Name: Utilizando o ZIF modificados para avaliar resultados de memória funcional após parada cardíaca (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Aprenda a utilizar o labirinto T modificado para avaliar memória funcional após isquemia cerebral por parada cardíaca em roedores. Este método simples permite medir déficits de memória de curto prazo de forma confiável.

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Este trabalho foi apoiado pelo nacional institutos de saúde nacionais Instituto de doenças neurológicas e AVC conceder 1R01NS096225-01A1, a American Heart Association concede AHA-13SDG1395001413, 17GRNT33660336-AHA, AHA-17POST33660174, o Louisiana Grant de Universidade de estado no Conselho de pesquisa de ajuda, Malcolm Feist, The Cardiovascular Research Fellowship e o Instituto de cérebro Evelyn F. McKnight.

Todos os procedimentos experimentais foram conduzidos em conformidade com as diretrizes do institutos nacionais da saúde e aprovados pelo Comitê de uso (Shreveport-LSU centro de Ciências da saúde) e cuidado institucional do Animal para o uso de masculino (de ratos Sprague Dawley 300-350 g, 9-10 semanas de idade). Ratos foram jejuou durante a noite antes da cirurgia ACA.
1. configuração e projeto do aparelho ZIF
Nota: Base para o design de ZIF do diácono e dos Rawlins 2006 modelo31.
<ol><li>Projetar a estrutura 3D do labirinto utilizando SketchUp32. Para criar uma estrutura 3D da ZIF, construa o braço de iniciar com um comprimento exterior de 200 mm, largura de 165 mm e altura de 148 mm para caber dentro das dimensões de impressão da impressora 3D. Use uma espessura de parede de 5,5 mm e espessura de 8 mm piso.</li>
	<li>Imprimir usando uma impressora 3D labirinto (ver tabela de materiais)32. Se uma impressora 3D não está disponível no laboratório, use outros materiais como madeira, painel de fibras de média densidade ou um plástico (ou seja, policloreto de vinila), que pode ser comprado em lojas da melhoria home.<ol>
<li>Devido a restrições de altura na área de impressão, construir as paredes do labirinto em duas impressões 3D separados e unir mediante Assembleia de labirinto (ou seja, uma segunda altura de parede foi adicionada à seção de labirinto para aumentar a altura de 140 mm, para uma altura total da parede de 280 mm). Cada base de impressão 3D separado continha um "T" em forma de cruzeta, onde uma seção conectados para o próximo.</li>
		<li>Na junção do braço iniciar com os braços de objetivo, crie uma ampla seção de 165 mm para juntar-se a largura do braço iniciar com que armas da gol. Construir braços objetivo usando um método de projeto similar como o braço de início; no entanto, reduza a largura do braço para 100 mm por design de diácono e Rawlins.</li>
		<li>Por favor, veja a Figura 1 para esquema/dimensões detalhadas da ZIF.</li>
		<li>Inclua uma partição central no design na junção do braço iniciar e braços de objetivo. Estenda esta partição da parede traseira da ZIF e 200 mm para o braço de início para dividir os braços de objetivo. Esta partição estendida também a altura do labirinto (Figura 1).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. no ataque cardíaco (ACA)
<ol><li>Autoclave instrumentos cirúrgicos (121 ° C por 15 min) antes do início da cirurgia. Desinfecte a mesa cirúrgica por etanol a 70% por 15 min. barbear os pelos no local da cirurgia. Aplica uma solução de betadine para superfícies para operação cirúrgica de pele.</li>
	<li>Anesthetization
	<ol>
<li>ANESTHETIZE ratos com 4% isoflurano e 30:70 mistura de O2 e N2O (300 mL/min O2 e 700 mL/min N2O) através de máscara.</li>
		<li>Dar ratos intubação endotraqueal para ventilação mecânica (após a intubação, ratos foram ligados a um ventilador).</li>
		<li>Manter a anestesia, diminuindo o isoflurano de 4% para 2%, com uma mistura de 30:70 de O2 e N2O. uso o método pitada-resposta para determinar a profundidade da anestesia.</li>
		<li>Aplica a pomada sobre os olhos para evitar ressecamento enquanto sob anestesia. Regulae a temperatura do corpo por um roedor Aquecimento pad com uma sonda anal como uma referência de temperatura.</li>
	</ol></li>
	<li>Intubação endotraqueal
	<ol>
<li>Coloca o rato na câmara de indução. Anestesiar os ratos com a mistura de isoflurano e 30:70 de 4% de O2 e N2O.</li>
		<li>Remova o rato da câmara de indução. Animal anestesiado na posição supina, com a cara do rato para a máscara de anestesia local.</li>
		<li>Mova a língua para a esquerda ou direita do animal com o polegar esquerdo e dedo indicador.</li>
		<li>Deslize um cateter flexível intravenosa 14 mm (49 mm de comprimento) sobre uma agulha de ponta romba 17 calibre pipetagem (93 mm de comprimento com ângulo de 10 graus na ponta da agulha). Insira a agulha de pipetagem de calibre 17 ponta romba na traqueia.</li>
		<li>Suavemente, puxe a agulha de calibre 17 pipetagem da traqueia. Conecte o cateter de calibre 14-ao ventilador. Ajuste o volume de curso ventilador para 0,67 mL/100 g e frequência respiratória de 60 respirações por minuto.</li>
		<li>Manter a cabeça e corpo temperatura a 37 ° C durante todo o procedimento por um roedor Aquecimento pad com sonda anal como uma referência de temperatura.</li>
	</ol></li>
	<li>Cateterismo arterial e venoso femoral
	<ol>
<li>Raspar o cabelo perto da área inguinal (dois lados) e aplicar betadine para superfícies para operação cirúrgica de pele.</li>
		<li>Colocado o rato na posição supina. Fazer uma incisão (10 mm) na área inguinal com tesoura cirúrgica.</li>
		<li>Separe o tecido conjuntivo por pinças de ponta romba até o ligamento inguinal é exposto. Use uma pinça hemostática para agarrar o ligamento inguinal. A artéria e veia femoral estão por baixo do ligamento inguinal.</li>
