Name: Avaliação do lactato sanguíneo e Plasma insulina durante o exercício de alta intensidade por cateterização da veia Antecubital (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: Aprenda a coletar amostras sanguíneas da veia antecubital durante exercício de alta intensidade em ergômetro. Este protocolo permite monitorar lactato e insulina plasmática em tempo real.

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Os autores gostaria de reconhecer o Dr. P. Karagiannis para ler o jornal e Professor T. Hoyo para seu suporte técnico.

Todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo Comitê de ético local (Comité de ética Doshisha University: 15033) e em estrita conformidade com as normas estabelecidas pela declaração de Helsinque. Foi obtido o consentimento de todos os participantes. Participantes foram atletas recreacionais do sexo masculino (idade, 20,1 ± 1,2 anos; peso, 69.7 ± 6,2 kg; altura, 176.1 ± 5,8 cm; corpo gordura 13,6 ± 1,5% e VO2máx, 52.6 ± 6,6 mL/min1/kg1).
1. estabelecimento do protocolo de exercício
Nota: O presente estudo consistiu da avaliação de sangue hormonal e dinâmica de metabolitos por amostragem de sangue da veia antecubital durante um protocolo HIIE.
<ol><li>Peça o assunto para executar uma recepção calorosa com 5 min de ciclismo no ergometro em baixa intensidade. Após o aquecimento, deixe o assunto descansar por 5 min.</li>
	<li>Pedir o assunto para executar a seguinte HIIE em cicloergômetro a perna: três episódios de 30 exercícios de alta intensidade de s, separados por 4 min. de repouso (Figura 1). Nota: As 30 lutas s devem ser definidas a uma intensidade igual a 90% à média de potência de um teste de Wingate anteriormente realizada. Referem-se em outro lugar8 para obter uma descrição completa do teste de Wingate.</li>
	<li>Para calcular a carga de trabalho para as 30 lutas de s, use as seguintes equações: Trabalho = força x distância (equação 1) Força = massa x aceleração (equação 2) Trabalho = (massa x aceleração) x distância (equação 3) Nota: Neste modelo, a massa é a carga de trabalho (kg), e a aceleração é 9.81 m/s2. A distância é o diâmetro da roda (1,622 m). Porque a roda gira 3.7 rotação /peal cronometrado, a distância por rotação do pedal é 3,7 x 1.662. Além disso, porque a frequência de pedal é 90 rev/min1, nós temos que multiplicar uma distância pedal por 90. Trabalho = carga de trabalho x 9,81 x 3.7 x 1.622 x 90 (equação 4) Carga de trabalho = trabalho / (9,81 x 3.7 x 1.622 x 90) (equação 5)</li>
</ol>2. cateterismo
Nota: Tubos e Vacu deve ser rotulado previamente para evitar a perda de tempo.
<ol><li>Embrulhe um torniquete no braço selecionado para o cateterismo. Para fazer isso, coloque um elástico na parte de trás do braço escolhido. Estendendo-se a banda, faça um laço com a banda à volta do braço e amarre o elástico.</li>
	<li>Selecionar a veia antecubital visível e esterilizar a pele com álcool etílico ou álcool.</li>
	<li>Introduza a ponta da cânula esterilizada na veia em um ângulo aproximado de 15° com a pele. Nota: A cânula deve ser inserida de proximal para distal direção. Se a canulação é bem sucedida, um proc de sangue deve ser observado.</li>
	<li>Fixar a cânula com a mão e retire a agulha suavemente. Nota: Para manter o ângulo da agulha durante o exercício, tecidos de algodão podem ser usados entre a pele e a agulha. Corrigi essa estrutura com uma fita.</li>
	<li>Conecte um vacutainer com heparina e aspirado para a primeira amostra de sangue (cerca de 2,5 mL). Imediatamente após, refrigere a amostra de sangue, colocando-o em uma caixa de gelo para não mais de 40 minutos. Pedi um assistente ajuda, se os gáses de sangue vai ser analisado.</li>
	<li>Conectar um tubo ao cateter e injetar heparina em todo o comprimento do tubo para evitar a coagulação do sangue. Feche a borboleta.</li>
	<li>Usando a fita, estabilize o cateter. Certifique-se que neste ponto, a mobilidade do braço do sujeito não interfere com a coleta de sangue. Para confirmar esta condição, certifique-se de que a posição da agulha não é afectada por qualquer movimento.</li>
</ol>3. coletas de sangue
<ol><li>Remova a heparina usando um vacutainer até que haja apenas sangue no cateter. Quando o flashback de sangue é observada, colete a amostra conforme descrito na etapa 2.5.</li>
	<li>Após a coleta de amostra, injete heparina novamente o tubo de cateter para evitar coagulação do sangue. Após esta ação, etapa 2.5 pode ser repetida para coleta de amostras diversas.</li>
	<li>Após a última amostra é coletada, cuidadosamente remova o tubo de canulação e limpar a pele com álcool. Para evitar possível sangramento, peça o assunto para manter algodão esterilizado no lugar onde o cateterismo foi feito.</li>
	<li>Depois o sangue é colhido em tubos vacutainer, cuidadosamente, passar cerca de 1,5 mL de sangue para um tubo de 1,5 mL e manter os tubos em gelo.</li>
	<li>Lactato sanguíneo de medida do sangue restante usando um detector de lactato. No mesmo dia, obter o plasma, as amostras de sangue (cerca de 1,5 mL de sangue).</li>
	<li>Para a separação do plasma, Centrifugar as amostras de sangue por 5 min a 5000 x g a 4 oC e separar o sobrenadante em um novo tubo de 1,5 mL.</li>
	<li>Repeti a centrifugação mais uma vez para purificar o plasma.</li>
	<li>Após a separação do plasma, armazene as amostras em-80 oC até a análise de hormônio.</li>
	<li>Medir a insulina plasma usando um kit de ELISA como pelo fabricante protocolo (consulte Tabela de materiais).</li>
</ol>

