Name: Utilizando o ultra-som de alta resolução para o aparecimento de Tumor de Monitor e crescimento em modelos de câncer pancreático geneticamente modificados (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Aprenda a usar ultra-som de alta resolução para detectar e monitorar tumores pancreáticos em modelos de camundongos geneticamente modificados KPC. Este método permite avaliar características tumorais em pesquisas oncológicas.

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Esta pesquisa foi apoiada pelo Deutsche Krebshilfe (grupo de Eder Max para AN: 110972), uma bolsa de tese de doutorado de DGVS (para SMB) e uma bolsa de Else Kröner Fresenius-Fundação- (para RGG) na Universidade Medical Center Goettingen. Agradecemos a Jutta Blumberg e Ulrike Wegner para assistência técnica especializada. Agradecemos também a todos os técnicos de animais nas instalações da Universidade Medical Center Goettingen para mouse mantendo animais. Todos os experimentos foram realizados de acordo com normas de bem-estar animal alemão.

Este protocolo está em conformidade com as orientações de cuidados com animais na universidade médica centro de Goettingen, Alemanha (33,9-42502-04-15/2056). Dependendo dos requisitos específicos de cada animal comissões de inquérito, algumas das etapas do protocolo podem ser modificadas em conformidade.
1. abdominal palpação dos ratos KPC
<ol><li>Para evitar exames desnecessários ultra-som, palpe o abdome do mouse para identificar os ratos que possivelmente podem suportar uma lesão intraabdominal e posteriormente devem ser submetidos a ecografia abdominal.<ol>
<li>Realize a palpação abdominal semanais a partir de 8 semanas de idade, no modelo do mouse KPC. Ultra-som de alta resolução também pode ser aplicada em modelos de tumor transplantado (por exemplo, orthotopics) ou outros modelos de rato geneticamente modificados. Nota: Dependendo do tumor cinética e estudo objetivo (estudo de prevenção, estudo de intervenção terapêutica), detecção de tumores muito pequenos (1-2 mm) é viável para o aparecimento de tumor do monitor antes de tumores podem ser palpados.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloque o mouse sobre a grade da gaiola e delicadamente Levante o mouse pela cauda e palpar o abdome suavemente indo para cima e para baixo com índice e o polegar da mão não-fixação (Figura 1).</li>
	<li>Se o mouse tolera palpação suave, vá aumentando lentamente a pressão. Uma maior resistência pode ser facilmente detectada no abdômen superior e inferior. Às vezes, difícil fezes podem ser erroneamente interpretadas como um tumor em massa.</li>
</ol>2. preparação do espaço de trabalho
<ol><li>Proporcionar espaço pelo menos três unidades de trabalho diferentes: área de pré-digitalização, digitalização gaiola de palco e recuperação. Material necessário são representados na Figura 2.</li>
	<li>Limpe a placa principal de trabalho (por exemplo, com 70% etanol) e ligue a plataforma de aquecimento antes da digitalização (Figura 3). Certifique-se que é atingida a temperatura de alvo de 38-40 ° C, antes do primeiro mouse é transferido.</li>
	<li>Ligue a máquina de ultra-som e criar uma nova pasta para os dados adquiridos (Figura 4). A configuração de modo-B é aplicada para a imagem latente abdominal. Além disso, certifique-se que o transdutor abdominal está conectado a porta ativa da máquina. Fixe a cabeça do transdutor na parte superior da fase de trabalho usando o transdutor de sistema de montagem.</li>
	<li>Preparar uma gaiola de recuperação em uma placa de aquecimento ou esteira térmica (ou lâmpada de aquecimento de uso) para garantir a termorregulação pós-processual e a rápida recuperação dos ratos digitalizados. Coloque uma camada fina de tecido como almofada no fundo da jaula para evitar a aspiração do fundamento com o risco de asfixia (Figura 5).</li>
</ol>3. anestesia por inalação
<ol><li>Proceda ao colocar um rato na câmara de indução. Abra a válvula de fluxo do gás portador (1 L/min de oxigênio ou ar) e definir a concentração de isoflurano para 4%, permitindo uma lentamente crescente saturação da câmara de indução. Certifique-se que isoflurano adequado eliminação (filtragem de passivo ou ativo) está no lugar. Após cerca de 2-4 min o mouse será geralmente sob sedação profunda.<ol>
<li>Manter a sedação através da administração de 2% de isoflurano através do cone de nariz na fase de trabalho.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Transferi com cuidado o animal da câmara de indução para a fase de trabalho. Verifique se o cone de nariz para um fluxo constante de gás. Colocar o focinho de rato no nariz cone de saída de linha de anestesia. A posição normal para a digitalização inicial é a posição supina. O mouse também pode ser colocado de lado esquerdo ou direito para aumentar a visibilidade da cabeça do pâncreas ou tumores da cauda (Figura 6).</li>
	<li>Embora ecografia abdominal não é doloroso por si, realize o teste do beliscão de pé como um indicador para uma condição livre de dor e estado profundamente anestésico. Se o mouse é ainda ativo ou movimentando-se ativamente, retransferência o animal de volta na câmara de indução para indução repetida e prolongada.</li>
	<li>Use pomada de proteção para evitar lesões da córnea devido a perda de líquidos.</li>
	<li>Durante a anestesia, use um sistema de monitoramento. No entanto, as ECG e temperatura retal não é regularmente usado para digitalização de ecografia abdominal. Importante, ratos perdem a capacidade de termorregulação sob anestesia. Portanto, observe de perto os sinais clínicos para hipotermia ou respiratória como ofegante ou apneia do sono. Se qualquer sintoma é óbvio paragem isoflurano e lugar o rato na gaiola recuperação imediatamente.</li>
</ol>4. o ultra-som configurações
