Name: Imagem de Neuroinflammation usando 11C DPA-713 em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico do animal de estimação (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 1 s
Description: Aprenda a quantificar neuroinflamação em modelo de AVC isquêmico em camundongos usando imagem PET com TSPO e DPA-713. Este protocolo permite visualização em tempo real de processos inflamativos cerebrais.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os autores gostaria de agradecer o laboratório Buckwalter (especialmente Dr. Todd Peterson) para fornecer o modelo do rato e realizar as cirurgias dMCAO e sham. Além disso, gostaríamos de agradecer a Thomas Liguori de Invicro por sua assistência técnica com software de análise de imagem de VivoQuant, Dr. Tim Doyle, Dr. Laura Pisani, Dr. Frezghi Habte do animal pequeno SCi3 facilidade em Stanford para seus conselhos de imagem e assistência no desenvolvimento deste protocolo de imagem e a facilidade de radioquímica (especialmente Dr. Jun Park) por sua ajuda com a síntese de [11C] DPA-713.

<ol><li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28122885">Heart disease and stroke statistics-2017 update: A report from the american heart association.</a> Circulation. 135 (10), 146-603 (2017).</li>
<li>Jin, R., Yang, G., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mechanisms+in+ischemic+stroke%3A+role+of+inflammatory+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mechanisms in ischemic stroke: role of inflammatory cells.</a> J Leukoc Biol. 87 (5), 779-789 (2010).</li>
<li>Wang, Q., Tang, X. N., Yenari, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammatory+response+in+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">The inflammatory response in stroke.</a> J Neuroimmunol. 184 (1-2), 53-68 (2007).</li>
<li>Brown, R. C., Papadopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+peripheral-type+benzodiazepine+receptor+in+adrenal+and+brain+steroidogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Role of the peripheral-type benzodiazepine receptor in adrenal and brain steroidogenesis.</a> Int Rev Neurobiol. 46, 117-143 (2001).</li>
<li>Papadopoulos, V., Lecanu, L., Brown, R. C., Han, Z., Yao, Z. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral-type+benzodiazepine+receptor+in+neurosteroid+biosynthesis%2C+neuropathology+and+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Peripheral-type benzodiazepine receptor in neurosteroid biosynthesis, neuropathology and neurological disorders.</a> Neuroscience. 138 (3), 749-756 (2006).</li>
<li>Scarf, A. M., Kassiou, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21498529">The translocator protein.</a> J Nucl Med. 52 (5), 677-680 (2011).</li>
<li>Cerami, C., Perani, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neuroinflammation+in+ischemic+stroke+and+in+the+atherosclerotic+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Vasc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Imaging neuroinflammation in ischemic stroke and in the atherosclerotic vascular disease.</a> Curr Vasc Pharmacol. 13 (2), 218-222 (2015).</li>
<li>Stefaniak, J., O'Brien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+neuroinflammation+in+dementia%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Imaging of neuroinflammation in dementia: a review.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 87 (1), 21-28 (2016).</li>
<li>Gerhard, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4870295/">TSPO imaging in parkinsonian disorders.</a> Clin Transl Imaging. 4, 183-190 (2016).</li>
<li>Airas, L., Rissanen, E., Rinne, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neuroinflammation+in+multiple+sclerosis+using+TSPO-PET%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Imaging%22%5BJournal%5D)">Imaging neuroinflammation in multiple sclerosis using TSPO-PET.</a> Clin Transl Imaging. 3, 461-473 (2015).</li>
<li>Fan, J., Lindemann, P., Feuilloley, M. G., Papadopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+evolution+of+the+translocator+protein+%2818+kDa%29%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Structural and functional evolution of the translocator protein (18 kDa).</a> Curr Mol Med. 12 (4), 369-386 (2012).</li>
<li>James, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+in+vivo+evaluation+of+a+novel+peripheral+benzodiazepine+receptor+PET+radioligand%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Synthesis and in vivo evaluation of a novel peripheral benzodiazepine receptor PET radioligand.</a> Bioorg Med Chem. 13 (22), 6188-6194 (2005).</li>
<li>Boutin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((11C-DPA-713%3A+A+novel+peripheral+benzodiazepine+receptor+PET+ligand+for+in+vivo+imaging+of+neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">11C-DPA-713: A novel peripheral benzodiazepine receptor PET ligand for in vivo imaging of neuroinflammation.</a> J Nucl Med. 48 (4), 573-581 (2007).</li>
<li>Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+permanent+focal+ischemia%3A+distal+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of permanent focal ischemia: distal middle cerebral artery occlusion.</a> Methods Mol Biol. 1135, 103-110 (2014).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B%2818%29F%5DDPA-714+PET+imaging+of+AMD3100+treatment+in+a+mouse+model+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">[(18)F]DPA-714 PET imaging of AMD3100 treatment in a mouse model of stroke.</a> Mol Pharm. 11 (18), 3463-3470 (2014).</li>
<li>Domercq, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27570548">PET Imaging with [(18)F]FSPG evidences the role of system xc(-) on brain inflammation following cerebral ischemia in rats.</a> Theranostics. 6 (11), 1753-1767 (2016).</li>
<li>Toth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+neuroinflammation+in+a+clinically+relevant+focal+cortical+ischemic+stroke+model+in+rat%3A+longitudinal+positron+emission+tomography+and+immunofluorescent+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Acute neuroinflammation in a clinically relevant focal cortical ischemic stroke model in rat: longitudinal positron emission tomography and immunofluorescent tracking.</a> Brain Struct Funct. 221 (3), 1279-1290 (2016).</li>
<li>Walter, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+neuroinflammation+in+the+late+chronic+phase+after+experimental+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of neuroinflammation in the late chronic phase after experimental stroke.</a> Neuroscience. 292, 71-80 (2015).</li>
<li>Rojas, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17457364">Imaging brain inflammation with [(11)C]PK11195 by PET and induction of the peripheral-type benzodiazepine receptor after transient focal ischemia in rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 27 (12), 1975-1986 (2007).</li>
<li>Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+ischemic+tolerance+following+brief+focal+ischemia+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 14 (4), 545-553 (1994).</li>
</ol>

Os autores declaram não há conflitos de interesses.

