Name: Transplante de células-tronco derivadas de tecido adiposo folha para reduzir o vazamento após colectomia parcial em um modelo do rato (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: Aprenda o transplante de folhas de células-tronco derivadas de tecido adiposo para reduzir vazamento em anastomose colorretal em modelo de rato. Este método promove cicatrização tecidual sem materiais sintéticos.

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Os autores agradecem ao Prof. Dr. S.E.R. Hovius, Dr. M.A.M. Mureau e todos os cirurgiões do departamento de cirurgia plástica para a coleção de tecido adiposo subcutâneo. P. Sukho é suportado por uma concessão do programa The Netherlands Fellowship (NFP-12/435), durante a realização do estudo. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens é suportado por doações da Fundação holandesa de artrite (LP11).

Tecido adiposo abdominal subcutâneo foi obtido de doadores humanos com aprovação do Comité de ética médica (#MEC-2014-092), Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Holanda. Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Comitê ético da experimentação Animal, Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Países Baixos (133-14-01).
1. cultura e isolamento de ASCs humana
<ol><li>Prepare-se 3 mL de meio de isolamento para 1 g de tecido adiposo. Mix baixa glicose Dulbecco está meio modificado águia (LG-DMEM) com 10 g/L bovina albumina de soro (BSA) e colagenase 1 g/L do tipo 1.</li>
	<li>Dissecar o tecido adiposo subcutâneo abdominal de humano (n = 8, todos do sexo feminino, média de idade 40 ± 9 anos de idade) em pedaços pequenos (0,5 cm) usando um tamanho de lâmina cirúrgica estéril 10, pinça de Adson-Brown tecido e tesoura Metzenbaum em uma SafetyCabinet biológica estéril.</li>
	<li>Armazene o tecido dissecado em uma garrafa de armazenamento de mídia de vidro estéril. Pesar a quantidade total de tecido dissecado e iniciar a digestão com o meio de isolamento preparado (50 g de tecido adiposo com 150 mL de meio de isolamento por garrafa). O protocolo pode ser pausado aqui armazenando a garrafa com a dissecado de tecido adiposo e meio de isolamento a 4 ° C durante a noite em um misturador de rolos. Em seguida escaldar a garrafa no dia seguinte à temperatura de 25 ° C durante 15 minutos antes de continuar com a próxima etapa. Nota: Tecido adiposo abdominal subcutâneo obteve-se como material de sobra de doadores submetidos à cirurgia de reconstrução de mama com aprovação do Erasmus MC médica ética Comitê (# MEC-200) e de acordo com o código de conduta: "uso secundário adequado de tecido humano"(< http://www.federa.org>). Utilizou-se apenas restos de tecido adiposo de doadores que não opt-out para uso secundário.</li>
	<li>Digeri o tecido adiposo dissecado em uma garrafa de armazenamento de mídia de vidro estéril em uma abanador-incubadora a 150 rpm e 37 ° C, durante 1 h.</li>
	<li>Divida a solução digerida em tubos de 50 mL e centrifugar os tubos por 10 min a 390 x g.</li>
	<li>Preparar o meio de cultura: LG-DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (FBS), a 50 µ g/mL gentamicina e a 1,5 µ g/mL ampothericin B.</li>
	<li>Após a centrifugação, remover o sobrenadante e ressuspender as células em 20 mL de meio de cultura (LG-DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (FBS), a 50 µ g/mL gentamicina e a 1,5 µ g/mL ampothericin B). Centrifugar as células novamente por 5 min a 390 x g e remover o sobrenadante.</li>
	<li>Ressuspender as células com 10 mL de meio de cultura (LG-DMEM suplementado com 10% FBS, 50 µ g/mL gentamicina e 1,5 µ g/mL ampothericin B) e filtrar a suspensão através de um filtro de 100 µm.</li>
	<li>Adicionar 50 µ l de solução de ácido acético 3% / azul de metileno (para lise de células vermelhas do sangue) de 50 µ l de suspensão de células, misturar a solução e usar 10 µ l para contar as células. Execute célula contando com um hemocytometer. Então as células em uma densidade de 40.000 células/cm2 em meio de cultura (LG-DMEM suplementado com 30% FBS, 50 µ g/mL gentamicina e 1,5 µ g/mL ampothericin B) da placa.</li>
	<li>Incube as células a 37 ° C numa atmosfera húmida com 5% de CO2 por 24 h.</li>