<ol><li>Ligue o sistema de ultra-som, como descrito por instruções do fabricante. Verifique se que a configuração principal é colocada na imagem geral com o pacote abdominal ativado. Normalmente B-modo-imagem é usado para aquisição de dados como um padrão.</li>
	<li>Obter uma qualidade de imagem otimizada com os seguintes parâmetros: frequência de 40 MHz, 2D-ganho 25-30 dB, profundidade de 10 mm, 10 mm, largura da imagem da imagem 3 zonas focais com centro entre 3 a 6 mm.</li>
</ol>5. Mouse preparação
<ol><li>Fixe a extremidade superior e inferior, usando fita adesiva. Ser tão cuidadoso quanto possível para evitar qualquer prejuízo ao animal devido a fixação (Figura 7).</li>
	<li>Remova todas as peles abdominal usando eletrônicas tosquiadeiras do animal de estimação. Devido a textura da pele, comece da parte inferior do abdome até a caixa torácica. Cuide ao processus xiphoideus para evitar lesões de pele nesta área. Nota: Pelo de rato reflete ondas de ultra-som e diminui a visibilidade.</li>
	<li>Use creme depilatório para realizar uma preparação de pele otimizada e completa remoção de pelo. Administre uma fina camada de creme sobre o abdômen depilado usando pontas de algodão (Figura 8). Retire o creme de leite (após 30 s ou mais tarde, dependendo do creme usado) com tecidos secos, seguidos de muita água para remover completamente todos os remanescentes (Figura 9, Figura 10, Figura 11). Restos de creme podem causar irritações de pele e mucosa após o ultra-som e, portanto, podem afetar a saúde.</li>
	<li>Para garantir a adequada verificação condições aplicam-se abundância de gel de ultra-som para o abdômen (Figura 12). Geralmente, gel de ultra-som quente é usado para minimizar a hipotermia para o mouse.</li>
	<li>Manualmente, aplique uma camada fina de gel de ultra-som na cabeça do transdutor. Execute um teste tocando na ponta do transdutor com o entalhe. Na tela de um sinal no lado superior esquerdo pode ser visto se o transdutor é posicionado corretamente.</li>
</ol>6. abdominal ultra-som
<ol><li>Ajuste o transdutor sobre o abdômen, usando a pressão firme. Compactação pesada do abdômen do mouse pode levar a comprometimento respiratório ou circulatório e deve ser evitada.</li>
	<li>Varredura para cima e para baixo. Ajuste o quadro de plataforma de trabalho e as rodas para os eixos x e y.</li>
	<li>Como o primeiro passo identifica ambos os rins. Geralmente aparecem como estruturas homogêneas de hyperechogenic na parte inferior do abdome. O conectado renalis veia pode ser facilmente encontrado que leva ainda mais para a veia cava inferior (Figura 13).</li>
	<li>Use o lienalis veia serve como embarcação de Marco para o pâncreas. Tentativa de distinguir entre renalis veia e veia lienalis. A detecção da veia lienalis o pâncreas pode ser localizado exatamente. O pâncreas normal é bastante uma membrana que se propagam através da cavidade abdominal do que uma estrutura sólida (Figura 14 e Figura 15).</li>
</ol>7. no pâncreas Tumor deteção e avaliação de Volume
<ol><li>Identifica lesões no pâncreas de todas as estruturas circundantes. Eles geralmente aparecem como massas de tecido não-homogênea de redondas ou alongadas Hipoecoica (Figura 16). O tumor é geralmente firme e dificilmente pode ser comprimido pela cabeça de varredura. Nota, de vez em quando pode ser difícil de distinguir claramente entre um tumor e um loop de intestino. Preste atenção para o peristaltismo intestinal que não deve ser observada em tumores pancreáticos.</li>
	<li>Tela de deteção de tumor acima e para baixo para obter uma impressão do tamanho total e medir o diâmetro maior usando o compasso de calibre de ultra-som. Uma vez que encontra-se uma imagem adequada, congelar a tela e use a ferramenta ' medida ' para determinar com precisão o tamanho do tumor. Nota, para uso posterior, será importante diferenciar se um tumor é localizado na cabeça do pâncreas, corpo ou cauda.</li>
	<li>Antes de mudar de volta para o modo de viver, certifique-se de salvar fotos para registrar o trabalho. Observe, enquanto a congelar a imagem, que é possível que a roda de ajuste é liberada, e a sonda de ultra-som é ainda mais pressionada no abdômen de rato. Portanto, corrigi o ajuste da compressão antes de alterar o modo para congelar.</li>
	<li>Depois de terminar a medição do primeiro avião gire a cabeça de varredura de 90º em posição longitudinal (Figura 17), ou vire o mouse para o lado, para detectar a expansão longitudinal dos tumores. Alguns tumores podem exigir mudando a posição do mouse para visibilidade adequada. Para tumores da cauda do pâncreas, o mouse pode ser colocado de lado direito (Figura 10 e Figura 19), de tumores pancreáticos de cabeça no seu lado esquerdo (Figura 11 e Figura 20).</li>
</ol>8. quantificação do Volume do Tumor
Nota: Um dos objectivos principal de todos os esforços é a correta determinação do volume do tumor. Embora existam várias técnicas disponíveis um método de cálculo, incluindo a fórmula de um elipsoide é preferencial para a Universidade Medical Center Goettingen.
<ol><li>Equipado com todos os três diâmetros anteriormente obtidos, calcule o volume aproximado do tumor correspondente (Figura 21).</li>
	<li>Alternativamente, use um sistema de motor da cabeça de varredura para realizar uma verificação automatizada da região com o cálculo dos volumes subsequentes e 3-D-reconstrução de tumor.</li>
</ol>9. recuperação
<ol><li>Após a digitalização, remova com cuidado a fita adesiva de todos e cuidadosamente remover todo o gel ultrasom com pano seco.</li>
	<li>Transferi com cuidado o mouse para a gaiola de recuperação ( Figura 21). Evite qualquer tecido cobrindo o rosto de mouse´s que pode causar deficiência respiratória. Uma posição de lado para recuperação deve ser preferida.</li>
</ol>