O protocolo apresentado descreve um método para a quantificação de neuroinflammation em camundongos dMCAO e sham usando [11C] DPA-713-animal de estimação. TSPO-animal de estimação é a mais amplamente investigada biomarcador de imagens para visualização e medição neuroinflammation na vivo até à data. TSPO expressão é upregulated na glia no cérebro durante a inflamação, permitindo a detecção não-invasiva e quantificação de neuroinflammation. Além disso, é uma técnica altamente traduzível, tornando-se uma ferramenta valiosa na investigação clínica e pré-clínica. Este protocolo e resultados representativos destacam a adequação do uso [11C] DPA-713 PET para detectar e monitorar alterações MPTP em acidente vascular cerebral e outros distúrbios neurológicos na vivo.
Neste estudo, dMCAO cirurgia foi executada utilizando ratos fêmeas de C57BL/6 de 3 meses de idade. Este modelo foi escolhido como dá origem a um infarto altamente reprodutível restringido ao córtex somatossensorial, fornecendo um modelo de isquemia focal permanente com baixa variabilidade em relação aos outros modelos de acidente vascular cerebral (por exemplo, média cerebral arterial método de oclusão (MCAO) filamento)14. Imagem latente do animal de estimação de modelos stroke tem a vantagem de que contém uma região de referência interna no cérebro para cada animal usando ROIs dentro do hemisfério contralateral. Já que haverá alguma inflamação que os resultados da cirurgia sozinha, é importante incluir os ratos que se submeteram à cirurgia de Souza no projeto de estudo, segundo o qual a craniotomia e manipulação das meninges sem oclusão da artéria foi realizada. Craniotomia sozinha pode resultar em perturbações ao tecido neuronal subjacente e introdução de patógenos, levando a respostas imunes independentes de curso20. Alguma inflamação após a cirurgia de Souza, portanto, é esperada e deve ser avaliada em paralelo com dMCAO para excluir a possibilidade de sinal devido a cirurgia sozinha. Para evitar incluindo inflamação resultantes da cirurgia sem traço na análise de coorte de dMCAO, o Sr. imagem latente deve ser realizado para confirmar o desenvolvimento de acidente vascular cerebral bem sucedida cirurgia e infarto. MRI também fornece um quadro de referência estrutural, que é essencial para desenhar com precisão o infarto e ROIs contralaterais. Além disso, o processamento de imagem exata, incluindo registro de imagem e definição do ROI são necessárias para assegurar a quantificação confiável.
Limitações adicionais devem ser mantidas em mente ao trabalhar com C-11 rotulado radiotracers para estudos de PET e autoradiografia. É imperativo considerar a meia-vida curta (20,33 min) de C-11, com seu uso geralmente restringido para institutos com acesso ciclotron no local. Rota de transporte apropriado de radioactividade, administração de dose e tempo-pontos de aquisição devem ser determinados antecipadamente com um plano detalhado pré-preparados de fluxo de trabalho do experimento para que a equipe possa trabalhar rapidamente e eficientemente. O projeto e a configuração deste estudo tem sido descrita para acomodar a imagem latente de 4 ratos simultaneamente para aumentar a saída de dados obtidos ao usar um rastreador de C-11. Se possível, é aconselhável ter todos os mouses canulados e no meio da sua tomografia computadorizada no momento o tracer C-11 chega na instalação de imagens para assegurar o decaimento mínimo radiotracer antes da injeção. Este protocolo passo a passo também melhor é realizado por uma equipe contendo pelo menos 3 pesquisadores para permitir a rápida canulação, medição de dose, injeção do traçador, varredura do animal de estimação e cérebro seccionamento antes significativa de decaimento radioativo. Requer duas pessoas realizar a iniciação da tomografia e injeção de todos os 4 mouses simultaneamente. A razão para a aquisição de PET apenas antes da injeção do começo é garantir que a farmacocinética e dinâmica de distribuição do traçador no sangue e regiões de interesse com precisão e completamente capturados. Muitas etapas podem exigir treinamento vigoroso e prática para garantir o bom funcionamento do experimento. Em particular, este protocolo é dependente de cateterização da veia sucesso cauda de camundongos C57BL/6, que pode ser difícil devido ao cabelo escuro presente em suas caudas e pode tornar-se mais desafiador após acidente vascular cerebral ocorreu ou se o mesmos ratos de imagem em vários pontos de tempo .
Outra consideração para a imagem latente de PET inclui gravação cuidadosa das medições de atividade dose e residual radiotracer, incluindo o tempo exato de medição. Isto é essencial para a correção de decaimento exata da dose injetada no momento da verificação e é usado para obter uma medição precisa da captação do traçador (i.e., % ID/g) para cada ROI. É imperativo saber a quantidade exata de radioatividade que estava presente em cada rato no momento da verificação para garantir a análise de imagem exata. Portanto, é aconselhável para sincronizar os relógios no scanner e calibrador de dose para evitar o erro quando utilizando isótopos de curta duração, tais como C-11.
Quantificação de imagem exata PET também pode ser limitada pela precisão do scanner e set-up. Portanto, para garantir a exata quantificação das imagens de PET/CT, é importante realizar verificações de controle de qualidade para o CT e PET componentes do scanner. Verificações de controle de qualidade do CT incluem condicionado fonte de raio-x, claro/escuro e centro do conjunto das calibrações. Estas calibrações medem e correto para o ruído do sistema e deve ser realizado antes da aquisição, conforme recomendado pelo fabricante do scanner. Calibrações também devem ser executadas para o scanner PET. Isso normalmente envolve a digitalização um scan "fantasma padrão / animal de estimação", que contém uma concentração conhecida de radioactividade. Ao preparar o padrão, é melhor usar o mesmo radioisótopo utilizado no estudo, uma dose comparável àquela administrados a um único rato em um volume semelhante ao corpo de um rato e a mesma aquisição parâmetros como animal de imagem. Uma seringa de 20 mL, cheia de radiotracer diluído em água é usada para o padrão no presente protocolo, com os resultados de imagem PET subsequentes usados para calcular um fator de correção baseado sobre a dose real medida pelo detector de calibração. A relação de correção pode ser aplicada a dados adquiridos na experiência para garantir a exata quantificação da captação do traçador em regiões de interesse em imagens de PET. Isto esclarece a gama de positron o radionuclídeo, além de considerar qualquer atividade de fundo presente no dia da verificação. Como o calibrador de dose é parte integrante da geração deste fator de correção, é imperativo que este equipamento também é calibrado regularmente de acordo com as orientações do fabricante.
Quando conduzindo ex vivo autoradiografia é importante escolher um ponto de tempo ideal para eutanásia após a injeção, para garantir o sinal-para-fundo elevado numa região ou regiões de interesse. Injeção de pós trinta minutos foi escolhido por autoradiografia de DPA-713 [11C] usando dados adquiridos durante a dinâmica imagem latente PET -ou seja, o na vivo TAC dinâmico como um guia, enquanto também considerando a curta meia-vida de C-11 e o tempo envolveu a seção e expor o tecido cerebral após a extração. Considerando isso, autoradiografia de DPA-713 [11C] deve ser realizada em uma coorte separada de ratos para permitir a injeção de uma dose maior de DPA-713 [11C] e a 30 minutos tempo-ponto para perfusão e eutanásia sob anestesia. Executar um pequeno na vivo estudo piloto PET com um 3-4 ratos antes da realização de ex vivo autoradiografia vai ser útil para determinar o ponto de tempo ideal para autoradiografia. Uma consideração adicional para ex vivo autoradiografia é se recuperar os ratos após a injeção ou mantê-los anestesiada até eutanásia. Mantendo-os anestesiados imita as condições da digitalização e garante a cinética de distribuição ou excreção radiotracer não sejam alteradas pela recuperação. Além disso, isso impede que um estresse adicional nos ratos, evitando a recuperação e posterior indução. Finalmente, uma adição útil para o protocolo ex vivo seria para avaliar os danos regionais nas fatias de cérebro usado por autoradiografia através de imuno-histoquímica coloração (após decaimento radioativo) para gerar uma imagem de alta resolução da localização do infarto e volume.
Como existem limitações com a utilização de um marcador de C-11 com base, este protocolo pode ser facilmente modificado para uso com um F-18 (Half-Life de min 109,77) baseado TSPO tracer, que pode ser mais aplicável aos locais sem um ciclotron no local. Além disso, este protocolo descreve o uso de uma configuração de imagem de 4-mouse. Embora este método de alta taxa de transferência é ideal ao usar um rastreador de C-11, esse protocolo também pode ser modificado para aqueles que utilizam o único rato camas de imagem. Um planejamento cuidadoso e consistente formação nas técnicas descritas neste protocolo vai levar para a geração de uma riqueza de dados usando [11C] DPA-713, que pode ser facilmente aplicado para sondar o papel de neuroinflammation na manifestação da doença e progressão em outros roedores modelos de doenças neurológicas. Além disso, esta técnica pode ser usada para avaliar a resposta na vivo à terapêutica immunomodulatory direcionada a microglia/macrófagos.

