Name: Fabricação de língua matriz extracelular e reconstituição da língua Carcinoma de células escamosas In Vitro (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Aprenda a fabricar matriz extracelular de língua e reconstituir carcinoma de células escamosas de língua in vitro usando decelularização e bioreator. Este método avança a pesquisa de câncer oral.

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Os autores reconhecem o apoio de bolsas de investigação da Fundação Nacional de ciências naturais da China (31371390), o programa de projeto de desenvolvimento de alta tecnologia do estado (2014AA020702) e o programa de Guangdong de ciência e tecnologia (2016B030231001).

Todo o trabalho animal foi efectuado de acordo com o ato do bem-estar animal, as orientações institucionais e aprovado pela Comissão de uso, Sun Yat-sen University e institucional Cuidado Animal.
1. preparação de TEM
<ol><li>Executar os ratos por deslocamento cervical e remover as línguas usando uma pinça e tesoura cirúrgica estéril.</li>
	<li>Mergulhe as línguas em etanol a 75% por 3 min, em seguida, coloque cada língua em um 1,5 mL tubo Eppendorf (EP) com 1 mL de fosfato estéril de 10 mM em buffer solução (PBS). Nota: A concentração de PBS em todas as etapas a seguir é o mesma que a concentração nesta etapa.</li>
	<li>Lise de células por congelar descongelar: congelar as línguas em tubos de EP a-80 ° C durante 1 h e depois descongelar as línguas à temperatura de 45 min por 3 ciclos.</li>
	<li>Carregar a cada língua em um pedaço de sutura cirúrgica, usando uma agulha cirúrgica e enrole a extremidade da sutura com um pequeno pedaço de papel alumínio estéril. Execute a operação em um prato de cultura 3,5 cm ou 6 cm contendo 75% de etanol em condições estéreis. Nota: O comprimento adequado de cada pedaço de sutura cirúrgica é de cerca de 20 cm, e o tamanho adequado de cada pedaço de papel alumínio é cerca de 0,3 cm2 (1 cm x 0,3 cm). A língua deve ser carregada perto o papel alumínio.</li>
	<li>Enxague cada língua com 3 mL de PBS estéril em um prato de cultura 3,5 cm ou 6 cm por 30 s. executar esta operação em condições estéreis.</li>
	<li>Lave a língua com água ultrapura: Adicionar ampicilina em um frasco de boca larga com 250 mL de água ultrapura esterilizada para uma concentração final de 90 µ g/mL. Colocar a língua no frasco que contém uma barra de agitação. Aperte a tampa de garrafa com parte da sutura permanecendo fora da garrafa. Execute esta operação em condições estéreis. Nota: Até 5 línguas podem ser colocadas no mesmo frasco na consideração de entrelaçamento da sutura. O papel alumínio é no final da sutura na garrafa para impedir que a língua deslizar fora. As línguas devem ser colocadas 2 cm de altura do fundo da garrafa, ajustando o comprimento da sutura permanecendo dentro da garrafa. Esta nota é também para etapas 1.8, 1.10, 1.12 e 1,16.</li>
	<li>Coloque a garrafa em um agitador magnético para 12h.</li>
	<li>Lave a língua com NaCl: Adicionar ampicilina em um frasco de boca larga com 250 mL de estéril 1 M NaCl a uma concentração final de 90 µ g/mL. Mova as línguas e a barra de agitação para a garrafa. Aperte a tampa de garrafa com parte da sutura permanecendo fora da garrafa. Execute esta operação em condições estéreis.</li>
	<li>Coloque a garrafa em um agitador magnético para 24h.</li>
	<li>Lise por Triton X-100 de célula: Adicionar ampicilina para uma concentração final de 90 µ g/mL em um frasco de boca larga com 250 mL de estéril 2% Triton X-100 em PBS. Mova as línguas e a barra de agitação para a garrafa. Aperte a tampa de garrafa com parte da sutura permanecendo fora da garrafa. Execute esta operação em condições estéreis.</li>
	<li>Coloque a garrafa em um agitador magnético por 48 h.</li>
	<li>Lave as línguas com CaCl2/MgCl2: Adicionar ampicilina em um frasco de boca larga com 250 mL de estéril 5 mM CaCl2/MgCl2 para uma concentração final de 90 µ g/mL. Mova as línguas e a barra de agitação para a garrafa. Aperte a tampa de garrafa com parte da sutura permanecendo fora da garrafa. Execute esta operação em condições estéreis.</li>
	<li>Coloque a garrafa em um agitador magnético para 24h.</li>
	<li>Digestão por DNase: adicionar 1 mL de Hank está equilibrada solução salina (HBSS) para cada tubo de EP. Adicionar DNase em HBSS, respectivamente, a uma concentração final de 300 µM. mover cada língua em cada tubo de EP, com parte da sutura do lado de fora do tubo. Execute esta operação em condições estéreis. Nota: Certifique-se de que a parte da sutura que permanece dentro as garrafas nas etapas anteriores também permanece no interior do tubo EP nesta etapa e certifique-se de que a parte da sutura que permanece fora as garrafas nas etapas anteriores também permanece fora do tubo EP nesta etapa.</li>
	<li>Incube as línguas em tubos de EP a 37 ° C por 24 h.</li>
	<li>Lave a língua com PBS: Adicionar ampicilina em um frasco de boca larga com 250 mL de PBS estéril para uma concentração final de 90 µ g/mL. Mova as línguas e a barra de agitação para a garrafa. Aperte a tampa de garrafa com parte da sutura permanecendo fora da garrafa. Execute esta operação em condições estéreis.</li>
	<li>Coloque a garrafa em um agitador magnético para 24h.</li>
	<li>Armazene a temperatura preparada em PBS estéril, a 4 ° C até o uso.</li>
</ol>2. tridimensional (3D) reconstituição de TSCC
<ol><li>
Construção de modelo estática TSCC
	<ol>
<li>Semente de 1,0 x 106 TSCC células únicas (Cal27) em um prato de cultura de 3,5 cm. Adicione 3 mL de Dulbecco modificado da águia médio/F12 (DF12) contendo 10% fetal de soro bovino (FBS), 90 µ g/mL ampicilina e 90 µ g/mL canamicina.</li>
		<li>Células de cultura a Cal27 a 37 ° C por 2 a 3 dias. Certifique-se que as células cobrem pelo menos 60% a área da parte inferior do prato.</li>
		<li>Carregar TEM para a monocamada Cal27 a placa de cultura.</li>
		<li>Coloque o prato em uma incubadora de CO2 a 37 ° C por 28 dias.</li>
		<li>Atualize o meio de cultura todos os dias durante o processo de cultura de células. A concentração de CO2 na incubadora é de 5%.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Construção de modelo mexida TSCC
	<ol>
<li>
Preparação de um self-made minibioreactor mexido
		<ol>
<li>Retire o êmbolo de uma seringa de 10 mL.</li>
			<li>Escavar um furo (diâmetro de 1 cm) perto do terminal inferior da haste e carregar uma barra de agitação no buraco.</li>
			<li>Cavar um buraco (de 0,5 cm de diâmetro) no centro da rolha de uma garrafa de plástico de boca larga e colocar a haste do pistão através da tampa.</li>
			<li>Cortar a metade de um tubo de centrífuga de 50 mL e solda-lo no lado exterior da tampa da garrafa.</li>
			<li>Anexe anzóis na haste envolvendo a haste com linhas de pesca, que são amarrados para os anzóis. Nota: Até 4 anzóis podem ser anexados a uma haste.</li>