		<li>Use pinça ponta romba para separar o tecido conjuntivo até a artéria e veia femoral são expostos.</li>
		<li>Suavemente separa o nervo femoral, que corre ao longo da artéria femoral através de pinças de ponta fina. Cuidadosamente, separar a artéria femoral e veia como uma unidade através de pinças de ponta fina.</li>
		<li>Use pinça de ponta fina para separar a artéria femoral a veia.</li>
		<li>Coloque 2 pedaços de sutura seda 5-0 (uma em direção a perna e o outro para o corpo) sob a veia.</li>
		<li>Faça um nó frouxo no lado perto do corpo. Use uma pinça hemostática para segurar e puxar a sutura na medida do possível, em direção os lados opostos do corpo.</li>
		<li>Faça um nó frouxo no lado perto da perna. Segure e puxe a sutura em direção a perna através de uma pinça hemostática para permitir que a veia encher com sangue.</li>
		<li>Faça uma pequena incisão na veia (cerca de 0,1 mm) por microdissecando a tesoura (em um ângulo de 45°). Absorva o sangue com uma gaze esterilizada.</li>
		<li>Anexe uma seringa de agulha de ponta romba (preenchida com soro fisiológico com heparina 20 de U/mL) para um cateter PE-50. Preencha o PE-50 cateter com soro fisiológico com heparina 20 de U/mL. Corte o cateter PE-50 com uma tesoura de dissecação em um ângulo de 45° para criar um ponto ou extremidade afiada. Use pinça ponta romba para segurar a extremidade do cateter PE-50. Insira cuidadosamente o cateter PE-50 na veia femoral.</li>
		<li>Depois que o cateter está completamente inserido, administre lentamente 0,1 mL de heparina/salina para garantir que não há nenhum vazamento. Amarre firme de sutura (single-nó) para estabilizar o cateter PE-50. Manter o cateter PE-50 injectável contínua intravenosa (IV) de diversas drogas.</li>
		<li>Uso uma seringa de 1 mL, conectada com um 23 gauge adaptador Luer de esboço para administrar o brometo de vecurônio (0,67 mg/kg, administrada a cada 10min) através da veia femoral para imobilizar o rato ao longo do processo.</li>
		<li>Coloque 2 pedaços de sutura seda 5-0 (uma em direção a perna e o outro para o corpo) sob a artéria.</li>
		<li>Faça um nó frouxo no lado perto da perna. Use uma pinça hemostática para segurar e puxar a sutura na medida do possível, em direção a perna.</li>
		<li>Faça um nó frouxo no lado perto do corpo. Segure e puxe os pontos para o corpo através de uma pinça hemostática para permitir que a artéria encher com sangue.</li>
		<li>Faça uma pequena incisão na artéria (cerca de 0,1 mm) por microdissecando a tesoura (em um ângulo de 45°).</li>
		<li>Anexe uma seringa de agulha de ponta romba (preenchida com soro fisiológico com heparina 20 de U/mL) para um cateter PE-50. Preencha o PE-50 cateter com soro fisiológico com heparina 20 de U/mL. Corte o cateter PE-50 com uma tesoura de dissecação em um ângulo de 45 graus para criar um final ponto ou afiado. Use pinça ponta romba para segurar a extremidade do cateter PE-50. Use pinça ponta romba para segurar a extremidade do cateter PE-50. Insira cuidadosamente o cateter PE-50 na artéria femoral.</li>
		<li>Depois que o cateter está completamente inserido, lentamente puxe para trás a seringa para garantir que esse cateter é funcional. Amarre firme de sutura (single-nó) para estabilizar o cateter PE-50. Manter o cateter PE-50 para gravação contínua de gases de pressão e sangue arteriais.</li>
	</ol></li>
	<li>No procedimento de parada cardíaca (ACA)
	<ol>
<li>Ajuste parâmetros fisiológicos (ou seja, pO2, pCO2, pressão arterial e valor de pH), conforme necessário, modulando o volume de curso, O2 ou níveis de N2O. Use faixas fisiológicas normais desses parâmetros: pO2: 100 mmHg, pCO2: 35-40 mmHg, pressão arterial: 100 mmHg e pH: 7.4.</li>
		<li>Uso uma seringa de 1 mL, conectada com um adaptador de esboço 23 calibre Luer para administrar o brometo de vecurônio (0,67 mg/kg, IV) através da veia femoral e esperar por 2 min. Verifique se a pressão arterial está em ou em torno de 100 mmHg antes de executar a ACA.</li>
		<li>Induzi apneia (6 min) desconectando o tubo endotraqueal (cateter 14-guage) do ventilador. Mais bloquear o tubo endotraqueal por uma seringa de 1 mL para garantir a completa do sono. Nota: O tempo-6min asfixia é definido como o período entre a desconexão do ventilador e o início da reanimação. Completa parada cardíaca é definida como uma pressão arterial média inferior a 10 mmHg.</li>
		<li>Durante a última min de apneia, ajustar a frequência respiratória do ventilador a 80 respirações por minuto e aumentar O2 a 2 L/min com 0% N2O. Esta ação vai explodir qualquer restante isoflurano ou N2O restante no ventilador.</li>
		<li>seringa de 1 mL min apneia, a seguir retire o tubo endotraqueal. Re-conecte o tubo endotraqueal ao ventilador.</li>
		<li>Uso uma seringa de 1 mL, conectada com um 23 gauge adaptador Luer de esboço para administrar epinefrina (0,005 mg/kg, IV) através da veia femoral e administrar as compressões manual pelo polegar, dedos indicador e médio no peito do animal em leves movimentos circulares no x e eixo z (200/min) até o retorno da circulação espontânea (pressão arterial média ≥ 50 mmHg)33,34,35.</li>
		<li>Uso de outra seringa de 1 mL, conectada com um 23 gauge adaptador Luer de esboço para administrar bicarbonato de sódio (1 meq/kg, IV) através da veia femoral, imediatamente após o retorno à circulação espontânea (50 mmHg ou superior)33,34, 35 para aliviar a acidose respiratória.</li>
		<li>Sangue de medida gases novamente 10 min após a ressuscitação para determinar o status de ácido-base (pH depois ACA deve ser de cerca de 7,35 a 7,40)</li>
