Avaliação sistemática de bem-estar em camundongos para procedimentos com anestesia geral

O objetivo geral deste protocolo é avaliar o bem-estar dos camundongos após serem submetidos a procedimentos, incluindo anestesia geral, e fornecer dados cientificamente sólidos para apoiar a classificação de gravidade de acordo com a diretiva da UE 2010/63. Este protocolo pode ajudar a responder a questões-chave sobre o bem-estar animal no campo da ciência de animais de laboratório, como o grau de sofrimento causado por procedimentos que envolvem anestesia geral. A principal vantagem deste protocolo é que o bem-estar de cada camundongo individual é avaliado de maneira científica baseada em animais e este protocolo pode ser facilmente adaptado e integrado a outros estudos planejados.

Tivemos a ideia para este protocolo pela primeira vez quando especulamos que, se a anestesia repetida causasse mais estresse em camundongos de laboratório do que uma única exposição, faltariam dados cientificamente fundamentados. Nesta etapa, prepare uma caixa de vidro com uma área útil de aproximadamente 220 milímetros por 290 milímetros e uma altura de 390 milímetros. Cubra o chão com aproximadamente 0,5 centímetros de material de cama.

Em seguida, espalhe um punhado de material de cama usado da gaiola doméstica em cima do novo material de cama para reduzir o sofrimento causado pelo novo ambiente. Forneça comida e água. Transfira suavemente o mouse para a gaiola de observação e deixe-o se habituar ao novo ambiente por pelo menos 30 minutos.

Para a escala de careta do mouse, use uma câmera de alta definição para fotografia. Tire continuamente cerca de 30 a 40 fotografias para cada ponto de tempo dentro de um a dois minutos. Para testar o comportamento de escavação de acordo com Deacon e Jirkof, prepare tocas colocando 140 gramas de pellets de comida em uma garrafa de água de plástico opaca padrão.

Em seguida, coloque a garrafa plástica de água cheia de pellets de comida paralela à parede traseira da gaiola de observação. Após duas horas, pese os pellets de comida restantes na toca. Realizar o ensaio duas vezes, dois dias antes do procedimento, como linha de base.

Nesta etapa, prepare uma gaiola com novo material de cama para o período de observação de 24 horas em que os camundongos são alojados individualmente. O período de observação de 24 horas começa após a escala da careta do rato e o comportamento de escavação. A duração da habitação individual é reduzida ao mínimo.

Nesse ínterim, a atividade da gaiola doméstica, a ingestão de alimentos, o comportamento de construção do ninho e os níveis de metabólitos fecais da corticosterona são medidos. Em seguida, espalhe um punhado de material de cama usado sem fezes da gaiola doméstica em cima do novo material para reduzir o sofrimento. Forneça um ninho de algodão quadrado padronizado com um peso definido apenas como enriquecimento ambiental.

Depois disso, monte o sensor infravermelho na parte superior da gaiola para medir a atividade da gaiola doméstica. Forneça pellets de comida padrão e água ad libitum e coloque o rato na gaiola. Na manhã seguinte, marque o ninho de acordo com a escala de cinco pontos de Deacon aproximadamente duas horas após o acendimento da luz.

Além disso, pese qualquer pedaço de ninho não rasgado que represente pelo menos 5% do peso inicial do ninho. Em seguida, coloque um topo de gaiola quadriculado na gaiola em um ângulo de 45 graus em relação ao lado mais longo da gaiola. Inicie o cronômetro e monitore ou grave o vídeo dos mouses por 10 minutos a uma distância de aproximadamente 1,5 metros.

Observe todas as vezes em que o mouse sobe no topo da gaiola com as quatro patas no topo da gaiola ou sai do topo da gaiola com uma ou mais patas no chão da gaiola seguido de análise. A experiência única de anestesia, bem como a anestesia repetida, aumentaram os escores de diferença da escala de caretas de camundongos em comparação com o controle 30 minutos após a exposição. Aos 150 minutos após a última anestesia, os escores de diferença da escala de caretas de camundongos de todos os camundongos retornaram aos níveis de controle.

Para o comportamento de escavação, apenas a anestesia repetida reduziu significativamente a porcentagem do peso dos pellets de comida que os camundongos removeram da toca em comparação com o controle. Para o comportamento de construção do ninho, não houve diferenças significativas nas pontuações do ninho entre uma única experiência de anestesia, anestesia repetida e o controle. No paradigma exploratório livre, a anestesia repetida reduziu significativamente o número de explorações em comparação com o controle e a duração total da exploração versus uma única anestesia um dia após a última anestesia.

Oito dias após a última anestesia, não houve mais diferenças entre os grupos de estudo. Ao tentar este protocolo, é importante lembrar de manusear ratos por métodos de túnel e/ou ventosaterapia. Pegar ratos pela cauda pode induzir estresse e ansiedade, o que, por sua vez, afeta o bem-estar e também pode influenciar os resultados do protocolo.

Este protocolo pode ser facilmente adaptado e integrado em estudos planejados para avaliar o impacto de um procedimento no bem-estar de camundongos. Dependendo do procedimento e do desenho do estudo, o teste mais adequado deste protocolo deve ser escolhido. Depois de assistir a este vídeo, você terá uma boa compreensão de como avaliar o bem-estar de camundongos submetidos ao procedimento de anestesia geral.

O protocolo ajuda a classificar a gravidade do procedimento de maneira científica baseada em animais.