			<li>O complexo auto-suficiente antes do uso de autoclave. Nota: Fazer não Autoclavar o frasco plástico de boca larga. Use um novo frasco plástico estéril de boca larga, enquanto o cultivo de células.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Cultura celular dinâmico
	<ol>
<li>Semente de 1,0 x 106 Cal27 células únicas no self-made minibioreactor. Adicione 150 mL de meio de DF12 que contém 10% FBS, 90 µ g/mL ampicilina e canamicina 90 µ g/mL.</li>
		<li>Carregar TEM para o minibioreactor usando anzóis anexados à haste.</li>
		<li>Aperte a tampa do frasco e colocar o minibioreactor em um agitador magnético. Ative o minibioreactor a 200 rpm numa incubadora de CO2 a 37 ° C por 7 a 14 dias. Nota: A concentração de CO2 , a incubadora de CO2 é de 5%.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Elfring, T., Boliek, C. A., Winget, M., Paulsen, C., Seikaly, H., Rieger, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+lingual+and+hypoglossal+nerve+function+and+quality+of+life+in+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Oral+Rehabil%22%5BJournal%5D)">The relationship between lingual and hypoglossal nerve function and quality of life in head and neck cancer.</a> J. Oral Rehabil. 41, 133-140 (2014).</li>
<li>Patel, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+incidence+of+oral+tongue+squamous+cell+carcinoma+in+young+white+women%2C+Age+18+to+44+Years%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Increasing incidence of oral tongue squamous cell carcinoma in young white women, Age 18 to 44 Years.</a> J. Clin. Oncol. 29, 1488-1494 (2011).</li>
<li>Zhao, L., Huang, L., Yu, S., Zheng, J., Wang, H., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+tongue+tissue+as+an+in+vitro.+model+for+studying+tongue+cancer+and+tongue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Decellularized tongue tissue as an in vitro. model for studying tongue cancer and tongue regeneration.</a> Acta Biomaterialia. 58, 122-135 (2017).</li>
<li>Ng, S. L., Narayanan, K., Gao, S., Wan, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+restricted+progenitors+for+the+repopulation+of+decellularized+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Lineage restricted progenitors for the repopulation of decellularized heart.</a> Biomaterials. 32, 7571-7580 (2011).</li>
<li>Ott, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion-decellularized+matrix%3A+using+nature%27s+platform+to+engineer+a+bioartificial+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart.</a> Nat. Med. 14, 213-221 (2008).</li>
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<li>Soto-Gutierrez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+whole-organ+regenerative+medicine+approach+for+liver+replacement%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C-ME%22%5BJournal%5D)">A whole-organ regenerative medicine approach for liver replacement.</a> Tissue Eng. Part C-ME. 17, 677-686 (2011).</li>
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<li>Ross, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cells+proliferate+and+differentiate+when+seeded+into+kidney+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cells proliferate and differentiate when seeded into kidney scaffolds.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 20, 2338-2347 (2009).</li>
<li>Song, J. J., Guyette, J. P., Gilpin, S., Gonzalez, G., Vacanti, J. P., Ott, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+and+experimental+orthotopic+transplantation+of+a+bioengineered+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Regeneration and experimental orthotopic transplantation of a bioengineered kidney.</a> Nat. Med. 19, 646-651 (2013).</li>
<li>Sullivan, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+methods+of+porcine+kidneys+for+whole+organ+engineering+using+a+high-throughput+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Decellularization methods of porcine kidneys for whole organ engineering using a high-throughput system.</a> Biomaterials. 33, 7756-7764 (2012).</li>
<li>Soto-Gutierrez, A., Wertheim, J. A., Ott, H. C., Gilbert, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspectives+on+whole-organ+assembly%3A+moving+toward+transplantation+on+demand%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Perspectives on whole-organ assembly: moving toward transplantation on demand.</a> J. Clin. Invest. 122, 3817-3823 (2012).</li>
<li>Song, J. J., Ott, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+engineering+based+on+decellularized+matrix+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Organ engineering based on decellularized matrix scaffolds.</a> Trends Mol. Med. 17, 424-432 (2011).</li>
<li>Badylak, S. F., Taylor, D., Uygun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-organ+tissue+engineering%3A+decellularization+and+recellularization+of+three-dimensional+matrix+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Whole-organ tissue engineering: decellularization and recellularization of three-dimensional matrix scaffolds.</a> Annu. Rev. Biomed. Eng. 13, 27-53 (2011).</li>
<li>Shamis, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-specific+scaffolds+for+in+vitro+expansion%2C+differentiation%2C+and+organization+of+primary+lung+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C-ME%22%5BJournal%5D)">Organ-specific scaffolds for in vitro expansion, differentiation, and organization of primary lung cells.</a> Tissue Eng. Part C-ME. 17, 861-870 (2011).</li>
<li>Nakayama, K. H., Batchelder, C. A., Lee, C. I., Tarantal, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+rhesus+monkey+kidney+as+a+three-dimensional+scaffold+for+renal+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Pt+A%22%5BJournal%5D)">Decellularized rhesus monkey kidney as a three-dimensional scaffold for renal tissue engineering.</a> Tissue Eng. Pt A. 16, 2207-2216 (2010).</li>
<li>Cortiella, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+acellular+natural+lung+matrix+on+murine+embryonic+stem+cell+differentiation+and+tissue+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Pt+A%22%5BJournal%5D)">Influence of acellular natural lung matrix on murine embryonic stem cell differentiation and tissue formation.</a> Tissue Eng. Pt A. 16, 2565-2580 (2010).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Um protocolo bem estabelecido para a fabricação de ECM decellularized deve manter a composição de ECM nativa ao remover componentes celulares nos tecidos quase completamente21. Apesar de protocolos decellularization atualmente relatado que exigem perfusão através de vasculatura para remover materiais celulares por transporte convectivo, agitação mecânica foi adotada aqui, conhecido como um método simples e barato tradicional22 , 23 ,<...

