Name: Um modelo Experimental de síndrome metabólica induzida por dieta em coelho: considerações metodológicas, desenvolvimento e avaliação (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: Aprenda a desenvolver um modelo experimental de síndrome metabólica em coelhos usando dieta rica em gordura e sacarose. Este método permite estudar remodelação de órgãos e testar novas abordagens terapêuticas.

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Este trabalho foi apoiado pela Generalitat Valenciana (GV2015-062), Universitat de València (UV-INV-PRECOMP14-206372) para MZ, Generalitat Valenciana (PROMETEOII/2014/037) e Instituto de Salud Carlos III-FEDER fundos (CIBERCV CB16/11/0486) FCJ.

Cuidados com animais e os protocolos experimentais usados neste estudo cumpriu com UE Directiva 2010/63, sobre a protecção dos animais utilizados para fins científicos e foram aprovados pelo Comitê de uso (2015/VSC/ervilha/00049) e cuidados institucionais do Animal.
Nota: O protocolo consiste na administração crônica de uma dieta de alto teor de gordura, alta-sacarose por 28 semanas e a avaliação dos principais componentes dos MetS. Nós usamos 11 coelhos Nova Zelândia branco (NZW) masculino adulto pesando 4.39 ± 0,14 (s.d.) kg, que eram 20-22 semanas de idade no início do protocolo experimental. Eles estavam alojados em um quarto com uma humidade relativa (50 ± 5%) e ciclo de condições de controle de temperatura (20 ± 1,5 ° C) com uma luz de 12-h. As palavras "chow" e "diet" pode ser usados de forma intercambiável nas etapas do protocolo.
1. dieta administração
<ol><li>
Obter ou preparar dietas
	<ol>
<li>Obter um comercialmente disponível alta gordura dieta com óleo de coco hidrogenado adicionado (10%) e banha (5%)19. Esta dieta fornecerá 3.7 kcal·g-1.</li>
		<li>Prepare soluções de sacarose de 5 a 15%, dissolvendo as quantidades apropriadas de sacarose em água esterilizada (por exemplo, uso 300 g de sacarose em estoque de 2 L de uma solução de sacarose 15%). Uma solução de 15% fornecerá kcal·mL 0,6-1.</li>
		<li>Obter um disponível comercialmente dieta controle19, que fornece 2,7 kcal·g-1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Adaptar os animais por 4 semanas
	<ol>
<li>Alimente a cada animal no grupo controle 120g de dieta controle diariamente. Fornece água ad libitum.</li>
		<li>Alimente animais em MetS chow de 250g de grupo começando com um controle de 50% e 50% comida de alto teor de gordura, aumentando progressivamente a comida de alto teor de gordura de 100% até o final da semana 4. Nota: O objetivo seria atingir: (i) controle de 35% e chow de alto teor de gordura 65% até o final de semana 1; (ii) 25% controle e chow de alto teor de gordura de 75% no final de semana 2; (iii) 15% controle e 85% gordura comida no final de semana 3. (iv) comida de alto teor de gordura 100% até o final da semana 4.</li>
		<li>Dê animais em MetS grupo água com 5% de sacarose no início e aumentar a concentração de sacarose a 15% até o final da semana 4th .</li>
		<li>Registre a ingestão diária de chow e sacarose solução para calcular a ingestão calórica, conforme valores fornecidos em 1.1.1. e 1.1.2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Induzir o MetS (28 semanas)
	<ol>
<li>Cada animal no grupo controle 120g de controle de alimentação comida e água ad libitum diariamente.</li>
		<li>Alimente os animais no grupo de MetS 250 g de gordura chow e 15% de sacarose em água. Substitua o chow diariamente e a solução de sacarose a cada três dias.</li>
		<li>Pese o restante comida e água diariamente para estimar o consumo diário.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. avaliação morfológica
<ol><li>Medida animal peso corporal em uma base semanal.</li>
	<li>Medir a altura, comprimento, contorno abdominale comprimento da tíbiae calcular o IMC antes da administração da dieta experimental e em semanas 14 e 28 em animais anestesiados.<ol>
<li>Canule veia marginal de orelha direita com um cateter descartável estéril (18-22 G) e injetar o propofol (8 mgkg-1), seguido por 1,5 mL de solução de NaCl 0,9%. No coelho anestesiado, execute as medidas listadas nas etapas subsequentes.</li>
		<li>Medida de altura e comprimento. Usando a fita métrica, medida e registro a distância entre o nariz para o calcanhar na posição de decúbito lateral (comprimento). Na mesma posição, leve a distância entre o acrômio no ombro à ponta da pata (altura).</li>
		<li>Calcular o índice de massa (IMC) de corpo20 como peso corporal (kg) · [corpo comprimento (m) x altura (m)] -1.</li>
		<li>Coloque a fita métrica suavemente ao redor do contorno abdominal e fazer uma medição com o animal em posição supina.</li>
		<li>Meça o comprimento da tíbia da parte inferior da articulação do joelho para a inserção do tendão de Aquiles.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. jejum a glicemia e teste de tolerância à glicose intravenosa (IVGTT)
Nota: É aconselhável iniciar os procedimentos, a mesma hora do dia (ou seja, 2-15:00).