Acidente vascular cerebral é a quinta causa principal de morte e das principais causas de incapacidade no Estados Unidos1. Acidente vascular cerebral isquêmico representa a esmagadora maioria dos casos (~ 87%), ocorrem quando há uma ruptura localizada do fluxo sanguíneo para o cérebro (por exemplo, por um coágulo de sangue ou depósito de gorduroso). Suprimentos de oxigênio e nutrientes para as áreas afetadas são subsequentemente reduzidos e uma complexa cascata patológica é iniciada resultando em morte neuronal dentro do núcleo de acidente vascular cerebral (infarto) Além das áreas circundantes. Neuroinflammation é um componente crucial na via que conduz a este dano, com ambas as células imunes do cérebro residente (microglia) e infiltração de células periféricas do sistema imunológico (neutrófilos, células T, células B e monócitos/macrófagos) pensados para contribuir para este destrutivo cascata2,3. Macrófagos e micróglia ativada são centrais para esta resposta de MPTP, com relatos de efeitos deletérios e benéficos após acidente vascular cerebral isquêmico2. Assim, é imperativo para avaliar a contribuição na vivo destas células após apoplexia.
Animal de estimação é uma técnica de imagem molecular 3-dimensional poderosa que permite a visualização de biológico processa na vivo através do uso de moléculas específicas rotulados com positron (β +) emitindo radionuclídeos como 11C, 13N, 15O e a 18F. Este método não-invasivo tem muitas vantagens sobre os métodos ex vivo (por exemplo, imuno-histoquímica) que permite a aquisição de informação molecular em tempo real, em vida sujeitos intacta, e permite a investigação longitudinal. Imagem de animais de TSPO, um marcador da micróglia ativada e células de linhagem mieloide periféricas, fornece um meio para quantificar e controlar respostas de célula imune inata dentro do corpo e pode ser utilizada para avaliar a inflamação após acidente vascular cerebral e resposta à terapêutica intervenções. TSPO, anteriormente conhecido como o receptor benzodiazepínico periférico-tipo, é uma proteína de 18 kDa que acredita-se que desempenham um papel no transporte de colesterol e a síntese de neuroesteroides4. Além disso, a evidência sugere que o TSPO está envolvido na neuroinflammation e sobrevivência neuronal5,6, com relatos de expressão aumentada em muitas doenças neurológicas envolvendo inflamação, incluindo derrame7, demência8, doença de Parkinson9 e esclerose múltipla10. TSPO está localizado na membrana mitocondrial externa e é altamente expressa na periferia, particularmente nos tecidos associados esteroides (por exemplo, glândulas) e com níveis intermediários, vistos no coração, rins e pulmões10. No entanto no cérebro saudável, os níveis TSPO são baixos e restrita principalmente a glia6,11. Após lesão neuronal, como observado em curso, os níveis TSPO no sistema nervoso central (SNC) aumentam significativamente. Este upregulation observado de TSPO pode ser explorada a imagem neuroinflammation in vivo com níveis de expressão, fornecendo um indicador preciso da gravidade da inflamação. Portanto, o objetivo desse método é quantificar com precisão a contribuiçãona vivo de neuroinflammation em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico usando TSPO-animal de estimação.
Vários marcadores TSPO foram desenvolvidos para a imagem latente de PET de neuroinflammation. Aqui, a imagem de TSPO-PET é descrita usando [11C] DPA-71312, uma promissora segunda geração tracer TSPO, que tem demonstrado maior sinal para ruído e menor ligação não específica do que o mais historicamente usado [11C] PK11195 13 . Como exemplo, o modelo do rato de dMCAO do curso foi escolhido para este método de14. Este modelo envolve craniotomia temporal e permanente ligadura da artéria cerebral média distal, resultando em isquemia focal do córtex somatossensorial. Isto é vantajoso em pesquisa pré-clínica do curso devido a grande reprodutibilidade de danos isquêmicos e baixa taxa de mortalidade associada com este modelo. Até à data, estudos de imagiologia TSPO-PET ainda tem que ser relatado no modelo dMCAO de roedores. No entanto, PET imagem estudos anteriores usando o modelo de oclusão (MCAO) da artéria cerebral média, um modelo de curso mais severo e variável, em camundongos e ratos, relataram expressão TSPO de aumentar de dia 3 e o pico em torno do dia 7 acidente vascular cerebral15, 16,17,18. Portanto, realizamos PET imagem 6 dias post-dMCAO para coincidir com elevada expressão de TSPO. [11-C] DPA-713 captação no cérebro foi avaliada em ipsilateral (enfartado) e hemisfério contralateral. TSPO-PET foi combinada com a ressonância magnética, permitindo a delimitação exacta de infarto e contralaterais regiões de interesse (ROIs). Aqui nós descrevemos uma baseados em atlas e uma abordagem orientada por MRI ROI para calcular a absorção de DPA-713 [11C]. Captação de radiotracer no baço também foi avaliada para investigar os níveis periféricos de inflamação entre grupos. Este método tem o potencial de fornecer insights críticos sobre a spatiotemporal dinâmica e o papel das interações específicas neuroimunológico em acidente vascular cerebral e outras doenças neurológicas.