<ol><li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li>
<li>Olive, K. P., Politi, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOlive%2C+KP+%22Translational+therapeutics+in+genetically+engineered+mouse+models+of+cancer%22">Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer</a>. (2), Cold Spring Harbor. 131-143 (2014).</li>
<li>Westphalen, C. B., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mouse+models+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+Cancer+Journal%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer.</a> The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).</li>
<li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li>
<li>Frese, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((nab-Paclitaxel+potentiates+gemcitabine+activity+by+reducing+cytidine+deaminase+levels+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).</li>
<li>Paredes, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-invasive+method+of+quantifying+pancreatic+volume+in+mice+using+micro-MRI%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI.</a> PLoS One. 9 (3), e92263(2014).</li>
<li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li>
<li>Aung, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunotargeting+of+Integrin+alpha6beta4+for+Single-Photon+Emission+Computed+Tomography+and+Near-Infrared+Fluorescence+Imaging+in+a+Pancreatic+Cancer+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model.</a> Molecular Imaging. 15, (2016).</li>
<li>Akladios, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+microCT+structural+imaging+to+preclinical+evaluation+of+hepatocellular+carcinoma+chemotherapeutics+on+orthotopic+graft+in+ACI+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+du+Cancer%22%5BJournal%5D)">Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats.</a> Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).</li>
<li>Neesse, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CTGF+antagonism+with+mAb+FG-3019+enhances+chemotherapy+response+without+increasing+drug+delivery+in+murine+ductal+pancreas+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science+USA%22%5BJournal%5D)">CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).</li>
<li>Sastra, S. A., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+murine+pancreatic+tumors+by+high-resolution+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Com este protocolo, é fornecida uma descrição detalhada para quantificação dos tumores pancreáticos, utilizando imagens de ultra-som abdominal de alta resolução em modelos do rato geneticamente modificados. Recentemente, Sastra et al . publicaram uma descrição detalhada como quantificar tumores pancreáticos em modelos do rato, mas não visualizadas instruções sobre a preparação e manipulação como pré-requisito para todos os novos passos foram mostrados11. O objetivo geral do presente manus...

