Name: Métodos de estadiamento Pupal períodos e medição de asa pigmentação da Drosophila guttifera (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Aprenda a estadiar períodos pupais e medir pigmentação de asas em Drosophila guttifera. Este método permite analisar desenvolvimento morfológico e processos de pigmentação em biologia evolutiva do desenvolvimento.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos a Sean B. Carroll e Thomas Werner para fornecer estoques voar, Naoyuki fusível para equipamentos, Byung Seok Jin por sua assistência na filmagem, Kiyokazu Agata para tutoria e Elizabeth Nakajima para edição inglesa. Este trabalho foi financiado pelo KAKENHI 17K 19427 e Takeda Science Foundation.

<ol><li>Carson, H. L., Hardy, D. E., Spieth, H. T., Stone, W. S. The evolutionary biology of the Hawaiian Drosophilidae. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCarson%2C+HL+%22Essays+in+evolution+and+genetics+in+honor+of+Theodosius+Dobzhansky%22">Essays in evolution and genetics in honor of Theodosius Dobzhansky</a>. Hecht, M. K., Steere, W. C. , Springer (Meredith Corporation). New York. 437-543 (1970).</li>
<li>Markow, T. A., O'Grady, P. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarkow%2C+TA+%22Drosophila%3A+a+guide+to+species+identification+and+use%22">Drosophila: a guide to species identification and use</a>. , Academic Press. New York. (2006).</li>
<li>Patterson, J. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPatterson%2C+JT+%22The+Drosophilidae+of+the+southwest%22">The Drosophilidae of the southwest</a>. 4313, University of Texas Publication. 7-216 (1943).</li>
<li>Setoguchi, S., Takamori, H., Aotsuka, T., Sese, J., Ishikawa, Y., Matsuo, T. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10164-014-0399-z">Sexual dimorphism and courtship behavior in Drosophila prolongata.</a> J Ethol. 32 (2), 91-102 (2014).</li>
<li>Werner, T., Jaenike, J. <a target="_blank" href="http://humanities.lib.rochester.edu/drosophilaguide/">Drosophilids of the Midwest and Northeast</a>. , River Campus Libraries, University of Rochester. Rochester. (2017).</li>
<li>Arnoult, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+and+diversification+of+fly+pigmentation+through+evolution+of+a+gene+regulatory+module%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Emergence and diversification of fly pigmentation through evolution of a gene regulatory module.</a> Science. 339 (6126), 1423-1426 (2013).</li>
<li>Camino, E. M., Butts, J. C., Ordway, A., Vellky, J. E., Rebeiz, M., Williams, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolutionary+origination+and+diversification+of+a+dimorphic+gene+regulatory+network+through+parallel+innovations+in+cis+and+trans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">The evolutionary origination and diversification of a dimorphic gene regulatory network through parallel innovations in cis and trans.</a> PLoS Genet. 11 (4), e1005136(2015).</li>
<li>Gompel, N., Prud'homme, B., Wittkopp, P. J., Kassner, V. A., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chance+caught+on+the+wing%3A+cis-regulatory+evolution+and+the+origin+of+pigment+patterns+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chance caught on the wing: cis-regulatory evolution and the origin of pigment patterns in Drosophila.</a> Nature. 433 (7025), 481-487 (2005).</li>
<li>Glassford, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-option+of+an+ancestral+Hox-regulated+network+underlies+a+recently+evolved+morphological+novelty%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Co-option of an ancestral Hox-regulated network underlies a recently evolved morphological novelty.</a> Dev. Cell. 34 (5), 520-531 (2015).</li>
<li>Koshikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancer+modularity+and+the+evolution+of+new+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Fly%22%5BJournal%5D)">Enhancer modularity and the evolution of new traits.</a> Fly. 9 (4), 155-159 (2015).</li>
<li>Koshikawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gain+of+cis-regulatory+activities+underlies+novel+domains+of+wingless+gene+expression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Gain of cis-regulatory activities underlies novel domains of wingless gene expression in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (24), 7524-7529 (2015).</li>
<li>McGregor, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+evolution+through+multiple+cis-regulatory+mutations+at+a+single+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Morphological evolution through multiple cis-regulatory mutations at a single gene.</a> Nature. 448 (7153), 587-590 (2007).</li>
<li>Tanaka, K., Barmina, O., Kopp, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+developmental+mechanisms+underlie+the+evolutionary+diversification+of+Drosophila+sex+combs%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Distinct developmental mechanisms underlie the evolutionary diversification of Drosophila sex combs.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (12), 4764-4769 (2009).</li>