		<li>Use uma pinça hemostática para fixar a artéria e veia femoral. Lenta e suavemente remova cateteres arteriais e venosos, usando pinça de ponta romba. Ligate artéria femoral/veia com uma sutura de seda 5-0 para evitar sangramento. Feche a pele sobrejacente local cirúrgico usando uma sutura de seda 3-0. Use a técnica de sutura interrompida para minimizar as chances da reabertura da ferida.</li>
		<li>Espere até que o rato se respira (geralmente de 30 min a 60 min após a reanimação), desligue o rato do ventilador e remova cuidadosamente o tubo endotraqueal.</li>
		<li>Lugar do rato na incubadora de bebê (27 ° C, 50% de umidade) durante a noite. Coloque os alimentos amolecido (feito por imersão-los na água) e a água para a incubadora do bebê durante a noite.</li>
		<li>Transferir o rato da gaiola individual e devolva o rato ao animal com água e comida normal. Testes de ZIF começam 3 dias depois da ACA.</li>
	</ol></li>
</ol>3. ZIF
<ol><li>
Preparação de animais
	<ol>
<li>O dia antes da cirurgia (farsa ou ACA), lidar com cada rato por 5 min. Nunca elevar ratos da gaiola (480 mm x 250 mm x 200 mm, gaiola plástica transparente) quando manipulação (Figura 2).</li>
		<li>Após manusear o rato, suavemente pegar o rato por sua cauda com uma mão com a outra mão apoiando suas ' pernas. Deixá-los saltar da mão para a gaiola (100 mm de altura), 5 vezes. Separe cada rato em gaiolas individuais, para que eles não vão dominar por comida e/ou luta.</li>
		<li>Três dias depois da farsa ou cirurgia ACA (Figura 2), transferi os ratos com a gaiola em um quarto silencioso e escuro antes do início da primeira corrida. Apenas ligue uma lâmpada de mesa de baixa potência e colocá-lo no canto da sala de testes para manter a iluminação mínima. Permitir que o rato para se adaptar à escuridão por 10 min.</li>
		<li>Execute todas as experiências da tarde para evitar os efeitos da variação diurna no desempenho dos ratos. Não aconselho o operador no qual Souza rato recebido ou cirurgia ACA.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Alternância de espontânea
	<ol>
<li>Espalhe uma camada fina de fundamento (~ 10 mm de espessura) para cobrir todo o piso do labirinto. Então lugar o rato para o braço de começo (parte inferior do "T"), que é o ponto de partida de cada um executar e permitir que cada um rato 3 min para explorar o braço direito ou esquerdo do gol.</li>
		<li>Uma vez que o rato compromete-se a um braço de objetivo específico (todas as quatro patas do rato entraram o braço gol), bloquear a junção em "T" entre o braço de iniciar e o braço de meta adversária (Figura 1) para impedir o rato entre o braço de meta adversária. Deixar o rato no labirinto por 30 segundos, em seguida, pegar o rato e coloque-o de volta à sua jaula por um tempo mínimo (~ 30 segundos). Em seguida, retire a junção em "T" quarteirão a ZIF (125 mm X 230 mm X 65 mm, feito por uma impressora 3D).</li>
		<li>Coloque o rato para o braço do começo e repetir 3.2.2. Alternância é definida como: quando o rato entra o braço oposto em comparação com o anterior executar36. Tem ratos executar 4 corridas por dia da seguinte forma: 1st executar 2nd executar 10-min intervalo executar 3rd 4th executar</li>
		<li>Mude a roupa de cama, durante o intervalo de 10 min e entre animais para eliminar o viés de perfume. Limpe a ZIF com 75% de etanol seguido de água destilada no final de cada dia experimental.</li>
		<li>Repita as etapas 3.2.1. -3.2.4. por mais dois dias (12 corridas no total) como ilustrado na Figura 2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Alternância taxa e lado preferência cálculos da taxa de
	<ol>
<li>Calcular a % de alternância e a % de preferência de lado, onde L: os ratos escolher o braço esquerdo R: os ratos escolher o braço direito Corrigir a escolha: a 2nd executar é diferente do 1st em um determinado conjunto (cada conjunto contém duas corridas) Escolha incorreta: os ratos escolher o mesmo braço semelhante a execução anterior <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56694/56694eq1.jpg"> <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56694/56694eq2.jpg"> Exemplo: Dia 1: L L / L L Dia 2: L L / L R Dia 3: R L / L L Alternância: 2 (escolhas corretas) 6 (total de moda realizada) * 100 = 33,33% Preferência de lado: 10 (L, lado preferencial) 12 (total executado realizado) * 100 = 83.33%</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Cuidados pós-operatórios:
	<ol>
<li>Dar ratos buprenorfina (0,01 mg/kg IP) cada 12h por 2 dias após a cirurgia. Observe os ratos para até 1 h após a parada cardíaca.</li>
		<li>Anexe ratos para o ventilador e a almofada de aquecimento até que recuperou a consciência suficiente para manter a prostração esternal. Para manter a temperatura corporal dos animais após a cirurgia, coloque o rato em uma incubadora de bebê (definir a 27 ° C, 50% de umidade).</li>
		<li>Fornece chow amolecida (feita por imersão em água) para animais para as primeiras 24 horas após a cirurgia. Se os ratos não eram água potável, administrar soro fisiológico bacteriostático (100 mL/kg/dia, I.P.) até que o animal se recupera e é água potável livremente.</li>
		<li>Dê o antibiótico tópico de ratos com alívio da dor (pomada de bacitracina e lidocaína) em todas as feridas. Volte ratos para as instalações de animais depois que eles se recuperar totalmente.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Método de eutanásia
	<ol>
<li>Use o isoflurano 5% e 100% N2O a eutanásia dos animais no final do experimento.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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Os autores não têm nada para divulgar.

