Name: Imagem de Intravital dois fotões de leucócitos durante a resposta imune em fígado de rato lipopolissacarídeo-tratados (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-06T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Aprenda a realizar imagem intravital de dois fotões para observar leucócitos no fígado de camundongos durante endotoxemia induzida por lipopolissacarídeo. Esta técnica minimamente invasiva permite visualizar em tempo real a dinâmica celular e avaliar respostas imunes hepáticas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Este estudo foi suportado por um fundo de nacional pesquisa Fundação de Coreia (NRF) financiado pelo governo da Coreia (MSIP; concessão n. º 2016R1A2B4008199, Y-m. H.) e o Ministério da saúde & bem-estar, República da Coreia (número de concessão: HI14C1324).

Todos os procedimentos foram realizados em conformidade com as diretrizes do Comitê de uso de Yonsei Universidade faculdade de medicina, Coreia e institucional Cuidado Animal. Proteína de LysM-verde fluorescente (GFP; gfp / +) ratos8 e CX3Cr1-GFP (gfp / +)9 ratos em 8-12 semanas de idade foram utilizados para a imagem latente intravital. Todos os instrumentos cirúrgicos foram esterilizados e desinfetados com álcool a 70%.
1. personalizados rato fígado câmara com apoio de ferramentas de imagem
<ol><li>Fígado de rato de imagem projeto câmara<ol>
<li>Fazer uma câmara do seguinte tamanho de fígado de rato de imagem (Figura 1): câmara interna (120 mm comprimento x 160 mm de largura x 30 mm altura), Câmara exterior (100 mm comprimento x largura 100 mm x 24 mm altura), parafusos (altura de 3 mm × 30mm Ф), nozes (Ф 4 mm) e nozes em forma de asa (Ф 4 mm).</li>
		<li>Medir o agente de cura e elastômero base na proporção de 1:9 para fazer um total de 120 g de silicone.</li>
		<li>Coloque a mistura de silicone líquido em um Erlenmeyer de 250 mL e misture bem. Em seguida, coloque o frasco num exsicador e remover bolhas de ar por cerca de 1h sob vácuo através da bomba.</li>
		<li>Despeje a mistura do silicone líquido em uma câmara do mouse personalizados tão alta quanto 10 mm de altura e que cura por um par de dias (figura 1A).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Preparação de slides de cobertura e o fígado cama de fixação<ol>
<li>Sobre o frame do metal, anexe o vidro de tampa usando a cola de silicone. Deixe secar por 1 dia (figura 1B).</li>
		<li>Para efetivamente manter a água destilada para a lente de imersão de água, uma estrutura de bloqueio de água semipermanente é essencial. Fazer 1 mm arredondamento cola de silicone e endurecê-lo durante a noite.</li>
		<li>Misture o agente de cura e elastômero base e em seguida despeje em uma placa de 6 a uma altura de aproximadamente 8-10 mm. realize o processo de endurecimento conforme descrito em 1.1.2-1.1.4.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. preparação de LPS
<ol><li>Prepare-se estéril 1 × fosfato salino (PBS) para diluir o pó de LPS da Salmonella enterica sorotipo enteritidis. (1 × PBS: 137 mM NaCl, KCl de 2,7 mM, 10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4).</li>
	<li>Pré-aquecer o PBS em banho-maria a 37 ° C e abrir a garrafa de pó de LPS (25 mg) cuidadosamente.</li>
	<li>Usando um auxílio de pipeta, despeje a PBS estéril (5 mL) do frasco de pó de LPS e agitar suavemente ou suspender a solução para preparar a solução-mãe. Nota: Depois de pó de LPS é liquefeito, num Vortex duro pode causar bolhas. Evite fazer bolhas para minimizar a perda ao fazer alíquotas em tubos de 1,5 mL.</li>
	<li>Armazenar a solução estoque de LPS −20 ° C e diluí-la em uma solução de LPS de 1 mg/mL para injeção.</li>
	<li>Injecte a solução de LPS de 1 mg/mL (20 mg/kg) no peritônio de um mouse não-anestesiados utilizando uma seringa de 1 mL. Para o animal de controle, injete o mesmo volume de PBS.</li>
	<li>Espere por 2h para resposta inflamatória suficiente.</li>
</ol>3. preparação do Texas-vermelho Dextran para manchar os vasos sanguíneos
<ol><li>Prepare dois tubos cônicos de 15 mL e 10 mL de PBS estéril.</li>
	<li>Diluir o pó vermelho Texas-dextrano (25mg) em 3 mL de PBS e misture bem. Transfira a mistura para um tubo cônico de 15 mL vazio.</li>
	<li>Transfira a restante PBS (7 mL) para o tubo cônico de 15 mL, contendo a mistura de dextrano (3 mL).</li>
