Name: Teste de tolerância à glicose intraperitoneal, medição da função pulmonar e a fixação do pulmão para estudar o impacto da obesidade e metabolismo prejudicado em resultados pulmonares (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Aprenda a realizar teste de tolerância à glicose, pletismografia e fixação pulmonar para estudar o impacto da obesidade na função respiratória em modelos animais. Essas técnicas combinadas permitem investigar doenças pulmonares crônicas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os experimentos foram apoiados pelo Marga e Walter Boll-Stiftung, Kerpen, Alemanha; Projeto 210-02-16 (maaaas), projeto 210-03-15 (maaaas) e pela Fundação de pesquisa alemã (DFG; AL1632-02; MAAAAS), Bonn, Alemanha; Centro de Medicina Molecular Colónia (CMMC; Hospital da Universidade de Colónia; Programa de avanço de carreira; MAAAAS,) Fortuna Köln (Faculdade de medicina, Universidade de Colónia; KD).

Todos os procedimentos de animais foram conduzidos em conformidade com os protocolos aprovados por autoridades do governo local (Land NRW, AZ: 2012.A424) e estavam em conformidade com a lei alemã de bem-estar animal e os regulamentos sobre o bem-estar dos animais utilizados para experiências ou para outros fins científicos. Desde que a análise de função pulmonar pode afetar a estrutura do pulmão e portanto subsequentes analisa histológica, a medição de Res Cdyn e a preparação e fixação do pulmão por Histomorfometria deve ser executada em animais diferentes. No entanto, medição de Res e Cdyn ipGTT a seguir é possível. Desde que o stress durante o ipGTT poderia interferir com a anestesia necessária para a função pulmonar testa, um período de recuperação de aproximadamente 2 semanas depois de ipGTT é recomendado para permitir que os ratos para recuperar da perda de peso corporal e mudanças no sangue parâmetros12.
1. preparação para o teste de tolerância à glicose Intraperitoneal (ipGTT)
Nota: Após 12 h de jejum, o ipGTT completo leva aproximadamente 2 h.
<ol><li>Desde que o stress influencia significativamente a glicemia, certifique-se de que ambos adaptação dos ratos, bem como a formação do cientista, são executadas.</li>
	<li>Transferi os animais para a área experimental em condições tranquilos e sem stress.</li>
	<li>Considere a aplicação de uma dieta hypercaloric para induzir obesidade em ratos. Consulte a seção de discussão para mais conselhos.</li>
	<li>Animais rápidos para 12 h durante a noite, sem limitar o acesso à água. No dia seguinte, após 12 h de jejum, preparar o medidor de glicose de sangue de acordo com o fabricante do protocolo (ver tabela de materiais), inserindo uma nova tira de teste na porta da tira de teste.</li>
	<li>Incise a ponta da cauda usando tesoura estéril, mantendo-se suavemente o mouse em sua cauda e imediatamente medir a glicemia de jejum, aplicando uma gota de sangue fluxo livre (mínimo de amostra tamanho 0,5 µ l) para a tira de teste do medidor de glicose no sangue. Nota: Uma contagem regressiva começa na tela após a aplicação da amostra de sangue suficiente. Após 4 s, o resultado do teste aparece na tela.</li>
	<li>Depois, pesar e etiquetar os animais individualmente usando cor de marcação.</li>
	<li>Administre 2G glicose/kg corpo peso através de injeção intraperitoneal. Certifique-se de que o volume de injeção é de 0,1 mL/10 g de massa corporal (1 cc de seringa e agulha 27G).</li>
	<li>Posteriormente, medir a glicose no sangue após 15, 30, 60 e 120 min, aplicando uma gota de sangue fluindo livremente sobre uma nova tira de teste. Nota: O fluxo sanguíneo pode ser aumentado por massageando suave de cauda ponta-alas. Se a ferida de cauda incrustado, limpá-lo usando um cotonete estéril embebido em solução de cloreto de sódio 0,9%.</li>
	<li>Permitir que os animais possam descansar em suas gaiolas em casa com acesso ilimitado a água entre as medições.</li>
</ol>2. análise de função pulmonar a medida Res e cDyn
Nota: Para a medição não perturbada de Res e cDyn, ratos precisam ser ventilado sob anestesia profunda. Estresse animal manipulação e um acompanhamento adequado da anestesia são essenciais. Para obter instruções gerais usando técnicas estéreis, por favor, reveja o artigo por Hoogstraten-Miller et al . 15
<ol><li>Calibrar a pletismografia antes de cada set de experimentos e preparar as configurações de estudo dentro do software (consulte a Tabela de materiais).</li>
	<li>Antes da cirurgia, profundamente anestesiar animais através de injeção intraperitoneal de xilazina (10mg/kg de peso corporal) e cetamina (100 mg/kg de peso corporal) (1 cc de seringa e agulha 27G). Certifique-se de que o volume de injeção é de 0,1 mL/10g por peso corporal. Nota: Desde que a ketamina tem um efeito analgésico adequado nos ratos, nenhum tratamento de dor adicional é necessário. O procedimento invasivo cateter traqueal/pletismografia leva aproximadamente 5-7 minutos, em seguida, pode começar a aquisição de dados.</li>
	<li>Posicione o mouse na posição supina sobre uma almofada de aquecimento para manter a temperatura do corpo.</li>
	<li>Cubra os olhos com pomada para evitar ressecamento sob anestesia.</li>
	<li>Monitore constantemente a profundidade da anestesia, usando a dedo pitada-resposta. Nota: Administração adicional de anestésico pode ser necessária manter um plano cirúrgico da anestesia.</li>
	<li>Umedece a pele da área cirúrgica na região da tireoide com etanol a 70%.</li>
	<li>Cuidadosamente, faça uma incisão da pele na linha média para cerca de 1 cm entre o entalhe na jugular do esterno e os symphyses do tubérculo do mentum levantá-la com a pinça e encaixando a pele por inspeção visual, usando a tesoura sem corte (figura 1A).</li>
	<li>Visualize o tecido adiposo subcutâneo subjacente e a glândula tireoide.</li>
	<li>Expor a traqueia, cuidadosamente sem corte separando ambos os lobos da tireoide no istmo e dissecação do esternotireoideo e músculos esternotireoideo (figura 1B). Tenha cuidado para não prejudicar qualquer vasos e causar sangramento, pois pode causar efeitos adversos sobre o sistema cardiovascular e, finalmente, nas medidas.</li>