Modificações foram feitas no presente estudo em relação ao protocolo de diácono e Rawlins'31. A impressora 3D foi usada para construir a ZIF. A impressão 3D oferece alternativas acessíveis e cost-effective para ZIF comercializado. Para reduzir a ansiedade dos ratos durante o ensaio, a ZIF realizou-se no quarto escuro com iluminação mínima. Uma vez que o rato entrou um dos braços objetivo, bloqueamos suavemente o braço oposto. Isso evita o estresse possível do teste, os possíveis danos à cauda dos ...

De acordo com a American Heart Association (2017), parada cardíaca (CA)-mortalidade induzida ocorre a cada quatro minutos e afeta mais de 400.000 pessoas por ano no Estados Unidos1. É bem documentado que o CA pode causar lesão neuronal do cérebro como resultado de sangue insuficiente perfusão2,3,4. Lesão cerebral induzida por CA ocorre na região CA1 do hipocampo5,6,7, afetando os neurônios que são essenciais para a aprendizagem e memória8,9, sensíveis à isquemia 10,11,12. Além disso, a perda de densidade de espinha dendrítica, sob condições isquêmicas no hipocampo (ou seja, CA1 neurônios), desempenha um papel crítico na memória espacial imparidade13,14,15. Devido a essas alterações patológicas após CA, distúrbios comportamentais tais como: ansiedade, depressão, transtorno de estresse pós-traumático e perda de memória são mais prevalentes. Embora tenha havido avanços na tecnologia médica (ou seja, serviço ambulatorial eficiente) que correlacionam com melhores taxas de sobrevivência de CA, a maioria dos tratamentos neuroprotetor (exceto para hipotermia) falha melhorar os resultados funcionais após CA16 ,17. Sobreviventes de CA normalmente tem uma má qualidade de vida e estão sobrecarregados com incremental medical gastando16.
Avaliações de estado cognitivo para isquemia cerebral através de testes comportamentais são importantes para determinar a eficácia ambas as drogas e, finalmente, desenvolver um ensaio clínico bem sucedido. Na década de 1940, Edward Tolman projetado o primeiro julgamento de comportamento para estudar baseado no hipocampo memória espacial18. Posteriormente, labirintos diferentes (ou seja, o labirinto de água Morris, labirinto radial, T - ou Y-labirinto e labirinto Barnes) foram desenvolvidos para avaliar hippocampal espacial a aprendizagem e a memória em ratos19,20,21,22 ,23. Um do mais amplamente utilizado teste comportamental é o labirinto de água de Morris, que examina a aprendizagem espacial e memória em ratos modelos24. No entanto, o labirinto de água Morris requer o rato para nadar e exercer controle e função motora total. Para experimentos de isquemia, tais como o modelo no cardíaca (ACA, um modelo do rato de CA), canulação da veia/artéria femoral são necessárias para obter a pressão de sangue vital, gases do sangue e introdução de diversas drogas. Desde que a cateterização da veia/artéria femoral pode inibir a mobilidade de perna, tornando a capacidade do rato está a nadar corretamente, o labirinto de água Morris pode não ser o mais adequado testar deficiências cognitivas sob ACA.
O labirinto de Barnes é o outro teste comportamental amplamente utilizado para examinar a aprendizagem espacial e memória em modelos de roedores. O labirinto de Barnes não exige o esforço de função completa motora e controle e, portanto, menos estressante do que o labirinto de água Morris. No passado, realizamos experimentos usando o labirinto Barnes para determinar se as diferenças de aprendizagem funcional/memória ocorrem entre controle ou sham contra ratos induzida por ACA. Os dados obtidos para o labirinto de Barnes não tinha a resolução para testar deficiências cognitivas após leve a moderada ACA, devido ao fato de que o labirinto de Barnes é amplamente utilizado para medir a referência (longo prazo) memória25,26, enquanto Défices neurocognitivos induzida por ACA mais intimamente relacionados com o trabalho (curto prazo) memória27,28,29,30 sugerindo que o labirinto de Barnes é menos viável para avaliar a função de memória em nosso ACA modelo.
Assim, desenvolvemos uma ZIF modificado usando alternância espontânea teste para avaliar a memória (curto prazo) a trabalhar depois da ACA. Grande vantagem do teste alternância espontânea modificados ZIF é sua simplicidade e o mínimo de estresse em ratos em comparação com outros testes comportamentais, devido ao fato de que a ZIF modificado não requer formação prévia de animais, como bem tão pesado computacional análise ou sub-rotinas (ou seja, a imagem latente do rato), conforme exigido pelo labirinto de água de Morris e labirinto de Barnes. Aqui nós mostramos que o teste de alternância espontânea de ZIF modificado é um paradigma de avaliação comportamental ainda altamente eficiente e simples que pode oferecer a resolução suficiente para detectar com precisão e avaliar função hippocampal em doenças que causam perda de memória (ou seja, ACA).

