Name: Aprimoramento do modelo de suínos do miocárdio peito fechado pela padronização do tecido e os procedimentos de recolha de amostras de sangue (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 1 s
Description: Aprenda a padronizar procedimentos de amostragem em modelo suíno de infarto agudo do miocárdio. Esta técnica permite determinar com precisão o tamanho do infarto e coletar amostras sanguíneas para análise.

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Os autores desejam reconhecer o Professor Christian Heinis para fornecer o inibidor FXIIa e o respectivo controle. Reconhecemos também com gratidão Olgica Beslac, Dr. Daniel Mettler e Kay Nettelbeck da unidade de Cirurgia Experimental, departamento de pesquisas biomédicas, Universidade de Berna, para suporte técnico. Celine Guillod e Matthias Rausch do departamento para diagnóstico, intervencional e radiologia pediátrica, Hospital Universitário de Berna, Inselspital fornecido com o equipamento de raios-x e técnicas. Este projecto foi financiado pela Swiss National Science Foundation, projeto n. º 320030_156193. Também gostaríamos de agradecer o Sr. Reto Haenni de comunicação e marketing, Hospital Universitário de Berna, Inselspital para nossa experiência de gravação de vídeo.

1. os animais:
Todos os animais foram tratados de acordo com as orientações da legislação nacional Suíça. O estudo foi aprovado pelo comitê local de experimentação animal do Cantão de Berna (permissão não. SER DE 25/16).
Use grandes porcos brancos de ambos os sexos (~ 30 ± 5 kg). Divida os animais cegamente em dois grupos, um grupo receber um inibidor (80 kDa protease) bicíclico de FXIIa ou o tratamento de escolha e o outro um controle inativo.
2. ato cirúrgico (Figura 1)
<ol><li>Anestesia e preparação do animal:
	<ol>
<li>Rapidamente os animais para 12 h antes de iniciar o experimento.</li>
		<li>Pre-medicar o animal com 20 mg/kg de ketamina e 2 mg/kg de xilazina através de uma injeção intramuscular no pescoço, utilizando uma seringa de 10 mL. Registre o peso do animal e sexo.</li>
		<li>Induzi anestesia pela injeção de 0,5 mg/kg de Midazolam e 0,05 mg/kg Atropin na veia auricular. Entube o animal com um tubo endotraqueal.</li>
		<li>Manter a anestesia por ventilação mecânica, usando um respirador (O2/Air do 1:3, sevoflurano 1,5%), um tubo de vias aéreas de 7-8 mm e um filtro. Ajuste da fração inspirada de oxigênio (FiO2) para 35% e o volume corrente de 6 a 10 mL/kg.</li>
		<li>Profundidade da anestesia é avaliada como adequada na ausência de respostas autonômicas ou motor para beliscar o nariz. Reflexos palpebrais e Tom mandíbula foram monitoradas continuamente também direcionamento Tom descontraído maxilar e ausência de reflexos palpebrais. Temperatura do núcleo foi continuamente monitorizada e manutenção de normotermia (38-38,5 ° C) foi assegurada com aquecimento passivo (isolando cobertores e garrafas quentes).</li>
		<li>Dissecar livre, como anteriormente descrito por Koudstaal e seus colegas as etapas 3-1 para 3-318, as artérias carótidas em ambos os lados e Canule-los com uma bainha 7F. Canule a veia jugular esquerda com uma bainha 7F para recolha de amostras de sangue venoso.</li>
		<li>Administre uma dose em bolus de 250 µ g analgésico de fentanil através da linha venosa central, seguido de 250 µ g/h como uma infusão intravenosa contínua, usando uma bomba de infusão. Monitorar a temperatura corporal, frequência cardíaca e ritmo com um vantagem de 3 eletrocardiograma (ECG), pressão venosa central e arterial durante todo o experimento.</li>
		<li>Usando tubos de colheita de sangue padrão, retirar as seguintes amostras de sangue de linha de base da linha venosa: plasma de EDTA 2,9 mL para os respectivos tubos e plasma citratado de 5 mL. Centrifugar imediatamente a 2.000 x g, durante 15 min a 4 ° C. Tirar sangue de 2,9 mL para um tubo de soro e deixe para coagular por 30 min à temperatura ambiente antes de centrifugação conforme descrito acima.</li>
		<li>Alíquota 200 µ l de plasma ou soro em 500 µ l tubos e armazenar todas as amostras a-80 ° C para uma análise mais aprofundada.</li>
		<li>0,5 mL de sangue retire a linha arterial utilizando que a análise de gás de sangue especiais (BGA) seringas para medir BGA usando a máquina BGA de acordo com as instruções do fabricante.</li>
