Método de triagem para micropartículas em transfusões de plaquetas de rotina

O objetivo geral deste método é caracterizar as transfusões de plaquetas por meio de exames de rotina que podem ser realizados em centros de doadores ou bancos de sangue hospitalares para otimizar o uso desses hemoderivados para pacientes com sangramento ou câncer no sangue. Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave na medicina transfusional, como se uma transfusão de plaquetas contém plaquetas ativadas ou não ativadas. A principal vantagem dessa técnica é que ela fornece uma triagem rápida e precisa do conteúdo de micropartículas como um indicador comprovado de ativação plaquetária.

Indivíduos novos neste método precisarão aprender a coletar amostras de segmentos de tubos de sacos, porque isso não é feito rotineiramente no momento. Tivemos a ideia para esse método pela primeira vez quando vimos que as plaquetas de diferentes doadores tinham alta variabilidade no estado de ativação e isso parecia ter um impacto no paciente. Existem três métodos para obter amostra de um concentrado de plaquetas.

Para amostrar de uma bolsa, misture bem o conteúdo do saco de plaquetas com um movimento horizontal suave por cinco segundos, inclinando de ponta a ponta, cinco vezes. Abra o grampo para a bolsa, a bolsa é evacuada e encherá sozinha. Não é necessário encher a bolsa completamente, pois é necessária apenas uma amostra de 100 microlitros para o teste de Dispersão Dinâmica de Luz ou DLS.

Desconecte a bolsa do saco selando a quente a tubulação de conexão com um selador de tubo. Ao coletar amostras de tubos vazios, verifique se o tubo do saco de plaquetas foi armazenado vazio e se o bloco de tubos ainda está no lugar. Inspecione visualmente o tubo para verificar se não há concentrado de plaquetas no tubo.

Feche o decapador de tubos na tubulação, o mais próximo possível do bloco de tubulação, comprimindo as alças para apertar a tubulação entre os rolos enquanto mantém o decapador fechado, solte o bloco de tubulação. Puxe lentamente o removedor para baixo no tubo vazio, permitindo que o tubo se encha lentamente atrás do removedor. Continue até que a seção abaixo do decapante esteja totalmente inflada ou até que o decapador esteja a uma polegada da extremidade do tubo.

É fundamental comprimir as alças do decapador de tubos com firmeza e puxar lentamente o decapador para baixo do tubo. Assim que o ponto de parada for atingido com o decapante, use o selador de tubos para selar a quente a tubulação uma polegada acima do decapante. Agora, solte as alças do decapador de tubos manual.

Selar a quente novamente, uma a duas polegadas acima da vedação anterior para criar o segmento de teste. Em seguida, corte o segmento de teste da unidade de plaquetas. Este segmento será usado para testes DLS.

Ao fazer a amostragem de tubos que não estão vazios, pendure o saco verticalmente e solte o bloco de tubos, se estiver no lugar. Inspecione visualmente a tubulação para determinar se há aglomerados sólidos significativos. Se houver aglomerados sólidos, sele acima deles, de modo que não possam ser retirados do saco.

Em seguida, feche o decapador de tubos na tubulação, o mais próximo possível da extremidade selada da tubulação. Descasque o conteúdo do tubo, no saco, comprimindo as alças para apertar o tubo entre os rolos. Enquanto mantém o clampforça de aperto, mova o decapador de tubos ao longo do tubo em direção ao saco.

Remova o saco de plaquetas do gancho de suspensão e misture suavemente o saco por cinco segundos, inclinando-o de ponta a ponta cinco vezes, mantendo o removedor fechado. Pendure a bolsa verticalmente, mantendo o decapante fechado. Puxe lentamente o removedor para baixo no tubo vazio, permitindo que o tubo se encha lentamente atrás do removedor.

Continue até que a seção abaixo do decapante esteja totalmente inflada ou até que o decapante esteja a uma polegada da extremidade do tubo. Assim que o ponto de parada for atingido com o decapante, use o selador de tubos para selar a tubulação a quente, uma polegada acima do decapante. Depois de soltar o decapante, sele novamente uma a duas polegadas acima da vedação anterior para criar o segmento de teste.

