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DOI: 10.3791/57077-v
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Este método demonstra como visualizar a invasão do patógeno em células de inseto com modelos tridimensionais (3D). Hemócitos de larvas de Drosophila foram infectados com patógenos virais ou bacterianos, ou ex vivo ou no vivo. Hemócitos infectados foram, em seguida, fixa e manchados para a imagem latente com um microscópio confocal e subsequente reconstrução celular 3D.
Essa técnica pode ajudar a responder a questões-chave no campo da infecção celular e da microbiologia, como a forma como os hemócitos contribuem para a resposta imune geral em moscas-das-frutas. A principal vantagem dessa técnica é que ela pode ser realizada em laboratório, utilizando larvas previamente infectadas. Alternativamente, hemócitos de larvas não infectadas podem ser usados para infecção ex vivo.
A demonstração visual desse método é crítica porque as etapas de imagem são difíceis de aprender devido às complexidades do microscópio confocal e às opções para reconstrução do modelo 3D. Para iniciar o protocolo, coloque de dois a três pedaços de filme de parafina de dez centímetros por dez centímetros sob um microscópio estéreo. Em seguida, prepare o capilar de vidro ajustando o aquecedor polar capilar para 55% do máximo.
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