		<li>Retirar a linha venosa utilizando uma seringa padrão 2 mL 0,5 mL de sangue e transferi-lo imediatamente no cartucho ACT usando uma agulha 30G. Insira o cartucho cheio dentro da máquina de ACT para medir o tempo de coagulação, de acordo com as instruções do fabricante. Consulte a Figura 2 para pontos de tempo.</li>
		<li>Administrar 5000 IU fluida de heparina na linha venosa, utilizando uma seringa de 2 mL e permitir que o animal se estabilize por 20 min antes de iniciar o experimento de MI.</li>
		<li>Monitor agir cada 30-45 min, como mencionado em 2.1.11. Injete heparina unfractionated 2500 IU por via intravenosa, se o ato é < 180 s.</li>
	</ol></li>
	<li>Experimento de infarto do miocárdio
	<ol>
<li>Usar um equipamento de fluoroscopia de braço C padrão (programa de angiografia coronária, ângulo de 0°, 12 quadros por segundo, ~ 70 kV) - ou alternativamente um sistema dedicado de angiografia - para realizar a intervenção coronária.</li>
		<li>Use sob orientação fluoroscópica para inserir um cateter de pressão (5F, 120 cm) através da bainha previamente colocada na artéria carótida esquerda. Avance-o para o ventrículo esquerdo. Conecte o cateter de pressão a um sistema de aquisição para registrar a pressão ventricular esquerda. O sistema de aquisição precisa calcular e registrar a frequência cardíaca, desenvolvida continuamente pressão, dP/dt máxima (contratilidade do ventrículo esquerdo) e dP/dt mínimo (relaxamento do ventrículo esquerdo) durante todo o experimento. Gravar valores basais durante 10 minutos.</li>
		<li>Inserir uma 6F (100 cm, EB3.75) cateter-guia através da bainha previamente colocada na artéria carótida direita. Avançá-lo para a artéria coronária esquerda para chegar à esquerda artéria descendente anterior coronária (LAD), sob orientação de raio-x. Injete o meio de contraste, utilizando uma seringa de 20 mL através do cateter-guia para realizar uma angiografia coronária de linha de base. Nota: Injeção de meio de contraste foi feita por pressão manual, mas um sistema injector dedicado poderia ser usado também.</li>
		<li>Avalie o tamanho do menino no monitor raio-x para selecionar o tamanho apropriado do cateter de intervenção coronária percutânea (PCI). Use balões PCI com um comprimento de 15 a 25 mm e diâmetros entre 2 e 3,5 mm dependendo do tamanho do rapaz. Monte PCI cateter e o fio guia coronário (F. 014/J, 175 cm). Conecte o cateter PCI com o dispositivo de inflação pré-preenchido com meio de contraste. Nota: O diâmetro do rapaz pode ser medido diretamente em um monitor calibrado, usando uma régua e o tamanho do balão PCI é então selecionado em conformidade.</li>
		<li>Inserir o sistema montado de 2.2.4 do lúmen do cateter-guia. Avance o fio-guia para o rapaz até atingir além do segundo ramo diagonal do menino.</li>
		<li>Use sob orientação fluoroscópica para avançar o cateter PCI até chegar no meio do menino. Escolha o site de bloqueio rapaz dependendo da anatomia das coronárias, geralmente após o segundo, às vezes após o primeiro ramo diagonal (Figura 3) para poder ter percentagens semelhantes de RAA do ventrículo esquerdo (LV). Nota: A escolha do site bloqueio depende do comprimento dos ramos diagonal e, portanto, a área de tecido que é fornecido pelo sangue através do respectivo ramo. No caso de uma longa e bifurcado primeiro ramo diagonal o bloqueio do site será só depois disto. No caso de um primeiro ramo diagonal mais curto, o bloqueio é feito após a segunda diagonal.</li>
		<li>Retire o fio-guia e vá aumentando a pressão no dispositivo de insuflação para 7-10 bar para insuflar o balão do cateter PCI e induzir isquemia miocárdica por 1 h. aumentar gradualmente a FiO de2 a 50-60% entre 15 e 40 min de isquemia. Manter o volume corrente em 6-10 mL/kg. Nota: Este procedimento irá reduzir a ocorrência de extrasystoles e diminuir a frequência de fibrilações ventricular.</li>
		<li>Registro de uma sequência de vídeo de s de 5-10 durante a injeção de meio de contraste através do cateter-guia ter um angiograma do balão do cateter PCI no lugar apenas após o início de isquemia; repeti após 10min de isquemia para verificar a completa oclusão do menino distal para o balão do cateter de PCI.</li>
		<li>Monitorar o animal estreitamente para imediatamente detectar e tratar (2.2.10) arritmias cardíacas. Extrasystoles geralmente ocorrem e o aumento da frequência (> 3 / min) entre 20 e 40 min após a indução de isquemia miocárdica. Se isso ocorrer, Massageie suavemente o pescoço de ambos os lados, logo abaixo da bochecha. Na maioria dos casos isso será suficiente para re-estabelecer uma pulsação regular, provavelmente pela estimulação dos barorreceptores nervo vagal localizado na artéria carótida comum.</li>