Modelos de rato geneticamente ganharam uma importância crescente em pesquisa de câncer, devido à sua capacidade intimamente recapitular a natureza complexa de carcinogênese humana1,2,3. Um dos mais frequentemente usados modelos para estudar o desenvolvimento de câncer no pâncreas, progressão e resposta terapêutica é caracterizada por uma mutação ativando o oncogene Kras combinado com uma inativação do tumor supressor p534. Este LSL-Kras G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre modelo de mouse (KPC) imita a progressão por etapas de lesões pre-invasoras de neoplasia intra-epitelial pancreática (PanIN) para carcinoma invasivo. Fenotipicamente, quase todos os ratos desenvolvem PDAC dentro os primeiros seis meses após o nascimento. No entanto, em comparação com modelos transplantados, o modelo KPC revela um início de tumor altamente variável de 8 semanas a vários meses4. Uma vez que tumores pancreáticos alcança um certo tamanho (5-9 mm de diâmetro), rapidamente acelera o crescimento do tumor e ratos terá que estar matriculado em ensaios pré-clínicos5. Portanto, a detecção exata do aparecimento do tumor e o tamanho do tumor é um pré-requisito essencial para estudos pré-clínicos logística e monitoramento de terapia. Em geral, várias abordagens como ressonância magnética (MRI)6, computadorizada, digitalização7,8,9 ou ultra-som de alta resolução pode ser empregada para realizar triagem de tumor e terapia de10. Cada técnica tem suas vantagens e desvantagens. Apesar de MRI- ou tomografia computadorizada (CT)-imagem permite a aquisição de dados de alta resolução, assim como o cálculo de volumes precisos, tempo prolongado exame sob sedação geral, e um equipamento muito caro é necessário e não permite frequente digitalização por um longo período de tempo. Em contraste, o pequena animal ultra-sonografia é um método estabelecido que pode ser empregado para a tela para patologias abdominais em ratos11. Vantagens deste método de imagem são curtas de digitalização vezes, alta resolução, e a possibilidade de utilizar ultra-som doppler ou contraste aprimorado ultra-som (CEUS) para visualizar a perfusão dos órgãos em paralelo. No entanto, conhecimento anatômico, imaginação 3D e exaustivo treinamento prático são necessários para a interpretação correta da imagem.
No artigo a seguir, é fornecido um protocolo detalhado para a utilização de ultra-som de alta resolução no modelo KPC. Além disso, imagens de ultra-som padrão são retratadas e rotuladas com estruturas do órgão para facilitar a orientação para o investigador.

