous malformations in mice.</a> J Clin Invest. 121 (5), 1871-1881 (2011).</li>
<li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+cavernous+malformations+arise+independent+of+the+heart+of+glass+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral cavernous malformations arise independent of the heart of glass receptor.</a> Stroke. 45 (5), 1505-1509 (2014).</li>
<li>McDonald, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fasudil+decreases+lesion+burden+in+a+murine+model+of+cerebral+cavernous+malformation+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Fasudil decreases lesion burden in a murine model of cerebral cavernous malformation disease.</a> Stroke. 43 (2), 571-574 (2012).</li>
<li>Maddaluno, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EndMT+contributes+to+the+onset+and+progression+of+cerebral+cavernous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">EndMT contributes to the onset and progression of cerebral cavernous malformations.</a> Nature. 498 (7455), 492-496 (2013).</li>
<li>Gibson, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategy+for+identifying+repurposed+drugs+for+the+treatment+of+cerebral+cavernous+malformation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Strategy for identifying repurposed drugs for the treatment of cerebral cavernous malformation.</a> Circulation. 131 (3), 289-299 (2015).</li>
<li>Choi, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-CT+Imaging+Reveals+Mekk3+Heterozygosity+Prevents+Cerebral+Cavernous+Malformations+in+Ccm2-Deficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Micro-CT Imaging Reveals Mekk3 Heterozygosity Prevents Cerebral Cavernous Malformations in Ccm2-Deficient Mice.</a> PLoS One. 11 (8), 0160833(2016).</li>
<li>Zhou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+cavernous+malformations+arise+from+endothelial+gain+of+MEKK3-KLF2%2F4+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cerebral cavernous malformations arise from endothelial gain of MEKK3-KLF2/4 signalling.</a> Nature. 532 (7597), 122-126 (2016).</li>
<li>Metscher, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroCT+for+comparative+morphology%3A+simple+staining+methods+allow+high-contrast+3D+imaging+of+diverse+non-mineralized+animal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Physiol%22%5BJournal%5D)">MicroCT for comparative morphology: simple staining methods allow high-contrast 3D imaging of diverse non-mineralized animal tissues.</a> BMC Physiol. 9, 11(2009).</li>
<li>Johnson, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virtual+histology+of+transgenic+mouse+embryos+for+high-throughput+phenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Virtual histology of transgenic mouse embryos for high-throughput phenotyping.</a> PLoS Genet. 2 (4), 61(2006).</li>
<li>Anderson, R., Maga, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Procedure+for+Rapid+Imaging+of+Adult+Mouse+Brains+with+MicroCT+Using+Iodine-Based+Contrast%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Novel Procedure for Rapid Imaging of Adult Mouse Brains with MicroCT Using Iodine-Based Contrast.</a> PLoS One. 10 (11), 0142974(2015).</li>
<li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+regulation+of+the+cerebral+cavernous+malformation+pathway+controls+vascular+stability+and+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Dynamic regulation of the cerebral cavernous malformation pathway controls vascular stability and growth.</a> Dev Cell. 23 (2), 342-355 (2012).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

CCM é uma malformação vascular comum que afeta até 0,5% de indivíduos1. CCM pode ocorrer de forma esporádica ou familiar. Prognóstico do paciente é muitas vezes pouco claro como lesões CCM podem romper inesperadamente para causar acidente vascular cerebral e outras consequências neurológicas. Atualmente, a único tratamento opção é remover cirurgicamente lesões, que são acompanhadas de alto risco.
Recentemente foram reproduzidas em condições humanas de CCM animal modelos...