		<li>Se arritmias cardíacas progridem para fibrilação ventricular, use um desfibrilador bifásico externo, para re-estabelecer um ritmo sinusal. Aplica compressões torácicas de 5-10 usando o desfibrilador imediatamente antes de aplicar o choque, a fim de preencher as coronárias com sangue oxigenado e depois choques com 150 J (para animais de 30 kg).</li>
		<li>Repita a operação se necessário e aumentar a energia para 175 J depois do choque de 3rd . Use configurações de energia mais elevadas para animais mais pesados.</li>
		<li>Cinco minutos antes do fim do tempo isquemia repita a mencionado no 2.1.8-2.1.13 de amostra de sangue. Injetar a substância (ou bicíclicos FXIIa inibidor ou controlar 4 mg/kg, isto fazer isto às cegas) por via intravenosa através do cateter venoso central e flush a linha com soro fisiológico 20 mL.</li>
		<li>Retirar uma amostra de plasma citrato (como mencionado em 2.1.8 e 2.1.9) 4 min após a injeção da substância em 2.2.12.</li>
		<li>Realize uma angiografia (2.2.3) para confirmar a oclusão do rapaz, em seguida, esvazie o balão do cateter PCI e retirar este cateter cateter-guia. Confirmar perfusão do menino distal ao site da oclusão por angiografia imediatamente após deflação e remoção do balão do cateter de PCI, 10 min depois disso, sempre que os sinais de isquemia miocárdica eram visíveis por ECG por mais de 5 min e imediatamente antes de Re-oclusão do menino.</li>
		<li>Permita a reperfusão do miocárdio isquêmico por 2 h. Colher amostras de soro e plasma às 10, 30, 60 e 115 min de reperfusão (2.1.8 e 2.1.9). Monitor BGA em 60 e 115 min (2.1.10).</li>
		<li>Volte a introduzir o cateter PCI juntamente com o fio-guia para exatamente a mesma posição usada para a isquemia. Insuflar o balão do cateter PCI como antes e confirmar a oclusão do rapaz por angiografia (2.2.3). Remover o cateter de pressão do ventrículo esquerdo e parar a gravação.</li>
		<li>Injetar 100 mL 2% azul de Evans em fosfato tampão salino (PBS, pH 7,4) em linha venosa central. Cerca de 30 s depois, quando o animal inteiro fica azul, injetar 40 mL 20% KCl a eutanásia do animal. Morte foi confirmada pela ausência de sinais de ECG e ondas de pulso.</li>
	</ol></li>
</ol>3. técnicas de amostragem
<ol><li>
Extraindo, dissecando e amostragem do coração (Figura 4)
	<ol>
<li>Execute uma esternotomia para expor o coração. Siga o protocolo descrito anteriormente por Koudstaal e colegas, as etapas de 8-2 e 8-3,18. Abri o pericárdio ao inspecionar para anormalidades, que talvez decorrem pericardite anterior e excluir o animal de nova avaliação.</li>
		<li>Esvazie e retire a placa PCI, bem como o cateter-guia. Excisar o coração para posterior análise. Cortar a veia cava e remover o sangue usando uma bomba de sucção, em seguida, corte todos os grandes navios conectando o coração com o corpo.</li>
		<li>Enxágue o coração dentro e por fora com temperatura ambiente salino. Pese o coração inteiro.</li>
		<li>Dentro de 30-40 min, corte o coração em fatias de cerca de 3-5 mm do ápice para o dever tendinae da válvula mitral, perpendicular ao eixo longo, usando uma faca afiada.</li>
		<li>Tenha cuidado de sempre colocar o coração na mesma orientação com o lado ventral virada para cima a fim de manter a orientação das amostras cortadas (Figura 5).</li>
		<li>Fotografe as fatias do coração usando uma câmera reflex de lente digital única.</li>
		<li>Corte do ventrículo direito (descarte que não necessário). Fotografar as fatias do ventrículo esquerdo e pesar todas as fatias para o peso total do ventrículo esquerdo.</li>
		<li>Diferencie entre o azul de Evans positivo e azul de Evans tecido negativo em todas as seções. Disse as fatias para separar o isquêmico (Evans Blue negativo) do tecido não-isquêmica (azul de Evans positivo) usando um bisturi.</li>
		<li>Primeiro analise as seções negativas azul de Evans (área isquêmica em risco, AAR). Pesá-los todos e colocá-los todos em um recipiente de plástico.</li>
		<li>Cubra as fatias inteiramente com solução de cloreto de 100-150 mL (de acordo com o tamanho do coração) trifenil tetrazólio (2G TTC, 16G dextrano, peso molecular 48000-90000, em 200 mL de PBS, preparados na hora) para que os pedaços de coração podem mover-se livremente dentro da solução. Cubra o recipiente e incubar durante 20 min a 37 ° C, agitando suavemente.</li>