	<li>Conecte a ponta de uma seringa de 10 mL, um filtro de seringa de 0,45 µm. O filtro de seringa deve substituir a agulha.</li>
	<li>Filtre a mistura de dextrano (10 mL). Pressione a seringa uniformemente para evitar derramamento.</li>
	<li>Dispense a 500 µ l da solução de dextran 2,5 mg/mL no tubo de 1,5 mL de luz-bloqueada e armazená-lo no −20 ° C. Uma vez descongelado, armazená-lo em 4° C.</li>
</ol>4. processo cirúrgico
<ol><li>Desinfecte a mesa de cirurgia e todos os instrumentos, usando álcool a 70% antes da cirurgia. Em seguida, definir as ferramentas para a cirurgia de fígado e ajuste a placa de aquecimento a 37 ° C (Figura 2A, B).</li>
	<li>Para anestesia, intraperitonealmente Injete os ratos com 30 mg/kg de tiletamina/eficiente e 10 mg/kg de xilazina. Essas soluções podem ser misturadas e diluídas em PBS para injeção simultânea. Confirme anesthetization pressionando suavemente o dedo do mouse.  Prosseguir a próxima etapa quando não há nenhum reflexo.</li>
	<li>Aplique pequena quantidade de pomada para evitar o ressecamento da retina do rato.</li>
	<li>Remova os pelos do corpo ao redor da área do abdômen usando creme depilatório (Figura 2).</li>
	<li>Injete 200 µ l de solução de Dextran Texas-vermelho (concentração de 2,5 mg/mL) através da veia da cauda ou retrô-orbital injeção usando uma seringa de insulina (Figura 2D).</li>
	<li>Marque a área subcostal direita com um marcador. A linha deve ser desenhada a partir do processo xifoide até o fim da costela. Corte a epiderme com pinças e tesouras (Figura 2E, F).</li>
	<li>Abrir a cavidade abdominal usando microtesoura e pinça e expor o fígado com cuidado. O lobo lateral esquerdo deve ser desenrolado usando cotonetes de algodão (Figura 2, H).</li>
	<li>Despeje 500 µ l de PBS estéril na cavidade abdominal para evitar o ressecamento do fígado.</li>
	<li>Coloque o mouse na posição de decúbito-direito numa câmara personalizados e aplique uma pequena quantidade de cola de tecido para a cama de silício. Cuidadosamente, anexe o fígado usando cotonetes de algodão (Figura 2I). Nota: Porque o tecido do fígado é extremamente friável, não mecanicamente puxe para fora o fígado. Delicadamente ensaiando com cotonetes de algodão.</li>
	<li>Poucos segundos depois, molhe o fígado novamente com 500 µ l de PBS estéril para evitar a secagem fora do fígado. Coloque a armação metálica sobre o fígado e fixe-a firmemente com nozes (Figura 2J).</li>
</ol>5. intravital imagem latente do fígado com microscopia de dois fotões
<ol><li>Executar o software ZEN (Carl Zeiss) para ligar o laser, definir o comprimento de onda de 880 nm e o conjunto verde e canais de vermelhos. Ajuste a potência do laser de acordo com a intensidade de fluorescência (Figura 3A). Informações de filtro de emissão são a seguinte: verde/Alexa488, 500-550 nm e vermelho/Alexa 555, 575-610 nm.</li>
	<li>Coloque a câmara no palco da imagem latente e o 20 X lente objetiva de imersão de água próximo a tampa de vidro.</li>
	<li>Conserte o aquecedor de borracha de silicone sob o corpo do mouse para manter a sua temperatura de corpo (Figura 3B).</li>
	<li>Largue a 500 µ l de água destilada no frame do metal e puxe a lente objetiva perto do fígado (Figura 3).</li>
	<li>Ajuste o foco e determinar a profundidade e a altura da área de imagem.</li>
	<li>Imagem de conduta.</li>
	<li>Para a imagem latente a longo prazo, injete metade da dose de mistura tiletamina/eficiente e xilazina cada hora durante a imagem latente. É essencial manter a temperatura do corpo dos ratos a 37 ° C durante esta etapa. Sempre ficar de olho para o mouse, desde o tempo de anesthetization difere de cada rato. Nota: Este método não é adequado para recuperação após a cirurgia e a imagem latente. Eticamente, sacrificamos o mouse imediatamente após a cirurgia.</li>
	<li>Verificar os reflexos de pedal para cada 30 min para anesthetization estável.</li>
</ol>6. análise de dados
<ol><li>Abra o software de análise de dados Volocity e importar os dados brutos na biblioteca para o software.</li>
	<li>Remova o ruído da imagem de acordo com a situação e tirar um instantâneo. Nota: Para obter suavizar imagens, use o filtro 'Fino' ou 'Mediana'. Além disso, use o recurso de 'Melhoramento' para fazer imagens borradas ou escuras mais claras.</li>
	<li>Ajuste os itens editados para 100% e a exportação como arquivos JPEG ou TIFF para imagens de instantâneo e AVI para filmes.</li>
</ol>