<table><tbody><tr><td>Sistema de ultrassom de alta resolução Visual Sonics Vevo2100, incluindo estágio de imagem e linha de anestesia</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canadá</td><td>VS-11945</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100 MicroScan Transdutor MS-550-D (22-55MHz)</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canadá</td><td>VS-11874</td><td></td></tr><tr><td>Vevo Anesthesia System (câmara de indução de anestesia com entrada de gás fresco e residual)</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canadá</td><td>SA-12055</td><td></td></tr><tr><td>Vevo Imaging Station (estágio de trabalho com cone de nariz para fornecimento de anestesia)</td> <td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canadá</td><td>SA-11982</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; aparadores eletrônicos para animais de estimação</td><td>Panasonic Marketing Europe, Germany</td><td>5025232484324</td><td>Panasonic ER-PA10-s</td></tr><tr><td>Labotect Placa quente</td><td>Labor tech G&ouml; ttingen, Alemanha</td><td>13854</td><td></td></tr><tr><td>creme para os olhos (pomada oftálmica)</td><td>Sch&uuml; lke& Mayr, Alemanha</td><td>9080249</td><td></td></tr><tr><td>isoflurano veterinário</td><td>Abbvie, Alemanha</td><td>4831867</td><td></td></tr><tr><td>creme depilatório</td><td>RB healthcare UK, Reino Unido</td><td>8218535</td><td></td></tr><tr><td>70% de etanol (v/v) em água destilada</td><td>TH. Geyer, Alemanha</td><td>22941000</td><td></td></tr><tr><td>gel de ultrassom</td><td>Asmuth, Alemanha</td><td>13477</td><td></td></tr><tr><td>lenços de tecido</td><td>Kimberly-Clark Alemanha, Alemanha</td><td>7558</td><td></td></tr><tr><td>pontas de algodão</td><td>Meditrade, Alemanha</td><td>75481116</td><td></td></tr><tr><td>tigela de vidro para gel de ultrassom</td><td>ARC França, França</td><td>H1149</td><td></td></tr><tr><td>tigela de água</td><td>W & P Trading Co., EUA</td><td>B00K2P6PLQ</td><td></td></tr><tr><td>esponjas de gaze</td><td>Fuhrmann, Alemanha</td><td>960504</td><td></td></tr></tbody></table>

utilizando o ultra-som de alta resolução para o aparecimento de tumor de monitor e crescimento em modelos de câncer pancreático geneticamente modificados

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

O LSL-Kras G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre modelo de mouse (KPC) representa um modelo transgênico estabelecido e usado com frequência para avaliar novas terapias em câncer pancreático. Aparecimento de tumor é variável no modelo KPC entre 8 semanas e vários meses. Portanto, ferramentas de imagem não-invasivos são obrigadas a tela para o aparecimento de tumor e monitor para resposta ao tratamento. Para resolver esse problema, diferentes abordagens têm surgido nos últimos anos. Ultra-som de alta resolução tem grandes vantagens como não-invasividade, tempos de sessão rápida e uma alta resolução de imagem sem exposição à radiação. No entanto, ultra-som em ratos não é trivial e suficiente conhecimento anatômico e habilidades práticas são necessárias para executar com êxito o ultra-som de alta resolução em modelos pré-clínicos de câncer pancreático. Com o artigo a seguir, é apresentado um guia detalhado de hands-on para ecografia abdominal em murino modelos com um foco particular em modelos de câncer no pâncreas endógeno. Além disso, é fornecido um resumo dos erros comuns e como evitá-los.