<li>Werner, T., Koshikawa, S., Williams, T. M., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+novel+wing+colour+pattern+by+the+Wingless+morphogen%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of a novel wing colour pattern by the Wingless morphogen.</a> Nature. 464 (7292), 1143-1148 (2010).</li>
<li>Wittkopp, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraspecific+polymorphism+to+interspecific+divergence%3A+genetics+of+pigmentation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Intraspecific polymorphism to interspecific divergence: genetics of pigmentation in Drosophila.</a> Science. 326 (5952), 540-544 (2009).</li>
<li>Lawrence, P. A., Morata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartments+in+the+wing+of+Drosophila%3A+a+study+of+the+engrailed+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Compartments in the wing of Drosophila: a study of the engrailed gene.</a> Dev Biol. 50 (2), 321-337 (1976).</li>
<li>Bainbridge, S. P., Bownes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+the+metamorphosis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 66, 57-80 (1981).</li>
<li>Ashburner, M., Golic, K. G., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+A+Laboratory+Handbook%22">Drosophila: A Laboratory Handbook</a>. , 2nd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press. New York. (2005).</li>
<li>Fukutomi, Y., Matsumoto, K., Agata, K., Funayama, N., Koshikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pupal+development+and+pigmentation+process+of+a+polka-dotted+fruit+fly%2C+Drosophila+guttifera+%28Insecta%2C+Diptera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Pupal development and pigmentation process of a polka-dotted fruit fly, Drosophila guttifera (Insecta, Diptera).</a> Dev Genes Evol. 227 (3), 171-180 (2017).</li>
<li>Koshikawa, S., Fukutomi, Y., Matsumoto, K. Drosophila guttifera as a model system for unraveling color pattern formation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKoshikawa%2C+S+%22Diversity+and+evolution+of+butterfly+wing+patterns%3A+an+integrative+approach%22">Diversity and evolution of butterfly wing patterns: an integrative approach</a>. Sekimura, T., Nijhout, H. F. , Springer. New York. in press (2017).</li>
<li>True, J. R., Edwards, K. A., Yamamoto, D., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+wing+melanin+patterns+form+by+vein-dependent+elaboration+of+enzymatic+prepatterns%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila wing melanin patterns form by vein-dependent elaboration of enzymatic prepatterns.</a> Curr Biol. 9 (23), 1382-1391 (1999).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li>
<li>Izumitani, H. F., Kusaka, Y., Koshikawa, S., Toda, M. J., Katoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogeography+of+the+Subgenus+Drosophila+%28Diptera%3A+Drosophilidae%29%3A+evolutionary+history+of+faunal+divergence+between+the+Old+and+the+New+Worlds%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Phylogeography of the Subgenus Drosophila (Diptera: Drosophilidae): evolutionary history of faunal divergence between the Old and the New Worlds.</a> PLoS ONE. 11 (7), e0160051(2016).</li>
<li>Resh, V. H., Cardé, R. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aResh%2C+VH+%22Encyclopedia+of+Insects%22">Encyclopedia of Insects</a>. , 2nd ed, Academic Press. Burlington. (2009).</li>
<li>DeLean, A., Munson, P. J., Rodbard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+analysis+of+families+of+sigmoidal+curves%3A+application+to+bioassay%2C+radioligand+assay%2C+and+physiological+dose-response+curves%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Simultaneous analysis of families of sigmoidal curves: application to bioassay, radioligand assay, and physiological dose-response curves.</a> Am J Physiol. 235 (2), E97-E102 (1978).</li>
<li>Robertson, C. W. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jmor.1050590207/abstract">The metamorphosis of Drosophila melanogaster, including an accurately timed account of the principal morphological changes.</a> J Morphol. 59 (2), 351-399 (1936).</li>
<li>McKinney, M. L., McNamara, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcKinney%2C+ML+%22Heterochrony%3A+the+evolution+of+ontogeny%22">Heterochrony: the evolution of ontogeny</a>. , Plenum Press. New York. (1991).</li>
<li>Hardie, D. C., Gregory, T. R., Hebert, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+pixels+to+picograms%3A+a+beginners%27+guide+to+genome+quantification+by+Feulgen+image+analysis+densitometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">From pixels to picograms: a beginners' guide to genome quantification by Feulgen image analysis densitometry.</a> J Histochem Cytochem. 50 (6), 735-749 (2002).</li>
<li>Koshikawa, S., Miyazaki, S., Cornette, R., Matsumoto, T., Miura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+size+of+termites+%28Insecta%2C+Dictyoptera%2C+Isoptera%29+and+wood+roaches+%28Insecta%2C+Dictyoptera%2C+Cryptocercidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Genome size of termites (Insecta, Dictyoptera, Isoptera) and wood roaches (Insecta, Dictyoptera, Cryptocercidae).</a> Naturwissenschaften. 95 (9), 859-867 (2008).</li>
</ol>

Os autores não têm nenhum conflito de interesses.