<ol><li>Wahl, P., Mathes, S., Köhler, K., Achtzehn, S., Bloch, W., Mester, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+active+vs.+passive+recovery+during+Wingate-based+training+on+the+acute+hormonal%2C+metabolic+and+psychological+response%5BTitle%5D)+AND+%22Growth+Horm+IGF+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of active vs. passive recovery during Wingate-based training on the acute hormonal, metabolic and psychological response.</a> Growth Horm IGF Res. 23 (6), 201-208 (2013).</li>
<li>Wahl, P., Mathes, S., Achtzehn, S., Bloch, W., Mester, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+vs.+passive+recovery+during+high-intensity+training+influences+hormonal+response%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Active vs. passive recovery during high-intensity training influences hormonal response.</a> Int J Sports Med. 35 (7), 583-589 (2014).</li>
<li>Nalbandian, H. M., Radak, Z., Takeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+active+recovery+during+interval+training+on+plasma+catecholamines+and+insulin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sports+Med+Phys+Fitness%22%5BJournal%5D)">Effects of active recovery during interval training on plasma catecholamines and insulin.</a> J Sports Med Phys Fitness. , (2017).</li>
<li>Stolen, T., Chamari, K., Castagna, C., Wislff, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+Soccer%5BTitle%5D)+AND+%22Sport+Med%22%5BJournal%5D)">Physiology of Soccer.</a> Sport Med. 35 (6), 501-536 (2005).</li>
<li>Bangsbo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiology+of+soccer--with+special+reference+to+intense+intermittent+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand+Suppl%22%5BJournal%5D)">The physiology of soccer--with special reference to intense intermittent exercise.</a> Acta Physiol Scand Suppl. 619, 1-155 (1994).</li>
<li>MacInnis, M. J., Gibala, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+adaptations+to+interval+training+and+the+role+of+exercise+intensity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Physiological adaptations to interval training and the role of exercise intensity.</a> J Physiol. 595 (9), 2915-2930 (2017).</li>
<li>Emberts, T., Porcari, J., Dobers-Tein, S., Steffen, J., Foster, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+intensity+and+energy+expenditure+of+a+tabata+workout%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sports+Sci+Med%22%5BJournal%5D)">Exercise intensity and energy expenditure of a tabata workout.</a> J Sports Sci Med. 12 (3), 612-613 (2013).</li>
<li>Smith, J. C., Hill, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+energy+systems+during+a+Wingate+power+test%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Contribution of energy systems during a Wingate power test.</a> Br J Sports Med. 25 (4), 196-199 (1991).</li>
<li>Dotan, R., Bar-Or, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Load+optimization+for+the+Wingate+Anaerobic+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Appl+Physiol+Occup+Physiol%22%5BJournal%5D)">Load optimization for the Wingate Anaerobic Test.</a> Eur J Appl Physiol Occup Physiol. 51 (3), 409-417 (1983).</li>
<li>Carrasco-Benso, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+expresses+intrinsic+circadian+rhythm+in+insulin+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue expresses intrinsic circadian rhythm in insulin sensitivity.</a> FASEB J. 30 (9), 3117-3123 (2016).</li>
<li>Hatfield, D. L., Nicoll, J. X., Kraemer, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Circadian+Rhythm+on+Power%2C+Force%2C+and+Hormonal+Response+in+Young+Men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Strength+Cond+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of Circadian Rhythm on Power, Force, and Hormonal Response in Young Men.</a> J Strength Cond Res. 30 (3), 725-732 (2016).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Neste estudo, foi cateterizar a veia antecubital, e amostras de sangue foram coletadas com êxito durante um exercício de intervalo de alta. Como um exemplo do uso desta metodologia, amostras de sangue foram analisadas para lactato sanguíneo e (após a separação do plasma) para insulina de plasma. A principal vantagem deste método é que permite a coleta de amostras de sangue em suma períodos de tempo. Ao mesmo tempo, ele tem algumas limitações. Por exemplo, as modalidades de exercício limitado que permitem a sua utilização...