A língua tem várias funções importantes, tais como deglutição, articulação e degustação. Assim, o comprometimento da função da língua tem grande impacto na qualidade de vida de1 pacientes. A malignidade mais comum na cavidade oral é a língua carcinoma de células escamosas (TSCC), que normalmente ocorre em pessoas que bebem álcool ou fumam tabaco2.
Nos últimos anos, pouco progresso foi alcançado na investigação fundamental na TSCC. A falta de investigação eficiente em vitro modelos permanece para ser um dos maiores problemas. Assim, a matriz extracelular (ECM) acaba por ser uma solução em potencial. ECM é um quadro de rede complexo composto de componentes de matriz altamente organizada, tendo um ECM-como a estrutura e a composição de materiais de andaime seria competentes para pesquisa do câncer. Decellularized ECM perfeitamente pode fornecer o nicho de células de mesma origem em vitro, que acaba por ser a mais significativa vantagem de ECM.
ECM pode ser mantido com componentes celulares, sendo retirados os tecidos através da decellularization, usando detergentes e enzimas. Vários componentes de ECM, incluindo colágeno, fibronectina e laminina na matriz decellularized fornecem um microambiente nativo-tecido-como para culturas de células, promovendo a sobrevivência, proliferação e diferenciação das células3. Além disso, a imunogenicidade para transplante pode ser reduzida a um nível mínimo, com a ausência de componentes celulares em ECM.
Até agora, os métodos de fabricação para ECM decellularized têm sido tentados em diferentes tecidos e órgãos, como coração4,5,6,7, fígado8,9,10 ,11, pulmão12,13,14,15,16,17e18,de rim19 , 20. no entanto, nenhuma pesquisa relevante tem ser encontrado em trabalho semelhante na língua com o melhor de nosso conhecimento.
Neste estudo, matriz extracelular de língua decellularized (TEM) foi fabricada tanto de forma eficiente e barata por uma série de tratamento físico, químico e enzimático. A temperatura foi usada para recapitulate TSCC em vitro, mostrando uma simulação apropriada para o desenvolvimento e comportamento TSCC. TEM tem boa biocompatibilidade, bem como a capacidade de guiar as células para o nicho de tecido-específica, que indica que TEM pode ter grande potencial em TSCC pesquisa3. O protocolo mostrado aqui fornece uma escolha para pesquisadores estudando na patogênese ou terapias clínicas de TSCC.