CCM são de paredes finas, dilatado malformações vasculares no cérebro, com prevalência de até 0,5% na população humana1. CCM pode ser herdada como uma desordem dominante devido a mutações de perda de função em um dos três genes: CCM1 (aka Krit1), CCM2e CCM3 (também chamado PDCD10)2,3,4 ,5,6. Estes genes estão presentes em um único complexo de sinalização.
Foram desenvolvidos vários modelos para doenças humanas de CCM modelo e entender os caminhos a jusante de genes CCM que são responsáveis por CCM7,8,9,10. O modelo mais robusto é condicionalmente excluir qualquer um dos genes Ccm com tamoxifeno-inducible Cdh5-CreERT2 em P1 em filhotes recém-nascidos8,10. Esses filhotes desenvolvem lesões CCM no cérebro de P6 para a frente e são esperados para ser um modelo ideal para estudos pré-clínicos em busca de mecanismos e agentes terapêuticos no tratamento de doenças do CCM.
Fardo de lesão CCM em cérebro de rato foi medido principalmente pelos métodos baseados em histologia, uma abordagem que é extremamente demorado e sujeito a investigador viés de11,10,12. MRI com base em métodos foram usados para avaliar a carga de lesão CCM no rato adulto modelo9,13. No entanto, um instrumento de MRI animal pequeno altamente especializado e varredura-tempo de várias horas durante a noite é necessária para alcançar uma resolução satisfatória para identificar lesões CCM. Também, não foi relatada se ressonância magnética pode ser usada para detectar lesões do CCM em camundongos Neonatais e resolução pode limitar a sensibilidade.
Recentemente desenvolvemos uma técnica de micro-CT para imagem e analisar CCM lesão14,15. De alta resolução, tempo e método cost-effective dramaticamente impulsionaram o valor do modelo de doença CCM em estudos terapêuticos e mecanicistas. Melhorar o contraste, toda montagem coloração métodos têm sido utilizados para a imagem latente de micro-CT dos tecidos moles e rato embriões16,17. Anteriormente, usamos uma baseada no ósmio de coloração para realçar o contraste para a imagem latente de micro-CT de lesões do CCM no cérebro14. Neste trabalho, usamos um menos tóxico, não-destrutivo, e reagente custo-eficiente, um iodo solução baseada em solução de Lugol, para realçar o contraste para a imagem latente de micro-CT. Iodo pode difundir em todo o cérebro e tem uma elevada afinidade para sangue18.
O protocolo detalhado é apresentado aqui para a indução de lesões do CCM em um modelo de rato neonatal, junto com a imagem e análise de lesões CCM com uma contraste baseados micro-CT. Este método baseado em micro-CT fornece medição global quantitativa do volume de lesão do CCM, identifica com precisão o número e a localização em 3D das lesões do CCM no cérebro do rato e reduz o custo e tempo necessário para o fenótipo desses animais.

<table><tbody><tr><td>4-hidroxi tamoxifeno</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6278</td><td>Para ativar Cdh5-CreErt2</td></tr><tr><td>Óleo de milho</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8267-500ML</td><td>Para diluir 4-hidroxi tamoxifeno</td></tr><tr><td>Estereomicroscópio</td><td>Leica</td><td>M205FA</td><td>Para tirar imagens macroscópicas</td></tr><tr><td>Solução de iodo de Lugol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6146</td><td>Para corar amostras para micro-CT</td></tr> <tr><td>de contrasteFilme plástico</td><td>parafina</td><td>Parafilm PM992</td><td>Para embalar amostras</td></tr><tr><td>Micro-CT</td><td>Xradia</td><td>MicroXCT-400</td><td>Micro-CT</td></tr><tr><td>Software de renderização 3D</td><td>FEI Visualization Science group</td><td>Software de processamento de imagem Avizo 3D</td><td>Para analisar varreduras de micro-CT</td></tr></tbody></table>

indução e micro-ct imaging de malformações cavernosas cerebrais no modelo de mouse