<ol><li>Prepare uma solução de glicose (60%) com 60 g de glicose em 100 mL de solução de NaCl 0,9%.</li>
	<li>Rápido o animal para 7 h (retirar alimentos e manter a água), em seguida, coloque o coelho consciente em uma retenção de bruços. Preparar o medidor de glicose (inserir uma nova tira no monitor) e pegue a primeira amostra da veia marginal esquerda usando uma lanceta para obter uma gota de sangue. Em seguida, encoste a gota de sangue com o teste tira e medir glicemia usando o medidor de glicose para determinar a glicemia de jejum.</li>
	<li>Canule veia marginal de orelha direita com um cateter descartável (18-22 G) e injetar um bolus de uma solução de glicose de 60% (0,6 g·kg-1). Nota: Para preparar o bolo, adicione 1 mL/kg do estoque de glicose.</li>
	<li>Colher amostras de sangue usando o lancet (uma gota de sangue) em 15, 30, 60, 90, 120 e 180 min após a injeção de glicose e analisá-los com o medidor de glicose como em 3.2.</li>
	<li>Remover o cateter descartável e comprima o local de inserção do cateter com uma gaze. Uma vez que o sangue está coagulado, remova a gaze e verificar o status do animal.</li>
</ol>4. pressão arterial
<ol><li>Preparar o sistema de aquisição, incluindo um transdutor de pressão, uma seringa de 10 mL com 0,9% de NaCl, uma torneira de três vias, um amplificador e um PC/laptop com o software de aquisição (para gravação de pressão arterial).</li>
	<li>Configure o equipamento. Primeiro, coloque a torneira de três vias e a seringa no transdutor de pressão, entre o transdutor e o cateter e conectar o transdutor de pressão para o amplificador. Em seguida, conecte o amplificador para o PC/laptop.</li>
	<li>Execute a calibração de transdutores de pressão de acordo com as recomendações do fabricante.</li>
	<li>Coloque o animal consciente em uma retenção de coelho, de bruços. Aquecer a orelha antes de canulação e, em seguida, aplicar topicamente um anestésico local (lidocaína/prilocaína 2,5%) no ouvido ao redor do local de inserção. Bata levemente a área onde o pacote vascular é executado para identificar facilmente a artéria. Em seguida, insira um cateter estéril (18-22 G) na artéria central da orelha esquerda. Soltar as amarras e permitir que o animal ficar quietos por 30 min.</li>
	<li>Registrar a pressão arterial continuamente por 20 min diretamente do cateter arterial, colocando o transdutor de pressão posicionado ao lado do animal no nível do coração (frequência de amostragem: 1 KHz, ver Figura 5B). Nota: Para manter a pressão arterial (PA) gravação livre da interferência de coagulação de sangue (sinal de BP perde amplitude ou desaparece), deve ser feita uma injeção de NaCl (0,9%). Usando a torneira de três vias, fecha o circuito que vai partir do transdutor para o cateter, abrir o circuito que vai desde a seringa ao cateter e injetar 1-2 mL. Isto irá remover coágulos de sangue que podem formar-se o cateter. Em seguida, abra o circuito entre o transdutor e o cateter e continuar a gravação, uma vez que o sinal tenha sido recuperado.</li>
	<li>Quando a gravação estiver concluída, remova o cateter e aperte com uma gaze no sítio de inserção do cateter para parar a perda de sangue. Uma vez que o sangue está coagulado, remova a gaze e verificar o status do animal.</li>
</ol>5. plasma medições
Nota: É aconselhável iniciar os procedimentos, a mesma hora do dia (ou seja, 2-15:00).
<ol><li>Rápido o animal para 7 h (retirar alimentos e manter a água), em seguida coloque o animal consciente em uma retenção de bruços e introduza uma agulha estéril de 21 G na veia marginal da orelha esquerda. Uma vez que o sangue começa a escorrer, descartar a primeira gota e coletar as amostras de sangue em tubos de EDTA até o nível indicado no tubo. Armazene as amostras no gelo.</li>
	<li>Centrifugar as amostras de sangue em 1.500 x g, 15 min, 4 ° C. Após a centrifugação, o plasma, utilizando uma pipeta de sucção e preparar alíquotas de 250 µ l.</li>
	<li>Analise as amostras frescas imediatamente. Parâmetros básicos de controle são as seguintes: triglicerídeos, colesterol total, HDL e LDL colesterol. Nota: As amostras analisadas não recém devem ser armazenadas imediatamente em um freezer-80 ° C. Se estiver interessado na análise de amostras de plasma de glicose no sangue, o teste de glicose do sangue deve usar tubos com fluoreto de oxalato em vez de EDTA.</li>
</ol>

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</ol>

Os autores declaram que eles têm não tem interesses financeiro concorrente.

O estabelecimento de um modelo experimental adequado pode fornecer um método mais consistente e confiável para estudar o desenvolvimento dos MetS, e também é necessário compreender os mecanismos básicos que sustentam os órgãos e sistemas de remodelação. Aqui, descrevemos os métodos utilizados para desenvolver um modelo experimental relevante de MetS induzida por dieta e como avaliar os principais componentes do aglomerado de anormalidades metabólicas e cardiovasculares que caracterizam este modelo: obesidade central, hip...