	<li>Posteriormente, passe uma sutura cirúrgica trançada de 4-0 entre a traqueia e o esófago usando fórceps rombudo. Incise cuidadosamente a traqueia perto da laringe entre as cartilagens traqueais com micro tesouras.</li>
	<li>Entube com tubo traqueal (0,04 polegadas/1,02 mm de diâmetro) sob o controle visual (Figura 1). Fixe a tubo através da ligadura com a sutura cirúrgica para evitar qualquer vazamento no sistema.</li>
	<li>Em seguida, mover o animal para a cama aquecida da câmara corpo e ligar o tubo traqueal para a placa de cara (Figura 1) e ligue a ventilação, pressionando o botão de ventilação do painel frontal do controlador (Figura 1E).</li>
	<li>Levantamento da ventilação, observando o movimento do tórax simultaneamente com a taxa de ventilação. Para confirmar a correcta colocação do tubo traqueal, certifique-se de que ambos os lados do tórax se mover simultaneamente.</li>
	<li>Cuidado com a pressão de sinal na tela do computador (Figura 1F). Certifique-se de que as curvas de ventilação são uniformes. Se isso não for o caso, retire o animal e verificar o lado da cirurgia. Cuidado com sangue ou muco, bloqueando o tubo traqueal. Nota: Para animais adultos com um peso de 20-25 g, as configurações do ventilador como mostrado na Figura 2 são sugeridas em conformidade com as recomendações do fabricante.</li>
	<li>Para controlar as alterações na pressão trans-pulmonar durante a ventilação, inserir um tubo esofágico (0,04 polegadas/1,02 mm de diâmetro) para o esôfago na profundidade que se aproxima dos níveis dos pulmões. Assista a tela enquanto a colocação do tubo. Coloca o tubo onde a deflexão de pressão máxima e mínima coração artefatos podem ser vistos na tela.</li>
	<li>Após a cirurgia, prepare o animal para a medição. Reinjeção anestesia através de injeção intraperitoneal de cetamina (100 mg/kg de peso corporal) 1 cc seringa e uma agulha de 27-G. Certifique-se de que o volume de injeção é de 0,1 mL/10g por peso corporal. Nota: Para avaliar hyperreagibility brônquica, nebuliza metacolina, um agonista não-seletivo de receptores muscarínicos do sistema nervoso parassimpático, que induz broncoconstrição. Aquisição de dados é realizada em quatro fases distintas (Figura 3).</li>
	<li>Inicie a aquisição de dados de acordo com o protocolo manufacturer´s. Nota: O software automaticamente orienta os usuários através do processo de aquisição.</li>
	<li>Aplicar 10 µ l de PBS (veículo) sobre o nebulizador e começar a nebulização após 5min de aclimatação. Em seguida, siga uma fase de resposta de 3 min, onde o Res (cmH2O/mL/s) e cDyn (mL/cmH2O) são medidos. No final, fornece uma fase de recuperação de 3 min para o animal antes da próxima nebulização.</li>
	<li>Siga o software de aplicação gradual de 10 µ l de concentrações crescentes de metacolina (2,5 µ g/10 µ l, 6,25 µ l µ g/10 e 12,5 µ g/10 µ l) sobre o ventilador.</li>
	<li>Uma vez que todas as medições foram realizadas e gravadas, sacrifica o animal por deslocamento cervical.</li>
</ol>3. pulmão isolamento para análise histomorfométrica quantitativa de ratos adultos
<ol><li>Profundamente anestesiar a animal através de injeção intraperitoneal de xilazina (10mg/kg de peso corporal) e cetamina (100 mg/kg de peso corporal) (1 cc de seringa e agulha 27G). O volume de injeção deve ser 0,1 mL/10g por peso corporal. Nota: Depois de atingir o estado de tolerância cirúrgica, a preparação leva cerca de 5 min, seguido por perfusão de órgão e 30 min para fixação.</li>
	<li>Uma vez que o animal atingiu o estado de tolerância cirúrgico (pitada-resposta negativa do dedo do pé), desinfectar o animal com 70% de etanol e corrigir o animal em uma almofada com fita cirúrgica.</li>
	<li>Sacrifica o animal por punção cardíaca e hemorragia. Brevemente, abra o abdômen com uma incisão medial através da pele e o peritônio usando tesoura sem corte.</li>
	<li>Localize as enfermarias de cabeça do diafragma do fígado e cuidadosamente separar o fígado do diafragma.</li>
	<li>Faça uma pequena incisão no diafragma com uma tesoura sem corte, e punctate do ventrículo esquerdo do coração com uma agulha 20g anexado a uma seringa de 2 mL. Lentamente, extrair sangue do animal. Nota: Sangramento lento e cuidadoso é importante para evitar que os ventrículos em colapso devido a pressão negativa, inibindo um fluxo sanguíneo sem ser perturbado.</li>
	<li>Disse o pulmão, abrindo o tórax suavemente através de uma incisão paraesternal ao longo de todo o comprimento da caixa torácica com uma tesoura curva, sem corte.</li>
	<li>Depois, levante a caixa torácica para expor a cavidade pleural (Figura 3). Remova o timo para ver o coração e os pulmões. Nota: Injeção opcional do ventrículo direito, seguido de perfusão do sistema vascular pulmonar com PBS gelado e, em seguida, com uma fixador solução [por exemplo, paraformaldeído 4% (massa/volume) (PFA)] é possível. Esteja ciente de que há um risco aumentado de ruptura de septos alveolares e afectar negativamente a estrutura pulmonar usando esse método.</li>
	<li>Dissecar o pulmão pelo primeiro cuidadosamente removendo o coração.</li>
	<li>Posteriormente, passe uma sutura cirúrgica trançada de 4-0 entre a traqueia e o esófago usando fórceps rombudo.</li>
	<li>Em seguida, cuidadosamente faça uma incisão na traqueia perto da laringe entre as cartilagens traqueais, entubar com uma cânula intravenosa (26 G) e insufle o pulmão por fixação de pressão a uma pressão constante de 20 cm H2O usando agente fixador [por exemplo, 4% (em massa /volume) de PFA].</li>
	<li>Para fixação de PFA, deixe o fixador por 30 min à temperatura ambiente. Depois, ligam a traqueia e remover a cânula. Em seguida, impostos especiais de consumo do pulmão cuidadosamente sem prejudicar o tecido e armazená-lo em agente fixador a 4 ° C durante a noite. Nota: Em alternativa, de acordo com o ATS/ETS consenso papel 2,5% GA em buffer OsO4, Uracil solução é usada para estabilização adequada do tecido. Para ainda mais preparação do tecido, consulte o documento de consenso por Hsia et al 14
</li>
</ol>