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Mutações no CCM1 (aka KRIT1), CCM2, ou CCM3 (aka PDCD10) gene causar malformação cavernosa cerebral (CCM) em seres humanos. Modelos do rato da doença CCM foram estabelecidos pela exclusão de tamoxifeno induzido de Ccm genes em animais pós-natal. Esses modelos de rato fornecem ferramentas de valor inestimáveis para investigar o mecanismo molecular e abordagens terapêuticas para a doença CCM. Um método exato e quantitativo para avaliar a progressão e o fardo da lesão é essencial para aproveitar o valor total desses modelos animais. Aqui, demonstramos a indução da doença do CCM em um modelo do rato e o uso do contraste melhorado método de (micro-CT) radiografia computadorizada micro medida CCM encargo de lesão no cérebro de rato. No dia pós-natal 1 (P1), usamos 4-hydroxytamoxifen (4HT) para ativar a atividade de recombinase Cre do transgene de Cdh5-CreErt2 para decompor o alelo floxed de Ccm2. Lesões do CCM em cérebro de rato foram analisadas em P8. Para o micro-CT, solução de Lugol à base de iodo foi usada para aumentar o contraste no tecido cerebral. Nós temos otimizado os parâmetros de verificação e utilizou uma dimensão de voxel de 9,5 µm, que levam a um tamanho mínimo de recurso de aproximadamente 25 µm. Esta resolução é suficiente para medir o número e volume de lesão CCM globalmente e com precisão e fornecer alta qualidade 3D mapeamento de lesões do CCM em cérebro de rato. Esse método aumenta o valor dos modelos rato estabelecida para estudar as bases moleculares e terapias potenciais para CCM e outras doenças cerebrovasculares.

Uma única injeção de 4HT no P1 foi suficiente para induzir lesões CCM no cerebelo. Solução de Lugol iodo contrastado micro-CT suficientemente detectado lesões CCM e podia quantificar o volume e o número. Estamos utilizando o micro-CT otimizado, fotografada lesões CCM nos hindbrains de Ccm2iECKO ratos. Imagens digitalizadas de raios-x foram reconstruídas para produzir imagens em 3D do cérebro do rato, que permitiu a visualização de lesões inteiras no parênquima cerebra...

Este protocolo demonstra a indução da doença malformação cavernosa cerebral em um modelo do rato e usa contraste aprimorado micro computadorizada para medir carga de lesão. Esse método aumenta o valor dos modelos de rato estabelecida para estudar a base molecular e terapias potenciais para malformação cavernosa cerebral e outras doenças cerebrovasculares.

Indução e Micro-CT Imaging de malformações cavernosas cerebrais no modelo de Mouse

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

O objetivo geral deste procedimento é induzir malformações cavernosas cerebrais em camundongos neonatais e medir a carga da doença usando micro-CT. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo das doenças vasculares cerebrais, como malformações cavernosas cerebrais. A principal vantagem desta técnica é que a carga de doença da malformação cavernosa cerebral em modelos de camundongos neonatais pode ser determinada com precisão e eficiência em comparação com os métodos existentes.A demonstração visual desse método é fundamental, pois a indução de malformação cavernosa cerebral e as etapas de análise de micro-TC são difíceis de aprender, pois requer experiência e uso de software sofisticado. Comece dissolvendo o 4-HT em 100% de etanol até uma concentração de 10 miligramas por mililitro. Prepare alaquads de 30 microlitros e armazene a 80 graus Celsius negativos.No dia do uso, dilua o alaquad a 4-HT em óleo de milho a 0,5 miligramas por mililitro. Em seguida, use uma seringa de insulina para injetar introgástricamente 50 microlitros de 4-HT em filhotes neonatais P1 para induzir lesões experimentais de CCM. Comece a preparação da amostra enchendo uma seringa de 10 milili

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Neste artigo, apresentamos uma técnica simples e prática para a fundição cerebrovascular que é fácil de executar e pode ser utilizado para a imagem da árvore vascular do cérebro do rato adulto.

Fundição vascular cerebral do rato adulto for Imaging 3D e Análise morfológica

Fonte: Xavier, A. L. R., et al. Implantação de cânula na cisterna magna de roedores. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra o procedimento para implantar uma cânula na cisterna magna de um camundongo anestesiado. A técnica envolve guiar uma cânula montada em agulha através da dura-máter até a cisterna magna triangular invertida e prendê-la para entrega direcionada no líquido cefalorraquidiano.