<table><tbody><tr><td>Camundongos C57-BL / 6J</td><td>Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Guangzhou Fábrica de Reagentes Químicos</td><td>HB15-GR-2.5L</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio</td><td>Sangon Biotech</td><td>A501218</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de potássio</td><td>Sangon Biotech</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de sódio dibásico Fábrica</td> de <td>reagentes</td> <td>químicos de GuangzhouBE14-GR-500G</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de Potássio Monobásico&nbsp;</td><td>Sangon Biotech</td><td>A501211</td><td></td></tr><tr><td>Tubo EP de 1,5 mL</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-A</td><td></td></tr><tr><td>Freezer de temperatura ultra-baixa&nbsp;</td>Placa de cultura de células <td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3,5 cm</td> Placa de cultura de células <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>153066</td><td></td></tr><tr><td>6 cm</td><td>Greiner</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900502</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>746495</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de magnésio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>449164</td><td></td></tr><tr><td>DNase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5025</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de magnésio</td><td>Sangon Biotech</td><td>A601988</td><td></td></tr><tr><td>Glicose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158968</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393</td><td></td></tr><tr><td>Canamicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PHR1487</td><td></td></tr><tr><td>Sutura cirúrgica</td><td>Shanghai Jinhuan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>250 mL frasco de boca larga</td><td>SHUNIU</td><td>1407</td><td></td></tr><tr><td>Agitador magnético</td><td>AS ONE</td><td>1-4602-32</td><td></td></tr><tr><td>CO2 incubadora</td><td>SHEL LAB</td><td>SCO5A</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 10 mL</td><td>Hunan Pingan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mL tubo de centrífuga</td><td>Greiner</td><td>227270</td><td></td></tr><tr><td>Célula Cal27</td><td>Academia Chinesa de Ciências, Banco</td><td></td> de Células de Xangai <td>Linha celular de carcinoma de células escamosas de língua</td></tr><tr><td>Célula U2OS</td><td>Academia Chinesa de Ciências, Banco</td><td></td> de Células de Xangai <td>Linha celular de osteossarcoma humano</td></tr><tr><td>DMEM / F12</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0547</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5280</td><td></td></tr><tr><td>Ácido livre de hepes</td><td>BBI</td><td></td><td></td>A600264</tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30084.03</td><td></td></tr><tr><td>4 &deg; Refrigerador C</td><td>Haier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Purificador de água</td><td>ELGA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemocitômetro</td><td>BLAU</td><td>717805</td><td></td></tr></tbody></table>

