Name: Métodos para analisar os impactos de urânio Natural em In Vitro Osteoclastogenesis (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 51 s
Description: Aprenda a analisar os efeitos do urânio natural na osteoclastogênese in vitro usando células RAW 264.7. Este método permite avaliar viabilidade, diferenciação e função celular em toxicologia ambiental.

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Os autores gostaria agradecer Cros Chantal por assistência técnica útil. Esta pesquisa foi financiada por doações do "Commissariat à l'Energie Atomique et aux energias alternativas" (URANOs - programa Transversal de Toxicologie du CEA e CPRR CEA-AREVA) e da ANR (toxicidade de urânio: abordagem multi-nível de biomineralização processo no osso, ANR-16-CE34-0003). Este trabalho também foi apoiado pela Universidade de Nice Sophia-Antipolis e o CNRS.

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<li>Ballou, J. E., Gies, R. A., Case, A. C., Haggard, D. L., Buschbom, R. L., Ryan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deposition+and+early+disposition+of+inhaled+233UO2%28NO3%292+and+232UO2%28NO3%292+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Phys%22%5BJournal%5D)">Deposition and early disposition of inhaled 233UO2(NO3)2 and 232UO2(NO3)2 in the rat.</a> Health Phys. 51 (6), 755-771 (1986).</li>
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<li>Kurttio, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+effects+of+uranium+in+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Renal effects of uranium in drinking water.</a> Environ.Health Perspect. 110 (4), 337-342 (2002).</li>
<li>Leggett, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basis+for+the+ICRP%27s+age-specific+biokinetic+model+for+uranium%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Phys%22%5BJournal%5D)">Basis for the ICRP's age-specific biokinetic model for uranium.</a> Health Phys. 67 (6), 589-610 (1994).</li>
<li>Vidaud, C., Bourgeois, D., Meyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+as+target+organ+for+metals%3A+the+case+of+f-elements%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Res.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Bone as target organ for metals: the case of f-elements.</a> Chem. Res. Toxicol. 25 (6), 1161-1175 (2012).</li>
<li>Arzuaga, X., Gehlhaus, M., Strong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modes+of+action+associated+with+uranium+induced+adverse+effects+in+bone+function+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Modes of action associated with uranium induced adverse effects in bone function and development.</a> Toxicol. Lett. 236 (2), 123-130 (2015).</li>
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<li>Teiltelbaum, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+osteoclast+and+its+unique+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The osteoclast and its unique cytoskeleton.</a> Ann N Y Acad Sci. 1240, 14-17 (2011).</li>
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<li>Salo, J., Lehenkari, P., Mulari, M., Metsikko, K., Vaananen, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+osteoclast+bone+resorption+products+by+transcytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Removal of osteoclast bone resorption products by transcytosis.</a> Science. 276 (5310), 270-273 (1997).</li>
<li>Pierrefite-Carle, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+natural+uranium+on+the+UMR-106+osteoblastic+cell+line%3A+impairment+of+the+autophagic+process+as+an+underlying+mechanism+of+uranium+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Effect of natural uranium on the UMR-106 osteoblastic cell line: impairment of the autophagic process as an underlying mechanism of uranium toxicity.</a> Arch. Toxicol. 91 (4), 1903-1914 (2017).</li>