Obesidade e síndrome metabólica (MetS) tornaram-se um problema crescente para a saúde pública e prática clínica, dada a sua prevalência aumentada devido ao aumento de estilos de vida sedentários e de hábitos alimentares pouco saudáveis1. Existem várias definições de MetS, mas a maioria descrevê-lo como um conjunto de alterações cardiovasculares e metabólicas como obesidade abdominal, redução de HDL e colesterol LDL elevado, triglicérides elevados, intolerância à glicose e hipertensão2 ,3,4. Diagnóstico requer que três dos cinco critérios estão presentes.
Devido a modelos animais, pesquisa básica tem sido capaz de investigar os mecanismos subjacentes a processos patológicos como MetS. Vários modelos animais têm sido utilizados, mas é de importância crucial que o modelo de escolha reproduz as principais manifestações clínicas da patologia humana (Figura 1). Com este objectivo, foram desenvolvidos modelos animais considerados semelhantes aos seres humanos, principalmente caninos e suína, (ver Verkest5 e Zhang &amp; Lerman6 para revisão). No entanto, modelos caninos não mostra todos os componentes do MetS, dado que o desenvolvimento de aterosclerose ou hiperglicemia em cães por meio da dieta é questionável5. Suína modelos apresentam a similaridade mais anatômica e fisiológica com os humanos e assim oferecem poder preditivo significativo para elucidar os mecanismos subjacentes MetS, mas sua manutenção e a complexidade dos procedimentos experimentais fazem o uso Este modelo muito trabalho intensivo e caro6.
Por outro lado, modelos de roedores (rato e rato), dieta induzida espontânea e transgênicos, têm sido extensivamente usados na literatura para o estudo da obesidade, hipertensão e MetS e suas consequências patológicas em diferentes órgãos e sistemas (veja Wong et al. 7 para revisão). Embora o uso desses modelos é mais acessível do que o canino ou suína,... eles têm desvantagens importantes. Com efeito, dependendo da pressão, animais desenvolvem alguns componentes do MetS, enquanto outros como hipertensão, hiperglicemia e hiperinsulinemia são ausentes7. Além disso, um dos principais componentes dos MetS, obesidade, em algumas variedades geneticamente modificadas, não só depende de fatores associados com a dieta, prefiro tem sido demonstrado que alguns animais se tornam obesas com comida normal ou mesmo reduzida ingestão8. Finalmente, camundongos e ratos mostram uma deficiência natural na proteína de transferência de éster de colesterol (CETP) e usam o HDL como os principais meios de transporte de colesterol, o que os torna relativamente resistentes ao desenvolvimento da aterosclerose. Esta é uma diferença importante no metabolismo de lipídios com seres humanos, que expressam CETP e transportar o colesterol principalmente em LDL9.
Por outro lado, o coelho do laboratório representa um estágio intermediário entre o animal maior e modelos experimentais de roedores. Assim, o coelho pode ser facilmente submetido a diferentes tipos de protocolos com requisitos mínimos de pessoal e manutenção, sendo mais facilmente manipulado em procedimentos experimentais do que modelos animais maiores. Além disso, foi relatado que coelhos alimentados com uma dieta high-fat tem alterações hemodinâmicas e neurohumoral semelhantes como seres humanos obesos8,10,11. De nota, sobre o metabolismo lipídico, o coelho tem CETP abundante no plasma e seu perfil de lipoproteína é rica em LDL12, que também é semelhante aos seres humanos. Além disso, coelhos desenvolvem hiperlipidemia rapidamente dado que, como herbívoros, eles são muito sensíveis a gordura dietética13.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57117/57117fig1.jpg"> Figura 1: comparação de modelos animais de MetS. Consulte Verkest5, Zhang e Lerman6e Wong et al . 7 para revisão. "<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg">" indica uma vantagem e "<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg">" indica uma desvantagem. *controverso, varia de acordo com o estudo, *como apontou fora por Carroll et al . 8, algumas linhagens geneticamente modificadas tornam-se obesas independentemente da ingestão de alimentos. CEPT: proteína de transferência de éster de colesterol. GTT: teste de tolerância à glicose. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57117/57117fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
A fim de elucidar os mecanismos básicos subjacentes a remodelação patológico produzido por metástases nos diferentes órgãos e sistemas e para obter uma compreensão desta patologia complexa, a escolha de um modelo experimental que reproduz os principais componentes do MetS humano é essencial. O coelho pode fornecer muitas vantagens, dadas a sua semelhança com a fisiologia humana e a disponibilidade de uso em protocolos crônicos e medições. Nesta linha, alguns modelos de coelho induzida por dieta usando dieta hiperlipídica e alta-sacarose foram utilizados14,15,16,17,18,19 (tabela 1) e um caracterização dos diferentes componentes dos MetS é de grande importância quando relativas a um fenótipo com remodelação de órgão. Assim, o objetivo principal do presente artigo é para descrever os métodos para desenvolver um modelo de MetS induzida por dieta em coelhos que permite o estudo de sua fisiopatologia e impacto na remodelação do órgão.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Estudo</td>
			<td rowspan="2">Dieta</td>
			<td rowspan="2">Duração</td>
			<td rowspan="2">Raça</td>
			<td colspan="4">Componentes de MetS</td>
		</tr>
<tr>
<td>OB</td>
			<td>HT</td>
			<td>HG</td>
			<td>DL</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Yin et al. (2002)14</td>
			<td>·    10% de gordura</td>
			<td rowspan="2">24 semanas</td>
			<td>·      NZW masculino</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2">-</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
		</tr>
<tr>
<td>·    37% de sacarose</td>
			<td>·      2 kg</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Zhao et al. (2007)15</td>
			<td>·    10% de gordura</td>
			<td rowspan="2">36 semanas</td>
			<td>·      JW masculino</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
		</tr>
<tr>
<td>·    30% de sacarose</td>
			<td>·      16 semanas</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Helfestein et al (2011)16</td>
			<td>·    10% de gordura</td>
			<td rowspan="3">24 semanas</td>
			<td>·      NZW masculino</td>
			<td rowspan="3"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="3">-</td>
			<td rowspan="3"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td rowspan="3"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
		</tr>
<tr>
<td>·    40% de sacarose</td>
			<td>·      12 semanas</td>
		</tr>
<tr>
<td>·    0.1-0.5 colesterol</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Ning et al (2015)17</td>
			<td>·    10% de gordura</td>
			<td rowspan="2">8-16 semanas</td>
			<td>·      WHHL masculino</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2">-</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
		</tr>
<tr>
<td>·    30% de frutose *</td>
			<td>·      12 semanas</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Liu et al (2016)18</td>
			<td>·    10% de gordura</td>
			<td rowspan="2">48 semanas</td>
			<td>·      NZW masculino</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2">-</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
		</tr>
<tr>
<td>·    30% de sacarose</td>
			<td>·      12 semanas</td>
		</tr>
<tr>
<td>Árias-Mutis et al (2017)19</td>
			<td>·    15% de gordura</td>
			<td>28 semanas</td>
			<td>·      NZW masculino</td>
			<td><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabela 1: MetS induzida por dieta coelho modelos usando dieta hiperlipídica, alta-sacarose. O símbolo "<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg">"indica ausência,"<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg">" presença, e "-" não avaliada. * restrito. WHHL, Watanabe hiperlipidemic hereditários coelhos. JW, japonês coelhos brancos. OB, obesidade. HT, hipertensão. HG, hiperglicemia. DL, dislipidemia.