		<li>Durante esse pesa de tempo de incubação de 20 min o azul de Evans peças positivas (área de risco, ANR), colher amostras para a incorporação de tecido-Tek (escolher a parte mais distal da lesão) e armazenar a-80 ° C para posterior análise. Transferir o resto em solução de formol 4% e armazenar à temperatura ambiente para seções de histologia.</li>
		<li>Retire os pedaços da raa da solução TTC. O tecido manchado vermelho é tecido isquêmico viável (VIT) e o tecido manchado não é tecido necrótico isquêmico (NIT). Corte 2 pedaços pequenos (blocos de 2-3 mm) de tanto o NIT e VIT, incorporá-los em tecido - Tek e armazenar a-80 ° C para posterior análise. Estas amostras devem ter o mesmo peso.</li>
		<li>Corrigi o resto das peças (todas as fatias, derivadas da AAR) fixando-os para baixo em um recipiente de isopor e cobrir completamente com solução de formol 4% por 24 horas à temperatura ambiente em uma coifa. As peças devem ficar planas para a documentação fotográfica na próxima etapa.</li>
		<li>No dia seguinte fotografia de ambos os lados das peças com uma câmera de alta resolução com a mesma configuração de zoom e distância do tecido (mesma ampliação). Adicione barras de escala automática para todas as imagens. Todas as barras precisam ter o mesmo comprimento. Nota: A câmera de alta resolução deve ser ligada a um software que adiciona automaticamente a barra de escala para cada foto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Cálculo da raa e o tamanho do infarto
	<ol>
<li>% De AAR do ventrículo esquerdo = (peso de AAR em g / peso do ventrículo esquerdo em g) * 100.</li>
		<li>Use o software ImageJ para calcular a área de superfície total de ambos os AAR e NIT (ambos os lados de cada peça) com base nas fotografias.</li>
		<li>Ajuste a barra de escala, selecionando o comprimento da barra de escala usando a linha reta da ferramenta ângulo. Escolha o menu Analyze > definir escala de e insira a distância conhecida e a unidade da barra de escala. Escolha "global" para que a mesma escala será aplicada a todas as imagens.</li>
		<li>Marque a área toda a superfície do tecido usando a ferramenta de seleção de mão livre para calcular AAR. Tenha cuidado para não incluir o lado (altura) do tecido e/ou do tecido adiposo (Figura 6-C).</li>
		<li>Definir a medição escolhendo "área" e "Exibir rótulo" de Analyze > menu definir medições. Medir a área de superfície de Analyze > medida.</li>
		<li>Repita o passo 3.2.5 a medida NIT (marca apenas o tecido não-coradas). Nota: Não inclua o tecido adiposo (Figura 6-D) no cálculo NIT. Repita o passo do outro lado do tecido.</li>
		<li>Calcule a média AAR e NIT para cada pedaço de tecido.</li>
		<li>Use os valores obtidos 3.2.7 para calcular o NIT como uma porcentagem do NIT de RAA AAR:% = (Σ superfície área média de NIT em cm2/ Σ média área de superfície de AAR em cm2) * 100.</li>
		<li>Dois investigadores diferentes devem repetir o método acima. A margem aceitável de diferença é < 10%.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Marcadores de isquemia
	<ol>
<li>Usar as amostras de plasma de EDTA, que foram previamente armazenadas a-80 ° C (2.1.9) para medir o nível de troponina cardíaca-usando um ensaio de Luminex-tipo single-plex, como anteriormente descrito 19.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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<li>Regueiro-Purriños, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventricular+Arrhythmias+and+Mortality+Associated+with+Isoflurane+and+Sevoflurane+in+a+Porcine+Model+of+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Ventricular Arrhythmias and Mortality Associated with Isoflurane and Sevoflurane in a Porcine Model of Myocardial Infarction.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. , (2011).</li>
<li>Roberts, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evans+blue+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Can+Med+Assoc+J%22%5BJournal%5D)">Evans blue toxicity.</a> Can Med Assoc J. 71, 489-491 (1954).</li>
<li>Ellenbroek, G. H. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Outcome+Assessment+in+a+Pig+Model+of+Acute+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primary Outcome Assessment in a Pig Model of Acute Myocardial Infarction.</a> J Vis Exp. , e54021(2016).</li>
</ol>