<li>Ubios, A. M., Guglielmotti, M. B., Steimetz, T., Cabrini, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uranium+inhibits+bone+formation+in+physiologic+alveolar+bone+modeling+and+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Res%22%5BJournal%5D)">Uranium inhibits bone formation in physiologic alveolar bone modeling and remodeling.</a> Environ. Res. 54 (1), 17-23 (1991).</li>
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<li>Kurttio, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+as+a+possible+target+of+chemical+toxicity+of+natural+uranium+in+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Bone as a possible target of chemical toxicity of natural uranium in drinking water.</a> Environ. Health Perspect. 113 (1), 68-72 (2005).</li>
<li>Collin-Osdoby, P., Osdoby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RANKL-mediated+osteoclast+formation+from+murine+RAW+264.7+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">RANKL-mediated osteoclast formation from murine RAW 264.7 cells.</a> Methods Mol. Biol. 816, 187-202 (2012).</li>
<li>Beranger, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+binding+of+poly%28ADP-Ribose%29+polymerase-1+and+JunD%2FFra2+accounts+for+RANKL-induced+Tcirg1+gene+expression+during+osteoclastogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Miner.+Res%22%5BJournal%5D)">Differential binding of poly(ADP-Ribose) polymerase-1 and JunD/Fra2 accounts for RANKL-induced Tcirg1 gene expression during osteoclastogenesis.</a> J. Bone Miner. Res. 22 (7), 975-983 (2007).</li>
<li>Mirto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+uranium%28VI%29+speciation+for+the+evaluation+of+in+vitro+uranium+cytotoxicity+on+LLC-PK1+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Exp.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Influence of uranium(VI) speciation for the evaluation of in vitro uranium cytotoxicity on LLC-PK1 cells.</a> Hum. Exp. Toxicol. 18 (3), 180-187 (1999).</li>
<li>Carrière, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+uranium+speciation+on+normal+rat+kidney+%28NRK-52E%29+proximal+cell+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Res.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Influence of uranium speciation on normal rat kidney (NRK-52E) proximal cell cytotoxicity.</a> Chem. Res. Toxicol. 17 (3), 446-452 (2004).</li>
<li>Milgram, S., Carrière, M., Malaval, L., Gouget, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+accumulation+and+distribution+of+uranium+and+lead+in+osteoblastic+cells+as+a+function+of+their+speciation%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Cellular accumulation and distribution of uranium and lead in osteoblastic cells as a function of their speciation.</a> Toxicology. 252 (1-3), 26-32 (2008).</li>
<li>Milgram, S., Carrière, M., Thiebault, C., Malaval, L., Gouget, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+and+phenotypic+effects+of+uranium+and+lead+on+osteoblastic+cells+are+highly+dependent+on+metal+speciation%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic and phenotypic effects of uranium and lead on osteoblastic cells are highly dependent on metal speciation.</a> Toxicology. 250 (1), 62-69 (2008).</li>
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<li>Gritsaenko, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+uranium+impairs+the+differentiation+and+the+resorbing+function+of+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Natural uranium impairs the differentiation and the resorbing function of osteoclasts.</a> Biochim Biophys Acta. 1861 (4), 715-726 (2017).</li>
<li>Motiur Rahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation-coupled+osteoclast+differentiation+by+RANKL%3A+Cell+density+as+a+determinant+of+osteoclast+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Proliferation-coupled osteoclast differentiation by RANKL: Cell density as a determinant of osteoclast formation.</a> Bone. 81, 392-399 (2015).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar

