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DOI: 10.3791/57048-v
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Este protocolo da isolação da ilhotas descreveu uma rota nova da injeção do colagenase para digerir o tecido exócrina e um procedimento simplificado do inclinação para purificar os ilhotas dos ratos. Envolve a digestão enzimática, separação de gradiente/purificação, e Islet mão-picking. O isolamento bem-sucedido pode produzir 250 – 350 de alta qualidade e ilhotas totalmente funcionais por mouse.
Este protocolo requer o uso de um gradiente de densidade única tornando-o significativamente menos intensivo em mão-de-obra e mais econômico em comparação com métodos de isolamento de ilhotas convencionais mais complexos. A principal vantagem deste protocolo é que a enzima é entregue diretamente ao pâncreas, resultando em uma maior digestão tecidual e aumento do rendimento da ilhota. Comece gravando os membros do mouse na posição supina e pulverizando o corpo com 70% de etanol.
Usando fórceps de vidro e tesoura cirúrgica curva, faça uma incisão de pele abdominal horizontal de aproximadamente três centímetros e puxe a pele para expor a parede abdominal. Faça uma incisão vertical de três a quatro centímetros no peritônio abdominal para expor totalmente o pâncreas e coloque o rato sob um microscópio dissecando. Empurre o lobo hepático superiormente para expor o ducto biliar que aparece como um tubo rosa pálido e mover suavemente os intestinos da região lombar e ilíaca direita para a direita da cavidade abdominal para expor o ducto biliar e artéria hepática.
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