A medida de marcadores metabólicos e endócrinas durante a atividade física é de relevância para a compreensão das implicações fisiológicas de exercício diferentes modalidades. Durante algumas modalidades de exercício (por exemplo, intervalado de alta intensidade exercício (HIIE)), metabólitos do sangue e os níveis hormonais flutuam em relativamente pouco tempo,1,2,3.
Muitos esportes (ou seja, futebol, basquete e rúgbi) consistem em curtos períodos de exercício de alta intensidade, separados por baixo exercício intenso e/ou períodos passiva4,5. HIIE apresenta semelhanças com os esportes acima mencionados e, portanto, é amplamente utilizada como um método de treinamento para atletas de6. Além disso, devido à sua semelhança com esportes, HIIE serviu como modelo para estudo de fisiologia do exercício7. Colheita de sangue é fundamental para medir as variáveis fisiológicas, e frequentemente é usado para fins de investigação e a avaliação da condição física. No entanto, durante a HIIE de amostra de sangue pode ser tecnicamente difícil devido o curto período de tempo entre coleções de amostra. Como uma solução para este problema, apresentamos aqui um método para obter amostras de sangue por cateterismo venoso antecubital em suma períodos de tempo enquanto sujeitos executam HIIE.

<table><tbody><tr><td>Cicloergômetro</td><td>Monark</td><td>MONARK Ergomedic 874 E</td><td></td></tr><tr><td>Cateter</td><td>Terumo</td><td>SR-FF2032</td><td></td></tr><tr><td>Vacutainer</td><td>Terumo</td><td>PZ-D03</td><td></td></tr><tr><td>Tubo para cateter</td><td>Terumo</td><td>SP-PTW30L02</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Terumo</td><td>PF-10HF10UA</td><td></td></tr><tr><td>Kit ELISA de insulina</td><td>Abnova</td><td>ELISA KA0921</td><td></td></tr></tbody></table>

avaliação do lactato sanguíneo e plasma insulina durante o exercício de alta intensidade por cateterização da veia antecubital

Evaluation of Blood Lactate and Plasma Insulin During High-intensity Exercise by Antecubital Vein Catheterization

A medida de marcadores metabólicos e endócrinas durante a atividade física é de relevância para a compreensão das implicações fisiológicas de exercício diferentes modalidades. Durante alguns exercício modalidades (por exemplo, exercício intervalado de alta intensidade), metabólitos do sangue e os níveis hormonais em breve alteram períodos de tempo. No presente estudo, descrevemos um método para cateterismo da veia antecubital, que permite a coleta de várias amostras de sangue durante o exercício. Insulina e as concentrações de lactato venoso foram medidas durante o exercício de alta intensidade, pela aplicação do método descrito. O exercício consistia em surtos de três 30 s de exercício de alta intensidade, separados por 4 min de recuperação. Após o último período de recuperação, foi realizado um teste de Wingate. Amostras de sangue da veia antecubital foram obtidas antes e depois de cada 30 s e antes e depois do teste de Wingate. Como resultado, foi possível avaliar a insulina de plasma e variações de lactato do sangue venoso durante o exercício.

