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DOI: 10.3791/57016-v
Flor M. Mendez1, Felipe J. Núñez1,2, Rocío I. Zorrilla-Veloz3,4, Pedro R. Lowenstein1,2, Maria G. Castro1,2
1Department of Cell and Developmental Biology,University of Michigan Medical School, 2Department of Neurosurgery,University of Michigan Medical School, 3Cancer Research Summer Internship Program (CARSIP), Cancer Biology Program,University of Michigan Medical School, 4Department of Biology,University of Puerto Rico-Río Piedras Campus
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol outlines a method for studying epigenetic changes in glioma through native chromatin immunoprecipitation. By analyzing histone modifications, researchers can gain insights into the impact of genetic alterations on gene transcription in tumor cells.
Mecanismos epigenéticos são frequentemente alterados no glioma. Imunoprecipitação da cromatina pode ser usada para estudar as consequências de alterações genéticas no glioma que resultam de mudanças nas modificações do histone que regulam a transcrição de gene e a estrutura da cromatina. Este protocolo descreve imunoprecipitação da cromatina nativa na neurospheres de tumor murino de cérebro.
O objetivo geral deste procedimento é identificar o enriquecimento de marcas de histonas em um local genômico específico. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da epigenética, como como mutações em reguladores epigenéticos que alteram as modificações de histonas afetam o transcriptoma das células tumorais. A principal vantagem dessa técnica é que as células não são reticuladas, portanto, estão em um estado mais natural, o que pode ajudar na especificidade dos anticorpos.
Comece dissecando o tumor induzido experimentalmente do cérebro de um camundongo em uma placa de Petri de 10 centímetros. Se o tumor expressar uma proteína fluorescente, visualize o tumor através de um microscópio de dissecação fluorescente ajustado para o canal fluorescente apropriado com ampliação de 0,3 vezes. Use um bisturi e uma pinça para separar o tecido tumoral do cérebro normal e pique o tumor em pequenos pedaços na placa de Petri.
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