<ol><li>Kelly, T., Yang, W., Chen, C. S., Reynolds, K., He, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+obesity+in+2005+and+projections+to+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Global burden of obesity in 2005 and projections to 2030.</a> Int J Obes (Lond). 32, 1431-1437 (2008).</li>
<li>Freemantle, N., Holmes, J., Hockey, A., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+strong+is+the+association+between+abdominal+obesity+and+the+incidence+of+type+2+diabetes%3F%5BTitle%5D)+AND+%22International+journal+of+clinical+practice%22%5BJournal%5D)">How strong is the association between abdominal obesity and the incidence of type 2 diabetes?</a> International journal of clinical practice. 62, 1391-1396 (2008).</li>
<li>Wassink, A. M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Waist+circumference+and+metabolic+risk+factors+have+separate+and+additive+effects+on+the+risk+of+future+Type+2+diabetes+in+patients+with+vascular+diseases.+A+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Waist circumference and metabolic risk factors have separate and additive effects on the risk of future Type 2 diabetes in patients with vascular diseases. A cohort study.</a> Diabetic Medicine. 28, 932-940 (2011).</li>
<li>Oktay, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Interaction+of+Cardiorespiratory+Fitness+with+Obesity+and+the+Obesity+Paradox+in+Cardiovascular+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+cardiovascular+diseases%22%5BJournal%5D)">The Interaction of Cardiorespiratory Fitness with Obesity and the Obesity Paradox in Cardiovascular Disease.</a> Progress in cardiovascular diseases. , (2017).</li>
<li>Azamar-Llamas, D., Hernandez-Molina, G., Ramos-Avalos, B., Furuzawa-Carballeda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipokine+Contribution+to+the+Pathogenesis+of+Osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Adipokine Contribution to the Pathogenesis of Osteoarthritis.</a> Mediators Inflamm. 2017, 5468023(2017).</li>
<li>Koenig, S. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11307867">Pulmonary complications of obesity.</a> The American journal of the medical sciences. 321, 249-279 (2001).</li>
<li>Stunkard, A. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8629660">Current views on obesity.</a> The American journal of medicine. 100, 230-236 (1996).</li>
<li>Murugan, A. T., Sharma, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19029235">Obesity and respiratory diseases.</a> Chron Respir Dis. 5, 233-242 (2008).</li>
<li>Zammit, C., Liddicoat, H., Moonsie, I., Makker, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2990395/">Obesity and respiratory diseases.</a> International journal of general medicine. 3, 335-343 (2010).</li>
<li>Ouchi, N., Parker, J. L., Lugus, J. J., Walsh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipokines+in+inflammation+and+metabolic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adipokines in inflammation and metabolic disease.</a> Nat Rev Immunol. 11, 85-97 (2011).</li>
<li>McArdle, M. A., Finucane, O. M., Connaughton, R. M., McMorrow, A. M., Roche, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+obesity-induced+inflammation+and+insulin+resistance%3A+insights+into+the+emerging+role+of+nutritional+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of obesity-induced inflammation and insulin resistance: insights into the emerging role of nutritional strategies.</a> Front Endocrinol (Lausanne). 4, 52(2013).</li>
<li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+models+%26+mechanisms%22%5BJournal%5D)">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Disease models & mechanisms. 3, 525-534 (2010).</li>
<li>Bates, J. H., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+lung+function+in+mice%3A+the+phenotyping+uncertainty+principle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Measuring lung function in mice: the phenotyping uncertainty principle.</a> J Appl Physiol. 94 (1985), 1297-1306 (2003).</li>
<li>Hsia, C. C., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society%2FEuropean+Respiratory+Society%3A+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> Am J Respir Crit Care Med. 181, 394-418 (2010).</li>
<li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+in+aseptic+rodent+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Curr Protoc Immunol. Chapter 1, Unit 1 12 11-11 12-14 (2008).</li>
<li>Heydemann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Overview+of+Murine+High+Fat+Diet+as+a+Model+for+Type+2+Diabetes+Mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+diabetes+research%22%5BJournal%5D)">An Overview of Murine High Fat Diet as a Model for Type 2 Diabetes Mellitus.</a> Journal of diabetes research. 2016, 2902351(2016).</li>
<li>Asha, G. V., Raja Gopal Reddy, M., Mahesh, M., Vajreswari, A., Jeyakumar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mice+are+susceptible+to+high+fat+diet-induced+hyperglycaemia+and+display+increased+circulatory+retinol+binding+protein+4+%28RBP4%29+levels+and+its+expression+in+visceral+adipose+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+physiology+and+biochemistry%22%5BJournal%5D)">Male mice are susceptible to high fat diet-induced hyperglycaemia and display increased circulatory retinol binding protein 4 (RBP4) levels and its expression in visceral adipose depots.</a> Archives of physiology and biochemistry. 122, 19-26 (2016).</li>
<li>Jovicic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Immunometabolic+Phenotype+in+Th1+and+Th2+Dominant+Mouse+Strains+in+Response+to+High-Fat+Feeding%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Differential Immunometabolic Phenotype in Th1 and Th2 Dominant Mouse Strains in Response to High-Fat Feeding.</a> PLoS One. 10, e0134089(2015).</li>
<li>Fontaine, D. A., Davis, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attention+to+Background+Strain+Is+Essential+for+Metabolic+Research%3A+C57BL%2F6+and+the+International+Knockout+Mouse+Consortium%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Attention to Background Strain Is Essential for Metabolic Research: C57BL/6 and the International Knockout Mouse Consortium.</a> Diabetes. 65, 25-33 (2016).</li>
<li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo%3A+advantages%2C+limitations%2C+and+appropriate+usage%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, E15-E26 (2008).</li>
<li>Heijboer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sixteen+hours+of+fasting+differentially+affects+hepatic+and+muscle+insulin+sensitivity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+lipid+research%22%5BJournal%5D)">Sixteen hours of fasting differentially affects hepatic and muscle insulin sensitivity in mice.</a> Journal of lipid research. 46, 582-588 (2005).</li>
<li>Heikkinen, S., Argmann, C. A., Champy, M. F., Auwerx, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18265403">Evaluation of glucose homeostasis.</a> Current protocols in molecular biology. Chapter 29, Unit 29B.23 (2007).</li>
<li>McGuinness, O. P., Ayala, J. E., Laughlin, M. R., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+experiment+in+centralized+mouse+phenotyping%3A+the+Vanderbilt+experience+and+recommendations+for+evaluating+glucose+homeostasis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">NIH experiment in centralized mouse phenotyping: the Vanderbilt experience and recommendations for evaluating glucose homeostasis in the mouse.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E849-E855 (2009).</li>
<li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li>
<li>Lodhi, I. J., Semenkovich, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+we+should+put+clothes+on+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Why we should put clothes on mice.</a> Cell Metab. 9, 111-112 (2009).</li>
<li>Swoap, S. J., Gutilla, M. J., Liles, L. C., Smith, R. O., Weinshenker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+full+expression+of+fasting-induced+torpor+requires+beta+3-adrenergic+receptor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The full expression of fasting-induced torpor requires beta 3-adrenergic receptor signaling.</a> J Neurosci. 26, 241-245 (2006).</li>
<li>Geiser, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+rate+and+body+temperature+reduction+during+hibernation+and+daily+torpor%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Metabolic rate and body temperature reduction during hibernation and daily torpor.</a> Annu Rev Physiol. 66, 239-274 (2004).</li>
<li>Mead, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/13768766">Mechanical properties of lungs.</a> Physiological reviews. 41, 281-330 (1961).</li>
<li>Lundblad, L. K., Irvin, C. G., Adler, A., Bates, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reevaluation+of+the+validity+of+unrestrained+plethysmography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">A reevaluation of the validity of unrestrained plethysmography in mice.</a> J Appl Physiol. 93, 1198-1207 (2002).</li>
<li>Lundblad, L. K., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17906089">Penh is not a measure of airway resistance!</a> Eur Respir J. 30, 805(2007).</li>
<li>Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unrestrained+plethysmography+is+an+unreliable+measure+of+airway+responsiveness+in+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Unrestrained plethysmography is an unreliable measure of airway responsiveness in BALB/c and C57BL/6 mice.</a> J Appl Physiol. 97, 286-292 (2004).</li>
<li>Fairchild, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+respiratory+volume+for+virus+retention+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+microbiology%22%5BJournal%5D)">Measurement of respiratory volume for virus retention studies in mice.</a> Applied microbiology. 24, 812-818 (1972).</li>
<li>Brown, R. H., Wagner, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+bronchoprotection+by+anesthetic+induction+agents%3A+propofol+versus+ketamine%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of bronchoprotection by anesthetic induction agents: propofol versus ketamine.</a> Anesthesiology. 90, 822-828 (1999).</li>
<li>Goyal, S., Agrawal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine+in+status+asthmaticus%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+journal+of+critical+care+medicine%3A+peer-reviewed%2C+official+publication+of+Indian+Society+of+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Ketamine in status asthmaticus: A review.</a> Indian journal of critical care medicine: peer-reviewed, official publication of Indian Society of Critical Care Medicine. 17, 154-161 (2013).</li>
<li>Doi, M., Ikeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airway+irritation+produced+by+volatile+anaesthetics+during+brief+inhalation%3A+comparison+of+halothane%2C+enflurane%2C+isoflurane+and+sevoflurane%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+journal+of+anaesthesia+%3D+Journal+canadien+d%27anesthesie%22%5BJournal%5D)">Airway irritation produced by volatile anaesthetics during brief inhalation: comparison of halothane, enflurane, isoflurane and sevoflurane.</a> Canadian journal of anaesthesia = Journal canadien d'anesthesie. 40, 122-126 (1993).</li>
<li>Braber, S., Verheijden, K. A., Henricks, P. A., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+fixation+methods+on+lung+morphology+in+a+murine+model+of+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 299, L843-L851 (2010).</li>
<li>Weibel, E. R., Limacher, W., Bachofen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopy+of+rapidly+frozen+lungs%3A+evaluation+on+the+basis+of+standard+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%3A+respiratory%2C+environmental+and+exercise+physiology%22%5BJournal%5D)">Electron microscopy of rapidly frozen lungs: evaluation on the basis of standard criteria.</a> Journal of applied physiology: respiratory, environmental and exercise physiology. 53, 516-527 (1982).</li>
<li>Rolls, G. <a target="_blank" href="http://www.leicabiosystems.com/pathologyleaders/fixation-and-fixatives-1-the-process-of-fixation-and-the-nature-of-fixatives/">Process of Fixation and the Nature of Fixatives</a>. , (2017).</li>
<li>Winsor, L. Tissue processing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWinsor%2C+L+%22Laboratory+histopathology%22">Laboratory histopathology</a>. Woods, A., Ellis, R. , 4.2-1-4.2-39 (1994).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Histochemistry%2C+theoretical+and+applied%22">Histochemistry, theoretical and applied</a>. Pearse, A. , Churchill Livingstone. London. (1980).</li>
<li>Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+basis+of+alveolar-capillary+gas+exchange%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+reviews%22%5BJournal%5D)">Morphological basis of alveolar-capillary gas exchange.</a> Physiological reviews. 53, 419-495 (1973).</li>
<li>Bur, S., Bachofen, H., Gehr, P., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+fixation+by+airway+instillation%3A+effects+on+capillary+hematocrit%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+lung+research%22%5BJournal%5D)">Lung fixation by airway instillation: effects on capillary hematocrit.</a> Experimental lung research. 9, 57-66 (1985).</li>
<li>Bachofen, H., Ammann, A., Wangensteen, D., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+of+lungs+for+structure-function+analysis%3A+credits+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%3A+respiratory%2C+environmental+and+exercise+physiology%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation of lungs for structure-function analysis: credits and limitations.</a> Journal of applied physiology: respiratory, environmental and exercise physiology. 53, 528-533 (1982).</li>
<li>Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+routines+cause+animal+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Contemporary+topics+in+laboratory+animal+science%22%5BJournal%5D)">Laboratory routines cause animal stress.</a> Contemporary topics in laboratory animal science. 43, 42-51 (2004).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Este relatório fornece três protocolos para três diferentes métodos analisar o impacto da obesidade no metabolismo da glicose e resultados pulmonares. Primeiro, o teste de tolerância à glicose oferece a oportunidade de analisar a absorção de glicose intracelular e pode ser indicativo de resistência à insulina. Em segundo lugar, pletismografia de corpo inteiro é uma técnica para medir a função pulmonar e é assim útil para testar a eficácia de novos tratamentos. Em terceiro lugar, um protocolo padronizado de fixação é esse...