Aqui descrevemos os protocolos para definição dos estágios pupal, removendo o casulo para observação detalhada, medindo durações dos estágios pupal e a medida da intensidade das manchas de preto em uma ala em d. guttifera. Esses protocolos podem ser aplicados para muitos Drosophila e relacionados a moscas espécies, especialmente com pigmentação de asa.
Observação em profundidade e descrição de eventos mais detalhados do desenvolvimento permitiria mais subdivisão dos estágios....

Alguns dos traços morfológicos da drosófila são diversificados entre espécies1,2,3,4,5. Vamos aproximar-na questão da diversidade morfológica como surge, comparando os mecanismos de geração destas morfologias. Exemplos de tais morfologias são tricomas larvas, pentes de sexo adulto, aparelho genital externo, pigmentação abdominal e asa pigmentação6,7,8,9, 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15. para estudar diferenças morfológicas entre os adultos, observação e análise da fase de pupa são importantes, porque o destino dos traços adultos é determinado na fase larval atrasado e subsequente morfogênese continua durante o período pupal.
Em estudos de biologia do desenvolvimento da Drosophila melanogaster, "horas APF" (horas depois da formação de pupa) é o método comum para indicar uma fase de pupa,16. Este sistema emprega o tempo absoluto após formação de pupa e é muito conveniente para experimentos de rotina. No entanto, velocidade do desenvolvimento pode diferir entre pupas e pode ser afectada por pequenas diferenças genéticas, epigenéticas ou microenvironmental, e, portanto, tendo o mesmo tempo absoluto após formação pupal não garante que as pupas são ao mesmo estágio do desenvolvimento. Em muitos casos, estágios definidos por características morfológicas são preferíveis para comparar vários indivíduos. Especialmente, uma comparação entre espécies requer preparo preciso e a comparação entre os estágios (homólogos) correspondentes.
Reconhecido de Bainbridge e Bownes17 20 estágios pupal (P1 a P15(ii)) baseada em características morfológicas das pupas de Drosophila melanogaster . Esta plataforma é o mais utilizado sistema de preparo do desenvolvimento morfológico18. Em um estudo anterior, realizamos encenando pupal de Drosophila guttifera para estabelecer uma base para asa pigmentação estudos19. D. guttifera tem um padrão de bolinhas pretas nas asas e é uma das espécies modelo para asa pigmentação formação20. Embora nós referidos os critérios morfológicos descritos na Bainbridge e 'Bownes pesquisa17, medimos diretamente durações de palco por observações serial19, em vez de usando Bainbridge e 'Bownes estimativa de durações de palco observava a frequência. Aqui descrevemos o método de preparo pupal e medição de durações dos estágios pupal de Drosophila usado em Fukutomi et al.19.
Para estudar o mecanismo do desenvolvimento de pigmentação de asa, precisamos saber quando nas fases de pupa ou adultos a pigmentação ocorre. Fukutomi et al. 19 quantificada densidades ópticas (ODs) de pigmentação durante estágios pupal e adultos por análise de imagem de imagens de asa. A pigmentação da drosófila asas é pensada para ser causado pelo acúmulo de melanina negra21. Para quantificação de ODs, foram utilizadas imagens de escala de cinza e ImageJ software (https://imagej.nih.gov/ij/)22 . Para reconhecer e quantificar a pigmentação local-específicos (ΔOD), subtraímos o OD fora de um local o OD dentro de um lugar. Para tornar este método reprodutível e objetiva, os locais de medição de OD devem ser determinados utilizando as veias da asa como Marcos. Neste artigo, descrevemos detalhadamente este método de quantificação de pigmentação de asa em Drosophila guttifera.