<table><tbody><tr><td>Scanner de PET/CT Inveon</td><td>Siemens</td><td>Versão 4.2</td><td></td></tr><tr><td>Scanner de ressonância magnética</td><td>Varian</td><td></td><td>7 Software Telsa</td></tr><tr><td>ParaVision Bruker</td><td></td><td>Versão 6.0.1</td><td>Software operacional de ressonância magnética</td></tr><tr><td>Software VivoQuant</td><td>InVicro</td><td>Versão 2.5</td><td>Software de análise de imagem</td></tr><tr><td>Software Inveon Research Workspace Siemens</td><td></td><td>Versão 4.2</td><td>Software operacional do scanner. Inclui microQView, o software de gerenciamento de pós-processamento</td></tr><tr><td>Calibrador de dose</td><td>Capintech</td><td></td><td>CRC-15 PET</td></tr><tr><td>Typhoon imager de fósforo 9410</td><td>GE Healthcare</td><td>8149-30-9410</td><td></td></tr><tr><td>Cateteres borboleta</td><td>SAI Infusion Technologies</td><td>BFL-24</td><td>27,5 G agulha</td></tr><tr><td>1 mL seringas BD</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seringas de insulina</td><td>BD</td><td>329461</td><td>Seringas de insulina de 0,5 mL com agulha</td></tr><tr><td>Seringa de 20 mL&nbsp;</td><td>VWR</td><td>BD302831</td><td>BD Seringa Ponta Deslizante Graduada</td></tr><tr><td>Cola de tecido</td><td>Santa Cruz Animal Health</td><td>sc-361931</td><td>3 mL</td></tr><tr><td>Lâmpada de calor</td><td>Fluker</td><td>27002</td><td>5.5" lâmpada de calor para répteis com braçadeira e interruptor</td></tr><tr><td>0.9% solução salina estéril</td><td>Pfizer</td><td>00409-4888-10</td><td>0.9% cloreto de sódio para injeção, 10 mL</td></tr><tr><td>Lubrificante para os olhos</td><td>Watson Rugby</td><td>PV926977</td><td>Lubrificante para Olhos de Lágrimas Artificiais, folhas</td></tr><tr><td>absorventes Chux</td> de 1/8 oz <td>ThermoFisher Scientific</td><td>1420662</td><td>Almofada absorvente descartável</td></tr><tr><td>Tesoura de íris</td><td>World Precision Instruments</td><td>503708-12</td><td>11.5 cm, Reta, pacote de 12</td></tr><tr><td>Fita cirúrgica</td><td>3M Durapore</td><td>1538-0</td><td>1/2" x 10 jardas, seda, hipoalergênico</td></tr><tr><td>Cama PET para rato</td><td>em casa</td><td></td><td>Isqueiro PET para 4 ratos</td></tr><tr><td>Bic</td><td></td><td>UDP2WMDC</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Henry Schein</td><td>NDC 11695-6776-2</td><td>Isothesia, anestésico por inalação, 250 mL</td></tr><tr><td>de oxigênio</td><td>Praxiar</td><td>UN1072</td><td></td></tr> de <tr><td>autorradiografia</td> de gás comprimido <td>Cole Palmer</td><td>EW-21700-34</td> Alumínio, filme de autorradiografia <td>de 8" x 10"</td></tr> <tr><td></td><td>GE Life Sciences</td><td>28-9564-78</td><td>Tela de Armazenamento de Fósforo BAS-IP SR 2025 E Super Resolução, 20 &vezes; 25 cm, apenas tela Lâminas</td></tr><tr><td>de micrótomo</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>30-508-35</td><td>MB35 Premier Descartável, ângulo de corte de 34&deg;</td></tr><tr><td>Microtomo</td><td></td><td></td><td>Lâminas de microscópio HM 550</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td>Superfrost&trade; Lâminas de microscópio Plus</td></tr><tr><td>OCT líquido</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>Formulação de glicóis e resinas solúveis em água para seccionamento de criostato a temperaturas de -10&deg; C (14&deg; F) e abaixo</td></tr><tr><td>de moldes de congelamento</td><td>Poly sciences</td><td>18646A-1</td><td>Moldes de parafina descartáveis</td></tr><tr><td>Saran wrap</td><td></td><td>Saran 25700001300</td><td></td></tr><tr><td>desinfetante</td><td>Virkon S</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

imagem de neuroinflammation usando [11c] dpa-713 em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico do animal de estimação

