Dissecando a proteínas multi sinalização complexos pela purificação da afinidade de complementação Bimolecular (BiCAP)

Este método pode nos ajudar a responder a questões-chave em biologia celular e bioquímica, como a forma como a montagem dinâmica de proteínas e complexos de proteínas controla as vias de sinalização e o comportamento celular. A principal vantagem dessa técnica é que podemos isolar especificamente duas proteínas que interagem, excluindo proteínas individuais não complexadas e parceiros de ligação concorrentes. Embora usemos esse método para fornecer informações sobre a dimerização receptiva da tirosina quinase no câncer de mama, ele também pode ser aplicado a qualquer outro ambiente fisiológico ou doença.

Tivemos uma ideia para esse método quando percebemos que o nanocorpo GFP reconhecia o epítopo tridimensional de GFP e outras proteínas fluorescentes. Para começar, adicione 150 nanogramas de vetor de entrada, 150 nanogramas de vetor de destino e oito microlitros de tampão TE a um tubo de 0,2 mililitro. Em seguida, adicione dois microlitros de recombinase e ZiMex e centrifugue os dois brevemente.