<ol><li>Girard, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fuels%2C+hormones%2C+and+liver+metabolism+at+term+and+during+the+early+postnatal+period+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Fuels, hormones, and liver metabolism at term and during the early postnatal period in the rat.</a> J Clin Invest. 52 (12), 3190-3200 (1973).</li>
<li>Marques, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+liver+biology+in+vivo+using+conventional+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Imaging liver biology in vivo using conventional confocal microscopy.</a> Nat Protoc. 10 (2), 258-268 (2015).</li>
<li>Dasari, S., Weber, P., Makhloufi, C., Lopez, E., Forestier, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+Microscopy+Imaging+of+the+Liver+following+Leishmania+Infection%3A+An+Assessment+of+Hepatic+Hemodynamics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics.</a> J Vis Exp. (101), e52303(2015).</li>
<li>Honda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+neutrophil+recruitment+in+hepatic+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of neutrophil recruitment in hepatic ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Transplantation. 95 (4), 551-558 (2013).</li>
<li>Jenne, C. N., Wong, C. H., Petri, B., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+spinning-disk+confocal+microscopy+for+the+intravital+analysis+of+platelet+dynamics+in+response+to+systemic+and+local+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The use of spinning-disk confocal microscopy for the intravital analysis of platelet dynamics in response to systemic and local inflammation.</a> PLoS One. 6 (9), e25109(2011).</li>
<li>Ritsma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+through+an+abdominal+imaging+window+reveals+a+pre-micrometastasis+stage+during+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy through an abdominal imaging window reveals a pre-micrometastasis stage during liver metastasis.</a> Sci Transl Med. 4 (158), 158ra145(2012).</li>
<li>Sierro, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Liver+Capsular+Network+of+Monocyte-Derived+Macrophages+Restricts+Hepatic+Dissemination+of+Intraperitoneal+Bacteria+by+Neutrophil+Recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">A Liver Capsular Network of Monocyte-Derived Macrophages Restricts Hepatic Dissemination of Intraperitoneal Bacteria by Neutrophil Recruitment.</a> Immunity. 47 (2), 374-388 (2017).</li>
<li>Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insertion+of+enhanced+green+fluorescent+protein+into+the+lysozyme+gene+creates+mice+with+green+fluorescent+granulocytes+and+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages.</a> Blood. 96 (2), 719-726 (2000).</li>
<li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+fractalkine+receptor+CX%283%29CR1+function+by+targeted+deletion+and+green+fluorescent+protein+reporter+gene+insertion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion.</a> Mol Cell Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).</li>
<li>Heymann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+intravital+multiphoton+microscopy+imaging+of+immune+cells+in+healthy+and+diseased+liver+using+CXCR6.Gfp+reporter+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Long term intravital multiphoton microscopy imaging of immune cells in healthy and diseased liver using CXCR6.Gfp reporter mice.</a> J Vis Exp. (97), (2015).</li>
</ol>

Os autores declaram não concorrentes interesses financeiros.