Corte e descarte a última parte do tubo. Em seguida, corte o segmento de teste da unidade de plaquetas. Este segmento será usado para testes DLS.

Usando uma proteção contra respingos e uma tesoura limpa e seca, corte uma extremidade do tubo da bolsa ou segmento de teste. Encha imediatamente o capilar usando a ferramenta de amostragem para extrair a amostra diretamente da bolsa aberta ou segmento de tubo para o capilar. Sele a parte inferior do capilar preenchido empurrando-o suavemente para dentro do selante do tubo capilar, enquanto aplica uma torção suave e alguma pressão contra a bandeja.

Em seguida, desconecte a pipeta de volume fixo de 100 microlitros e a ponta do capilar, garantindo que o capilar permaneça firmemente embutido no selante do tubo capilar. Remova o capilar da bandeja de selante do tubo capilar e limpe com uma almofada de álcool isopropílico. Certifique-se de que nenhuma bolha de ar fique presa sacudindo suavemente a parte inferior do capilar.

Por fim, coloque o capilar no sistema DLS. Para começar, inicie o console, siga as instruções na tela sensível ao toque para fazer login e selecione a opção de teste de micropartículas ou MP para iniciar um novo teste DLS para medir o conteúdo de micropartículas de uma amostra de plaquetas. Insira as informações da amostra usando um leitor de código de barras ou insira-as manualmente.

Coloque o capilar no sistema DLS quando instruído e inicie o teste. Quando o teste estiver concluído, remova o sample do suporte capilar e descarte adequadamente os consumíveis de acordo com as diretrizes da instalação. Marque o saco de plaquetas com a cor correspondente ao resultado.

Por exemplo, laranja para não ativado e rosa para ativado. O Espalhamento Dinâmico de Luz mede a velocidade das partículas que se movem em suspensão pelo movimento browniano. Com base nas diferentes velocidades, as partículas pequenas se movem rapidamente e as partículas grandes se movem lentamente.

Essa tecnologia determina a distribuição de tamanho de uma amostra. O DLS determina que esta transfusão contém plaquetas não ativadas com base em menos de 15% de conteúdo de micropartículas. Realmente. A maioria das plaquetas discóides com muito poucas micropartículas eram visíveis por microscopia.

No entanto, uma transfusão de plaquetas diferente, que a olho nu parece exatamente igual à primeira bolsa, continha plaquetas ativadas, com base em mais de 15% de conteúdo de micropartículas. Nesta amostra, várias morfologias plaquetárias, pequenos agregados e muitas micropartículas foram visíveis por microscopia. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como coletar de forma não invasiva uma amostra de um saco de plaquetas, encher o capilar e testar o conteúdo de micropartículas da amostra, para permitir otimizar o uso de um inventário de plaquetas.

Ao tentar este procedimento, é importante misturar bem o saco para obter uma amostra boa e representativa. E seguindo esse procedimento, você pode fazer outros métodos, como a citometria de fluxo, para responder a perguntas sobre a origem celular das micropartículas. Uma vez dominada, essa técnica pode ser executada em cerca de dois minutos e meio.

Juntamente com o teste de cinco minutos, as transfusões de plaquetas podem ser caracterizadas em menos de oito minutos. Após seu desenvolvimento, essa técnica permitiu que os bancos de sangue hospitalares rastreassem seu inventário de plaquetas, tratassem pacientes de hematologia/oncologia apenas com plaquetas não ativadas e observassem uma redução nas transfusões de plaquetas utilizadas. Como dizemos, a transfusão mais segura é aquela que não é dada.

Embora esse método forneça informações sobre a caracterização de plaquetas antes da transfusão, ele também pode ser usado para testar o plasma rico em plaquetas diretamente dos doadores. As implicações dessa técnica se estendem ao tratamento de pacientes com câncer de sangue, pois eles se beneficiam de transfusões de plaquetas não ativadas, que reduzem o risco de se tornarem refratárias.