PET Imaging of Neuroinflammation Using [11C]DPA-713 in a Mouse Model of Ischemic Stroke

Neuroinflammation é central para a cascata patológica após acidente vascular cerebral isquêmico. Métodos não-invasivos de imagem moleculares têm o potencial de fornecer insights críticos sobre a dinâmica temporal e o papel de certas interações neuroimunológico em curso. Especificamente, imagem de tomografia por emissão de pósitrons (PET) de translocator proteína 18 kDa (TSPO), um marcador da micróglia ativada e células de linhagem mieloide periféricas, fornece um meio para detectar e rastrear neuroinflammation em vivo. Aqui, apresentamos um método para quantificar com precisão usando neuroinflammation [11C]N,N-Diethyl-2-[2-(4-methoxyphenyl)-5,7-dimethylpyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl]acetamide ([11C] DPA-713), uma promissora segunda geração TSPO-PET radiotracer, em oclusão de artéria cerebral média distal (dMCAO) em comparação com ratos de operação. MRI foi realizada 2 dias post-dMCAO cirurgia para confirmar o acidente vascular cerebral e definir o local do infarto e volume. Imagens de PET/Computed Tomography (CT) foi realizada em 6 dias post-dMCAO para capturar o pico de aumento dos níveis TSPO após acidente vascular cerebral. Quantificação das imagens de PET foi conduzida para avaliar a absorção de [11C] DPA-713 no cérebro e baço de camundongos dMCAO e sham para avaliar os níveis centrais e periféricos de inflamação. Na vivo [11-C] Captação de DPA-713 cérebro foi confirmada usando ex vivo autoradiografia.

Os ratos foram submetidos a ressonância para verificar o golpe bem sucedido e [11C] DPA-713 PET foi realizado pela verificação de 4 ratos simultaneamente. PET, CT e o senhor imagens foram co registrado antes manualmente desenho cérebro ROIs e realizar a análise de atlas de cérebro dividido semi-automático, para investigar a captação do traçador em regiões ipsilaterais e contralaterais (Figura 2).
Imagens de PET/CT e curvas de tempo atividade (atividade de TAC-radiotracer como uma função do tempo) exibem aumento [11C] DPA-713 captação no ipsilateral versus contralaterais hemisférios(Figura 3). Quantificação de imagens dinâmicas de cérebro de PET, usando resumiu dados de 50-60 min, revelaram um aumento significativo no marcador captação (% ID/g) no ipsilateral (enfartado) em comparação com o hemisfério contralateral em dMCAO, mas não em ratos de Souza usando o desenhada manualmente Abordagem ROI (Figura 3B). Também observou-se aumento da absorção do hemisfério ipsilateral entre ratos dMCAO e sham. Não há diferenças significativas entre os hemisférios ipsilaterais e contralaterais foram observadas usando a abordagem de atlas, provavelmente devido o atlas ROIs sendo maiores que o tamanho do infarto (geralmente restringido ao córtex somatossensorial), portanto, diluir a sinal. No entanto, aumento da absorção total em dMCAO comparado a farsa foi observado para todos os ROIs, que alinha com relatórios anteriores usando ratos do modelo MCAO, demonstrando aumento da expressão TSPO em regiões fora do infarto19. Ipsilateral/contralateral rácios foram aumentados na dMCAO contra ratos Souza usando ambas as abordagens; no entanto, essa diferença só foi significativa no córtex, usando a abordagem de atlas do cérebro devido à maior variação na abordagem de ROI. Isto pode ser superado pelo aumento do número de ratos em cada grupo. Quantificação da captação de DPA-713 [11C] no baço mostrou que não houve diferença significativa entre os grupos (Figura 4).
Cérebro dMCAO rato PET imagem resultados foram confirmados por ex vivo de alta resolução digital autoradiografia (Figura 5). Captação de DPA-713 aumento [11C] foi observada em tecido enfartado com sinal negligenciável no tecido cerebral saudável. Quantificação dessas imagens revelou ipsilateral rácios contralateral, variando de 1,4 a 2.09 em ratos dMCAO.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig1.jpg"> Figura 1: PET Scanner e set-up de trabalho. Todos os espaços de trabalho estavam cobertos de protecções absorvente para criar um ambiente estéril. (A) depois de calibrações, uma cama de rato 3D-impresso, equipada para 4 ratos de imagem simultaneamente foi assegurada no scanner e cones de nariz para todos os 4 mouses anexados à anestesia. (B) equipamento necessário para a imagem latente de PET foram preparados com antecedência, incluindo cateteres de 27,5 G de solução salina-cheia, lubrificante de olho, cotonetes de etanol, lâmpadas de calor, fita cirúrgica, cola de tecido, seringas de dose de 0,5 mL, tesoura e um isqueiro. (C) para injeção radiotracer, coloque soro fisiológico-flush seringas e uma tesoura na parte de trás do scanner. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig2.jpg"> Figura 2: ROI ipsilateral/Contralateral e direita/esquerda-Split hemisfério do cérebro processo de análise de imagem PET Atlas. Análise de imagem software foi usado para determinar a absorção de traçador ipsilateral e contralateral regiões de interesse (ROIs) usando manualmente desenhadas ROIs e uma abordagem semi-automática atlas 3D de inconsistência. Registro automático de PET/CT 3D foi realizado seguido de registro manual do cérebro MRI dentro do crânio de rato correspondente definido na imagem do CT. A ferramenta ROI 3D foi usada para desenhar manualmente ipsilateral (vermelho) e contralaterais ROIs (verdes) usando o infarto na RM como uma referência. Para a abordagem de cérebro dividida, o atlas do cérebro de rato esquerda/direita-split 3D foi carregado e instalado dentro do crânio, conforme definido pela imagem CT. ROIs cérebro usados para quantificação neste Atlas do cérebro de rato 3D incluíam córtex esquerdo (cinza escuro), hipocampo esquerdo (centáurea azul), esquerda Striatum (fundo rosa), córtex direito (vermelho tomate), hipocampo direito (verde) e direito Striatium (ciano). A absorção de [11C] DPA-713 em cada região foi obtido no nCi/cc e foi posteriormente convertido ao %ID/g por normalização para a dose de correção de decaimento no tempo de varredura para cada rato. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig3.jpg"> Figura 3 : Representante na Vivo [11C] DPA-713 cérebro captação em DMCAO e ratos Sham. (A) imagens de PET/CT dinâmico e TAC demonstrar aumento [11C] DPA-713 captação no córtex ipsilateral de ratos que foram submetidos a DMCAO (n = 3) e um ligeiro aumento para sham (n = 3) operado ratos, com ratos DMCAO demonstrando significativamente maior contraste em dose injetada percentagem entre o infarto e o lado contralateral do cérebro (%ID/g). (B) quantificação de PET (50-60 min resumida) revelou significativamente aumento da absorção no ROI ipsilateral usando a abordagem ROI e no córtex (Ctx) usando a abordagem de inconsistência atlas. Não há diferenças significativas foram encontradas no hipocampo (HC) ou striatum (Str). Aumento ipsilateral ao contralateral rácios foram vistos usando ambos análise aproxima-se, mas só foi estatisticamente significativa em Ctx usando a abordagem de atlas do cérebro. * (p &lt; 0,05), * * * (p &lt; 0,001) <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig3large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig4v2.jpg"> Figura 4: Representante In Vivo [11C] DPA-713 baço captação em dMCAO e ratos Sham. (A) [11C] DPA-713 PET/CT imagens dinâmicas mostrando baço ROIs em dMCAO (n = 3) e sham (n = 3) ratos. (B) resultados quantitativos demonstram sem resultados significativos na captação de baço entre ratos dMCAO e sham. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig4v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig5v2.jpg"> Figura 5 : Representante autoradiografia resultados. Imagens de digital autoradiografia demonstram aumento [11C] DPA-713 captação no ipsilateral comparado ao hemisfério contralateral. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig5v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Imagem de tomografia por emissão de pósitrons (PET) de translocator proteína 18 kDa (TSPO) fornece um meio não-invasivo para visualizar o papel dinâmico de neuroinflammation no desenvolvimento e progressão de doenças cerebrais. Este protocolo descreve autoradiografia TSPO-PET e ex vivo para detectar neuroinflammation em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico.