O fígado tem sido ativamente estudado por muitos grupos3,10, devido à importância da sua função. Por exemplo, Heymann et al sugeriram um método delicado usando agarose. Embora esse método foi encontrado para ser altamente precisos, a configuração de agarose leva tempo. Todavia, com nossa metodologia, todos os procedimentos podem ser efectuados dentro de 30 min, minimizando outros fatores de confundimento. Em segundo lugar, estabilizar o fígado é extremamente impo...

O fígado é o órgão metabólico importante nos mamíferos; Ele atua como uma torre de controle para desintoxicação, hormônios e energia1. Devido à sua importância, os pesquisadores realizaram muitos experimentos in vitro e in vivo para elucidar as alterações no fígado durante a inflamação. A microscopia intravital tem sido usada para capturar imagens ao vivo do fígado2 . Com efeito, fígado de vários métodos de imagem têm sido introduzidos2,3,4,5,6. No entanto, a fim de desenvolver uma abordagem cirúrgica mais simplificada e estabilização do órgão-alvo e as células do sistema imunológico, nós projetamos um protocolo simples que pode orientar pesquisadores para minimizar o seu esforço para a imagem latente intravital.
Neste estudo, introduzimos uma câmara de imagem estável e romance e uma técnica cirúrgica que pode ser usada para minimizar o sangramento e possível infecções. Confirmamos que o fígado permaneceu intacto por mais de 2 h. Com este método, identificamos com êxito morfologias de LCMs7 e neutrófilos sob condição séptica. Desde que esse método minimiza fatores confundimento, físicos e biológicos, tais como inflamação trêmula e inesperada durante o procedimento cirúrgico, prevemos que este método pode ser usado para observar reações agudas de células imunes no fígado em resposta a reagentes como LPS.

<table><tbody><tr><td>Câmara projetada para instrumentos</td><td>de célula</td><td></td> viva <td>Tamanho personalizado</td></tr><tr><td>Slide de tampa de metal</td><td>Instrumentos</td><td></td> de célula viva <td>Tamanho personalizado</td></tr><tr><td>Vidro de cobertura</td><td>Eletrônica Microscopia Sciences</td><td>#72204-03</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Kit de elastômero de silicone</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Frasco Erlenmeyer</td><td>DURAN</td><td>21 216 36</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura celular (tipo plano)</td><td>HYUNDAI Micro Co.</td><td>H31006</td><td></td></tr><tr><td>Dessecador</td><td>ADARSH</td><td>55204</td><td></td></tr><tr><td>High Q BOND SE 5 mL</td><td>BJM LAB</td><td></td><td>Para fazer barragem semi-permanente</td></tr><tr><td>Aquecedores flexíveis de borracha de silicone</td><td>Omega</td><td>SRFR/SRFG SERIES, M1250/0800</td><td></td></tr><tr><td>Fonte de alimentação DC</td><td>Toyotech</td><td>DP30-03A</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Solução salina</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>tamponada com fosfatoLipopolissacarídeos (LPS) de Salmonella enteria sorotipo enteritidis</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6011</td><td></td></tr><tr><td>Texas Red Dextran</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1830</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Tubo cônico de polipropileno de alta clareza</td><td>FALCON</td><td>14-959-49B</td><td></td></tr><tr><td>0,45 &mu; filtro m (filtro de seringa Minisart)</td> <td>Sartorius</td><td>16555k</td><td></td></tr><tr><td>1,5 ml Micro Tubo, âmbar</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-X</td><td>Para seringa de bloqueio de luz</td></tr> de <tr><td>1 mL</td><td>Vacina da Coréia</td><td>KV-S01</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 3 mL</td><td>Vacina da Coréia</td><td>KV-S03</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 10 mL</td><td>Vacina da Coréia</td><td>KV-S10</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de insulina de 0,3 mL</td><td>Becton Dickinson</td><td>324900</td><td></td></tr><tr><td>Creme de depilação 100 mL</td><td>Body natur</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cotonete</td><td>ABDI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zoletil 50 5 mL</td><td>Virbac</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rompun 10 mL</td><td>Bayer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placa de aquecimento</td><td>Instrumentos de célula viva</td><td>PH-S-10</td><td>Controlador DC de tamanho personalizado</td></tr><tr><td></td><td>Instrumentos</td> <td>de célula viva-301</td><td></td></tr><tr><td>Microdissecação Tesoura</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-5418</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura</td><td>Roboz</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Roboz</td><td>RS-5137</td><td></td></tr><tr><td>Vet bond</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>ZEN software (Black Edition)</td> Programa <td>Carl Zeiss</td><td></td><td>para LSM 7 MP</td></tr><tr><td>LSM 7 MP</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Programa de Análise Volocity</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

imagem de intravital dois fotões de leucócitos durante a resposta imune em fígado de rato lipopolissacarídeo-tratados