<table><tbody><tr><td>Drosophila guttifera</td><td>The Drosophila Species Stock Center na UC San Diego</td><td>15130-1971.10</td><td>Drosophila guttifera, uma espécie de mosca-da-fruta usada neste artigo</td></tr><tr><td>Frasco de plástico</td><td>Hightech</td><td>MKC-30</td><td>Frasco de plástico, para manutenção de estoque</td></tr> de <tr><td>moscas Buzz plugs frascos e tampas de garrafas para frascos de vidro</td><td>Fisher Scientific</td><td>AS-271</td><td>Tampão de celulose, para manutenção de estoque de moscas</td></tr><tr><td>Açúcar macio branco</td><td>Mitsui Sugar</td><td>J-500g</td><td>Açúcar macio branco, para alimentos padrão de fubá/açúcar/fermento/ágar</td></tr><tr><td>Farinha de milho</td><td>Nippon Flour Mills</td><td>F</td><td>Farinha de milho, para alimentos padrão de fubá/açúcar/fermento/ágar</td></tr><tr><td>Grãos de milho - C</td><td>Nippon Flour Mills GC</td><td></td><td>Grãos de milho - C, para alimentos padrão de fubá/açúcar/fermento/ágar</td></tr><tr><td>Ágar em pó</td><td>Matsuki Kanten Sangyo</td><td>No.602</td><td>Ágar em pó, para alimentos padrão de fubá / açúcar / fermento / ágar</td></tr><tr><td>Fermento de cerveja seca</td><td>Asahi Food & Healthcare</td><td>Y2A</td><td>Levedura de cerveja seca, para alimentos padrão de fubá/açúcar/fermento/ágar</td></tr><tr><td>P-hidroxibenzoato de butila</td><td>Nacalai Tesque</td><td>06327-02</td><td>P-hidroxibenzoato de butilo, para alimentos padrão de fubá/açúcar/fermento/ágar</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Wako</td><td>057-00456</td><td>Etanol, para alimentos padrão de fubá/açúcar/fermento/ágar</td></tr><tr><td>Microtubo de fundo plano</td><td>Ina Optica</td><td>CF-0150</td><td>microtubo de 1,5 mL, para coletor de pupas</td></tr><tr><td>CAPSULEFUGE</td><td>Tomy</td><td>PMC-060</td><td>Mini microcentrífuga, para coleta de pupas</td></tr><tr><td>Esterilizado Schale NB</td><td>Sansei Medical</td><td>01-013</td><td>Placa de Petri de plástico (diâmetro 90 mm x altura 15 mm)</td></tr><tr><td>Rack de tubo de soro</td><td>Iwaki</td><td>9796-050</td><td>Usado como uma câmara úmida, para observação de pupa</td></tr><tr><td>Corning Falcon Easy-Grip placa de cultura de tecidos</td><td>Corning</td><td>353001</td><td>Placa de Petri de plástico (diâmetro 35 mm x altura 10 mm)</td></tr><tr><td>Placa de cultura de tecidos padrão Falcon</td><td>Corning</td><td>353002</td><td>Placa de Petri de plástico (diâmetro 60 mm x altura 15 mm)</td></tr><tr><td>Pino</td><td>Kokuyo</td><td>51233709</td><td>Alfinete, para fazer furos na tampa do microtubo</td></tr><tr><td>Estereomicroscópio</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td>Estereomicroscópio, para observação morfológica</td></tr><tr><td>Câmera digital</td><td>Olympus</td><td>DSE-330-A</td><td>Câmera digital, para imagem</td></tr><tr><td>NICETACK fita dupla face</td><td>Nichiban</td><td>NW-15SF</td><td>Fita dupla face, para remoção de pupário</td></tr><tr><td>Dumont #5 fórceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td>Fórceps, para remoção de pupário</td></tr><tr><td>Van Gogh VISUAL Pincel</td><td>Talens Japão</td><td>GWVR-#5/0</td><td>Pincel, para remoção de pupário</td></tr><tr><td>Greiner CELLSTAR 12 poços placa de cultura de células</td><td>Merck</td><td>665-180</td><td>Placa de cultura de células de 12 poços, para medir a duração dos períodos de pupa</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Wako</td><td>191-01665</td><td>NaCl, para PBS</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Nacalai Tesque</td><td>285-14</td><td>KCl, para PBS</td></tr><tr><td>Na2HPO4&middot; 12H2O</td><td>Wako</td><td>196-02835</td><td>Na2HPO4&middot; 12H2O, para PBS</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Nacalai Tesque</td><td>28721-55</td><td>KH2PO4, para PBS</td></tr><tr><td>Filtro de densidade neutra escalonada (ND) 0,04 - 3,0</td><td>Edmund Optics</td><td>64-384</td><td>Filtro de densidade escalonada, para calibração de medição de pigmentação</td></tr><tr><td>Software ImageJ</td><td>NIH</td><td>1.8.0-101</td><td>Software ImageJ, para medição da intensidade de manchas pretas em uma asa (https://imagej.nih.gov)</td></tr><tr><td>FINE FROST lâmina de vidro</td><td>Matsunami Glass Ind</td><td>FF-001</td><td>Lâmina de vidro, para medição da intensidade de manchas pretas em uma asa</td></tr><tr><td>Vidro de cobertura de microscópio quadrado 18 x 18</td><td>Matsunami Glass Ind</td><td>C018181</td><td>Lamínula, para medição da intensidade de manchas pretas em uma asa</td></tr></tbody></table>