fabricação de língua matriz extracelular e reconstituição da língua carcinoma de células escamosas in vitro

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

A fim de construir um modelo eficaz e realista para língua escamosas carcinoma (TSCC) em vitro, os métodos foram criados para produzir decellularized língua matriz extracelular (TEM) que fornece andaimes funcionais para construção de TSCC. TEM fornece um nicho em vitro para crescimento celular, diferenciação e migração celular. As microestruturas de nativo da matriz extracelular (ECM) e composições bioquímicas retidas na matriz decellularized fornecem nichos de tecido-específica para ancoragem de células. Fabricação de temperatura pode ser realizada por digestão desoxirribonuclease (DNase), acompanhada de uma séria de pré-tratamento orgânico ou inorgânico. Este protocolo é fácil de operar e garante alta eficiência para o decellularization. A temperatura mostrou favorável cytocompatibility para células TSCC sob condições de cultura estático ou mexido, que permite a construção do modelo de TSCC. Um biorreator self-made também foi utilizado para a condição de mexido persistente para cultura de células. TSCC reconstruída usando TEM mostrou as características e propriedades, assemelhando-se a clínica histopatologia TSCC, sugerindo o potencial em investigação TSCC.

Este protocolo para a preparação de TEM acaba por ser eficiente e adequada. A temperatura mostrou decellularization perfeito, em comparação com os tecidos de língua nativa. A eficácia do decellularization foi confirmada pela hematoxilina-eosina (HE) coloração (Figura 1A-B). O HE coloração resultados revelados completo desaparecimento da coloração nuclear na temperatura (Figura 1B). Além disso, co...

Um método é mostrado aqui para a preparação da matriz extracelular de língua (TEM) com decellularization eficiente. A temperatura pode ser usada como andaimes funcionais para a reconstrução de um modelo de carcinoma de células escamosas (TSCC) língua sob as condições de cultura estático ou mexido.

Fabricação de língua matriz extracelular e reconstituição da língua Carcinoma de células escamosas In Vitro

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo de pesquisa do câncer bucal, como construir um modelo de assistência T apropriado in vitro. A principal vantagem dessa técnica é que o CEC reconstruído expressa características tumorais que têm uma forte semelhança com a histopatologia clínica do CEC. Quando tivemos a ideia para este método pela primeira vez, percebemos que as células TSCC cultivadas em 2-D não exibiam adequadamente o fenótipo nativo do TSCC.Além disso, percebemos a importância da matriz extracelular para a evasão e diferenciação da sobrevivência ao câncer. A demonstração visual deste método é crítica, pois a preparação da matriz extracelular da língua e a cultura 3-D usando um mini biorreator são difíceis de aprender apenas por meio de palavras e são melhores vistas para esclarecimento. Depois de isolar as línguas dos camundongos eutanasiados de acordo com o protocolo de texto, mergulhe o tecido em etanol a 75% por três minutos.Em seguida, transfira cada língua para um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro, com um mililitro de PBS estéril 10 milimolar. Para realizar a lise celular, congele as línguas a menos 80 graus Celsius por uma hora. Em seguida,

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Uma visão abrangente das técnicas envolvidas na geração de um modelo do rato de câncer oral e monitorização quantitativa de invasão tumoral dentro da língua por meio de microscopia multi-fotão de células marcadas é apresentado. Este sistema pode servir como uma plataforma útil para a avaliação molecular e eficácia de drogas anti-invasivos compostos.