Os autores declaram não haverá conflito de interesses.

Miocárdica eu / lesão R tem um efeito significativo no tamanho final de infarto que é traduzido diretamente para o prognóstico do paciente após infarto agudo do miocárdio3. Entendimento da fisiopatologia do miocárdio eu / lesão de R é o primeiro passo para reduzir ou evitar isso. Miocárdica eu / lesão R é uma condição aguda que ocorre diretamente após a reperfusão dos vasos obscurecidos. Eu / lesão R leva à ativação da resposta imune inata e dano celular ocorre no local da reperfusão e os tecidos ...

Doença isquêmica do coração, em especial infarto agudo do miocárdio (MI), é a principal causa de morte em países desenvolvidos 1. Hoje, o tratamento padrão de MI é intervenção coronária percutânea (PCI), o tratamento de cateter de balão. Um dos fatores críticos que afeta a qualidade de vida e o prognóstico de pacientes após MI aguda tratada com PCI são o tamanho do infarto. A redução do tamanho pode ter um grande impacto na para sobrevivência e prognóstico do paciente 2. Isquemia/reperfusão miocárdica (eu / R) lesão tem uma influência significativa sobre o tamanho do infarto por um dos principais objectivos em pesquisa cardiovascular é evitar ou reduzir miocárdica eu / R lesão 3. Os mecanismos exatos de I / lesão R estão ainda sob investigação 4. Ativação das cascatas de plasma e as células endoteliais são marcas registradas de I / R lesão 5. Ativação do sistema de coagulação é claramente envolvidos 6,7. Recentemente, o papel do FXII, como um início peptídeo montante envolvido na ativação de contato fase da cascata da coagulação, tem sido demonstrado em um FXII nocautear modelo do rato de cerebral eu / R lesão 8. Validação destes resultados em um modelo de suínos é um passo importante na tradução clínica. Portanto, estamos testando um inibidor de FXIIa romance bicíclico (80 kDa protease) no contexto do miocárdio eu / lesão R em um estudo piloto.
Modelos animais, que imitam a situação clínica de tratamentos MI e PCI agudas, são essenciais para melhorar a nossa compreensão da fisiopatologia do miocárdio eu / lesão R e testar as opções de tratamento de novela. Os porcos representam um bom modelo animal para clínicos miocárdica eu / lesão R. Isto não é só porque seus corações são muito semelhantes aos corações humanos no que diz respeito a anatomia e circulação coronária, mas eles também mostram respostas fisiopatológicas semelhantes a miocárdica isquemia e reperfusão 9,10. Outros modelos tais como ratos e camundongos não cumprir esses critérios e mostrar diferenças consideráveis em relação de corações humanos 11,12, Considerando que os cães por exemplo, têm muitos vasos coronarianos colaterais, mais, em comparação com os seres humanos 13.
O modelo de suínos infarto agudo do miocárdio tem sido amplamente utilizado em pesquisa cardiovascular para investigar a doença de coração isquêmica incluindo miocárdica eu / R lesão 14,15,16,17. O último é uma condição inflamatória, por causa do qual minimizando a reação inflamatória relacionada a esternotomia ou toracotomia usada na cirurgia de peito aberto é essencial. O modelo de peito fechado usando uma configuração de angiografia C-braço clínica resolve este problema. Além disso, um dos pontos mais importantes é que nosso protocolo fornece uma distinção exata entre isquêmica (área de risco, AAR) e áreas não-isquêmicas do ventrículo esquerdo (área de risco, ANR) para que o tamanho do infarto (tecido necrótico isquêmico, NIT) pode ser determinado com precisão. O nosso objectivo para este papel é definir claramente uma metodologia reproduzível de um suíno miocárdica eu / lesão R modelo, em particular no que diz respeito a amostragem do tecido do miocárdio, que permitirá uma análise mais precisa dos mecanismos moleculares de I / lesão R e um mais clara dos efeitos dos tratamentos com drogas novas.