<table><tbody><tr><td>Balança veterinária</td><td>SOEHNLE</td><td>7858</td><td>Balança https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale</td></tr><tr><td>Pá para alimentação de alumínio</td><td>COPELE</td><td>10308</td><td>Pá para alimentação de alumínio http://copele.com/es/herramientas/48-pala-para-pienso-de-aluminio.html</td></tr><tr><td>Balança</td><td>PCE Ib&eacute; Ralo rica</td><td>PCE-TB 15</td><td>Balance http://www.pce-iberica.es/medidor-detalles-tecnicos/balanzas/balanza-compacta-pce-bdm.htm</td></tr><tr><td>(20 cm de diâmetro)</td><td>ZWILLING</td><td>39643-020-0</td><td>Filtro https://es.zwilling-shop.com/Menaje-del-hogar/Menaje-de-cocina/Menaje-especial/Accesorios/Colador-20-cm-ZWILLING-39643-020-0.html</td></tr><tr><td>Tigela</td><td>ZWILLING</td><td>40850-751-0</td><td>Funil de Escala https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale</td></tr><tr><td></td><td>BT Ingenieros</td><td>não disponível</td><td>Funil http://www.bt-ingenieros.com/fluidos-y-combustibles/961-juego-de-4-embudos-de-plastico.html?gclid=EAIaIQobChMIuInui_y-1QIVASjTCh28Zwf-EAQYBSABEgK7xPD_BwE</td></tr><tr><td>Introcan Certo 22G blue</td><td>B Braun</td><td>4251318</td><td>Cateter intravenoso periférico http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan-Propofol</td></tr> <tr><td>Lipuro frasco para injetáveis 10 mg/ml 20 ml</td><td>B Braun</td><td>3544761VET</td><td>Solução de soro anestésico intravenoso geral http://www.bbraun-vetcare.es/producto/propofol-lipuro-1-FisioVet</td></tr> <tr><td>500ml</td><td>B Braun</td><td>472779</td><td>Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale</td></tr><tr><td>Askina Film Vet 1,25cm x 5m</td><td>B Braun</td><td>OCT13501</td><td>Gesso Plástico http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-film-vet</td></tr><tr><td>Askina Film Vet 2,50cm x 5m</td><td>B Braun</td><td>OCT13502</td><td>Gesso Plástico http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-film-vet</td></tr><tr><td>Seringa Injekt 10ml luer</td><td>B Braun</td><td>4606108V</td><td>Seringa de injeção-aspiração de dois corpos de uso único http://www.bbraun-vetcare.es/producto/injekt-Seca</td></tr> <tr><td>201</td><td>seca</td><td>seca 201</td><td>Fita ergonómica para medição de perímetros https://www.seca.com/es_es/productos/todos-los-productos/detalles-del-producto/seca201.html#referred</td></tr><tr><td>Sterican 21Gx1" - 0,8x25mm verde</td><td>B Braun</td><td>4657543</td><td>Agulha hipodérmica de uso único http://www.bbraun-vetcare.es/producto/agujas-hipodermicas-sterican-CONTOURNEXT-Meter</td></tr> <tr><td></td><td>BAYER</td><td>84413470</td><td>Sistema de análise de glicemia http://www.contournextstore.com/en/contour-next-meter-2</td></tr><tr><td>Tiras de teste CONTOUR NEXT BAYER</td><td></td><td>83624788</td><td>Tiras de teste de glicose no sangue http://www.contournextstore.com/en/contour-next-test-strips-100-ct-package</td></tr><tr><td>MICROLET NEXT LANCETADOR</td><td>BAYER</td><td>6702</td><td>Lancetador de http://www.contournextstore.com/en/new-microlet-next-lancing-device</td></tr><tr><td>MICROLET 2 Lancetas Coloridas</td><td>BAYER</td><td>81264857 Lanceta</td><td>estéril ultrafina para punção capilar http://www.contournextstore.com/en/microlet2-colored-lancets-100s</td></tr><tr><td>Injekt 20ml luer siringe</td><td>B Braun</td><td>4606205V</td><td>Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale</td></tr><tr><td>Askina Mullkompressen 7,5x7,5cm - estéril</td><td>B Braun</td><td>9031219N</td><td>Pacotes de gaze estéril em envelopes http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-mullkompressen-esteril</td></tr><tr><td>Emla lidocaína/prilocaína</td><td>AstraZeneca</td><td>não disponível</td><td>Anestésicos locais https://www.astrazeneca.es/areas-terapeuticas/neurociencias.html</td></tr><tr><td>Introcan Certo 18G short</td><td>B Braun</td><td>4251342</td><td>Cateter intravenoso periférico http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan-Introcan</td></tr> <tr><td>Certo 20G</td><td>B Braun</td><td>4251326</td><td>Cateter intravenoso periférico http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan-Transdutores de</td></tr> <tr><td>pressão arterial-MA1 72-4497</td><td>Aparelho Harvard</td><td>724497</td><td>Transdutor para monitoramento da pressão arterial http://www.harvardapparatus.com/physiology/physiological-measurements/transducers/pressure-transducers/research-grade-pressure-transducers.html</td></tr><tr><td>PowerLab 2/26</td><td>AD Instruments</td><td>ML826</td><td>Amplificador https://www.adinstruments.com/products/powerlab</td></tr><tr><td>LabChart ver. 6</td><td>AD Instruments</td><td>não disponível</td><td>Software de aquisição https://www.adinstruments.com/products/labchart</td></tr><tr><td>Animal Bio Amp</td><td>AD Instruments</td><td>FE136</td><td>Amplificador https://www.adinstruments.com/products/bio-amps#product-FE136</td></tr><tr><td>K2EDTA 7.2mg</td><td>BD</td><td>367861</td><td>Tubos de coleta de sangue http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=367861</td></tr><tr><td>Centrífuga Centrífuga</td><td>SciQuip</td><td>2-16KL</td><td> http://www.sigma-centrifuges.co.uk/store/products/refrigerated-sigma-2-16k-centrifuge/</td></tr> <tr><td>Eppendorf Referência 2, 100 - 1000 &mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>4920000083</td><td>Pipeta https://online-shop.eppendorf.es/ES-es/Pipeteo-44563/Pipetas-44564/Eppendorf-Reference2-PF-42806.html</td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 0,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30121023</td><td>Tubes https://online-shop.eppendorf.es/ES-es/Puntas-tubos-y-placas-44512/Tubos-44515/Eppendorf-Safe-Lock-Tubes-PF-8863.html</td></tr><tr><td>Coelhos NZW (16-18 semanas de idade)</td><td>Granja San Bernardo</td><td>não disponível</td><td>Nova Zelândia Coelhos brancos http://www.granjasanbernardo.com/en/welcome/</td></tr> <tr><td>Sucrose&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S0389-5KG</td><td>Sacarose para solução potável http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s0389?lang=es&region=ES</td></tr><tr><td>Dieta de controle de manutenção para coelhos</td><td>Ssniff</td><td>V2333-000</td><td>Dieta de controle http://www.ssniff.com/</td></tr> <tr><td>Dieta rica em gordura para coelhos</td><td>Ssniff</td><td>S9052-E020</td><td>Dieta rica em gordura http://www.ssniff.com/</td></tr> <tr><td>Rack e bebedouro para coelhos</td><td>Sodispan</td><td>não disponível</td><td>Rack para coelhos https://www.sodispan.com/jaulas-y-racks/racks-conejo-y-cobaya/</td></tr> <tr><td>Retenção de coelhos</td><td>Zoonlab</td><td>3045601</td><td>http://www.zoonlab.de/en/index.html</td></tr></tbody></table>

