Avaliação do esperma de peixe utilizando Software e dispositivos de refrigeração

O principal objetivo deste procedimento é analisar a qualidade do esperma de peixes com base na motilidade dos espermatozóides, a fim de contribuir para o sucesso da fertilização artificial. Sou o Dr. Carles Soler, professor da Universidade de Valência e diretor científico da PROiSER I+D. Eu sou Carina Caldeira, bolsista do Projeto Impress.

A tecnologia CASA foi desenvolvida há algumas décadas para a análise de sêmen de espécies de mamíferos usando uma análise de sêmen assistida por computador. No caso dos peixes, é necessário levar em consideração duas coisas. A primeira delas é o fato de que esses animais normalmente fertilizam em baixas temperaturas, em torno de quatro graus, e por esse motivo, não é possível analisar o sêmen em temperatura doméstica, mas é necessário desenvolver ferramentas específicas para refrigerar as amostras.

O outro problema, é que a motilidade diminui muito rápido após a ativação, e é preciso analisar esse fato, para definir qual é o melhor momento para a análise da qualidade, ou da qualidade do sêmen. Então, vamos mostrar a análise de esperma de peixe, e este protocolo será uma modificação do protocolo de mamíferos, e incluirá análise de motilidade usando Então, vamos começar. Os peixes são anestesiados para injeção de hormônio e as amostras de esperma são coletadas 24 horas depois.

A área genital é limpa para evitar contaminação. O esperma é coletado aplicando uma leve pressão. As amostras de esperma são mantidas a quatro graus, até que as análises de motilidade sejam realizadas.

O diluidor e o ativador são preparados previamente. Defina o bloco do resfriador em quatro graus para manter as amostras a uma temperatura constante. Espere até que se estabilize.

Diluir as amostras de esperma utilizando o diluidor específico para cada espécie. Para a enguia europeia, o esperma é diluído no meio P1, na proporção de 1:50. Prepare 500 microlitros de esperma diluído, adicionando 450 microlitros de P1 e 50 microlitros de amostra de esperma fresco.

Misture bem. Pegue um aliquarter da solução do ativador e coloque no bloco mais frio. Defina o estágio mais frio em quatro graus.

Espere até que se estabilize. Selecione o módulo de motilidade e, se necessário, use um nome e senha. Escolha propriedades.

Clique nas espécies e selecione peixe. Selecione quadros por segundo e o número de imagens que deseja usar. É obrigatório o uso de contraste negativo.

Selecione a câmara de contagem e a balança correspondentes. Para cada espécie, adapte a área de partículas e a conectividade. Para a enguia europeia, a área mínima de partículas deve ser de dois e a conectividade de sete.

Salve a configuração. Captura aberta. Pegue quatro microlitros de solução ativadora e coloque na câmara.

Homogeneizar bem o esperma diluído. Pegue 5 microlitros de esperma e misture com ativador. Coloque a tampa.

Concentre-se na amostra e encontre a melhor área visual. Selecione capturar vídeo para obter rastros de espermatozóides, que são separados de acordo com a velocidade. Mais campos podem ser capturados.

Selecione capturar e proceda como antes. Clique em sair para obter uma visão geral de todos os campos. As capturas de espermatozóides foram feitas em intervalos de tempo específicos após a ativação.

No entanto, a análise de espermatozoides foi realizada para cada repetição de intervalo de tempo. O relatório parcial para cada intervalo de tempo pode ser obtido selecionando campos e clicando em parcial. A planilha do Excel fornece valores médios de dados parciais, gráficos e imagens de rastros de espermatozóides.

Repita o mesmo procedimento para outros campos. A outra opção são os dados gerais. Esses dados fornecem valores cinéticos para espermatozóides individuais de todos os campos.

Com o relatório parcial, a porcentagem de motilidade e progressividade para os diferentes tempos pode ser comparada imediatamente, usando gráficos de pizza. Os dados gerais dão a opção de obter várias análises estatísticas usando os parâmetros cinéticos. As trilhas de espermatozóides fornecem três parâmetros.

VCL, velocidade curvilinar, VSL, velocidade progressiva e VAP, velocidade de caminho. VCL é o parâmetro mais importante e muda com o número de quadros por segundo. Ao aumentar o número de quadros, o VCL também aumenta, permitindo uma análise de trilha quase perfeita.

A melhor taxa de quadros pode variar de acordo com a espécie. O objetivo é encontrar o maior valor de VCL, após o qual quaisquer diferenças potenciais com outras ferramentas, como câmaras de contagem, podem ser observadas. Subpopulações é atualmente uma importante análise estatística que fornece mais informações sobre a amostra de esperma.

Este é um exemplo de amostras de esperma de salmão do Atlântico. Diferentes subpopulações de espermatozóides podem ser observadas em diferentes gerações produzidas em cativeiro. Mostramos como usar um sistema de computador para análise de esperma de peixe e também como otimizar aspectos técnicos e metodológicos, como câmara de contagem, temperatura e taxas de quadros.

Então, com esses dados, podemos fazer muitas análises em diferentes campos, como a criação de peixes, não só para aquicultura, mas também para programas de conservação, estudos filogenéticos, ou para aumentar o conhecimento sobre a população de espermatozóides. Então, espero que este protocolo o ajude em seus estudos.