De acordo com a Saúde Organização Mundial (OMS) em 2008, mais de 1,4 bilhões de adultos, com idades entre 20 e mais velhos, estavam acima do peso com um índice de massa corporal (IMC) maior ou igual a 25; Além disso, mais 200 milhões de homens e mulheres de quase 300 milhões eram obesos (BMI≥30)1. Obesidade e síndrome metabólica são importantes fatores de risco para uma infinidade de doenças. Enquanto a obesidade e o concomitante desenvolvimento aumentado de tecido adiposo branco massa tem sido intimamente associada ao tipo 2 diabetes2,3, doenças cardio-vasculares, incluindo doença coronariana (DAC), insuficiência cardíaca (HF), fibrilação atrial4 e osteoartrite5, seus papéis funcionais na patogênese de doenças respiratórias permanecem mal compreendidos. No entanto, estudos epidemiológicos têm demonstrado que a obesidade está fortemente associada com doenças respiratórias crônicas, incluindo esforço dispneia, síndrome de apneia obstrutiva do sono (SAOS), obesidade hipoventilação síndrome (SST), crônica doença pulmonar obstrutiva (DPOC), embolia pulmonar, pneumonia por aspiração e asma brônquica6,7,8,9. Potenciais mecanismos de ligação entre obesidade e metabolismo perturbado, por exemplo, resistência à insulina e diabetes tipo II, para a patogênese da doença de pulmão crônica não só compreendem as consequências físicas e mecânicas de peso ganho na ventilação mas também induzi a um estado inflamatório subagudo crônica10,11. O aumento da obesidade e doenças do pulmão durante a última década, juntamente com a falta de estratégias preventivas eficazes e abordagens terapêuticas, destaca a necessidade de investigar os mecanismos moleculares para definir novas vias para gerenciar o pulmão obesidade doenças.
Aqui, descrevemos três testes padrão, que são princípios importantes para investigar a obesidade e o seu impacto na estrutura do pulmão e função em modelos do rato: glicose (1) intraperitoneal tolerância (ipGTT) (2) medição da resistência das vias aéreas (Res) e respiratória conformidade de sistema (Cdyn); e (3) preparação e fixação do pulmão para posterior avaliação histológica quantitativa. O ipGTT é um teste de rastreio robusto para a absorção de glicose medida e, portanto, o efeito da obesidade no metabolismo. A simplicidade do método permite boa padronização e, portanto, a comparabilidade dos resultados entre os laboratórios. Métodos mais sofisticados, tais como braçadeiras hiperglicêmicos ou estudos sobre ilhotas isoladas, podem ser usados para análise detalhada do fenótipo metabólico12. Aqui nós avaliar a tolerância à glicose para definir um estado de obesidade associada de desordem metabólica e sistêmica como base para estudos adicionais em um resultado pulmonar. Para avaliar o efeito da obesidade e doença metabólica na função pulmonar, medimos a resistência das vias aéreas (Res) e conformidade do sistema respiratório (Cdyn). Para caracterizar a doença pulmonar, desenfreados, bem como comedidos métodos para avaliação da função pulmonar estão disponíveis. Pletismografia desenfreada em movimentando-se livremente animais imita um estado natural, refletindo os padrões de respiração; em contraste, métodos invasivos, tais como a medição de impedância de entrada do Res e cDyn em ratos anestesiados profundamente para avaliar a mecânica pulmonar dinâmica, são mais precisos13. Desde que as condições respiratórias crônicas são refletidas por alterações histológicas do tecido pulmonar, fixação adequada do pulmão, para posterior análise é iminente. A escolha do método de preparação e fixação de tecidos varia de acordo com o compartimento do pulmão que será estudado, por exemplo, realização de vias aéreas ou de parênquima pulmonar14. Aqui, descrevemos um método que permite a avaliação qualitativa e quantitativa das vias aéreas conduzindo para estudar o efeito da obesidade sobre o desenvolvimento de asma.

