Técnicas cirúrgicas para a colocação do cateter e nefrectomia 5/6 em modelos murino de diálise Peritoneal

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da diálise peritoneal sobre alterações peritoneais ou sistêmicas em resposta à exposição a fluidos sob condições urêmicas ou não urêmicas. As principais vantagens desta técnica são que grandes quantidades de líquido podem ser injetadas por via intraperitoneal durante um longo período de tratamento e que permite o uso de animais geneticamente modificados. A implicação dessa técnica se estende para a terapia e diagnóstico da deterioração peritoneal estrutural e funcional, pois facilita o teste estratégico terapêutico potencial e a avaliação de biomarcadores.

Tivemos a ideia desse método pela primeira vez quando antecipamos a necessidade de usar camundongos geneticamente modificados para iniciar as pistas moleculares envolvidas no dano peritoneal. Para a colocação do cateter, após raspar os flancos e costas direitos de cada animal, confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé e aplique pomada nos olhos do animal. Em seguida, coloque o primeiro animal em seu flanco esquerdo na mesa cirúrgica e desinfete a pele exposta com solução de gluconato de clorexidina a 1%.

Use uma tesoura romba para fazer uma incisão na pele cortada de 0,5 centímetro no flanco direito do corpo. Em seguida, separe cuidadosamente a pele da camada muscular adjacente até que a pele que cobre todo o dorso do animal esteja bem separada. Faça uma incisão de um milímetro de diâmetro na camada muscular através da incisão na pele e insira a ponta do cateter e o primeiro anel de plástico na incisão muscular.

Suturar a parede peritoneal firmemente ao redor do cateter com a sutura inabsorvível 5-0 ou 6-0, com um anel de plástico dentro da cavidade peritoneal e outro entre o músculo e a pele. As suturas devem ser preparadas antes da incisão e o músculo não deve ser liberado até que o cateter seja inserido. Caso contrário, como a incisão é muito pequena, pode ser difícil encontrá-la novamente.

Insira a porta de acesso no espaço subcutâneo em direção à cauda do mouse e feche a ferida com uma segunda sutura. Em seguida, retorne o animal à sua gaiola após decúbito esternal completo. Quatro a sete dias depois, para iniciar o tratamento de diálise peritoneal, primeiro carregue uma seringa com dois mililitros de fluido de diálise peritoneal e desinfete a pele ao redor da porta com solução de gluconato de clorexidina a 1%.

Em seguida, use uma mão para prender o animal pela cauda e pela porta de acesso e injete o fluido na porta com a outra mão usando uma agulha chanfrada. Para uma nefrectomia 5/6 e colocação de cateter, após preparar os animais para a cirurgia, conforme demonstrado, faça uma incisão na pele de 0,5 centímetro no lado esquerdo do animal próximo à parte inferior das costelas. Abra uma pequena incisão no músculo para extrair o rim esquerdo do peritônio e remova a cápsula e a glândula adrenal.

Use um cauterizador para queimar e cortar as extremidades do rim e retornar o rim à cavidade peritoneal. Em seguida, feche o músculo e as feridas da pele com suturas insolúveis 5-0 ou 6-0 e devolva o animal à gaiola quando estiver totalmente recuperado. No dia seguinte, faça uma incisão na pele de 0,5 centímetro no lado direito do animal e separe a pele na parte de trás do animal do músculo, conforme demonstrado.

Faça uma incisão de 0,3 a 0,4 centímetro no músculo e extraia o rim direito da cavidade peritoneal. Remova a cápsula e a glândula adrenal e use uma sutura 5-0 ou 6-0 não absorvível para ligar a veia renal, a artéria e o ureter. Agora remova o rim completamente e insira o cateter de forma que o músculo seja mantido entre os dois anéis de plástico, conforme demonstrado, antes de fechar a ferida muscular.

Introduza a porta de acesso no espaço subcutâneo e feche a pele, conforme demonstrado. Em seguida, retorne o animal à sua gaiola com monitoramento até a recuperação total e permita que o animal se recupere por pelo menos 10 dias antes de administrar o fluido hiperosmótico, conforme demonstrado. Tecidos peritoneais peritoneais de camundongos obtidos da área mais distante do cateter demonstram um aumento da espessura e do recrutamento celular durante a diálise que é ainda mais agravado nos animais nefrectomizados.

As células epiteliais do timo também exibem uma morfologia alterada devido à degradação da união intercelular induzida pela diálise peritoneal. Amostras de soro de camundongos nefrectomizados indicam que uma nefrectomia 5/6 induz um estado urêmico, aumentando os níveis de nitrogênio ureico durante o curso do experimento, em comparação com a linha de base. Além disso, quando os rins estão totalmente funcionais, os níveis de nitrogênio ureico permanecem semelhantes ao estado basal, mesmo em camundongos expostos ao fluido de diálise peritoneal.

Essas técnicas podem ser concluídas em cinco a sete minutos. Sem a nefrectomia, 15 a 20 minutos. Para a cauterização do rim esquerdo, 20 a 25 minutos.

Para a remoção correta do rim e colocação do cateter, se sua metodologia for realizada adequadamente. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para que pesquisadores da área de diálise peritoneal explorassem opções terapêuticas para preservação peritoneal em pacientes renais submetidos ao tratamento de diálise peritoneal.