Imagem de Neuroinflammation usando [11C] DPA-713 em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico do animal de estimação

Neuroinflammation is central to the pathological cascade following ischemic stroke. Non-invasive molecular imaging methods have the potential to provide ...

O objetivo geral deste experimento é quantificar com precisão a distribuição espacial e a extensão da neuroinflamação em um modelo de camundongo de AVC isquêmico usando imagens TSPO-PET e RM e validar esses achados in vivo usando autorradiografia ex vivo. Estou muito animado para compartilhar com vocês este guia passo a passo sobre como usar imagens PET para visualizar a neuroinflamação em um sujeito vivo. Aqui estamos usando um modelo de mouse de traço como exemplo.Agora, por que você pode querer usar essa técnica? Existem algumas razões. A primeira é que a neuroinflamação, que é apenas uma inflamação que ocorre no sistema nervoso central, é considerada intimamente associada e realmente algo que está por trás de muitas, muitas doenças cerebrais, incluindo acidente vascular cerebral, mas também doença de Alzheimer, esclerose múltipla, Parkinson e a lista continua.Portanto, é extremamente importante que tenhamos essas técnicas que realmente nos permitam estudar esses fenômenos biológicos. Em segundo lugar, a imagem PET oferece uma série de vantagens sobre algumas das técnicas mais tradicionais. Por exemplo, a maioria dessas técnicas tradicionais depende muito do uso de tecido cerebral post-mortem humano e de camundongo e, embora tenham proporcionado uma série de insights importantes, essas técnicas são estáticas por natureza, o que significa que elas só podem realmente nos dizer informações sobre um momento no tempo.Como sabemos que tanto o cérebro quanto o sistema imunológico são altamente dinâmicos, faz sentido que queiramos ter uma técnica que nos permita realmente capturar esses processos moleculares em sistemas vivos e intactos, em seu ambiente nativo em tempo real, e é exatamente isso que a imagem PET faz. Aqui, mostraremos como usamos um radiotraçador PET específico, o DPA-713, que é conhecido por se ligar à proteína TSPO ou translocadora. Mostraremos especificamente como injetamos uma imagem não apenas em um mouse, mas em quatro mouses ao mesmo tempo dinamicamente, e por que isso é tão importante é que realmente ajuda a aumentar o número de mouses que você pode criar imagens em um determinado dia com o mesmo lote de rastreador, simplificando assim seus experimentos.Embora isso seja tecnicamente desafiador, espero que este vídeo possa ajudar a guiá-lo para que você possa fazer isso em seu próprio laboratório. Comece posicionando os camundongos anestesiados de bruços na cama do scanner PET/CT, garantindo que estejam endireitados e seguros nos cones do nariz. Prenda a cabeça e o corpo de cada camundongo na cama com fita cirúrgica macia, garantindo que a respiração não seja restringida pela colocação da fita.Quando os animais estiverem seguros na cama e a respiração estiver estável, ligue a mira do laser e mova a cama de varredura para que eles se alinhem com o cérebro de todos os quatro camundongos. Mova a base do scanner para a posição de aquisição com os cérebros dos camundongos o mais próximo possível do centro do campo de visão. Adquira uma imagem de visualização de reconhecimento dos mouses para verificar sua posição e ajuste a posição arrastando a caixa de campo de visão na interface, se necessário.Por fim, clique em Iniciar fluxo de trabalho no software do scanner para iniciar a tomografia computadorizada, certificando-se de selecionar exibir prompts interativos do usuário, para que a varredura PET possa ser iniciada manualmente antes da injeção do traçador. Assim que os camundongos avançarem automaticamente da TC para a PET, configure a parte traseira do scanner para a injeção do radiotraçador. Coloque um acolchoamento protetor e absorvente em uma borda e certifique-se de que uma tesoura e um isqueiro estejam à mão.Corte o tubo selado do cateter com uma tesoura. Verifique se as linhas do cateter estão livres de bolhas e confirme se a cânula ainda está dentro da veia realizando uma lavagem de solução salina de 10 a 20 microlitros e, em seguida, carregue seringas de dose previamente medidas em cada um dos quatro cateteres, mantendo o controle de qual dose foi administrada a cada camundongo. Clique em OK quando o PET scan estiver pronto para iniciar e, ao mesmo tempo, iniciar um cronômetro de 10 segundos.Tenha dois pesquisadores na parte de trás do scanner com as seringas de dose na mão para injetar todos os quatro camundongos simultaneamente quando o cronômetro chegar a zero. Lave cada cateter com 50 a 100 microlitros de solução salina para garantir que a dose completa entre na veia da cauda e feche novamente o tubo usando um isqueiro. Em seguida, meça as seringas de dose usando um calibrador de dose para obter um valor de radioatividade residual.Anote os valores e a hora em que são registrados. Quando a digitalização estiver concluída, retorne a cama PET à posição original usando o botão Horizontal Home no painel Motion Control. Remova os mouses do scanner e remova cuidadosamente o cateter.Aplique pressão suavemente no local da canulação para evitar sangramento excessivo. Em