Método para a rotulagem transcritos em células individuais Escherichia coli para único-molécula fluorescência In Situ as experiências de hibridação

O objetivo geral deste protocolo é rotular transcritos individuais em E.Coli para sondas de DNA marcadas com fluorescência para visualização em experimentos FiSH de molécula única. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da biologia de sistemas, como caracterizar a capacidade de transcrição célula a célula do campo de interesse. Bem como as transcrições de localização da parede celular.

A principal vantagem dessa técnica é que ela fornece uma quantidade de informações sobre as estatísticas dos processos transcricionais. Para iniciar o protocolo, cultive E.Coli MG1655 em meio LB durante a noite em um agitador orbital, a 260 RPM e 37 graus Celsius. No dia seguinte, diluir a cultura durante a noite em um a 100 em meio fresco e medir sua densidade óptica em um espectrofotômetro, até um valor de 0,2 a 0,4.