Tanto quanto sabemos, esta é a primeira vez que um procedimento detalhado com o objetivo de estudar os efeitos do urânio natural no osso resorbing células é descrito. Esta abordagem será útil para alcançar uma melhor compreensão do impacto de urânio na fisiologia do osso e pode fornecer uma ferramenta nova e interessante para o rastreio de quelantes de urânio. Além disso, acreditamos que o protocolo descrito aqui pode ser aplicado para estudar o impacto de outros metais pesados na osteoclatogenesis.
<p class="jove_co...

Urânio é um elemento radioativo ocorre naturalmente presente no solo, ar e água; como tal, animais e seres humanos estão expostos ao urânio natural em suas dietas. Além de fontes naturais, urânio origina actividades antropogénicas, que aumenta a sua abundância no ambiente. Urânio representa perigos químicos e radiológicos. No entanto, porque o urânio natural (que é uma mistura isotópica contendo 99.27% 238U, 0.72% 235U e 0.006% 234U) tem uma baixa atividade específica (25.103 Bq.g-1), seus impactos na saúde são atribuídos à sua toxicidade química.
O que quer que sua rota de entrada (inalação, ingestão ou exposição dérmica), a maioria de urânio, entrando no corpo é eliminado com fezes e apenas uma pequena porção atinge a circulação sistêmica. Cerca de 67% do urânio no sangue, por sua vez é filtrada pelos rins e deixa o corpo na urina dentro de 24 h1. O restante é depositado principalmente nos rins e ossos, os dois órgãos-alvo principal de urânio toxicidade2,3,4. Porque o esqueleto foi identificado como o local principal de urânio de retenção do longo prazo2,3,4,5,6, vários estudos têm sido realizados para explorar o efeito de urânio no osso fisiologia7.
Osso é um tecido mineralizado que é continuamente remodelado durante toda sua vida. Remodelação óssea é um processo complexo que depende de tipos de células especializadas e consiste principalmente em duas fases: reabsorção da matriz antiga pré-existente pelos osteoclastos, seguido por construção de osso de novo pelos osteoblastos. Osteoclastos são células grandes Relaxometria, resultando da fusão de células precursoras de origem hematopoiética que migram para locais de reabsorção, onde eles atribuem ao osso8. Sua fixação ocorre simultaneamente com uma extensa reorganização do seu citoesqueleto9. Esta reorganização é necessária para o estabelecimento de um compartimento isolado entre a célula e superfície óssea no qual o osteoclasto segrega prótons, levando à dissolução da hidroxiapatita e proteases envolvidas na degradação da matriz orgânica. Os produtos resultantes da degradação são endocytosed, transportado através da célula para a área de membrana oposta à superfície óssea e secretada, um processo chamado transcytosis10,11.
Resultados de estudos in vivo e in vitro indicam que o urânio inibe a formação óssea e altera o número e a atividade dos osteoblastos7,12. Em contraste, os efeitos do urânio na reabsorção óssea e osteoclastos têm sido mal explorados. Várias em vivo estudos relataram um aumento da reabsorção óssea após a administração de nitrato de uranilo para ratos ou ratos de13,14. Além disso, uma investigação epidemiológica sugere que o aumento na ingestão de urânio através da água potável tendeu a ser associado com um aumento do nível de soro de um marcador de reabsorção óssea em homens15. Tomados em conjunto, estas descobertas levaram à conclusão de que o urânio, que se acumula no osso poderia promover reabsorção óssea. No entanto, os mecanismos celulares envolvidos neste efeito potencial de urânio permanecem uma questão em aberto. Por esta razão, decidimos analisar o impacto de urânio no comportamento de resorbing células ósseas.
Aqui, descrevemos o protocolo que estabelecemos para caracterizar e quantificar os efeitos do urânio natural na viabilidade de pre-osteoclastos e na diferenciação de osteoclastos e atividade Odontoclastic. Os experimentos descritos neste documento tem sido feitos com a linha de celular de murino macrófago transformado 264.7 crus, que facilmente pode se diferenciar em osteoclastos quando cultivadas na presença da citocina RANKL por 4 ou 5 dias, e que é classicamente usado para estudar osteoclast diferenciação e função16. Os procedimentos desenvolvidos são confiáveis, dá resultados altamente reprodutíveis e são plenamente aplicável aos osteoclastos primários. Por todas estas razões, acreditamos que essa metodologia é útil para obter uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos na toxicidade de urânio no osso. Além disso, pensamos que esta abordagem poderia ser adaptada como uma ferramenta de triagem para identificar o urânio novo agentes quelantes.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Lonza</td><td>BE12-604F</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-MEM</td><td>Lonza</td><td>BE12-169F</td><td></td></tr><tr><td>EMEM sem vermelho de fenol</td><td>Lonza</td><td>12-668E</td><td></td></tr><tr><td>Água para cultura de células</td><td>Lonza</td><td>BE17-724F</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Solução de penicilina-estreptomicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Solução de L-Glutamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution 0,4%</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>HyClone soro fetal bovino</td><td>GE Life Sciences</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>Solução aquosa de bicarbonato de sódio a 7,5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>Kit de fosfatase ácida, lecócitos (TRAP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>387A</td><td></td></tr><tr><td>Brometo de tetrazólio azul de tiazolil (MTT) em pó</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5655</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5879</td><td></td></tr><tr><td>Sal de sódio Alizarin Red S, 1% p / v aq.</td><td>Alfa Aeros</td><td>42746</td><td></td></tr><tr><td>Placas de reabsorção óssea de osteoensaio, placas de 24 poços</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3987</td><td></td></tr><tr><td>Placas multipoços de 24 poços</td><td>Falcon</td><td>353504</td><td></td></tr><tr><td>Flask 75 cm2</td><td>Falcon</td><td>353133</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cônicos de polipropileno 50 ml</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Raspadores de células 30 cm</td><td>TPP</td><td>Rolamento 90003</td><td></td></tr></tbody></table>

métodos para analisar os impactos de urânio natural em in vitro osteoclastogenesis