seguida, meça a atividade residual no cateter usando um calibrador de dose. Por fim, reconstrua os dados abrindo o software de gerenciamento de pós-processamento, que reconstruirá automaticamente cada varredura usando os dados do histograma gerados a partir do primeiro arquivo.Para análise de PET, comece abrindo o software de análise de imagem, clicando no ícone Dados abertos para carregar a imagem de TC e selecionando o ícone Anexar dados para carregar o PET dinâmico. Execute um controle de qualidade visual dos dados por meio do operador de série temporal no menu suspenso. Selecione referência e global e aplique um mínimo e um máximo apropriados para a escala de cores.Visualize os dados PET dinâmicos quadro a quadro, verificando a captação de radioatividade e verificando se há confusão de movimento na varredura. Em seguida, crie uma imagem PET média usando a função Aritmética. Escolha a média selecionada, desmarque Referência e certifique-se de que Entrada 1, Entrada 2 e Entrada estejam selecionadas para criar uma média de todos os quadros PET.Vá para a guia Gerenciador de dados e arraste a imagem média até a posição Entrada 1 para permitir a visualização do sinal PET usando a imagem PET média. Em seguida, redistribua a escala de cores clicando no cálculo automático na ferramenta Mín/Máx. Em seguida, registre o CT no arquivo PET médio usando a função 3D automática no menu suspenso Registro de reorientação.Selecione Ref e Input 1 e escolha Rigid, Fast, Input 1 para Ref registration. Verifique visualmente o registro em todas as três dimensões e ajuste manualmente, se necessário, na guia Manual 3D usando as funções de Translação e Rotação. Quando estiver satisfeito com o registro, selecione Entrada 2 e Entrada e aplique a todos os quadros PET clicando na marca de seleção.Clique com o botão direito do mouse nos arquivos CT e PET no DM e salve como raw. Em seguida, selecione Corte no menu suspenso e arraste os limites da imagem para cortar a cabeça de um mouse de cada vez abaixo do tronco cerebral. Reoriente manualmente as imagens PET e CT para que o crânio fique reto em todas as dimensões.Carregue a imagem MR para esse mouse usando o botão Anexar dados no canto superior esquerdo da interface. Mova o MR usando a reorientação 3D manual e ajuste-o ao crânio dentro da imagem de TC. Em seguida, desative a visualização PET desmarcando-a na guia Visual Controller e use apenas o MR e o CT para desenhar a região de interesse ou ROI.Na ferramenta ROI 3D, clique no botão Adicionar ROI para criar um novo ROI e nomeie-o Infarto. Selecione a ferramenta Spline, clique com o botão esquerdo do mouse para desenhar a borda do ROI e clique com o botão direito do mouse para fechá-la. Depois disso, crie um novo ROI e rotule-o como contralateral.Clique com o botão direito do mouse no ROI do infarto e selecione Exportar. Em seguida, mova o ROI para a posição 2, Entrada 1, para permitir a visualização e a reorientação manual do novo ROI. Com apenas a Entrada 1 selecionada, marque a caixa ROI e escolha View Only para permitir a visualização do ROI do infarto sem reorientá-lo.No menu Registro de reorientação, aplique uma inversão esquerda-direita usando a função Operador e mova manualmente o novo ROI para a região idêntica no lado contralateral. Em seguida, selecione o operador Aritmética e aplique uma multiplicação escalar de dois ao novo ROI, permitindo a quantificação independente dos ROIs. Retorne à ferramenta ROI 3D.Vá para a guia Especialista e Experimental e clique no botão Importar ROI. Selecione Entrada 1 na caixa de diálogo para carregar o novo volume como o ROI contralateral. Por fim, clique com o botão direito do mouse na imagem PET média, descarregue-a e ligue o PET novamente.Gere os resultados de aceitação quantitativa usando o ícone Exportar Resultados na ferramenta ROI 3D. As imagens PET/CT resultantes e as curvas de atividade de tempo exibem maior captação de radiotraçador nos hemisférios ipsilateral versus contralateral. A quantificação de imagens cerebrais dinâmicas de PET usando dados somados de 50 a 60 minutos revelou um aumento significativo na captação do traçador no hemisfério ipsilateral em comparação com o hemisfério contralateral em dMCAO, mas não em camundongos simulados usando a abordagem ROI desenhada manualmente.Depois de assistir a essa técnica, você deve ter uma boa compreensão de como quantificar com precisão e eficiência a neuroinflamação em um modelo de camundongo de AVC isquêmico via TSPO-PET, usando métodos de análise de imagem automática e manual. É importante ressaltar que você também deve ser capaz de confirmar esses achados in vivo usando autorradiografia digital ex vivo. Como a meia-vida do Carbon 11 é tão curta, é fundamental mapear um plano experimental claro e um cronograma antes de tentar esse procedimento, a fim de maximizar a quantidade e a qualidade de seus dados.Após este procedimento, outros métodos, como a imuno-histoquímica, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais, como a correlação entre a ativação glial e a expressão de TSPO. Lembre-se de que o uso de radioatividade pode ser extremamente perigoso. Para minimizar sua exposição, utilize roupas de proteção, protetores de chumbo e aumente sua distância ao realizar este procedimento.