<table><tbody><tr><td>Impressora 3D</td><td>MakerBot</td><td>Replicator</td> Impressora 3D de <td>quinta geração</td></tr><tr><td>Filamento</td><td>Hatchbox</td><td></td><td>PLA, diâmetro do filamento de 1,75 mm</td></tr><tr><td>Etanol puro 200 provas</td><td>Koptec</td><td>V1005SG</td><td></td></tr><tr><td>Sani-Chips</td><td>PJ Murphy-Forest Produtos</td><td></td><td>Tamanho: 8 a 20 mesh; 2,2 pés cúbicos/pacote; sacos autoclaváveis</td></tr><tr><td>Rat</td><td>Charles River Laboratories</td> Brometo de vecurônio <td>Sprague-Dawley</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sun Pharmaceutical</td><td>47335-931-40</td><td>10 mg</td></tr><tr><td>Epinefrina</td><td>Par Pharmaceutical</td><td>42023-103-01</td><td>Solução de cloreto de adrenalina 1 mg/mL, injeção de</td></tr><tr><td>cloridrato de buprenorfina</td> 1:1000 <td>Pfizer</td><td>00409-2012-32</td><td>0,3mg/mL</td></tr><tr><td>SketchUp</td><td>Trimble Inc.</td><td></td><td>Software de modelagem 3D</td></tr><tr><td>VentElite Small Animal Ventilator</td><td>Harvard Apparatus</td><td>55-7040</td><td>Animais furiosos em tamanho de camundongo a porquinho-da-índia (10g a 1kg)</td></tr><tr><td>PowerLab 8/35</td><td>Adinstruments</td><td>PL3508</td><td>8 canais de entrada analógica - 4 dos quais podem ser usados em modo diferencial.</td></tr><tr><td>Bio Amps</td><td>Adinstruments</td><td>FE132</td><td>O Bio Amp é um bioamplificador diferencial de alto desempenho e isolado galvanicamente, otimizado para a medição de uma ampla variedade de sinais biológicos, como gravações de ECG, EMG e EEG.</td></tr><tr><td>Quad Bridge Amp</td><td>Adinstruments</td><td>FE224</td><td>Um amplificador de ponte não isolado de quatro canais projetado para permitir que o PowerLab se conecte à maioria dos transdutores de ponte DC.</td></tr><tr><td>LabChart 8</td><td>Adinstruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ABL80 FLEX CO-OX analisador de gases sanguíneos</td><td>Radiômetro</td><td></td><td>pH / p CO2 / p O2</td></tr><tr><td>SURFLO Teflon I.V. Cateter</td><td>Terumo</td><td>sc-361556</td><td>Use apenas o cateter flexível de parede fina (49 mm de comprimento)</td></tr><tr><td>Pipeta/Agulha de Infusão</td><td>Hamilton</td><td>7748-03</td><td>calibre 17; 93 mm de comprimento; Vaporizador T3 Clássico de ângulo de 10 graus</td></tr><tr><td></td><td>SurgiVet</td><td>VCT302</td><td>Enchimento de funil de isoflurano T3 clássico</td></tr><tr><td>Recipiente de carvão ENVIRO-PURE</td><td>SurgiVet</td><td>32373B10</td><td>Projetado para absorver resíduos de gás anestésico</td></tr><tr><td>O2 medidor de vazão único</td><td>SurgiVet</td><td>32375B1</td><td>0-1000 mL</td></tr><tr><td>N2O Medidor de vazão</td><td>VetEquip</td><td>401721</td><td>0-4LPM</td></tr><tr><td>Adaptador Luer-Stub Intramedic Clay Adams (Estéril)</td><td>Becton Dickinson</td><td>427565</td><td>23 gauge</td></tr><tr><td>Micro Forceps</td><td>Cirúrgico Preto e Preto</td><td>B3FRC-18 RM-8</td><td>7 1/4" (18 cm), 8mm RH, contrapeso com pino guia 2mm, plataforma 6 x .3 mm, curvado.</td></tr><tr><td>Pinça Halstead Mosquito</td><td>Roboz</td><td>RS-7111</td><td>Curva; 5" de comprimento, 1,3 mm de diâmetro da ponta, 2,1 mm de largura da mandíbula</td></tr><tr><td>Pinça Mixter</td><td>Roboz</td><td>RS-7291</td><td>5,25" Curvada Extra Delicada, pontas de 1,1 mm</td></tr><tr><td>Tesoura de Mola Micro Dissecante Castroviejo</td><td>Roboz</td><td>RS-5650</td><td>Reta, Pontas Afiadas; Borda de Corte de 9 mm; Largura da Ponta de 0,15 mm; Tesoura Mayo-Stille de Comprimento Total de 3 1/2"</td></tr><tr><td></td><td>Roboz</td><td>RS-6891</td><td>5.5" Pinça Dumont #5 Redonda Curvada</td></tr><tr><td></td><td>Roboz</td><td>RS-5058</td><td>45 Graus Tamanho da Ponta Dumoxel .10 x .06 mm</td></tr><tr><td>Tesoura Combinada Olsen-Hegar e Suporte de Agulha</td><td>Roboz</td><td>RS-7884</td><td>Ponta Serrilhada Cruzada; Pinça Moloney de 5.5" de Comprimento</td></tr><tr><td></td><td>Roboz</td><td>RS-8254</td><td>Serrilhada; Ligeira curva; 4,5" de comprimento</td></tr></tbody></table>

