Utilizando o ZIF modificados para avaliar resultados de memória funcional após parada cardíaca

O objetivo geral deste labirinto em T modificado é avaliar o aprendizado funcional e a memória após isquemia cerebral induzida por parada cardíaca. Esses companheiros de equipe modificados podem ajudar a responder à função do hipocampo em doenças que causam déficits de memória de curto prazo, como parada cardíaca. A principal vantagem do labirinto em T modificado é seu design relativamente simples.

Isso é poderoso o suficiente para medir a memória de aprendizagem funcional após a isquemia. Além disso, a análise de dados é simples e direta. Como a parada cardíaca por asfixia resulta principalmente em déficits de memória de curto prazo, o labirinto em T modificado também pode ser aplicado a outras doenças do sistema nervoso central, que causam déficits de memória de curto prazo.

Como a doença de Alzheimer, a doença de Parkinson e o ataque isquêmico transitório. Após o cateterismo femoral, arterial e venoso, ajuste os parâmetros fisiológicos conforme necessário, modulando o volume sistólico, oxigênio ou nitroso Em seguida, use uma seringa de um mililitro conectada a um adaptador de isca de calibre 23 para administrar brometo de vecurônio pela veia femoral e aguarde dois minutos.

Certifique-se de que a pressão arterial esteja em torno de 100 milímetros de mercúrio. Induza a apneia por seis minutos desconectando o tubo endotraqueal do ventilador. Bloqueie ainda mais o tubo endotraqueal por uma seringa de um mililitro para garantir a apneia completa.

Durante o último minuto de apneia, ajuste a frequência respiratória do ventilador para 80 respirações por minuto e aumente o oxigênio para dois litros por minuto com zero por cento de óxido nitroso para soprar qualquer isoflurano ou óxido nitroso restante no ventilador. Após os seis minutos de apneia, remova a seringa de um mililitro do tubo endotraqueal. Reconecte o tubo endotraqueal ao ventilador.

Em seguida, use uma seringa de um mililitro conectada a um adaptador de isca de calibre 23 para administrar epinefrina através da veia femoral. Administrar compressões torácicas manuais pelo polegar, indicador e dedo médio no tórax do animal, em leve movimento circular nos eixos X e Z, até o retorno da circulação espontânea. Em seguida, use outra seringa de um mililitro conectada a um adaptador de isca de calibre 23 para administrar bicarbonato de sódio via veia femoral, imediatamente após o retorno à circulação espontânea, para aliviar a acidose respiratória.

10 minutos após a ressuscitação, meça a gasometria novamente para determinar o estado ácido-básico. Use um hemostático para pinçar a artéria e a veia femoral. Remova lenta e suavemente os cateteres arteriais e venosos usando uma pinça de ponta romba.

Em seguida, legar a artéria e a veia femoral com uma sutura de seda 5 O para evitar sangramento. Feche a pele que recobre o local cirúrgico com uma sutura de seda 3O usando a técnica de sutura interrompida, para minimizar a chance de reabertura da ferida. Depois que o rato começar a respirar por conta própria, 30 a 60 minutos após a ressuscitação, desconecte-se do ventilador e remova suavemente o tubo endotraqueal.

Coloque o rato na incubadora de bebês durante a noite. Por fim, transfira o rato para a gaiola individual e devolva-o ao biotério com ração e água regulares. No dia anterior à cirurgia, manuseie cada rato por cinco minutos e nunca eleve o rato da gaiola durante o manuseio.

Em seguida, pegue-o suavemente pela cauda com uma mão, enquanto a outra mão apóia as pernas, e deixe-o pular da mão para a gaiola cinco vezes. Separe cada rato em gaiolas individuais para que eles não dominem por comida e / ou luta. Então, três dias após a cirurgia simulada ou ACA, transfira o rato com a gaiola para uma sala silenciosa e escura antes do início da primeira corrida.

Ligue apenas uma lâmpada de mesa de baixa potência e coloque-a no canto da sala de testes para manter a iluminação mínima. Deixe o rato se adaptar à escuridão por 10 minutos. Em seguida, espalhe uma fina camada de roupa de cama para cobrir todo o chão do labirinto e coloque o rato no braço inicial.

Permita que cada rato explore o braço direito ou esquerdo. Depois que o rato se comprometer com um dos braços da meta, quando todas as quatro patas do rato tiverem entrado no braço da meta, trave a junção em T entre o braço inicial e o braço da meta oposta para evitar que o rato entre no braço da meta oposta. Deixe o rato no labirinto por 30 segundos.

Em seguida, pegue o rato e coloque-o de volta em sua gaiola por aproximadamente 30 segundos. Em seguida, remova o bloco de junção em T do labirinto em T. Colocar o rato no braço inicial novamente e repetir o ensaio para determinar a alternância espontânea.

Faça com que os ratos realizem quatro corridas por dia com um intervalo de 10 minutos após as duas primeiras corridas. Por fim, troque a roupa de cama durante o intervalo de 10 minutos e entre os animais para eliminar o viés do cheiro. Limpe o labirinto em T com etanol 75% seguido de água destilada no final de cada dia experimental.

Os resultados do teste de alternância espontânea sugerem que a taxa de alternância de três dias consecutivos no grupo ACA foi significativamente menor em comparação com o grupo controle. Isso se deve ao fato de que os ratos submetidos à ACA desenvolveram um aumento na preferência lateral em comparação com os controles. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como utilizar este labirinto em T modificado para avaliar o déficit de memória de curto prazo após isquemia cerebral em um roedor.

Ao tentar este labirinto em T modificado, é importante bloquear suavemente o braço oposto depois que o rato entrar em um dos braços do gol. Além disso, o labirinto em T deve ser realizado em sala escura com iluminação mínima, o que reduz a ansiedade do rato.