	<li>Após a incubação, lavar as células com fosfato quente (37 ° C) tampão salino (PBS) para remover detritos celulares e substituir os meios de comunicação com meio de cultura FBS 10% com recém adicionaram ácido ascórbico-2-fosfato (25 µ g/mL) e crescimento do fibroblasto recombinante humana fator 2 (FGF2, 1 ng/mL).</li>
	<li>Subcultura ASCs na confluência de 90% usando padrão solução de EDTA de tripsina 0,25% (3 mL para um balão de T175). Após 3-5 min, neutralize a solução de EDTA de tripsina 0,25% com 10 mL de meio de cultura (LG-DMEM suplementado com 10% FBS, 50 µ g/mL gentamicina e 1,5 µ g/mL ampothericin B). Nota: Flow cytometry análise usando marcadores de superfície comuns ASC e diferenciação de tri-linhagem ensaios foram realizados anteriormente e revelou que ASCs isolaram usando este protocolo exibido ASC características específicas21,22.</li>
	<li>Lavar as células com 10 mL de meio de cultura (LG-DMEM suplementado com 10% FBS, 50 µ g/mL gentamicina e 1,5 µ g/mL ampothericin B) para um balão de T175 e centrifugar as células durante 8 min em x 250 g remover o sobrenadante e ressuspender as células em 1 mL de meio de cultura. Conte as células com um hemocytometer.</li>
	<li>As células em frascos de cultura T175 em uma densidade de 8.000 células/cm2da placa.</li>
	<li>Congele os restantes ASCs em nitrogênio líquido, com 10% de Dimetilsulfóxido (DMSO) em meio de cultura antes de nova utilização.</li>
</ol>2. preparação de folha de ASC
<ol><li>Pre-casaco pratos de cultura thermo-responsivos (3,5 cm de diâmetro) com 1 mL de FBS e, em seguida, coloque os pratos em uma incubadora a 37 ° C durante pelo menos 30 minutos antes da semeadura de célula.</li>
	<li>Trypsinize ASCs usando a solução padrão de EDTA de tripsina 0,25% para 3-5 min (3 mL para um frasco de cultura T175). Se houver qualquer aglomerados de células após tripsinização, filtre as células através de um filtro de 100 µm antes da contagem.</li>
	<li>Neutralizar a solução de tripsina com LG-DMEM suplementado com 10% FBS (10 mL para um balão de T175) e centrifugar a suspensão de eritrócitos durante 8 min em x 250 g. remover o sobrenadante e ressuspender as células em 1 mL de DMEM-LG suplementado com 10% FBS.</li>
	<li>Após o revestimento os pratos de cultura thermo-responsivo com FBS, mover os pratos de incubadora para uma placa de aquecimento a 37 ° C e remover FBS do prato.</li>
	<li>Sementes ASCs em 400.000 células/cm2 (no total, 3,52 × 106 células diluídas em 2 mL de meio de cultura por prato).</li>
	<li>Cuidadosamente, distribua as células mais uniformemente possível balançando suavemente o prato.</li>
	<li>Folhas ASC cultura por 48 h a 37 ° C numa atmosfera húmida com 5% de CO2. Nota: Tente minimizar a abrir a porta de incubadora após semeadura ASCs para evitar quedas de temperatura que possam interferir com a formação de folha ASC ou causar descolamento prematuro de folhas ASC formados.</li>
</ol>3. parcial colectomia e anastomose colorretal
<ol><li>Induzir e manter ratos machos Wistar (pesando entre 250-350 g) com 1 L/min de isoflurano (inalação de 1.5-5%)/oxygen e injetar buprenorfina 0,05 mg/kg por via intramuscular.</li>
	<li>Uma vez que os animais estão sob anestesia geral, avalie a profundidade anestésica usando testes de reflexo. Aplica a pomada contendo vitamina A para os olhos para evitar ressecamento. Quando a anestesia é considerada suficiente para a cirurgia, assepticamente prepare o abdômen, raspar os cabelos e pulverizar a área cirúrgica duas vezes com etanol a 70%. Armar o abdômen com cortinas de papel estéril. Use uma técnica asséptica e manter o campo estéril durante todo o ato cirúrgico.</li>
	<li>Fazer uma incisão abdominal de 5 cm, com um tamanho de lâmina cirúrgica estéril 10 e estender a incisão com uma tesoura de Metzenbaum. Identificar e exteriorize o cólon e embalar o cólon do restante da cavidade abdominal com solução Salinas gazes umedecidas. Identificar o meio certo e deixou as artérias cólica no mesentério, sem rodeios dissecar ao redor de cada vaso utilizando mosquito de Halsted e ligar cada nave individual com seda trançada não absorvível 4/0.</li>
	<li>Isole o segmento do cólon entre 1,0 cm aborally ao ceco e 0,5 cm acima da artéria mesentérica caudal. Transecto através do cólon saudável com uma tesoura de Metzenbaum. Após a ressecção do segmento do cólon, unir as extremidades proximais e distais do cólon introduzindo dois cotonetes longos trans-anal através do cólon distal e em seguida na extremidade proximal do cólon.</li>