um modelo experimental de síndrome metabólica induzida por dieta em coelho: considerações metodológicas, desenvolvimento e avaliação

An Experimental Model of Diet-Induced Metabolic Syndrome in Rabbit: Methodological Considerations, Development, and Assessment

Nos últimos anos, obesidade e síndrome metabólica (MetS) tornaram-se um problema crescente para a saúde pública e prática clínica, dada a sua prevalência aumentada devido ao aumento de estilos de vida sedentários e hábitos alimentares pouco saudáveis. Graças a modelos animais, a pesquisa básica pode investigar os mecanismos subjacentes a processos patológicos como MetS. Aqui, descrevemos os métodos utilizados para desenvolver um modelo experimental de coelho de MetS induzida por dieta e sua avaliação. Após um período de aclimatação, os animais são alimentados com um alto teor de gordura (10% hidrogenados óleo de coco e banha 5%), dieta de alta-sacarose (15% de sacarose dissolvida em água) para 28 semanas. Durante este período, vários procedimentos experimentais foram realizados para avaliar os diferentes componentes dos MetS: morfológicas e medições de pressão arterial, determinação de tolerância de glicose e a análise de vários marcadores de plasma. No final do período experimental, animais desenvolvidas obesidade central, hipertensão ligeira, pré-diabetes e dislipidemia com baixo HDL, LDL elevado e um aumento dos níveis de triglicérides (TG), reproduzindo, assim, os principais componentes do MetS humanos. Este modelo de crônico permite novas perspectivas para a compreensão dos mecanismos subjacentes na progressão da doença, a detecção de marcadores pré-clínicos e clínicos que permitem a identificação de pacientes de risco, ou mesmo o teste de novo terapêutico abordagens para o tratamento desta patologia complexa.

MetS representa um conjunto de anormalidades metabólicas e cardiovasculares, cujo estudo pode ser facilitado pela utilização de modelos experimentais. Com efeito, para elucidar os mecanismos subjacentes a remodelação patológico produzido por MetS, a escolha de um modelo experimental que apropriadamente se assemelha a condição humana e é adequado para a pesquisa é de importância crucial. Aqui, apresentamos os métodos para induzir MetS em coelho usando uma dieta rica em gordura saturada e s...

Descrevemos os métodos para desenvolver um modelo experimental de síndrome metabólica induzida pela dieta (MetS) em coelhos, usando uma dieta hiperlipídica, alta-sacarose. Os animais desenvolveram obesidade central, hipertensão ligeira, pre-diabetes e dislipidemia, reproduzindo, assim, os principais componentes do MetS humanos. Este modelo de crônico permitirá a aquisição de mecanismos subjacentes do conhecimento da progressão da doença.

Um modelo Experimental de síndrome metabólica induzida por dieta em coelho: considerações metodológicas, desenvolvimento e avaliação

In recent years, obesity and metabolic syndrome (MetS) have become a growing problem for public health and clinical practice, given their increased ...