utilizando o zif modificados para avaliar resultados de memória funcional após parada cardíaca

Utilizing the Modified T-Maze to Assess Functional Memory Outcomes After Cardiac Arrest

Fundo: Avaliação de leve a moderada impairment cognitive em um modelo de isquemia cerebral global (ou seja, parada cardíaca) pode ser difícil devido a pobre locomoção após a cirurgia. Por exemplo, ratos que se submetem a procedimentos cirúrgicos e estão sujeitos ao labirinto de água Morris podem não ser capazes de nadar, anulando, assim, o experimento.
Novo método: Estabelecemos um teste de ZIF modificados comportamental espontânea alternância. A grande vantagem do protocolo modificado ZIF é seu design relativamente simples que é poderoso o suficiente para avaliar a aprendizagem/memória funcional após a isquemia. Além disso, a análise de dados é simples e direta. Usamos a ZIF para determinar défices de aprendizagem/memória dos ratos tanto na presença ou ausência de leve a moderada (6 min) no cardíaca (ACA). Ratos têm uma tendência natural para a exploração e explorarão os braços alternativos na ZIF, Considerando que ratos hippocampal lesionado tendem a adotar um lado-preferência resultando em rácios de diminuição da alternância espontâneo, revelando o hipocampo-relacionados aprendizagem/memória funcional na presença ou ausência de ACA.
Resultados: Grupos ACA têm percentagens mais elevadas de preferência do lado e alternações mais baixas em comparação com o controle.
Comparação com o método existente (s): água a Morris e Barnes labirinto são mais proeminentes para avaliar a função de aprendizagem/memória. No entanto, o labirinto de água de Morris é mais estressante do que outros labirintos. O labirinto de Barnes é amplamente utilizado para medir a memória de referência (longo prazo), enquanto déficits neurocognitivos induzida por ACA são mais proximamente relacionados com memória (curto prazo) a trabalhar.
Conclusões: Nós desenvolvemos uma estratégia simples, mas eficaz para delinear a memória (curto prazo) via a ZIF a trabalhar no nosso modelo de isquemia cerebral global (ACA).

ACA (isquemia cerebral global) causa principalmente trabalhando de28,de déficits de memória (curto prazo)29. Para avaliar a função de aprendizagem e memória após ACA, usamos o teste modificado de alternância espontânea para avaliar o trabalho de memória (curto prazo)30. Os resultados do teste de alternância espontânea sugerem que a taxa de alternância de três dias consecutivos no grupo ACA (26,19 ± 4,96%) f...