	<li>Usando um microscópio cirúrgico, crie uma anastomose to-end insuficientemente suturada invertendo-se uma camada suturar usando 5 suturas interrompidas (poliamida monofilamento não absorvível 8/0). Coloque as suturas interrompidas através de todas as camadas da parede do cólon e posicione o extraluminally knots.</li>
	<li>Divida os ratos aleatoriamente em controle ou grupo de folha ASC.</li>
</ol>4. ASC folha transplante
<ol><li>Permitir que os pratos de cultura arrefecer à temperatura ambiente 40 min antes no vivo transplante, a fim de facilitar o desprendimento de folha ASC. Nota: Após o desprendimento, folhas ASC encolhem a aproximadamente 2 cm de diâmetro. Viabilidade de folha ASC permanece elevada pelo menos 3-6 h após o desprendimento de20.</li>
	<li>Retire do meio de cultura e substitui-lo com 1 mL de soro livre LG-DMEM.</li>
	<li>Delicadamente, pegue as bordas da folha ASC com Pinças atraumáticas e coloque o prato do lado da folha em cima da linha anastomótica de ASC.</li>
	<li>Cuidadosamente, para esticar o ASC folha cerca de 0,25 cm acima e abaixo da linha anastomótica usando as Pinças atraumáticas e envoltório da folha em torno do cólon. Levante o cólon até envoltório de folha de ASC em torno do lado dorsal. Nota: Folhas ASC espontaneamente aderirem à linha anastomótica, não há nenhuma necessidade de usar cola de tecido ou qualquer outro biomaterial. O grupo de controle não recebe qualquer tratamento adicional.</li>
	<li>Remover os cotonetes de algodão e trocar as luvas e instrumentos. Substitua o cólon no abdômen. Fechar o abdome-linea alba com uma camada de execução usando de Suturas absorvíveis trançado polyglycolic ácido 5/0. Suture subcutis e juntos em uma camada de execução suturas usando poliglicólico trançado absorvível ácido 5/0 a cútis.</li>
</ol>5. acompanhamento e avaliação pós-operatório
<ol><li>Imediatamente Re-hidratar os animais com uma injeção subcutânea de solução salina quente 5ml no pós-operatório. Coloque os animais sob uma lâmpada de calor para manter a temperatura corporal e monitorar os sinais vitais até animais recobrar a consciência suficiente para manter a prostração esternal. Nota: Os animais que tinham sido submetidos a cirurgia não foram devolvidos para a companhia de outros animais até que se recuperou totalmente. Após a recuperação, permitem o livre acesso à água e comida de rato normal. Para alívio da dor pós-cirúrgica, administre a buprenorfina 0,05 mg/kg por via subcutânea cada 6-8 h por 3 dias. Sem antibióticos foram administrados a qualquer momento neste estudo.</li>
	<li>Obter avaliações clínicas diárias de peso e bem-estar. No caso de uma pontuação muito baixa de bem-estar ou perda de peso severa, animais deveriam ser sacrificados por perda de sangue através de punção cardíaca enquanto ainda está sob anestesia.</li>
	<li>No dia 3 ou dia 7 de pós-operatório, anestesiar os ratos novamente com 1 L/min de isoflurano (inalação de 1.5-5%)/oxygen sem a buprenorfina e realizar uma re-laparotomia com uma incisão em forma de U. Verifique o abdómen para os sinais de peritonite, estenose, aderências fibrosas e a presença de abscessos. Marcar a severidade das adesões e abscesso no abdômen e na área anastomótica.</li>
	<li>Determine a pressão de rotura anastomótica, a insuflação de ar em um segmento fechado do cólon incluindo a anastomose. Grave a pressão do ar e o local da ruptura, quando o ar a primeiro fuga como estourando a pressão.</li>
	<li>Remover os dois pontos de cada animal sacrificado e consertar o corte segmento do cólon - contendo a anastomose colorretal - com formol 4% tamponado, seguindo por parafina incorporação e corte do cólon em 4 μm de seções espessas.</li>
	<li>Eutanásia dos animais enquanto sob anestesia diretamente após a colheita do segmento anastomose por perda de sangue através de punção cardíaca. Confirme a morte de animais com ausência de respiração, movimento e num piscar de olhos.</li>
	<li>Realize colorações histoquímicas como hematoxilina & eosina e Picro Sirius vermelho e colorações imuno-histoquímica com anticorpos contra mitocôndrias humanas, células endoteliais de rato (anti-CD34) e células do sistema imunológico (CD3 +, CD163 +).</li>
	<li>Digitalizar slides para análise computadorizada e comparar os grupos de animais.</li>
</ol>