<table><tbody><tr><td>GlucoMen LX</td><td>A.Menarini diagnostics, Firneze, Itália</td><td>38969</td><td>medidor de glicose no sangue</td></tr><tr><td>GlucoMen LX Sensor</td><td>A.Menarini diagnostics, Firneze, Itália</td><td>39765</td><td>Tiras de teste</td></tr><tr><td>Glicose 20%</td><td>B. Braun, Melsung, Alemanha</td><td>2356746</td><td></td></tr><tr><td>FinePointe Software</td><td>DSI, MC s&acute; Hertogenbosch, Holanda</td><td>601-1831-002</td><td></td></tr><tr><td>Mesa de Mouse de Local Único FinePointe RC</td><td>DSI, MC s&acute; Hertogenbosch, Holanda</td><td>601-1831-001</td><td></td></tr><tr><td>Controlador FPRC</td><td>DSI, MC s&acute; Hertogenbosch, Holanda</td><td>601-1075-001</td><td></td></tr><tr><td>FPRC Bloco de Aerossol</td><td>DSI, MC s&acute; Hertogenbosch, Holanda</td><td>601-1106-001</td><td></td></tr><tr><td>Cabeça de neb Aerogen-5.2-4um</td><td>DSI, MC s&acute; Hertogenbosch, Holanda</td><td>601-2306-001</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>FST, Colúmbia Britânica, Canadá</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura sem corte</td><td>FST, Colúmbia Britânica, Canadá</td><td>14105-12</td><td></td></tr><tr><td>Microtesoura</td><td>FST, Colúmbia Britânica, Canadá</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Perma-Hand 4-0</td><td>Ethicon, Porto Rico, EUA</td><td>736H</td><td>Sutura cirúrgica</td></tr><tr><td>Roti-Histofix 4%</td><td>Roth</td><td>P087.1</td><td>4% Paraformaldeído</td></tr><tr><td>Ketaset</td><td>Zoetis, Berlim, Alemanha</td><td>10013389</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina Rompun 2%</td><td>Bayer, Leverkusen, Alemanha</td><td>770081</td><td>Xilazina</td></tr></tbody></table>