Methods for Analyzing the Impacts of Natural Uranium on In Vitro Osteoclastogenesis

Urânio foi mostrado para interferir na fisiologia óssea e está bem estabelecido que este metal se acumula no osso. No entanto, pouco é conhecido sobre o efeito do urânio natural sobre o comportamento de células ósseas. Em particular, o impacto de urânio em osteoclastos, as células responsáveis pela reabsorção da matriz óssea, não está documentado. Para investigar esse problema, nós estabelecemos um novo protocolo usando acetato de uranilo como uma fonte de urânio natural e a linha de celular murino 264.7 crus como um modelo de precursores do osteoclast. Neste documento, nós detalhados todos os ensaios necessários para testar a citotoxidade de urânio sobre precursores osteoclasto e avaliar o seu impacto sobre a osteoclastogenesis e a função resorbing dos osteoclastos maduros. As condições que nós desenvolvemos, em particular para a preparação de uranilo, contendo meios de cultura e para a semeadura de RAW 264.7 células permitem para obter resultados confiáveis e altamente reprodutivos. Além disso, otimizamos o uso de ferramentas de software para facilitar a análise de vários parâmetros como o tamanho dos osteoclastos ou a porcentagem de matriz reabsorvido.

Coloração da fosfatase ácida tartarato-resistente foi usado para visualizar os osteoclastos como grandes células roxas tendo 3 ou mais núcleos. Imagens representativas dos osteoclastos obtidos de 264.7 pilhas cultivadas na presença de RANKL e íons uranilo são mostrados na Figura 1. Alterações no número e tamanho dos osteoclastos em resposta ao urânio são facilmente visíveis em imagens compostas de poços inteira e em fotos alargadas.
<p class="jove_content...

Urânio é conhecido por afetar o metabolismo ósseo. Aqui, apresentamos um protocolo que visa investigar o efeito da exposição de urânio natural sobre a viabilidade, a diferenciação e a função dos osteoclastos, as células responsável pela reabsorção óssea.

Métodos para analisar os impactos de urânio Natural em In Vitro Osteoclastogenesis

Uranium has been shown to interfere with bone physiology and it is well established that this metal accumulates in bone. However, little is known about ...

O objetivo geral deste procedimento é investigar os efeitos da exposição natural ao urânio na viabilidade, diferenciação e função dos osteoclastos. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da toxicidade ambiental sobre o impacto da exposição ao urânio na fisiologia e metabolismo ósseo. A principal vantagem desta técnica é que ela fornece uma nova ferramenta interessante para a triagem de originadores de urânio.Quando a cultura de células RAW 264.7 atingir 85 a 90% de confluência, use um raspador de células para levantar mecanicamente as células do fundo do frasco de cultura de células e transferir as células para um tubo cônico estéril de 50 mililitros. Pipetar a solução celular algumas vezes para quebrar os aglomerados e contar a suspensão unicelular resultante. Dilua as células para uma concentração de um vezes 10 a quatro células por mililitro em meio essencial mínimo modificado com alfa, suplementado com L-glutamina e 5% de soro bovino fetal e adicione um mililitro de células por poço a uma placa de cultura de células de 24 poços para uma incubação de seis horas a 37 graus Celsius.Um parâmetro importante para a reprodutibilidade do ensaio de diferenciação e

methods-for-analyzing-impacts-natural-uranium-on-vitro

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Neste vídeo, descrevemos um ensaio de reabsorção osteoclástica in vitro em placas de cultura de células revestidas com fosfato de cálcio cultivadas com osteoclastos derivados de células mononucleares de sangue periférico humano. Os osteoclastos formam um anel de actina característico na matriz revestida de fosfato de cálcio da placa de cultura de células e degradam a matriz dentro da região do anel de actina para liberar íons de cálcio e fosfato, resultando na formação de poços de reabsorção...