Como resultados representativos, usamos este protocolo para medir a variação de lactato e insulina de sangue em seis indivíduos durante um HIIE em um cicloergômetro. Potência de pico e potência média para o teste de Wingate foram 732 ± 120 e 549 ± 84 Watts, respectivamente. Potência média era usada para calcular a potência de saída (494 ± 75 Watts) durante os 30 episódios de s do HIIE.
A Figura 2 mo...

Aqui nós apresentamos um protocolo para obter várias amostras de sangue da veia antecubital durante o treinamento intervalado de alta intensidade. Este protocolo pode ser útil para a medição dos metabólitos do sangue e marcadores endócrinas durante o exercem.

Avaliação do lactato sanguíneo e Plasma insulina durante o exercício de alta intensidade por cateterização da veia Antecubital

The measurement of metabolic and endocrinal markers during physical activity is of relevance to understanding the physiological implications of different ...

O objetivo geral deste experimento é obter várias amostras de sangue venoso de um único sujeito durante o exercício em cicloergômetro. Essa medida pode ajudar a responder a questões-chave na fisiologia porosa e na variação hormonal e metabolizada durante diferentes modalidades de exercício. A principal vantagem dessa técnica é que várias amostras de sangue podem ser obtidas, mesmo durante o exercício.Demonstrando os procedimentos estará Rie Oosaki, que colabora com nosso laboratório. Para avaliar a dinâmica sanguínea, hormonal e metabólita da veia antecubital durante o protocolo de exercícios intervalados de alta intensidade, faça com que o sujeito primeiro realize um aquecimento de cinco minutos no ergômetro em baixa intensidade. Após um descanso de cinco minutos, faça com que o sujeito realize três intervalos de exercícios de alta intensidade de 30 segundos com 90% de intensidade na média de potência determinada a partir de um teste de Wingate realizado anteriormente, separados por quatro minutos de descanso por intervalo de exercício.Para a coleta de amostras de sangue, amarre um torniquete ao redor do braço selecionado para o cateterismo e identifique a veia antecubital. Esterilize a pele com álcool e insira a ponta de uma cânula esterilizada na veia antecubital e em um ângulo de aproximadamente 15 graus em relação à pele. Se a canulação for bem-sucedida, um flash de sangue deve ser observado.Depois de remover a agulha, prenda a cânula e coloque um lenço de algodão sob a agulha. Remova a heparina com um tubo de coleta vazio e conecte um novo recipiente para coleta de sangue à cânula. Aspirar cerca de 2,5 ml de sangue e fechar a borboleta, colocando imediatamente a amostra no gelo.Em seguida, injete heparina em todo o comprimento do tubo para evitar a coagulação da amostra de sangue e faça com que o sujeito inicie a próxima série de intervalos de exercícios. Após a coleta da última amostra, remova cuidadosamente o tubo de canulação e desinfete a pele com mais álcool. Pressione suavemente um pedaço de algodão estéril no local de coleta para minimizar o sangramento e transfira 1,5 ml de sangue de cada amostra para tubos individuais de microcentrífuga de 1,5 ml no gelo.Utilizar o detector de lactato, medir o lactato sanguíneo de cada amostra de sangue de 1 ml e centrifugar duas vezes as alíquotas de amostra de sangue de 1,5 ml. Transfira os sobrenadantes para novos tubos de mirocentrífuga e centrifugue as amostras novamente em sobrenadantes de transferência para novos tubos. Em seguida, armazene as amostras de plasma purificado a menos 80 graus Celsius até a análise da insulina plasmática por ELISA.Neste experimento representativo, os níveis plasmáticos de insulina diminuíram em todas as seis amostras de sangue periférico do paciente durante o primeiro e terceiro períodos de exercício de alta intensidade de 30 segundos, mas aumentaram durante o segundo intervalo nos períodos de recuperação. O lactato plasmático, no entanto, diminuiu durante o segundo e terceiro períodos de exercício intervalado de alta intensidade de 30 segundos e aumentou durante o primeiro intervalo de 30 segundos e períodos de recuperação. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de manter as amostras de sangue a não mais de 40 graus Celsius.Seguindo este procedimento, outros métodos como a Análise de Brodgar podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre as variações do nível de pH durante o exercício. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como coletar amostras de sangue consecutivas da veia antecubital durante o exercício em cicloergômetro.

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