O objetivo geral deste procedimento é desenvolver e caracterizar um modelo de síndrome metabólica em coelhos usando uma dieta rica em gordura e sacarose, que é de grande importância ao associar um fenótipo à remodelação de órgãos. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da fisiopatologia, como a compreensão da remodelação de órgãos e a progressão da doença, a detecção de marcadores paraclínicos e clínicos para identificar pacientes em risco ou testar novas abordagens terapêuticas. O coelho pode oferecer muitas vantagens sobre outros modelos animais, incluindo murino, canino ou suíno, dada sua semelhança com a fisiologia humana e a acessibilidade do uso em protocolos e medições crônicas.Demonstrando este procedimento estará Oscar Arias, um estudante de doutorado do nosso laboratório. Para aclimatar os animais à sua dieta, alimente cada animal do grupo controle com 120 gramas de dieta controle diariamente durante quatro semanas e forneça água ad libitum. Alimente os animais do grupo MetS com 250 gramas de ração, começando com 50% de controle e 50% de ração com alto teor de gordura.Em seguida, aumente progressivamente a dieta para ração com 100% de gordura até o final da quarta semana. Além disso, dê aos animais do grupo SM água com 5% de sacarose no início e aumente a concentração de sacarose para 15% até o final da quarta semana. Registre a ingestão diária de ração e solução de sacarose para calcular a ingestão calórica.Uma vez que os animais tenham sido aclimatados às suas dietas, alimente cada animal do grupo de controle com 120 gramas de ração de controle e água ad libitum diariamente. Alimente os animais do grupo MetS com 250 gramas de ração com alto teor de gordura e 15% de sacarose em água. Substitua a ração diariamente e a solução de sacarose a cada três dias.Pese a ração restante e a água diariamente para estimar a ingestão diária. Para realizar a avaliação morfológica, pesar cada animal semanalmente. Antes da administração da dieta experimental e nas semanas 14 e 28, anestesiar o animal usando um cateter descartável estéril para canular a veia marginal da orelha direita.Em seguida, injete oito miligramas por quilograma de propofol, seguido de 1,5 ml de solução de cloreto de sódio a 0,9%. Uma vez confirmada a anestesia, coloque o animal em decúbito lateral e use uma fita métrica para medir a distância do nariz ao calcanhar. Registre essa medida como o comprimento.Com o animal na mesma posição, meça a distância do acrômio no ombro até a ponta da pata e registre isso como a altura. Agora, com o animal em decúbito dorsal, coloque suavemente a fita métrica ao redor do contorno abdominal e faça uma medição. Em seguida, meça o comprimento da tíbia da parte inferior da articulação do joelho até a inserção do tendão de Aquiles.Prepare uma solução estoque de glicose a 60% com 60 gramas de glicose em 100 mililitros de cloreto de sódio a 0,9%. Deixe os animais jejuarem apenas com água por sete horas. Em seguida, para determinar a glicemia de jejum, coloque um coelho consciente em uma contenção em decúbito ventral.Insira uma nova tira em um medidor de glicose e, em seguida, use uma lanceta na veia marginal esquerda da orelha para obter uma gota de sangue e toque a gota na tira de teste. Use o medidor de glicose para medir o nível de glicose no sangue. Com um cateter descartável, canule a veia marginal da orelha direita e injete um bolus de uma solução de glicose a 60%.Use a lanceta como antes para coletar amostras de sangue 15, 30, 60, 90, 120 e 180 minutos após a injeção de glicose e use o medidor de glicose para analisá-las. Remova o cateter descartável e use gaze para beliscar o local de inserção do cateter. Assim que o sangue estiver coagulado, remova a gaze e verifique o estado do animal.Para o registro da pressão arterial, prepare o sistema de aquisição que inclui um transdutor de pressão, uma seringa de 10 mililitros com cloreto de sódio a 0,9%, uma torneira de três vias, um amplificador e um laptop PC com o software de aquisição. Para configurar o