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<li>Kobayashi, J., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+a+thermoresponsive+cell+culture+dish%3A+a+key+technology+for+cell+sheet+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Technol+Adv+Mat%22%5BJournal%5D)">Fabrication of a thermoresponsive cell culture dish: a key technology for cell sheet tissue engineering.</a> Sci Technol Adv Mat. 11 (1), 014111(2010).</li>
<li>Elloumi-Hannachi, I., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+sheet+engineering%3A+a+unique+nanotechnology+for+scaffold-free+tissue+reconstruction+with+clinical+applications+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Cell sheet engineering: a unique nanotechnology for scaffold-free tissue reconstruction with clinical applications in regenerative medicine.</a> J Intern Med. 267 (1), 54-70 (2010).</li>
<li>Miyahara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monolayered+mesenchymal+stem+cells+repair+scarred+myocardium+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction.</a> Nat Med. 12 (4), 459-465 (2006).</li>
<li>Makarevich, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+angiogenesis+in+ischemic+skeletal+muscle+after+transplantation+of+cell+sheets+from+baculovirus-transduced+adipose-derived+stromal+cells+expressing+VEGF165%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhanced angiogenesis in ischemic skeletal muscle after transplantation of cell sheets from baculovirus-transduced adipose-derived stromal cells expressing VEGF165.</a> Stem Cell Res Ther. 6, 204(2015).</li>
</ol>