Ecografia é uma técnica não-invasiva e versátil que é usada para resolver vários problemas em murino modelos de doenças humanas. Em comparação com todos os outras de imagem abordagens principais vantagens são eficiência alta produtividade, custo, tempo curto de aquisição e geração de imagens em tempo real. No entanto, esta ferramenta precisa de expertise para gerar imagens precisas e de alta qualidade. Particularmente no caso de artefatos indesejados pelo menos alguma experiência com ultr...

Este artigo descreve a utilização de ultra-som de alta resolução em camundongos geneticamente modificados câncer pancreático. O objetivo principal é fornecer uma instrução detalhada para detecção e avaliação de tumores pancreáticos endógenas.

Utilizando o ultra-som de alta resolução para o aparecimento de Tumor de Monitor e crescimento em modelos de câncer pancreático geneticamente modificados

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

Existem vários modelos de camundongos geneticamente modificados para estudar o câncer de pâncreas. O modelo mais comumente usado é o Kras, modelo de camundongo p53 que abriga uma mutação ativadora no oncogene Kras e uma mutação inativadora no gene supressor de tumor p53. Ambas as mutações são condicionalmente ativadas pelo promotor Pdx-Cre.Este modelo de camundongo Kras, p53, Pdx-Cre, em resumo modelo KPC, desenvolve tumores pancreáticos endógenos entre a idade de dois a seis meses. Na preparação do seu procedimento de ultrassom, o seguinte equipamento deve estar preparado e pronto para uso. Para ultrassom de alta resolução, é usado um dispositivo de ultrassom estacionário.O procedimento de ultrassom é realizado em anestesia geral usando evaporação de isoflurano. Uma vez que o mouse está sob sedação profunda, ele é transferido para o estágio de trabalho verde. Após o procedimento de ultrassom, o mouse deve ser colocado em uma gaiola pré-aquecida para acelerar a recuperação.O desenvolvimento do tumor é altamente variável no modelo de camundongo KPC. Para evitar procedimentos desnecessários de triagem por ultrassom, geralmente realizamos palpação abdominal semanalmente a partir dos d

utilizing-high-resolution-ultrasound-to-monitor-tumor-onset-growth

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Este vídeo descreve o protocolo para implantação ortotópica guiada por ultrassom de células de adenocarcinoma ductal pancreático derivadas de murinos diretamente no pâncreas do camundongo. Isso causa menos inflamação no local de implantação em comparação com procedimentos cirúrgicos.

Implante guiado por ultrassom: uma técnica para implantar células de adenocarcinoma ductal pancreático em um camundongo adulto

Este vídeo demonstra um modelo ortotópico de câncer de pâncreas que utiliza Matrigel para entrega celular localizada e imagens de bioluminescência in vivo para monitoramento não invasivo da progressão do tumor. O modelo ortotópico é adequado para modelos singênicos e de xenoenxerto e pode ser usado em ensaios pré-clínicos para investigar o impacto de novas terapias anticâncer no crescimento do tumor pancreático primário e metástase.

Modelo de camundongo com câncer de pâncreas ortotópico bioluminescente: uma técnica não invasiva para monitorar a progressão do câncer em camundongos

Uma melhor compreensão da biologia do câncer de pâncreas é criticamente necessário para permitir o desenvolvimento de melhores opções terapêuticas para o tratamento de câncer no pâncreas. Para atender a essa necessidade, nós demonstramos um modelo ortotópico de câncer pancreático que permite o monitoramento não-invasivo de progressão do câncer...