Multi-fotão imagem de invasão das células tumorais em um modelo de camundongo ortotópico de carcinoma epidermóide oral

Neste vídeo, descrevemos o isolamento de células epiteliais de uma língua murina. Essas células podem ser cultivadas posteriormente para dar origem a colônias de células.

Isolamento e cultura de células epiteliais da língua murina: um procedimento para isolar e cultivar células epiteliais da língua a partir de modelo de camundongo

Este vídeo demonstra a preparação da matriz extracelular da língua murina usando o método de descelularização, que envolve a exposição da língua colhida a uma série de tratamentos físicos, químicos e enzimáticos. O andaime TEM resultante retém sua composição de matriz extracelular nativa, removendo os componentes celulares.

Fabricação de Matriz Extracelular a partir de Modelo de Camundongo: Um Procedimento Eficaz para Preparar Matriz Extracelular de Língua Descelularizada a partir de Língua Murina

Engenharia de tecidos da matriz nativa derivada de fibroblastos é uma ferramenta emergente para gerar um substrato do estroma que suporta a proliferação de células epiteliais e de diferenciação. Aqui, um protocolo de aplicação desta metodologia para avaliar o impacto de diferentes tipos de células do estroma em biologia de células tumorais é apresentado.

Engenharia de Tecidos de tumor estromal Microenvironment com Aplicação a invasão Cancer Cell

Aqui nós apresentamos um método reprodutível para desenvolver um modelo murino ortotópico de cabeça e pescoço carcinoma de células escamosas. Tumores demonstram clinicamente relevantes características histopatológicas da doença, incluindo necrose, pobre diferenciação, metástases nodais e infiltração imune. Tumor-rolamento ratos desenvolvem sintomas clinicamente relevantes, incluindo disfagia, deslocamento da mandíbula e perda de peso.

Intramucosal inoculação de células de Carcinoma de células escamosas em ratos para perfil imune de Tumor e tratamento avaliação de resposta

O desenvolvimento de modelos de urina com genes específicos mutados em pacientes com câncer de cabeça e pescoço é necessário para a compreensão da neoplasia. Aqui, apresentamos um protocolo para a transformação in vitro das células primárias da língua murina usando um sistema de vírus-Cas9 associado ao adeno para gerar linhas celulares murine HNC com alterações genômicas específicas.

In Vitro Estabelecimento de uma linha de células de câncer de urina de urina geneticamente modificada usando um sistema adeno associado de vírus-cas9

Desenvolvemos um protocolo generalizado para dissociar uma grande quantidade de células únicas de alta qualidade a partir do epitélio e mesenquime/tecido conjuntivo de línguas de camundongos embrionários e adultos.

Dissociação celular do Epitélio da Língua e Mesenquime/Tecido Conjuntivo de Ratos Embrionários 12,5 e 8 Semanas

O protocolo apresenta um método para cultivo e processamento de organoides linguais derivados de células-tronco de sabor isoladas da papila de sabor posterior de camundongos adultos.

Geração e Cultura de Organoides Linguais Derivados de Células-Tronco do Gosto de Rato Adulto

Este protocolo descreve os principais passos para gerar e caracterizar organoides 3D oro-esofágicos murinos que representam lesões normais, pré-neoplásicas e de carcinoma espinocelular induzidas por carcinogênese química.

Modelagem do carcinoma epidermóide orco-esofágico em organoides 3D

Um método único para ressecar cirurgicamente tumores de carcinoma escamoso oral estabelecidos na cavidade oral é apresentado aqui.

Modelo de Resseção Tumoral Translacional Relevante para Modelos Pré-clínicos de Múrino de Carcinoma Escamoso Oral

Aprenda a fabricar matriz extracelular de língua e reconstituir carcinoma de células escamosas de língua in vitro usando decelularização e bioreator. Este método avança a pesquisa de câncer oral.

Fabricação de língua matriz extracelular e reconstituição da língua Carcinoma de células escamosas In Vitro

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