Os autores declaram que a pesquisa foi realizada na ausência de qualquer relação comercial ou financeira que poderia ser interpretada como um potencial conflito de interesses.

Escapamento anastomótica é o efeito adverso mais grave após a ressecção do cólon com uma anastomose primária. Técnicas ideais para impedir fugas e ruptura anastomótica ainda estão faltando. Aplicação local de uma matriz de biomateriais tem sido conduzida, com resultados variados25,26,27. O objetivo das terapias com células é facilitar o reparo do tecido por substituição de tecido ou a estimulação da cicatrização local através de...

Colectomia parcial com uma anastomose primária é comumente realizada cirurgia que pode ser feita para muitas doenças que afetam o cólon como câncer colorretal, doença de Crohn e diverticulite1,2. A mais temida complicação após anastomose colorretal é fuga anastomótica3. Embora tenham sido identificados vários factores de risco associados a vazamentos anastomótica, soluções para a prevenção de vazamento permanecem unkown4,5.
Tecido adiposo-derivado de células do estroma (ASCs) estão associadas com propriedades anti-inflamatórias e trófico6,7, que faz com que estas células prometendo candidatos para terapias regenerativas8. A eficácia de ASCs para promover a cicatrização tecidual foi mostrada em vários tecidos como o músculo cardíaco, pele e esôfago9,10,11,12,13. No entanto, existem poucos relatos sobre o uso de ASCs para promover a cicatrização intestinal. Transplante de local de ASCs para anastomoses Colorretais experimentais através de biosutures ASC-revestido ou serosas injeções de ASCs não mostraram nenhuma melhora ou na cura de14 ou não impediu a fuga anastomótica apesar de um mais favorável anastomótica cura de15.
Transplante de local de ASCs em suspensão ou combinado com biomateriais podem ser associados com retenção insuficiente ou uma distribuição inadequada de células transplantadas11. Célula folha tecnologia16,17 oferece um método inovador de ASC entrega18,19. Portanto, em um estudo anterior, uma nova abordagem foi proposta na quais ASCs organizados em uma célula de folha poderá ser aplicada na anastomose colorretal experimental20. Este estudo demonstrou que o transplante de folha ASC é bem sucedido em reduzir o vazamento de anastomose colorretal após colectomia parcial em um modelo do rato. Este artigo relata a elaboração de folha ASC e técnica cirúrgica de transplante.

<table><tbody><tr><td>LG DMEM</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>22320022</td><td>isolamento e cultura ASC</td></tr><tr><td>colagenase tipo I</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>17100-01</td><td>ASC Isolamento</td></tr> de <tr><td>soro bovino Albumina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td>ASC Isolamento</td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>10270-106</td><td>FBS, isolamento ASC e cultura</td></tr><tr><td>3% acético ácido com azul de metileno</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7060</td><td>ASC Isolamento</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>15750-037</td><td>Isolamento e cultura ASC</td></tr><tr><td>Ancotericina B</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>15290-018</td><td>Isolamento ASC e cultura</td></tr><tr><td>Shaker (Gallenkamp Environmental Shaker Modelo 10X 400)</td><td>Akribis Scientific</td><td>F240</td><td>ASC Isolamento</td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Hettichlab</td><td>Rotina380</td><td>ASC isolamento e cultura</td></tr><tr><td>Tampão fosfato salino</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>14190-094</td><td>PBS, ASC isolamento e cultura</td></tr><tr><td>Ácido ascórbico-2-fosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8960</td><td>ASC isolamento e cultura</td></tr><tr><td>Fator de crescimento de fibroblastos recombinantes humanos 2</td><td>AbD Serotec</td><td>AF-100-15</td><td>FGF2, isolamento e cultura ASC</td></tr><tr><td>Tripsina EDTA</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>25200-056</td><td>Cultura ASC</td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650-5x</td><td>DMSO, ASC congelamento</td></tr><tr><td>Placas de cultura Termo-responsivas</td><td>Nunc Thermo scientific</td><td>174904</td><td>ASC preparação de folhas</td></tr><tr><td>Seda trançada não absorvível 4/0</td><td>B Cirurgia</td><td>de 21151042</td> Braun <td></td></tr><tr><td>Monofilamento não absorvível poliamida 8/0</td><td>B Braun</td><td>G1118170</td><td>cirurgia</td></tr><tr><td>Ácido poliglicólico trançado absorvível 5/0</td><td>B Braun</td><td>C1048207</td><td>cirurgia</td></tr></tbody></table>

transplante de células-tronco derivadas de tecido adiposo folha para reduzir o vazamento após colectomia parcial em um modelo do rato