métodos de estadiamento pupal períodos e medição de asa pigmentação da drosophila guttifera

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Diversificadas espécies de Drosophila (mosca de fruta) fornecem oportunidades para estudar os mecanismos de desenvolvimento e alterações genéticas responsáveis por mudanças evolutivas. Em particular, a fase adulta é uma fonte rica de traços morfológicos para comparação interespecífica, incluindo comparação de pigmentação de asa. Para estudar as diferenças de desenvolvimento entre as espécies, a observação detalhada e preparo adequado são necessários para comparação precisa. Aqui descrevemos os protocolos para preparo dos períodos pupal e quantificação de pigmentação da asa de uma mosca de fruta bolinhas, Drosophila guttifera. Primeiro, descrevemos o método por observação morfológica detalhada e definição dos estágios pupal baseado em morfologias. Este método inclui uma técnica para remover o casulo, que é o caso de quitinoso exterior da pupa, para permitir a observação detalhada de morfologias pupal. Em segundo lugar, descrevemos o método para medir a duração da fase pupal definido. Finalmente, descrevemos o método para a quantificação de pigmentação de asa com base na análise de imagem usando imagens digitais e o software ImageJ. Com esses métodos, podemos estabelecer uma base sólida para a comparação de processos de desenvolvimento de traços adultos durante estágios pupal.

O período pupal de d. guttifera é dividido em 17 estágios (P1 - P15(ii); imagens de representante de três estágios (P1, P5 - 6, P10) são mostrados a Figura 3e todas as 17 fases estão ilustradas na Figura 4). Embora Bainbridge e Bownes17 reconhecido 20 fases no d. melanogaster, alguns destes estágios não poderiam ser aplicado a d. guttifera. A ordem dos dois eventos do desenvolvim...

Protocolos para encenar o período pupal e medição de pigmentação de asa de Drosophila guttifera são descritos. Preparação e quantificação de pigmentação fornecem uma base sólida para estudar os mecanismos do desenvolvimento dos traços adultos e habilitar interespecífica comparação do desenvolvimento de traço.

Métodos de estadiamento Pupal períodos e medição de asa pigmentação da Drosophila guttifera

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary ...

O objetivo geral deste experimento é estadiar períodos de pupa e medir a pigmentação das asas de Drosophila guttifera. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da biologia evolutiva do desenvolvimento, como a forma como os padrões de pigmentação são desenvolvidos em Drosophila. A principal vantagem desta técnica é que podemos obter informações detalhadas sobre o desenvolvimento morfológico e o processo de pigmentação.Embora este método possa fornecer informações sobre o desenvolvimento morfológico e o processo de pigmentação de Drosophila guttifera, ele pode ser aplicado a outras espécies de Drosophila. Para iniciar a remoção do pupário, cole um pedaço de fita dupla-face em um pedaço de papel toalha. Coloque uma pupa na fita dupla-face, com o lado ventral para cima.Localize o espaço entre o lado anterior do pupário e a pupa interna. Segure e remova o pupário ao redor dessa lacuna, usando uma pinça. E exponha o lado anterior da cabeça da pupa.Insira a ponta de uma pinça movendo-a paralelamente ao eixo ântero-posterior. Levante a ponta da pinça para quebrar localmente o pupário. Repita esta ação até que a quebra atinja a parte posterior do pupário.Certifique-se d

methods-for-staging-pupal-periods-measurement-wing-pigmentation

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Variação fenotípica para características podem resultar de mutações em cis-regulatórias elemento (CRE) seqüências que controlam os padrões de expressão gênica. Métodos derivados para uso em Drosophila melanogaster pode comparar quantitativamente os níveis de padrões espaciais e temporais de expressão genética mediada por variantes modificadas ou que ocorre naturalmente CRE.