Ensaio de reabsorção: uma técnica in vitro para quantificar a atividade de reabsorção de cálcio de osteoclastos maduros usando placas de cultura revestidas com fosfato de cálcio

Neste vídeo, demonstramos o efeito de diferentes concentrações de anticorpos anti-c-fms na osteoclastogênese, que é o processo de formação de osteoclastos a partir de progenitores de osteoclastos.

Efeito do anticorpo anti-C-fms na osteoclastogênese em células da medula óssea de camundongos in vitro

Os osteoclastos são as células de reabsorção óssea principais no corpo. Uma capacidade de isolar os osteoclastos em grandes números resultou em avanços significativos na compreensão da biologia dos osteoclastos. Neste protocolo, nós descrevemos um método para o isolamento, cultivo e quantificar a actividade dos osteoclastos in vitro.

Osteoclastos Derivação do mouse Medula Óssea

A água de sangria de produção (PBW) foi tratada com nanopartículas de óxido cúprico (CuO-NPs) e a toxicidade celular foi avaliada em células humanas cultivadas. O objetivo deste protocolo foi integrar a amostra ambiental nativa em um formato de cultura de células avaliando as mudanças na toxicidade devido ao tratamento com CuO-NP.

A remoção do Trace Elements por Óxido de Cupric nanopartículas de urânio<em&gt; In Situ</em&gt; Recuperação sangro água e seu efeito na viabilidade celular

Os osteoclastos são polykaryons tecido-específicos do macrófago derivados da linhagem do monocyte-macrófago de pilhas de haste hematopoietic. Este protocolo descreve como isolar pilhas da medula de modo que as grandes quantidades de osteoclastos sejam obtidas ao reduzir o risco de acidentes encontrados em métodos tradicionais.

Isolamento, purificação e diferenciação de precursores de osteoclast da medula óssea de ratos

Este protocolo inclui a dissecação de murino de ossos longos e isolamento de medula óssea, para gerar os macrófagos da medula óssea e produzir osteoclastos usando macrófago da colônia fator (M-CSF) e do receptor ativador de ligante fator nuclear Kappa-B (RANKL) ou fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e a sua detenção por anticorpo anti-c-fms, receptor de M-CSF.

Efeito de anticorpo Anti-c-fms Osteoclast formação e proliferação de Osteoclast Precursor In Vitro

Este protocolo apresenta um ensaio de captação de aminoácidos radiomarcado, que é útil para avaliar o consumo de aminoácidos em células primárias ou em ossos isolados.

Avaliação do Consumo de Aminoácidos em Células Ósseas Cultivadas e Eixos Ósseos Isolados

O ensaio de fluxo metabólico celular em tempo real mede a taxa de consumo de oxigênio e a taxa de acidificação extracelular, que corresponde à produção de triptosfato de adenosina mitocondrial e glicolítico, usando sensores de pH e oxigênio. O manuscrito explica um método para compreender o estado energético dos osteoblastos e a caracterização e interpretação do estado bioenergéstico celular.

Usando o analisador de fluxo metabólico de células em tempo real para monitorar bioenergetics osteoblast

Aqui apresentamos protocolos que oferecem uma base flexível e estratégica para manipular viralmente células precursoras de oligodendrócitos para superexpressar proteínas de interesse, a fim de interrogar especificamente seu papel em oligodendrócitos por meio do modelo in vitro de mielinização do sistema nervoso central.

Produção e Uso de Lentivírus a seletivamente transduzem Primária Oligodendrocyte células precursoras para In Vitro Os ensaios mielinização

Estabelecemos um método de encapsulamento de células-tronco pluripotentes (células PS) em cápsulas de hidrogel de alginato usando um bico coaxial.  Isso evita que as células se agreguem excessivamente e limita a tensão de cisalhamento experimentada pelas células em cultura em suspensão.  A técnica é aplicável à produção em massa de células PS, bem como à pesquisa de nicho de células-tronco.

Encapsulation alginato de pluripotentes células estaminais utilizando um bocal Co-axial

Aprenda a analisar os efeitos do urânio natural na osteoclastogênese in vitro usando células RAW 264.7. Este método permite avaliar viabilidade, diferenciação e função celular em toxicologia ambiental.

Métodos para analisar os impactos de urânio Natural em In Vitro Osteoclastogenesis

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