teste de tolerância à glicose intraperitoneal, medição da função pulmonar e a fixação do pulmão para estudar o impacto da obesidade e metabolismo prejudicado em resultados pulmonares

Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes

Obesidade e distúrbios respiratórios são problemas de saúde. A obesidade está se tornando uma epidemia emergente com um número esperado de indivíduos obesos mais 1 bilhão em todo o mundo em 2030, representando assim um peso crescente socioeconômico. Simultaneamente, comorbidades relacionadas à obesidade, incluindo diabetes, bem como o coração e doenças pulmonares crônicas, estão continuamente a aumentar. Embora a obesidade tem sido associada com aumento do risco de exacerbações da asma, agravamento dos sintomas respiratórios e controle pobre, o papel funcional de obesidade e metabolismo perturbado na patogênese da doença de pulmão crônica é muitas vezes subestimado, e mecanismos moleculares subjacentes permanecem indescritíveis. Este artigo tem como objetivo apresentar métodos para avaliar o efeito da obesidade no metabolismo, bem como a estrutura do pulmão e função. Aqui, descrevemos três técnicas para estudos de ratos: (1) avaliação de tolerância de glicose intraperitoneal (ipGTT) para analisar o efeito da obesidade no metabolismo da glicose; (2) medição da resistência das vias aéreas (Res) e conformidade do sistema respiratório (Cdyn) para analisar o efeito da obesidade sobre a função pulmonar; e (3) preparação e fixação do pulmão para posterior avaliação histológica quantitativa. Doenças pulmonares relacionadas com a obesidade são provavelmente multifatoriais, decorrentes da sistêmica desregulação metabólica e inflamatória que potencialmente negativamente influenciam a função pulmonar e a resposta à terapia. Portanto, uma metodologia padronizada para estudar os mecanismos moleculares e o efeito de tratamentos romance é essencial.

Resultados representativos de teste de tolerância à glicose intraperitoneal (ipGTT) (Figura 4), produtos de imagens de teste (Figura 5) e representante de função pulmonar ilustrando a hematoxilina e eosina manchado pulmões (Figura 6).
O ipGTT foi realizado em ratos obesos (azuis) depois de 7 semanas de alta--dieta rica em gordura (HFD). Pad...

A incidência da obesidade está aumentando e aumenta o risco de doenças pulmonares crônicas. Estabelecer os mecanismos subjacentes e estratégias preventivas, animal bem definido modelos são necessários. Aqui, nós fornecemos três métodos (teste de tolerância à glicose, pletismografia de corpo e fixação do pulmão) para estudar o efeito da obesidade sobre os resultados pulmonares em camundongos.

Teste de tolerância à glicose intraperitoneal, medição da função pulmonar e a fixação do pulmão para estudar o impacto da obesidade e metabolismo prejudicado em resultados pulmonares

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese ...