Este protocolo descreve o uso de uma ZIF modificado para avaliar aprendizagem funcional/memória em isquemia cerebral induzida por parada cardíaca de asfixia.

Utilizando o ZIF modificados para avaliar resultados de memória funcional após parada cardíaca

Background: Evaluating mild to moderate cognitive impairment in a global cerebral ischemia (i.e. cardiac arrest) model can be difficult due to poor ...

O objetivo geral deste labirinto em T modificado é avaliar o aprendizado funcional e a memória após isquemia cerebral induzida por parada cardíaca. Esses companheiros de equipe modificados podem ajudar a responder à função do hipocampo em doenças que causam déficits de memória de curto prazo, como parada cardíaca. A principal vantagem do labirinto em T modificado é seu design relativamente simples.Isso é poderoso o suficiente para medir a memória de aprendizagem funcional após a isquemia. Além disso, a análise de dados é simples e direta. Como a parada cardíaca por asfixia resulta principalmente em déficits de memória de curto prazo, o labirinto em T modificado também pode ser aplicado a outras doenças do sistema nervoso central, que causam déficits de memória de curto prazo.Como a doença de Alzheimer, a doença de Parkinson e o ataque isquêmico transitório. Após o cateterismo femoral, arterial e venoso, ajuste os parâmetros fisiológicos conforme necessário, modulando o volume sistólico, oxigênio ou nitroso Em seguida, use uma seringa de um mililitro conectada a um adaptador de isca de calibre 23 para administrar brometo de vecurônio pela veia femoral e aguarde dois minutos.Certifique-se de que a pressão arterial esteja em torno de 100 milímetros de mercúrio. Induza a apneia por seis minutos desconectando o tubo endotraqueal do ventilador. Bloqueie ainda mais o tubo endotraqueal por uma seringa de um mililitro para garantir a apneia completa.Durante o último minuto de apneia, ajuste a frequência respiratória do ventilador para 80 respirações por minuto e aumente o oxigênio para dois litros por minuto com zero por cento de óxido nitroso para soprar qualquer isoflurano ou óxido nitroso restante no ventilador. Após os seis minutos de apneia, remova a seringa de um mililitro do tubo endotraqueal. Reconecte o tubo endotraqueal ao ventilador.Em seguida, use uma seringa de um mililitro conectada a um adaptador de isca de calibre 23 para administrar epinefrina através da veia femoral. Administrar compressões torácicas manuais pelo polegar, indicador e dedo médio no tórax do animal, em leve movimento circular nos eixos X e Z, até o retorno da circulação espontânea. Em seguida, use outra seringa de um mililitro conectada a um adaptador de isca de calibre 23 para administrar bicarbonato de sódio via veia femoral, imediatamente após o retorno à circulação espontânea, para aliviar a acidose respiratória.10 minutos após a ressuscitação, meça a gasometria novamente para determinar o estado ácido-básico. Use um hemostático para pinçar a artéria e a veia femoral. Remova lenta e suavemente os cateteres arteriais e venosos usando uma pinça de ponta romba.Em seguida, legar a artéria e a veia femoral com uma sutura de seda 5 O para evitar sangramento. Feche a pele que recobre o local cirúrgico com uma sutura de seda 3O usando a técnica de sutura interrompida, para minimizar a chance de reabertura da ferida. Depois que o rato começar a respirar por conta própria, 30 a 60 minutos após a ressuscitação, desconecte-se do ventilador e remova suavemente o tubo endotraqueal.Coloque o rato na incubadora de bebês durante a noite. Por fim, transfira o rato para a gaiola individual e devolva-o ao biotério com ração e água regulares. No dia anterior à cirurgia, manuseie cada rato por cinco minutos e nunca eleve o rato da gaiola durante o manuseio.Em seguida, pegue-o suavemente pela cauda com uma mão, enquanto a outra mão apóia as pernas, e deixe-o pular da mão para a gaiola cinco vezes. Separe cada rato em gaiolas individuais para que eles não dominem por comida e / ou luta. Então, três dias após a cirurgia simulada ou ACA, transfira o rato com a gaiola para uma sala silenciosa e escura antes do início da primeira corrida.Ligue apenas uma lâmpada de mesa de baixa potência e coloque-a no canto da sala de testes para manter a iluminação mínima. Deixe o rato se adaptar à escuridão por 10 minutos. Em seguida, espalhe uma fina camada de roupa de cama para cobrir todo o chão do labirinto e coloque o rato no braço inicial.Permita que cada rato explore o braço direito ou esquerdo. Depois que o rato se comprometer com um dos braços da meta, quando todas as quatro patas do rato tiverem entrado no braço da meta, trave a junção em T entre o braço inicial e o braço da meta oposta para evitar que o rato entre no braço da meta oposta. Deixe o rato no labirinto por 30 segundos.Em seguida, pegue o rato e coloque-o de volta em sua gaiola por aproximadamente 30 segundos. Em seguida, remova o bloco de junção em T do labirinto em T. Colocar o rato no braço inicial novamente e repetir o ensaio para determinar a alternância espontânea.Faça com que os ratos realizem quatro corridas por dia com um intervalo de 10 minutos após as duas primeiras corridas. Por fim, troque a roupa de cama durante o intervalo de 10 minutos e entre os animais para eliminar o viés do cheiro. Limpe o labirinto em T com etanol 75% seguido de água destilada no final de cada dia experimental.Os resultados do teste de alternância espontânea sugerem que a taxa de alternância de três dias consecutivos no grupo ACA foi significativamente menor em comparação com o grupo controle. Isso se deve ao fato de que os ratos submetidos à ACA desenvolveram um aumento na preferência lateral em comparação com os controles. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como utilizar este labirinto em T modificado para avaliar o déficit de memória de curto prazo após isquemia cerebral em um roedor.Ao tentar este labirinto em T modificado, é importante bloquear suavemente o braço oposto depois que o rato entrar em um dos braços do gol. Além disso, o labirinto em T deve ser realizado em sala escura com iluminação mínima, o que reduz a ansiedade do rato.