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Anastomótica escapamento é uma complicação catastrófica após cirurgia colorectal. Embora os métodos atuais para prevenção de vazamento tem diferentes níveis de eficácia clínica, eles são até agora imperfeitas soluções. Terapia de células-tronco, usando folhas de ASC poderia fornecer uma solução para este problema. ASCs são considerados candidatos mais promissores para a promoção do tecido de cicatrização devido às suas propriedades tróficas e imunomoduladores. Aqui, nós fornecemos métodos para produzir folhas ASC de alta densidade, que são transplantadas para uma anastomose colorretal em um modelo do rato para reduzir o vazamento. ASCs formaram folhas de célula em pratos de cultura thermo-responsivo que poderiam facilmente ser desanexados. No dia do transplante, foi realizada uma colectomia parcial com uma anastomose colorretal 5-sutura. Os animais foram transplantados imediatamente com 1 folha ASC por rato. Folhas ASC aderiram espontaneamente para a anastomose sem qualquer cola, sutura ou qualquer biomaterial. Grupos de animais foram sacrificados 3 a 7 dias no pós-operatório. Em comparação com animais transplantados, a incidência de abscessos anastomótica e escapamento foi maior nos animais controle. Em nosso modelo, o transplante de folhas ASC após anastomose colorretal foi bem sucedida e associado uma menor taxa de fugas.

Um fluxograma deste estudo descrevendo tanto cultura folha ASC e o procedimento de ressecção do cólon e anastomose é mostrado na Figura 1. A Figura 2 mostra a morfologia microscópica de folha ASC e a aparência macroscópica da folha ASC durante e após o desprendimento. A Figura 3 mostra os diferentes passos do destacamento de folha ASC e transplante de órgãos. A Figura 4 ...

A preparação e a transplantação de lençóis de células-tronco (ASC) derivado de tecido adiposo para anastomoses Colorretais insuficientemente suturados em um modelo do rato é apresentado. Esta aplicação romance mostra que folhas ASC podem reduzir o vazamento de anastomose colorretal.

Transplante de células-tronco derivadas de tecido adiposo folha para reduzir o vazamento após colectomia parcial em um modelo do rato

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Por assumirem um efeito positivo na cicatrização do tecido, as folhas ASC foram testadas em muitos modelos de doenças, como infarto do miocárdio. Este experimento mostra que as folhas de ASC podem ser usadas intra-abdominalmente e aplicadas no intestino. A principal vantagem das chapas ASC é que não são necessários materiais sintéticos.Além disso, o transplante de folhas ASC é relativamente fácil de realizar, com apenas uma pequena quantidade de prática. Esta nova aplicação do transplante de folha ASC foi desenvolvida para evitar vazamentos após a ressecção intestinal e oferece um primeiro passo para o qual uma nova estratégia terapêutica. As lâminas de ASC aplicadas à anastomose intestinal têm se mostrado promissoras na prevenção de vazamentos.As folhas ASC também podem ser aplicadas a outros órgãos intra-abdominais, como o trato urinário. Comece dissecando o tecido adiposo abdominal subcutâneo humano em pedaços de 0,5 cm, com lâmina cirúrgica estéril tamanho 10, pinça de tecido Adson-Brown e tesoura de Metzenbaum. Pesar a quantidade total de tecido dissecado em um frasco de vidro estéril.Adicionar 30 ml de meio isolante por frasco. E digerir o tecido adiposo dissecado em uma incu

transplantation-adipose-tissue-derived-stem-cell-sheet-to-reduce

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra uma técnica para isolar e cultivar células-tronco derivadas do tecido adiposo do arco periaórtico murino marcadas com fluorescência (ADSCs) do tecido adiposo do arco periaórtico murino. Após o isolamento, os NCADSCs são detectados, classificados usando classificação de células ativadas por fluorescência e, posteriormente, cultivados em uma placa, promovendo a proliferação celular.