O objetivo geral dos três métodos a seguir é estudar o impacto da obesidade e distúrbios metabólicos na estrutura e função pulmonar. Esses métodos podem ajudar a responder a questões-chave no campo da pesquisa respiratória sobre o impacto dos distúrbios metabólicos na estrutura e função pulmonar. A vantagem dessas técnicas é que elas podem ser combinadas para avaliar o papel funcional do metabolismo na patogênese de doenças pulmonares crônicas e testar diferentes abordagens terapêuticas.As implicações dessas técnicas vão além da fenotipagem para o que está elucidando o papel funcional específico dos alvos metabólicos na patogênese das doenças pulmonares. Esses métodos também podem ser aplicados ao estudo da estrutura e função em animais saudáveis com modificações genéticas, mas também em modelos animais de DPOC e asma. Geralmente, os indivíduos novos nesses métodos terão dificuldades, pois a inserção do tubo traqueal, a insuflação do pulmão e a administração da anestesia profunda, todos eles requerem experiência e treinamento.Tivemos a ideia desses métodos pela primeira vez quando descobrimos que a obesidade de início precoce em camundongos, mas também em humanos, estava intimamente ligada ao metabolismo de impacto e a doenças pulmonares crônicas além da infância. Para medir a tolerância à glicose intraperitoneal, prenda suavemente um camundongo adulto em jejum de 12 horas pela cauda e use uma tesoura estéril para incisar a ponta da cauda. Aplique imediatamente uma gota de sangue de fluxo livre na tira de teste do medidor de glicose no sangue para medir o nível de glicose no sangue em jejum.O resultado do teste aparecerá na tela do glicosímetro após quatro segundos. Depois de medir a glicose para cada animal, rotule-os individualmente com marcadores coloridos e pese os animais. Em seguida, use uma agulha de calibre 27 presa a uma seringa de um mililitro para administrar 100 microlitros de glicose por tonelada de peso corporal a cada animal por meio de injeção intraperitoneal e meça os níveis de glicose no sangue 15, 30, 60 e 120 minutos depois com novas tiras de teste, conforme demonstrado.Para avaliar a função pulmonar, coloque um camundongo adulto em decúbito dorsal em uma almofada e aplique pomada nos olhos do animal. Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé, molhe o pelo na região da tireoide com etanol a 70% e use uma pinça para levantar a pele na linha média entre a incisura jugular no esterno e a sínfise do tubérculo do mento. Usando uma tesoura romba, faça cuidadosamente uma incisão cutânea de um centímetro na pele em tenda para visualizar o tecido adiposo subcutâneo subjacente e a glândula tireoide e expor a traqueia com uma separação cuidadosa de ambos os lobos tireoidianos no istmo e dissecção dos músculos esternotireóideo e esternotireóideo.Usando uma pinça afiada, passe uma sutura cirúrgica trançada 4-0 entre a traqueia e o esôfago e faça uma incisão cuidadosa na traqueia, feche a laringe entre as cartilagens traqueais com uma microtesoura. Intubar com um tubo traqueal prendendo o tubo com uma sutura cirúrgica e mover o animal para o leito aquecido de uma câmara corporal. Conecte o tubo traqueal à placa frontal e ligue o ventilador.Confirme o movimento do tórax simultaneamente com a frequência de ventilação para confirmar o posicionamento adequado do tubo traqueal e observe o sinal de pressão na tela do computador. Para controlar as mudanças na pressão transpulmonar durante a ventilação, insira um tubo esofágico no nível dos pulmões observando a tela para facilitar a colocação do tubo onde a deflexão máxima da pressão e os artefatos cardíacos mínimos possam ser observados. Inicie a aquisição de dados de acordo com as instruções do fabricante e aplique 10 microlitros de PBS no nebulizador.Inicie a nebulização após cinco minutos de aclamação, seguida por uma fase de resposta de três minutos, durante a qual a resistência das vias aéreas e a complacência do sistema respiratório são medidas. Deixe o animal se recuperar por três minutos antes de iniciar a próxima nebulização e siga as instruções do software para aplicação gradual de concentrações crescentes de 10 microlitros de metacolina no ventilador. Para análise histomorfométrica quantitativa do tecido pulmonar, use uma tesoura romba para fazer uma pequena incisão no diafragma de um camundongo adulto e use uma tesoura curva romba para fazer uma incisão periesternal ao longo de todo o comprimento da caixa torácica para abrir suavemente o tórax.Levante a caixa torácica para expor a cavidade pleural e remova o timo. Após a remoção do coração, use uma pinça afiada para preparar e expor a traqueia, a fim de passar uma sutura cirúrgica trançada 4-0 entre a traqueia e o esôfago, seguida de uma incisão cuidadosa da traqueia próxima à laringe entre as cartilagens traqueais. Intubar com uma cânula intravenosa de calibre 26 e usar um agente fixador para inflar os pulmões por fixação de pressão a uma pressão constante de 20 centímetros de água.Após 30 minutos à temperatura ambiente, ligue a traqueia e remova a cânula ao mesmo tempo. Em seguida, excise cuidadosamente os pulmões sem danificar o tecido e armazene os pulmões em agente fixador fresco a quatro graus Celsius durante a noite. Camundongos obesos demonstram um aumento nos níveis séricos de glicose 15 e 30 minutos após a injeção intraperitoneal de glicose, indicando uma captação celular prejudicada de glicose em comparação com camundongos alimentados com dieta padrão.A análise invasiva da função pulmonar mostra um aumento de até 1,5 vezes na resistência das vias aéreas em camundongos obesos alimentados com dieta rica em gordura após estimulação com metacolina em comparação com animais de controle. A coloração de hematoxilina e eosina de cortes de parênquima pulmonar após instalação intratraqueal revela múltiplas áreas não infladas, septos alveolares espessos e alvéolos de formato poligonal nos pulmões instilados com pouca pressão. Em contraste, muita pressão de instilação leva a áreas superinfladas com septos alveolares destruídos.A aplicação da quantidade adequada de pressão durante a fixação pulmonar, no entanto, leva a um pulmão completamente inflado com alvéolos redondos. Uma vez dominados, os testes de tolerância à glicose intraperitoneal podem ser concluídos em duas horas e meia. Os testes de função pulmonar podem ser concluídos em uma hora e a insuflação pulmonar pode ser concluída em menos de uma hora.Ao tentar este procedimento, é importante lembrar que adaptar os camundongos, treinar o investigador e trabalhar em um ambiente silencioso e com estresse reduzido são recomendados para a aquisição ideal de dados. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores nas áreas de metabolismo e doenças respiratórias explorarem os mecanismos envolvidos e o potencial das estratégias de tratamento de doenças pulmonares crônicas usando modelos de pequenos animais. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como investigar o impacto da obesidade e distúrbios metabólicos na estrutura e função pulmonar.Não se esqueça de que trabalhar com animais ou instrumentos cirúrgicos pode causar lesões ou reações cutâneas e que precauções como usar o equipamento de proteção individual adequado devem sempre ser tomadas durante a realização desses procedimentos.