equipamento, coloque a torneira de três vias e a seringa no transdutor de pressão entre o transdutor no cateter e conecte o transdutor de pressão ao amplificador. Em seguida, conecte o amplifier ao laptop PC.Coloque o animal consciente que um coelho prende na posição de bruços. Aqueça o ouvido antes da canulação e, em seguida, aplique topicamente um anestésico local no ouvido ao redor do local de inserção. Bata suavemente na área onde o pacote vascular passa para identificar facilmente a artéria.Em seguida, insira um cateter estéril na artéria central da orelha esquerda. Agora, afrouxe as restrições e deixe o animal ficar quieto por 30 minutos. Posicione o transdutor de pressão próximo ao animal na altura do coração e registre a pressão arterial continuamente por 20 minutos, diretamente do cateter arterial.Quando a gravação terminar, remova o cateter e use gaze para apertar o local de inserção do cateter para interromper a perda de sangue. Assim que o sangue estiver coagulado, remova a gaze e verifique o estado do animal. Para fazer medições de plasma, permita que os animais jejuem com água apenas por sete horas.Em seguida, coloque um animal consciente em uma contenção na posição de bruços e insira uma agulha estéril de calibre 21 na veia marginal da orelha esquerda. Assim que o sangue começar a pingar, descarte a primeira gota e colete as amostras de sangue em tubos de EDTA até o nível indicado no tubo. Em seguida, armazene as amostras no gelo.Centrifugue as amostras de sangue a 1500 G e quatro graus Celsius por 15 minutos. Após a centrifugação, use uma pipeta para coletar o plasma e prepare alíquotas de 250 microlitros. Analise imediatamente as amostras frescas para colesterol total, HDL, LDL e triglicerídeos.Conforme mostrado nesta tabela, o peso dos coelhos do grupo SM aumentou progressivamente na dieta hiperlipídica até o final do protocolo experimental. O comportamento da ingestão energética e suas flutuações é ilustrado neste gráfico, variando de 250 a 815 quilocalorias no grupo SM. Neste gráfico, a contribuição relativa das diferentes fontes de energia é representada.Existem períodos críticos nas semanas 14 e 28, porque, dado o estresse produzido pelos procedimentos experimentais, os coelhos podem diminuir a ingestão de ração e água. Observa-se hiperglicemia leve na semana 14, que atinge um platô, e mantém valores semelhantes na semana 28. A área sob a curva também aumenta no grupo MedS.A hipertensão está estreita e diretamente relacionada à gravidade da obesidade. Coelhos alimentados com uma dieta rica em gordura e sacarose por 28 semanas mostraram um aumento na pressão arterial sistólica, diastólica e média já na semana 14, e esse aumento na pressão arterial é mantido na semana 28. Por fim, nesse modelo crônico, foi observada alteração no perfil lipídico já na semana 14, e essa alteração permaneceu estável até a semana 28.Isso incluiu um aumento nos triglicerídeos e LDL, uma diminuição no HDL e nenhuma alteração no colesterol total em animais MedS versus controles em ambos os momentos. Usando esse modelo crônico, outros estudos poderiam ser realizados para responder a perguntas adicionais, como como a patologia está se transformando de maneira semelhante na síndrome metabólica humana, permitindo novas perspectivas nos mecanismos fisiopatológicos envolvidos na progressão da doença. Este modelo experimental abriu caminho para pesquisadores no campo da fisiologia interativa e fisiopatologia explorarem os mecanismos subjacentes à remodelação de órgãos.A detecção de biomarcadores para identificar pacientes em risco, ou testar novas abordagens terapêuticas para o tratamento da síndrome metabólica.

an-experimental-model-diet-induced-metabolic-syndrome-rabbit

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra a geração de um modelo de câncer de endométrio em coelho injetando uma suspensão de células VX2 altamente metastática nos cornos uterinos suturados do coelho. Isso leva à geração de câncer de endométrio primário com metástases linfonodais retroperitoneais.