pet-imaging-neuroinflammation-using-11cdpa-713-mouse-model-ischemic

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Source: Chaney, A. M., et.al. Imagem PET de neuroinflamação usando [11C]DPA-713 em um modelo de mouse de traço isquêmico. J. Vis. Exp. (2018). Este vídeo demonstra uma técnica para imagens in vivo de neuroinflamação em um modelo de camundongo de AVC isquêmico usando um Radiotraçador específico para TSPO. Após a injeção, o radiotraçador se liga ao TSPO, uma proteína localizada na membrana mitocondrial externa e superexpressa em células imunes ativadas. Um scanner PET/CT detecta a distribuição do...

Imagens TSPO-PET/CT para detectar a formação de infarto em um modelo de camundongo com AVC isquêmico

Fonte: Ouyang, Y., et al. Imagem simultânea de PET/MRI durante hipóxia-isquemia cerebral de camundongo. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra uma técnica para avaliar a lesão por hipóxia cerebral por meio de tomografia por emissão de pósitrons (PET) e ressonância magnética (MRI) simultâneas. Um camundongo anestesiado é submetido à ligadura da artéria carótida comum (CCA), reduzindo o fluxo sanguíneo para um hemisfério cerebral e predispondo-o a lesões induzidas por hipóxia. A PET e a...

Imagem de danos cerebrais induzidos por hipóxia-isquemia cerebral em um modelo de camundongo

Os danos cerebrais resultantes da isquemia cerebral podem ser visualizados de forma não invasiva e estudados em ratos usando tomografia pré-clínica por emissão de pósitrons acoplada à sonda radioativa injetável, 18F-fluorodesoxiglicose. Além disso, o uso de ferramentas de software modernas que incluem modelos cerebrais de volume de interesse (VOI) aumenta drasticamente as informações quantitativas obtidas nesses estudos.

Imagem não invasivo e Análise de Isquemia Cerebral em Ratos de Vida Usando Positron Emission Tomography com<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

O método aqui apresentado utiliza a tomografia por emissão de pósitrons simultânea e ressonância magnética. No modelo de hipoxia-isquemia cerebral, alterações dinâmicas no metabolismo de glicose e de difusão ocorrem durante e após a lesão. O dano em evolução e irreproduzível neste modelo exige aquisição simultânea, se dados de imagens multi-modais significativas devem ser adquiridos.

Simultânea de imagem PET / MRI Durante Rato isquemia-hipoxia cerebral

Aqui apresentamos metodologia para a produção de um AVC focal na substância branca murina por injeção local de um inibidor irreversível da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) (L-Nio). São apresentadas duas variações estereotáxicas, traçado neuronal retrógrado e marcação e dissecção de tecidos frescos que expandem as aplicações potenciais dessa técnica.

A Stroke Versátil Modelo murino de Subcortical Branco Matéria para o Estudo da axonal Degeneration e branco Matéria Neurobiology

Apresentamos um protocolo para medir a captação de [14C]-iodoantipirina (IAP) e avaliar a ativação de substratos neurais envolvidos na dor central pós-AVC (CPSP) em um modelo de roedor.

Medidas autoradiográficas de [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine no cérebro de um rato Seguindo Central pós-AVC Dor

Este protocolo descreve a aplicação de tomografia combinada fluorescente no infravermelho próximo (NIRF) e imagiologia de micro-computadorizada (microCT) para visualizar tromboêmbolos cerebral. Esta técnica permite a quantificação da carga de trombo e evolução. A técnica de imagem NIRF visualiza fluorescente etiquetado trombo no cérebro extirpado, enquanto que a técnica microCT visualiza trombo no interior de animais vivos usando ouro-nanopartículas.

Combinada Near-infrared imagens fluorescentes e tomografia Micro-computado para Diretamente Visualizando Cerebral tromboêmbolos

Este trabalho demonstra o uso de uma plataforma multimodal de imagem baseada em ultrassom para imagens não invasivas de acidente vascular cerebral isquêmico. Este sistema permite a quantificação da oxigenação sanguínea através de imagens fotoacústicas e a perfusão prejudicada no cérebro através da angiografia acústica.

Fotoacústica, Ultrassonografia e Angiotomografia Integradas (PAUSAT) para Imagem Não Invasiva do Cérebro Inteiro do Acidente Vascular Cerebral Isquêmico

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Indução de AVC Isquêmico Agudo em Camundongos Usando a Técnica de Oclusão Distal da Artéria Média

Usando uma abordagem totalmente óptica, o AVC isquêmico é induzido enquanto registra simultaneamente a atividade neuronal de Ca2+ usando um biossensor fluorescente no núcleo emergente do AVC de um camundongo acordado e comportado.

Fototrombose Simultânea e Fotometria de Fibra para Induzir e Monitorar AVC Isquêmico em Camundongos em Comportamento

Aprenda a quantificar neuroinflamação em modelo de AVC isquêmico em camundongos usando imagem PET com TSPO e DPA-713. Este protocolo permite visualização em tempo real de processos inflamativos cerebrais.

Imagem de Neuroinflammation usando 11C DPA-713 em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico do animal de estimação (Vídeo) | JoVE Journal

Imagem de Neuroinflammation usando [¹¹C] DPA-713 em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico do animal de estimação

Explorar mais vídeos