utilizing-modified-t-maze-to-assess-functional-memory-outcomes-after

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Comprometimento cognitivo decorrentes da gestão radioterápico de tumores cerebrais representa uma condição clinicamente intratáveis ​​que impacta negativamente a qualidade de vida. A capacidade de avaliar criticamente potenciais intervenções para amenizar induzida por radiação decrementa cognitivo depende em última instância a capacidade de realizar rigorosa avaliações quantitativas da cognição.

Diminui quantificar cognitivos causados ​​pela radioterapia craniana

Este artigo apresenta o protocolo de T-maze testes utilizando um aparelho modificado automatizado para avaliar as funções de aprendizagem e memória em camundongos.

T-maze Alternância forçado e Tarefas esquerda-direita para a Avaliação da Discriminação de Trabalho e Memória de Referência em Ratos

O labirinto de água radial de oito braços foi projetado para avaliar o desempenho da referência e da memória de trabalho simultaneamente, exigindo que os sujeitos usem dicas extra-labirinto para localizar plataformas de fuga e corrige as limitações observadas em projetos de labirintos de braço radial terrestres.

Uso de um labirinto de água radial de oito braços para avaliar a memória de trabalho e de referência após lesão cerebral neonatal

O objetivo deste protocolo é investigar a cognição espacial em roedores. O labirinto aquático duplo-H é um teste novo, que é particularmente útil para elucidar os diferentes componentes de aprendizagem, consolidação e memória, bem como a interação dos sistemas de memória.

O Double-H labirinto: um teste comportamental robusto para Aprendizado e Memória em roedores

Para investigar a doença co-mórbida de Alzheimer (DA) ea condição acidente vascular cerebral em um novo modelo, três tarefas de comportamento estão descritos que avaliar tanto o controle motor e comportamentos cognitivos. Essas tarefas incluem a tarefa beam-pé, a tarefa cilindro e Morris labirinto de água.

Motor e hipocampo aprendizagem espacial Dependente e Avaliação de Memória de Referência em um rato transgénico modelo da doença de Alzheimer com AVC

Aqui apresentamos um protocolo para um teste de cognição específico do mouse que não requer natação. Este teste pode ser usado para distinguir com sucesso os camundongos de traumatismos cerebrais traumáticos induzidos pelo impacto cortical controlados dos controles simulados.

Avaliando a insuficiência da memória espacial em um modelo de mouse de lesão cerebral traumática usando um labirinto de roda de água radial

Lesão cerebral traumática (TCE) é comumente associada com prejuízo de memória. Aqui, apresentamos um protocolo para avaliar a memória de trabalho espacial após o TBI através de uma tarefa métrica. Um teste métrico é uma ferramenta útil para estudar o prejuízo de memória de trabalho espacial após o TBI.

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Este protocolo descreve o modelo de isquemia cerebral focal transitória em camundongos através da oclusão intraluminal da artéria cerebral média. Além disso, exemplos de avaliação de resultados são mostrados usando ressonância magnética e testes comportamentais.

Modelo de Oclusão Transitória da Artéria Cerebral Média do Acidente Vascular Encefálico

A maioria dos experimentos de comportamento para roedores foi originalmente concebida para ratos. Devido às diferenças comportamentais entre ratos e camundongos, às vezes são necessárias modificações para camundongos. Apresentamos um método para testar a memória de trabalho espacial em camundongos, minimizando o estresse durante a tarefa de memória de trabalho.

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Três novos testes comportamentais (membro anterior passo a alternância, teste instabilidade postural, teste de manipulação de massas) para avaliar a função do membro torácico após lesão medular cervical em roedores são descritos.

Avaliação da Função Membro Anterior após Unilateral Cervical SCI usando tarefas Novel: Membro Passo alternância, instabilidade postural e Pasta Manipulação

Aprenda a utilizar o labirinto T modificado para avaliar memória funcional após isquemia cerebral por parada cardíaca em roedores. Este método simples permite medir déficits de memória de curto prazo de forma confiável.

Utilizando o ZIF modificados para avaliar resultados de memória funcional após parada cardíaca

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