<table><tbody><tr><td>ABL 90 Flex, analisador de gases sanguíneos</td><td></td> <td>Radiômetro-Análise</td> <td>de gases sanguíneos (BGA)</td></tr><tr><td>ACT Plus</td> Tempo <td>de</td> <td>coagulação ativado</td><td>pela Medtronic</td></tr> <tr><td>Atropin</td><td>Sintetica-Atropinum</td><td></td> <td>Sulfas, 0,5mg/ml</td></tr><tr><td>Balance (20-500 Kg)</td><td>NAGATA Scale, Tiwan</td><td>HTB/HTR</td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Balance (21-4200 g)</td><td>Mettler toledo, Suíça</td><td>MS4002SDR</td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Tubos de coleta de sangue: EDTA, citrato e soro</td><td>S-Monovette, Nuembrecht, Alemanha</td><td>05.1167.001, 05.1071.001 e 05.1557.001 respectivamente</td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>BV Pulsera móvel C-arm</td><td>Produtos Philips-Alternative</td><td></td> <td>podem ser usados</td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Labcare, Reino Unido</td><td>ALC PK120R</td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Desfibrilador Lifepak 12</td><td>Produtos Medtronic-Alternative</td><td></td> <td>podem ser usados</td></tr><tr><td>Dextrano de Leuconostoc mesenteroides</td><td>Sigma-Aldrich, Alemanha</td><td>D3759</td><td>Média M.wt 48000-90000</td></tr><tr><td>Câmera digital reflex de lente única</td><td>Sony, Tailândia</td><td>DSLR-A500 / A550</td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Pinça de dissecação</td><td></td><td></td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Cateter de dilatação EMPIRA RX PCI Cordis</td><td>, Johnson& Johnson, EUA</td><td>85R15300S</td><td>Diâmetro 3 mm, comprimento 15 mm, Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Cateter de dilatação EMPIRA RX PCI</td><td>Cordis, Johnson& Johnson, USA</td><td>85R15350S</td><td>Diâmetro 3,5 mm, comprimento 15 mm, Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich, Alemanha</td><td>E2129</td><td>Toxic</td></tr><tr><td>Fabius GS respirador premium</td><td>Dr&auml; ger, L&uuml; beck,</td> <td>Alemanha-Estação de trabalho de</td> <td>anestesia, Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Fentanil</td><td>Inselspital ISPI-Fentanil</td><td></td> <td>2500mcg/50ml</td></tr><tr><td>Instituto de Patologia de Formaldeído</td><td>, Universidade de Berna</td><td>SI148701</td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Inibidor FXIIa</td><td>Fornecido pelo laboratório do Prof. Christian Heinis em EPFL</td><td></td><td>Novo peptídeo bicíclico</td></tr><tr><td>Galeo, fio-guia coronário</td><td>Biotronik, Alemanha</td><td>125497</td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Cateter de orientação</td><td>Boston Scientific, Flórida, EUA</td><td>34356-06</td><td>6F (100 cm, EB3.75). Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Heparina Sódica</td><td>Drossapharm, Basileia,</td><td></td> <td>Suíça-Liquemin, 25000 U.I./5 ml</td></tr><tr><td>Eletrocirurgia de alta qualidade</td><td>BOWA, Alemanha</td><td>ARC 400</td><td>Fonte elétrica para sucção de sangue. Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Filtro respiratório Hydro-Guardmini</td><td>Intercirúrgico, Lituânia</td><td>1745000</td><td>Filtros</td></tr><tr><td>Imagem J</td><td>National Institute of Health, EUA</td><td>1.47v</td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Dispositivo de inflação, Atrion QL2530</td><td>Produto médico Atrion, Alabama, EUA</td><td>96402</td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>IntelliVue MP 70</td><td>Philips, Boeblingen,</td> <td>Alemanha-Monitor</td> <td>(ECG, frequência cardíaca, pressão sanguínea e temperatura corporal). Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sintetica SA</td> <td>- cloreto de</td> <td>potássio 15%</td></tr> <tr><td>cetamina</td><td>vetoquinol-narketan</td><td></td><td>, 1ml / 100mg</td></tr><tr><td>LR-ACT</td><td>Medtronic</td><td>402-01</td><td>ACT seringas especiais</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Roche-Dormicum</td><td></td><td>, 5mg / ml</td></tr><tr><td>Bisturi</td><td></td><td></td> monopolar <td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Porta-agulhas</td><td></td><td></td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Câmera de alta resolução, PathStand Macro Imaging Stand for Grossing</td><td>Spotimaging, resolução HD 1080p dos EUA</td><td></td><td>. Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Preparação interna</td> <td>-</td> <td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Cânula venosa periférica, 18 G</td><td></td><td></td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Sistema de aquisição de dados PowerLab 4/35</td><td>Adinstruments, Spechbach,</td><td></td> Alemanha-Rotamax120T <td></td></tr><tr><td></td><td>Heidolph, Alemanha</td><td>544-41200-00</td><td>Shaker. Alternativa pode ser usada</td></tr><tr><td>R&uuml; schelit-Super Safety Clear Tube</td><td>Teleflex, Dublin, Irlanda,</td><td>112480</td><td>Tubo de via aérea, produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Seringas de Aspirador Pico Seguro</td><td>Radiômetro</td><td>956-622</td><td>Seringas especiais BGA</td></tr><tr><td>Solução salina</td><td>Sintetica Bioren-NaCl</td><td></td> <td>0,9%. Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Sevorane 1,5%</td> <td>AbbVie AG-Sevorane</td><td></td> <td>250ml 100%</td></tr> <tr><td>Bainha</td><td>Cordis, Johnson & Johnson, EUA</td><td>504-607 A</td><td>AVANTI + / 7 F, Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Bomba de infusão espacial</td><td>B.Braun Medical AG,</td> <td>Alemanha-Para</td> <td>infusão de fentanil. Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>SPR-350 (cateter Millar)</td><td>Adinstruments, Texas, EUA</td><td>840-8166</td><td>MIKRO-TIP, 5F, 120 cm</td></tr><tr><td>Serra</td><td></td><td></td> de esternotomia <td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Suturas</td><td>ETHICON, Johnson& Johnson, EUA</td><td>Y3110H</td><td>Monocryl 3-0 SH-1 Plus. Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Seringas (20, 10 e 5 mL)</td><td>CODAN,Baar, Suíça</td><td>62.7602, 62.6616, 62.5607 respectivamente</td><td>Usado para injetar materiais anestésicos por via intramuscular ou diretamente na linha venosa central. Também para injetar heparina ou FXIIa ou o respectivo controle. Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Espalhador de</td><td></td><td></td> tórax <td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Tissue-tek</td><td>SAKURA, Holanda</td><td>4583</td><td>Composto O.C.T.</td></tr><tr><td>Pinça</td><td></td><td></td> vascular <td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr><tr><td>Meio de contraste Xenetix 300</td><td>Guerbet, Z&uuml; rico,</td> <td>Suíça-Lobitridol, 300 mg de iodeto/ml</td><td></td></tr> <tr><td>de xilazina</td><td>Vetoquinol-xilapan</td><td></td><td>, 20mg/1 mL</td></tr><tr><td>2,3,5-trifeniltetrazólio choride</td><td>Sigma-Aldrich, Áustria</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>500 &mu; Tubos L (eppendorf)</td><td>Trefflab, Suíça</td><td>96.08185.9.03</td><td>Produtos alternativos podem ser usados</td></tr></tbody></table>