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

Sepse é um tipo de infecção grave que pode causar a falha de órgãos e tecidos danos. Embora as taxas de mortalidade e morbidade associada com sepse são extremamente elevado, não direto tratamento ou órgãos relacionados com o mecanismo foi examinado em detalhes em tempo real. O fígado é o órgão chave que gerencia as toxinas e infecções no corpo humano. Neste documento, tivemos como objetivo realizar intravital imagem latente do fígado de rato após indução de endotoxemia para acompanhar a motilidade das células do sistema imunológico, tais como neutrófilos e macrófagos capsulares hepáticas (LCMs). Nesse sentido, nós projetamos um novo método cirúrgico para exposição do fígado com cirurgia minimamente invasiva. Os ratos foram injetados intraperitonealmente com lipopolissacarídeo (LPS), um endotoxina comum. Usando nossa nova abordagem cirúrgica para exposição e intravital imagem do recrutamento rato fígado, que encontramos o neutrófilo em proteína de LPS-tratados LysM-verde fluorescente (GFP) fígado de rato foi aumentado em comparação com isso em tampão fosfato fígado de tratados com solução salina. Após o tratamento de LPS, o número de neutrófilos aumentou significativamente com o tempo. Além disso, estamos com êxito usando ratos CX3Cr1-GFP, visualizado fígados macrófagos residentes chamados LCMs. Portanto, para investigar a eficácia de novos reagentes para controlar a mobilidade imune na vivo, determinando a motilidade e morfologia dos neutrófilos e LCMs no fígado pode permitem identificar efeito terapêutico no órgão falha e tecido danos causados por ativação de leucócitos na sepse.

Foi criada uma câmara de imagens simples e muito estável. Parte inferior da câmara estava coberta com silicone, que impediu a escorregar do rato corpo e órgãos. Além disso, porque o silício tem a quantidade adequada de elasticidade, poderia impedir esperado danos induzidos pela pressão do slide tampa (figura 1A, C). Segunda, tecido-cofre cola (sulfite de Vet) foi aplicada a fim reparar o fígado extraído na cama do silicone em forma de círculo...

Estabelecemos um protocolo cirúrgico romance para a imagem latente de dois fotões de fígado de ratos ao vivo com invasão mínima. Com esta técnica, identificamos a estrutura detalhada do fígado durante endotoxemia induzidas pelo lipopolissacarídeo. Nós antecipamos que este método pode ser utilizado para determinar a eficácia de vários tratamentos de reagentes para migração de leucócitos hepática.

Imagem de Intravital dois fotões de leucócitos durante a resposta imune em fígado de rato lipopolissacarídeo-tratados

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

O objetivo geral deste procedimento é observar a morfologia e a funcionalidade dos leucócitos dentro do fígado durante o choque séptico. A principal vantagem dessa técnica é que você pode obter vídeos diretos de leucócitos dentro do fígado. Antes da cirurgia, use etanol a 70% para desinfetar a mesa de cirurgia e todos os instrumentos.Em seguida, configure as ferramentas para cirurgia hepática e ajuste a placa de aquecimento para 37 graus Celsius. Depois de anestesiar os camundongos injetados com LPS ou PBS de acordo com o protocolo de texto, aplique uma pequena quantidade de pomada para os olhos para evitar que a retina seque. Use uma lâmina de barbear e creme depilatório para remover os pelos ao redor do abdômen.Em seguida, use gaze úmida para limpar o abdômen. Ao realizar uma injeção retroorbital usando uma seringa de insulina, injete 200 microlitros de solução de dextrano vermelho do Texas. Use um marcador para marcar a área subcostal direita do processo xifóide até o final da costela.Em seguida, aplique iodopovidona no abdômen do camundongo para prevenir infecções secundárias. Use fórceps e tesouras para cortar a epiderme. Em seguida, usando microtesouras e fórceps, abra a cavi

two-photon-intravital-imaging-leukocytes-during-immune-response

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Aqui, descrevemos um método não invasivo de dois fótons abordagem microscopia (2P) para estudo de leucócitos homing na pata do rato. Discutimos os aspectos técnicos de nossa preparação tissular e andar o leitor através de um experimento típico de configuração inicial para coleta de execução e de dados.