Isolando células-tronco derivadas de tecido adiposo do tecido adiposo periaórtico murino

Em 2001, pesquisadores da UCLA descreveu o isolamento de uma população de células-tronco adultas, chamadas células-tronco derivadas de tecido adiposo ou ASC, a partir de tecido adiposo. Este artigo descreve o isolamento de ASC de lipoaspirates usando, um protocolo de digestão enzimática manual utilizando colagenase.

Isolamento manual de células-tronco adiposo-derivadas de Lipoaspirates Humanos

Células-tronco adiposo-derivado (ASCs) são facilmente isoladas e colhidas a partir da gordura de ratos normais. ASC as folhas podem ser criadas usando a célula-folha engenharia e podem ser transplantadas Zucker ratos diabéticos gordos, exibindo a espessura total da pele defeitos com osso exposto e então coberto com uma BICAMADA de pele artificial.

Criação e transplante de uma folha de células-tronco adiposo-derivado (ASC) em um modelo de cicatrização de feridas diabética

Este estudo relata um método bem-sucedido de células adiposo endoscópica derivadas de tecido do estroma (ADSC) em folha transplante para a prevenção de estenose esofágica após uma dissecção endoscópica da submucosa estendida (ESD) em suínos.

ADSC folhas transplante para prevenir a estenose após estendido esofágico endoscópica submucosa Dissection

Aqui, apresentamos um protocolo para desenvolver um modelo câncer in vivo usando a tecnologia de célula de folha. Tal modelo poderia ser muito útil para a avaliação da terapêutica antineoplásica.

Explorando o potencial das células-tronco mesenquimais folha sobre o desenvolvimento do Carcinoma hepatocelular na Vivo

Este artigo descreve um método de transplante para enxertar células epiteliais mamárias doadoras na almofada de gordura branca interscapular de animais receptores. Este método pode ser usado para examinar os efeitos do hospedeiro e/ou doador no desenvolvimento do epitélio mamário e elimina a necessidade de pré-compensação, estendendo assim a utilidade desta técnica.

Transplante de células epiteliais mamárias no Bloco de Gordura Branca Interscapular

Este método de transplante de ilhotas cobertas de gordura é adequado para a detecção de ilhotas enxertadas na cavidade intraperitoneal. Notavelmente, não requer o uso de agentes bioligantes ou sutura.

Transplante de ilhotas cobertas de gordura usando tecido adiposo branco epididimal

Este protocolo descreve o método para estabelecer um modelo de bolsite em ratos. O modelo de bolsa ileal foi criado através da realização de cirurgia de anastomose ileal-bolsa anal (IPAA) usando técnicas microcirúrgicas. Após a cirurgia, o rato foi tratado com sulfato de dextrano sódico (DSS) a 4% por 4 dias.

Um modelo de bolsite em ratos após proctocolectomia e anastomose ileal bolsa-anal usando sulfato de dextrano sódico

Aqui apresentamos um protocolo de transplante de tecido adiposo branco e marrom que oferece uma estratégia promissora para reverter a subfertilidade, obesidade e hiperglicemia, enquanto melhora a função renal em camundongos BTBR diabéticos e obesos.

Enxertos adiposos brancos e marrons: uma abordagem para corrigir déficits reprodutivos, metabólicos e renais em camundongos obesos com braquiúria preta e castanha (BTBR)

Aqui, apresentamos um método padrão para isolar eficientemente células-tronco e adipócitos derivados do adiposo, caracterizado por redução de &gt;90% no tempo de processamento, alta viabilidade celular e ampla compatibilidade.

Isolamento Eficiente de Células-Tronco e Adipócitos Derivados do Adiposo a partir do Tecido Adiposo Suíno

Aprenda o transplante de folhas de células-tronco derivadas de tecido adiposo para reduzir vazamento em anastomose colorretal em modelo de rato. Este método promove cicatrização tecidual sem materiais sintéticos.

Transplante de células-tronco derivadas de tecido adiposo folha para reduzir o vazamento após colectomia parcial em um modelo do rato (Vídeo) | JoVE Journal

Transplante de células-tronco derivadas de tecido adiposo folha para reduzir o vazamento após colectomia parcial em um modelo do rato

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