aprimoramento do modelo de suínos do miocárdio peito fechado pela padronização do tecido e os procedimentos de recolha de amostras de sangue

Improvement of a Closed Chest Porcine Myocardial Infarction Model by Standardization of Tissue and Blood Sampling Procedures

Reperfusão de isquemia miocárdica (eu / R) lesão contribui para quase metade da área necrótica após infarto do miocárdio. Até à data, não há nenhuma droga aprovada para evitar ou reduzir miocárdica eu / lesão R. O estudo e compreensão dos mecanismos fisiopatológicos do miocárdio eu / R lesão é essencial para desenvolver tratamentos bem sucedidos. Experiências com animais grandes são um passo importante na translação métodos. O modelo suíno de infarto agudo do miocárdio foi estabelecido e descrito por nós mesmos e os outros. Objetivo melhorar ainda mais o valor do modelo, concentrando-se em detalhes sobre as técnicas de amostragem para uso em experimentos futuros. Além disso, Ressaltamos a passos pequenos, mas importantes que podem afetar a qualidade do resultado final. Para imitar a situação clínica do miocárdio eu / lesão R, um cateter de intervenção coronária percutânea (PCI) foi inserido no esquerdo artéria descendente anterior coronária (rapaz) de um porco anestesiado. ° ° ° Este modelo imita infarto agudo do miocárdio e tratamento PCI em seres humanos com a possibilidade de determinar com precisão a área de risco assim como a necrose- e tecido isquêmico viável. Aqui, o modelo foi usado para investigar o efeito de um inibidor de peptídeo bicíclico de FXIIa. O modelo também pode ser modificado para permitir tempos de reperfusão mais estudar os efeitos posteriores de infarto do miocárdio.

Um animal morreu prematuramente antes da administração de FXIIa peptídeo inibidor ou controle devido a um erro técnico (queda súbita da pressão arterial durante o tempo de isquemia, antes da adição da substância em estudo). Um animal foi excluído do grupo de inibidor FXIIa porque nenhuma lesão de isquemia/reperfusão foi observada devido a anatomia anormal da artéria descendente anterior esquerda (LAD). Uma grande parte do ventrículo esquerdo, incluindo o ápice, foi perfundida pela artéria...

Aqui vamos demonstrar um protocolo para padronizar os procedimentos de amostragem de um modelo estabelecido de suínos de infarto agudo do miocárdio, a fim de aumentar seu valor de translação no entendimento da fisiopatologia da lesão de isquemia/reperfusão miocárdica e para testar candidatos a novos fármacos.

Aprimoramento do modelo de suínos do miocárdio peito fechado pela padronização do tecido e os procedimentos de recolha de amostras de sangue

Myocardial ischemia reperfusion (I/R) injury contributes to almost half of the necrotic area after myocardial infarction. To date there is no approved ...

O objetivo geral deste modelo de infarto do miocárdio de tórax fechado suíno é investigar a lesão de isquemia miocárdica e reperfusão. Este método pode ajudar a responder a questões-chave na pesquisa cardiovascular, como investigar a fisiopatologia da lesão de isquemia e reperfusão no contexto do infarto agudo do miocárdio. A principal vantagem desta técnica é que ela permite uma determinação precisa do tamanho do infarto e uma técnica de amostragem precisa para análise posterior.Prepare o porco para a cirurgia e administre anestésicos conforme descrito no protocolo de texto. Comece a dissecção liberando as artérias carótidas de ambos os lados. Canule-os com bainhas 7-francesas.Em seguida, canule a veia jugular esquerda com uma bainha de 7 French para amostragem de sangue venoso. Em seguida, use tubos de coleta de sangue padrão para retirar amostras de sangue basais da linha venosa. Colete cinco e 2,9 mililitros de sangue em tubos coletores de plasma citrato e EDTA, respectivamente, e centrifugue imediatamente a 2.000 g por 15 minutos a quatro graus Celsius.Em seguida, colete 2,9 mililitros de sangue em um tubo de soro e deixe-o coagular por 30 minutos em temperatura ambiente, depo