Implantação de cânula na cisterna magna em um modelo de camundongo

Neste vídeo, um filhote de camundongo geneticamente modificado carregando o gene Ccm2 ladeado por locais loxP e Cre recombinase fundidos a um receptor de estrogênio é usado para induzir malformações cavernosas cerebrais (CCMs). A administração de 4-hidroxitamoxifeno ativa o Cre nas células endoteliais, levando à deleção de Ccm2 e à formação de CCMs no cérebro.

Indução mediada por Cre-LoxP de malformações cavernosas cerebrais em um modelo de camundongo

Fonte: Choi, J. P. et al. Indução e micro-CT de malformações cavernosas cerebrais em modelo de camundongo. J. Vis. exp. ( 2017)Este vídeo demonstra o uso de imagens de micro-TC para visualizar lesões de malformação cavernosa cerebral (CCM) em um cérebro de camundongo. Ele detalha as etapas de preparação da amostra, imagem e reconstrução de imagem 3D para avaliar a densidade e a localização das lesões de CCM no tecido cerebral.

Imagem de micro-tomografia computadorizada com contraste de lesões de malformação cavernosa cerebral em um cérebro de camundongo

Fonte: Kim, D., et. al. Imagem fluorescente combinada de infravermelho próximo e microtomografia computadorizada para visualização direta de tromboêmbolos cerebrais. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a visualização de trombos cerebrais em camundongos usando imagens de microtomografia computadorizada (micro-CT). Um modelo de camundongo tromboso cerebral é injetado com nanopartículas de ouro direcionadas à fibrina que atuam como um agente contrastante. O mouse é colocado na cama de uma...

Visualização de um trombo cerebral em um camundongo usando imagens de microtomografia computadorizada

Este protocolo descreve a aplicação de tomografia combinada fluorescente no infravermelho próximo (NIRF) e imagiologia de micro-computadorizada (microCT) para visualizar tromboêmbolos cerebral. Esta técnica permite a quantificação da carga de trombo e evolução. A técnica de imagem NIRF visualiza fluorescente etiquetado trombo no cérebro extirpado, enquanto que a técnica microCT visualiza trombo no interior de animais vivos usando ouro-nanopartículas.

Combinada Near-infrared imagens fluorescentes e tomografia Micro-computado para Diretamente Visualizando Cerebral tromboêmbolos

O objetivo deste artigo é apresentar um método que permite uma reconstrução 3-dimensional da árvore vascular em ratos após micro computado tomografia computadorizada e determinação de volumes de segmentos de toda embarcação que podem ser usados para quantificar o vasoespasmo cerebral em modelos de murino de hemorragia subaracnoide.

Um método volumétrico para quantificação de vasoespasmo Cerebral em um modelo murino de hemorragia subaracnoide

Este artigo descreve um método simples para preparar pequenos cérebros de animais para a imagem latente de micro-CT, nas quais as lesões podem ser quantificadas e eletrodos localizados com elevada precisão no contexto do cérebro inteiro.

Um método de Micro-CT-baseado para caracterizar as lesões e localização de eletrodos nos cérebros de animais pequenos

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Indução de AVC Isquêmico Agudo em Camundongos Usando a Técnica de Oclusão Distal da Artéria Média

O protocolo descreve um método para injetar células tumorais através da via de punção percutânea na cisterna magna que induz metástase leptomeníngea em camundongos, reduzindo o trauma e a carga tumoral extracraniana.

Modelo de injeção minimamente invasiva de cisterna magna para estudos de metástase leptomeníngea em camundongos

Aprenda a induzir malformações cavernosas cerebrais em camundongos neonatais e medir a carga da doença usando micro-CT. Este método avança a pesquisa em doenças cerebrovasculares.

Indução e Micro-CT Imaging de malformações cavernosas cerebrais no modelo de Mouse

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