intraperitoneal-glucose-tolerance-test-measurement-lung-function

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo apresenta como realizar um teste oral de tolerância à glicose em um camundongo de laboratório.

Teste oral de tolerância à glicose (OGTT): medindo o metabolismo da glicose em camundongos

O objetivo deste protocolo é o de apresentar um método padrão para executar testes de tolerância à glicose intravenosa (IVGTTs) para avaliar o controle glicêmico em primatas não humanos e avaliar o seu estado metabólico do saudável dismetabólica.

Caracterização de Metabolic Estado em não-humanos Primatas com o Teste de Tolerância à glicose intravenosa

Este estudo descreve um protocolo que usa 18imagens de F-FDG e tomografia por emissão de pósitrons/tomografia computadorizada (PET/CT), juntamente com modelagem cinética, para quantificar a captação in vivo e em tempo real de 18F-FDG nos tecidos.

Determinando Glucose Metabolismo Kinetics Usando<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG Micro-PET / CT

A área de superfície pulmonar interna (ISA) é um critério crítico para avaliar a morfologia pulmonar e a fisiologia em doenças pulmonares e regeneração alveolar induzida por lesão. Descrevemos aqui um método padronizado que pode minimizar o viés de medição para ISA tanto na pneumonectomia pulmonar quanto nos modelos de mouse de implante de prótese.

Um Método Padronizado para Medição da Superfície de Pulmão Interna via Neumonectomia de Mouse e Implante de Prótese

O atual artigo descreve a geração e caracterização metabólica de ratos alimentados com dieta de alto teor de gordura como um modelo de obesidade e resistência à insulina induzida pela dieta. Possui ainda mais protocolos detalhados para executar o teste de tolerância à glicose oral e o teste de tolerância à insulina, monitoramento de alterações de todo o organismo de glicose metabolismo na vivo.

Estudo do metabolismo in vivo da glicose em camundongos alimentados com dieta de alto teor em gordura usando o teste oral de tolerância à glicose (OGTT) e o teste de tolerância à insulina (ITT)

Este protocolo descreve o uso de um analisador de composição do corpo e sistema de monitoramento animal metabólico para caracterizar a composição corporal e parâmetros metabólicos em camundongos. Um modelo de obesidade induzido pelo alto teor de gordura alimentar é usado como um exemplo para a aplicação dessas técnicas.

Composição corporal e análise de enjaulamento metabólico em ratos de alta gordura Fed

O esgotamento extracelular da glicose fluorescente se correlaciona com a absorção de glicose e pode ser usado para triagem de alto rendimento da absorção de glicose em órgãos excisados e culturas celulares.

Esgotamento da glicose extracelular como medida indireta de captação de glicose em células e tecidos Ex Vivo

Este protocolo apresenta um método para avaliar a reserva alvéolo-capilar pulmonar medida pela medida combinada de respiração única da capacidade de difusão de monóxido de carbono (D, L,CO) e óxido nítrico (D, L,NO) durante o exercício. Pressupostos e recomendações para o uso da técnica durante o exercício formam a base deste artigo.

Medida da Capacidade de Difusão Pulmonar de Gases de Teste Duplo durante o Exercício em Humanos Usando o Método de Respiração Única

A Tomografia de Impedância Elétrica é uma ferramenta de monitoramento de ventilação pulmonar em tempo real, não invasiva e livre de radiação. Ao medir as mudanças de impedância no tórax, ele pode visualizar a distribuição do ar respiração a respiração. Inicialmente destinada ao monitoramento da ventilação, a tomografia por impedância elétrica também pode medir a perfusão por meio de injeção intravenosa de solução salina.

Monitorização da Função Pulmonar com Tomografia por Impedância Elétrica na Unidade de Terapia Intensiva

Testes de susceptibilidade antimicrobiana Atualmente, o diagnóstico baseia-se no crescimento planctônico dos isolados em ricas em nutrientes, condições aeróbicas. Aqui, nós utilizamos um meio de escarro alternativa artificial para estudar susceptibilidade antimicrobiana de biofilmes de Pseudomonas aeruginosa em ambas as condições de aerobiose e microaerofilia mais representativas do pulmão da fibrose cística.

Uso de meio de escarro Artificial para testar a eficácia antibiótica contra<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Em condições mais relevantes para o Pulmão Fibrose Cística

Aprenda a realizar teste de tolerância à glicose, pletismografia e fixação pulmonar para estudar o impacto da obesidade na função respiratória em modelos animais. Essas técnicas combinadas permitem investigar doenças pulmonares crônicas.

Teste de tolerância à glicose intraperitoneal, medição da função pulmonar e a fixação do pulmão para estudar o impacto da obesidade e metabolismo prejudicado em resultados pulmonares (Vídeo) | JoVE Journal

Teste de tolerância à glicose intraperitoneal, medição da função pulmonar e a fixação do pulmão para estudar o impacto da obesidade e metabolismo prejudicado em resultados pulmonares

Explorar mais vídeos