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Research

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Medicine

Medicina

O trauma cirúrgico induz uma resposta inflamatória. As citocinas e ligandos endógenos são conhecidos para modular o tamanho do enfarte do miocárdio após isquemia e reperfusão. Apresentamos um modelo modificado fechado de tórax murino de isquemia e reperfusão utilizando pesos pendurados para minimizar os efeitos de toracotomia.

Um modelo fechado de tórax murino de isquemia do miocárdio e reperfusão

Este protocolo descreve o modelo suíno infarto do miocárdio (IM) usando um 90 min-peito fechado oclusão coronária balão da artéria descendente anterior esquerda (LAD), seguida de reperfusão. Além disso, o protocolo para vários parâmetros de resultados, tais como a função cardíaca, hemodinâmica, resistência microvascular e tamanho do infarto, também são apresentados.

Infarto do Miocárdio e Avaliação de Resultados Funcional em porcos

avaliação fiável e exacta resultado é a chave para a tradução de terapias pré-clínicos para o tratamento clínico. O presente artigo descreve como avaliar três parâmetros de resultado primário clinicamente relevantes de desempenho cardíaco e danos em um modelo de infarto do miocárdio porco aguda.

Avaliação do resultado principal em um modelo suíno de Infarto Agudo do Miocárdio

Este protocolo descreve um novo método para a comparação 3D do tecido do miocárdio todo-coração com a RM. Este é concebido para a avaliação precisa de injecções intramiocárdicos na zona de fronteira do enfarte de um modelo suíno crónica de enfarte do miocárdio.

Análise Tecidos do Miocárdio Whole-coração 3D

Buscamos estabelecer um modelo suíno de insuficiência cardíaca induzido pelo bloqueio da artéria circunflexo esquerda e ritmo rápido para testar o efeito e a segurança da administração intramiocárdia de células-tronco para terapias baseadas em células.

Estabelecendo um modelo suíno de insuficiência cardíaca pós-miocárdio para tratamento de células-tronco

O objetivo geral do presente estudo é apresentar as técnicas de indução do infarto do miocárdio (MI) e insuficiência cardíaca pós-miocárdio (pós-MI HF) em miniporcos de Göttingen adultos e a caracterização do modelo pós-MI HF em miniporcos de Göttingen em comparação com os porcos landrace.

Insuficiência cardíaca pós-miocárdio em oclusão coronariana de peito fechado/modelo de reperfusão em Miniporcos de Göttingen e Poros landrace

Aqui, apresentamos um protocolo para obter imagens de tomografia micro computada de alta resolução de corações integrais saudáveis e patológicos de grandes mamíferos com aprimoramento de contraste seletivo de colágeno.

Técnicas de preparação de tecidos para imagens de tomografia microcomputante aprimorada de contraste de grandes modelos cardíacos de mamíferos com doença crônica

Os modelos animais de infarto do miocárdio (MI) que emulam o processo natural da doença em humanos são cruciais para entender mecanismos fisiodicos e testar a segurança e eficácia de novas terapias emergentes. Aqui, descrevemos um modelo de suíno MI criado pela implantação de uma bobina de embolização percutânea.

Infarto do Miocárdio por implantação de bobina de embolização percutânea em um modelo de suíno

Neste trabalho, apresentamos um protocolo com foco no controle de qualidade da ligadura da artéria coronária descendente anterior, modificando tecnicamente o procedimento tradicional em ratos para pesquisa de isquemia-reperfusão miocárdica aguda.

Ligadura da Artéria Coronária Descendente Anterior para Pesquisa de Isquemia-Reperfusão: Aprimoramento do Modelo via Modificações Técnicas e Controle de Qualidade

O protocolo descreve um modelo de doação pós-morte circulatória de animais de grande porte (suínos), seguido de perfusão regional normotérmica toracoabdominal, que simula de perto o cenário clínico do transplante cardíaco e tem o potencial de facilitar estudos e estratégias terapêuticas.

Modelo de Doação em Animais de Grande Porte após Morte Circulatória e Perfusão Regional Normotérmica para Avaliação Cardíaca

Aprenda a padronizar procedimentos de amostragem em modelo suíno de infarto agudo do miocárdio. Esta técnica permite determinar com precisão o tamanho do infarto e coletar amostras sanguíneas para análise.

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Aprimoramento do modelo de suínos do miocárdio peito fechado pela padronização do tecido e os procedimentos de recolha de amostras de sangue

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