Modelo ortotópico bioluminescente de progressão do câncer de pâncreas

O objetivo deste protocolo é aplicar ressonância magnética com contraste dinâmico (DCE-MRI) para xenoenxertos de tumores pancreáticos ortotópicos em camundongos. A DCE-MRI é um método não invasivo para analisar a microvasculatura em um tecido-alvo e útil para avaliar a resposta vascular em um tumor após uma nova terapia.

Contraste Dinâmico aprimorada Ressonância Magnética de um Modelo de câncer de pâncreas Orthotopic Rato

Um procedimento para implantar células cancerígenas pancreáticas que expressam proteínas fluorescentes verdes (PANC-1 GFP) ortotopicamente no pâncreas de camundongos Balb-c Ola Hsd-Fox1nu para avaliar a progressão e metástase do tumor é apresentado aqui.

Fluorescente modelo de camundongo ortotópico de câncer de pâncreas

Descrevemos um protocolo para a implantação guiada por ultrassom de linhas de células de adenocarcinoma ductal pancreática derivada de urina diretamente no local do tumor nativo. Esta aproximação conduziu aos tumores pancreatic detectáveis pela exploração do ultra-som dentro de 2-4 semanas da injeção, e reduziu significativamente a semeadura da pilha do tumor da proporção na parede peritoneal em comparação à implantação ortotópica cirúrgica.

Implantação ortotópica guiada por ultrassom do Adenocarcinoma Ductal Pancreático murine

A imagem in vivo de alta resolução do pâncreas foi facilitada com a janela de imagem intravital pancreática.

Visualização de nível celular longitudinal estabilizada do pâncreas em um modelo murino com uma janela de imagem intravital pancreática

Apresentamos um protocolo para gerar um modelo de câncer de pâncreas ortotópico minimamente invasivo por injeção guiada por ultrassom de células cancerígenas pancreáticas humanas e o subsequente monitoramento do crescimento tumoral in vivo por ultrassonografia.

Geração de um xenoenxerto ortotópico de células cancerígenas pancreáticas por injeção guiada por ultrassom

O presente protocolo descreve a ultrassonografia de alta frequência para visualização de toda a glândula tireoide de camundongos e monitoramento do crescimento do carcinoma anaplásico de tireoide.

Ultrassonografia de Alta Resolução na Análise de Tumores Ortotópicos ATC em Modelo de Camundongo Geneticamente Modificado

Apresentamos um protocolo para o implante cirúrgico de uma janela óptica de demora estabilizada para imagens de resolução subcelular do pâncreas murino, permitindo estudos seriados e longitudinais do pâncreas sadio e doente.

Janela estabilizada para imagem intravital do pâncreas murino

Esse protocolo utiliza uma cama multicâmara para ressonância magnética paralela (RM) de até quatro animais para detectar tumores de adenocarcinoma pancreático em modelos de camundongos geneticamente modificados. Esse protocolo de ressonância magnética multianimal é rápido e econômico para detectar e medir tumores, facilitando a seleção de animais para estudos pré-clínicos e o monitoramento longitudinal do crescimento tumoral.

Imagem por Ressonância Magnética Multianimal para Medições de Tumores em Modelos de Câncer de Pâncreas em Ratos

Aprenda a usar ultra-som de alta resolução para detectar e monitorar tumores pancreáticos em modelos de camundongos geneticamente modificados KPC. Este método permite avaliar características tumorais em pesquisas oncológicas.

Utilizando o ultra-som de alta resolução para o aparecimento de Tumor de Monitor e crescimento em modelos de câncer pancreático geneticamente modificados (Vídeo) | JoVE Journal

Utilizando o ultra-som de alta resolução para o aparecimento de Tumor de Monitor e crescimento em modelos de câncer pancreático geneticamente modificados

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