Comparação quantitativa de Cis-Regulamentação elemento (CRE) Atividades em transgênicos Drosophila melanogaster</em

Um método para immunostain e visualizar os órgãos chordotonal em larvas e pupas...

Visualização de Propriocepção em<em&gt; Drosophila</em&gt; As larvas e pupas

Este artigo descreve uma técnica para remover o pupário de um inseto, mantendo a pupa interna intacta e, portanto, adequada para uma investigação mais aprofundada. O protocolo de exemplo mostra o procedimento com Drosophila guttifera; no entanto, esta técnica é aplicável a outras espécies de Drosophila.

Remoção de insetos puparium: um método para investigação de pupas

Este trabalho demonstra o uso de um microscópio confocal de varredura rápida para o comportamento das células de imagem diretamente através do pupário. Ao deixar o caso de pupa intacto, este método permite a observação e medição de processos celulares dinâmicos numa fase de desenvolvimento de Drosophila que é difícil de estudar directamente.

Imagem Através do Pupal Caso de<em&gt; Drosophila melanogaster</em

A capacidade de detectar com precisão as transcrições ou proteínas em Drosophila tecidos é fundamental para estudar a sua abundância e relacionadas com o processo de desenvolvimento de localização. Aqui está a descrição de um procedimento simples para dissecar as asas pupal. Estas asas podem ser usadas como amostras em várias técnicas (imuno-histoquímica, ensaio PCR, etc.).

Um método rápido e eficiente para dissecar asas Pupal de Drosophila apropriado para Immunodetections ou ensaios PCR

O ovário de Drosophila é um sistema excelente modelo para estudar o desenvolvimento de nicho de células-tronco. Embora métodos para dissecando larvas e adultos ovários foram publicados, dissecções de ovário pupal requerem diferentes técnicas que não tenham sido publicadas em detalhe. Aqui nós esboçamos um protocolo para dissecar, coloração e montagem ovários pupal.

Dissecção e coloração dos ovários Pupal drosófila

Aqui, apresentamos um método fácil de usar e versátil para executar ao vivo de imagens de processos de desenvolvimento em geral e músculo-tendão morfogênese em particular na vida pupas de Drosophila .

Na Vivo Imagem latente da morfogênese músculo-tendão em pupas de Drosophila

Este protocolo é projetado avaliar a viabilidade de Drosophila em cada estágio desenvolvente, do embrião ao adulto. O método pode ser utilizado para determinar e comparar a viabilidade de diferentes genótipos ou condições de crescimento.

Um método direto e simples para avaliar a viabilidade da Drosophila melanogasterdo embrião ao adulto

Este protocolo é projetado para a imagem e análise da dinâmica da orientação celular e crescimento tecidual na epitélia abdominal Drosophila à medida que a mosca-das-frutas sofre metamorfose. A metodologia aqui descrita pode ser aplicada ao estudo de diferentes estágios de desenvolvimento, tecidos e estruturas subcelulares em Drosophila ou outros organismos modelo.

Imagem e Análise da Dinâmica de Orientação e Crescimento tecidual na Epitélia Drosophila em Desenvolvimento durante os estágios pupal

Aqui, um protocolo é apresentado para imagens ao vivo de longo prazo da perna de Drosophila durante o estágio de pupa, envolvendo a remoção completa do pupário. Este protocolo também pode ser aplicado a outros tecidos.

Imagem ao vivo de longo prazo do desenvolvimento da perna de pupa de Drosophila após a remoção do pupário

Drosophila é um modelo poderoso para entender os mecanismos fundamentais da miogênese. Este protocolo para a dissecção e preparação de hemissecções de tórax permite a análise microscópica do músculo de voo indireto dos estágios pupal e adulto. Este protocolo permite imagens confocais da morfologia celular, localização de proteínas, estrutura muscular e vários outros aspectos da miogênese.

Dissecção de músculos de voo indireto de Drosophila melanogaster para abordagens de microscopia

Aprenda a estadiar períodos pupais e medir pigmentação de asas em Drosophila guttifera. Este método permite analisar desenvolvimento morfológico e processos de pigmentação em biologia evolutiva do desenvolvimento.

Métodos de estadiamento Pupal períodos e medição de asa pigmentação da Drosophila guttifera

Explorar mais vídeos