Não-invasiva por imagem do Homing leucócitos e Migração In vivo</em

Recentes avanços em 2-fotão microscopia permitiram em tempo...

Imagem intravital do Linfonodo Popliteal Rato

Este artigo relata um método detalhado para a medição dinâmica e quantificação da velocidade do fluxo sanguíneo dentro dos vasos sanguíneos individuais da vasculatura hepática de camundongo usando imagens de microscopia intravital em combinação com uma metodologia específica para aquisição e análise de imagens.

Microscopia intravital Imagem do Fígado seguinte<em&gt; Leishmania</em&gt; Infecção: Uma Avaliação de hepáticas Hemodinâmica

A imagem intravital estável de alta resolução de células imunes no fígado é um desafio. Aqui, fornecemos um método altamente sensível e confiável para estudar a migração e as interações célula-célula de células imunes no fígado de camundongo por longos períodos (cerca de 6 horas) por microscopia de varredura a laser multifotônica intravital em combinação com monitoramento de terapia intensiva.

Long Term Intravital Multiphoton Microscopia de imagem de células imunes no saudáveis ​​e doentes do fígado por meio CXCR6.Gfp Reporter Mice

Esta aplicação simplificada de microscopia intravital de veias mesentérias em camundongos pode ser usada em diferentes modelos de inflamação para observar as interações leucócitos-endoteliais e plaquetas-leucócitos.

Interações Intravital Microscopia de leucócito-endothelial e plaquetas-leucócitos em mesenterial Veias Ratos

Detalhamos um protocolo para monitorar o comportamento de neutrófilos e monócitos em veias mesentéricas em estado estacionário e condições inflamatórias usando microscopia confocal intravital em camundongos anestesiados.

Imagiologia neutrófilos e monócitos em Mesenteric Veins por Microscopia intravital em ratos anestesiados em Tempo Real

Aqui, descrevemos uma abordagem de microscopia de folha clara para visualizar o infiltrado de leucócitos CD45 + cardíacos em um modelo murino de miocardite fulminante asséptica, que é induzida pelo tratamento de toxina diftônica intratraqueal de ratos CD11c.DTR.

Visualização Quantitativa de Infiltrado de Leucócitos em um Modelo Murino de Miocardite Fulminante por Microscopia de Folha de Luz

Descrevemos dois ensaios in vitro e in vivo de infecção que podem ser usados para analisar as atividades dos fatores do hospedeiro-codificação.

Usando um patógeno bacteriano para sonda para celular e organísmica-nível Host respostas

Nós descrevemos um método para visualizar o IELS do ltγδ GFP-etiquetado usando a imagem latente intravital do intestino pequeno murino pela microscopia confocal invertida do disco de giro. Esta técnica permite o rastreamento de células ao vivo dentro da mucosa para até 4 h e pode ser usada para investigar uma variedade de interações imunológicas intestinais.

Imagem latente intravital de linfócitos intraepithelial no intestino pequeno murine

Aqui, apresentamos um protocolo para obter imagens intravitais do pulmão esquerdo de camundongo transplantado usando microscopia de dois fótons. Isso representa uma ferramenta valiosa para estudar a dinâmica e as interações celulares em tempo real após o transplante de pulmão murino.

Microscopia intravital de dois fótons do pulmão de camundongo transplantado

Aprenda a realizar imagem intravital de dois fotões para observar leucócitos no fígado de camundongos durante endotoxemia induzida por lipopolissacarídeo. Esta técnica minimamente invasiva permite visualizar em tempo real a dinâmica celular e avaliar respostas imunes hepáticas.

Imagem de Intravital dois fotões de leucócitos durante a resposta imune em fígado de rato lipopolissacarídeo-tratados

Explorar mais vídeos