Modelo de modelagem de câncer de endométrio metastático: uma técnica para gerar câncer de endométrio com metástase linfonodal em modelos de coelhos

Modelos animais de aterosclerose são essenciais para entender o mecanismo e a investigar novos enfoques para evitar o desenvolvimento de placa ou ruptura, das principais causas de morte no mundo industrializado. Este protocolo utiliza uma combinação de lesão de balão e colesterol dieta rica para induzir ateroma na artéria ilíaca coelho.

O modelo de coelho da aterosclerose acelerada: uma perspectiva metodológica da artéria ilíaca balão lesão

Nós descrevemos um procedimento cirúrgico usado para induzir a isquemia periférica nos coelhos com hiperlipidemia e diabetes. Esta cirurgia actua como um modelo pré-clínico para as circunstâncias experimentadas na doença de artéria periférica nos pacientes. A angiografia também é descrita como um meio de medir a extensão da isquemia introduzida e a recuperação da perfusão.

Modelo pré-clínico de isquemia de membros posteriores em coelhos diabéticos

Aqui nós descrevemos, passo a passo, um protocolo detalhado para realizar a Ecocardiografia no modelo do coelho. Nós mostramos como obter corretamente as diferentes visões ecocardiográficas e planos de imagem, bem como os diferentes modos de imagem disponíveis em um sistema de ecocardiografia clínica rotineiramente usado em pacientes humanos e veterinários.

Exame ecocardiográfico transtorácico no modelo coelho

Este protocolo descreve o uso de uma dieta altamente palatável, de estilo ocidental cafeteria para modelar excessos e obesidade em roedores. Aqui, fornecemos um esboço detalhado da seleção, preparação e medição de alimentos e explicamos fatores metodológicos que ajudam na geração de um fenótipo robusto e reproduzível.

Palatável dieta de estilo ocidental cafeteria como um método confiável para modelagem de dieta induzida obesidade em roedores

O registro contínuo da pressão arterial permite a investigação do impacto de vários parâmetros hemodinâmicos. Este relato demonstra a aplicação da monitorização contínua da pressão arterial em um modelo animal de grande porte de acidente vascular cerebral isquêmico para determinação da fisiopatologia do AVC, impacto de diferentes fatores hemodinâmicos e avaliação de novas abordagens de tratamento.

Monitorização e Modulação da Pressão Arterial em Tempo Real em Modelo de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico em Coelhos

O presente estudo demonstra um modelo animal altamente reprodutível de lesão aguda de isquemia e reperfusão miocárdica regional em coelhos, utilizando uma minitoracotomia esquerda para casos de sobrevida ou uma esternotomia mediana para casos de não sobrevida.

Modelo de Lesão de Isquemia e Reperfusão em Coelhos

Este estudo detalha os procedimentos para o estabelecimento de uma lesão crônica do manguito rotador (MR) de coelhos. Especificamente, a lesão é criada na unidade músculo-tendão/miotendíneo subescapular (SSC) para mimetizar a anatomia e fisiopatologia do MR humano, incluindo degeneração gordurosa muscular (DF) grave. Este protocolo pode ser aplicado para estudar lesões do MR e avaliar terapias regenerativas.

Desenvolvimento de um modelo de lesão crônica do manguito rotador de coelhos para estudo de fibrose e degeneração gordurosa muscular

Este protocolo descreve um método para induzir cardiomiopatia diabética por meio de uma combinação de dieta rica em gordura e injeção de estreptozotocina. Essa abordagem visa fornecer uma estrutura confiável para a investigação científica sobre a cardiomiopatia diabética e explorar possíveis caminhos para aplicações de tratamento clínico.

Modelagem e Avaliação do Modelo de Cardiomiopatia Diabética Murina

Este estudo oferece um método reprodutível e padronizado para estabelecer modelos de ratos obesos que apresentam obesidade simples, comumente caracterizada por pâncreas gorduroso. Também inclui protocolos detalhados para amostragem de tecido pancreático e imuno-histoquímica.

Desenvolvimento e Validação de uma Metodologia para Estabelecimento de Modelos de Ratos Obesos com Pâncreas Gorduroso Típico

Aprenda a desenvolver um modelo experimental de síndrome metabólica em coelhos usando dieta rica em gordura e sacarose. Este método permite estudar remodelação de órgãos e testar novas abordagens terapêuticas.

Um modelo Experimental de síndrome metabólica induzida por dieta em coelho: considerações metodológicas, desenvolvimento e avaliação (Vídeo) | JoVE Journal

Um modelo Experimental de síndrome metabólica induzida por dieta em coelho: considerações metodológicas, desenvolvimento e avaliação

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