Composição corporal e análise de enjaulamento metabólico em ratos de alta gordura Fed

O objetivo deste procedimento é coletar medidas de composição corporal e metabólicas de camundongos, como porcentagens de gordura e massa magra e gasto energético. Esses métodos podem ajudar a responder a perguntas importantes sobre o metabolismo dos camundongos, como: qual é a gordura dos meus camundongos? E por que meus ratos são tão gordos?

A principal vantagem dessas técnicas é que elas podem ser concluídas em camundongos conscientes vivos e, portanto, podem ser repetidas várias vezes ao longo de um estudo. Antes de escanear os mouses, execute um teste de sistema na máquina analisadora de composição corporal assim que a máquina aquecer por algumas horas. Use os padrões chamados Canola Oil System Test Sample ou COSTS.

Abra o software do sistema e clique no botão da barra de ferramentas Teste do sistema ou pressione alt+Y no teclado. Antes de iniciar o teste, coloque o padrão correto dentro do pórtico do sistema. Em seguida, execute o teste de diagnóstico seguindo os prompts do sistema, conforme necessário.

Depois que o sistema passar no teste, prossiga com o diagnóstico de um mouse. Agora coloque o mouse em um suporte. Um suporte opaco vermelho é o menos estressante.

Posicione o suporte em um ângulo de 45 graus e insira o mouse. Em seguida, levante lenta e cuidadosamente o suporte até que fique na vertical. Em seguida, insira um delimitador no suporte para limitar o movimento do mouse.

Em algumas circunstâncias, com mouses extremamente ativos, pode ser necessário proteger manualmente o delimitador. Agora, dentro do software, selecione uma pasta para salvar os dados e crie um nome de arquivo. Em seguida, se necessário, reduza a quantidade de ruído aleatório nas medições de gordura e magra aumentando o número de acumulações primárias da varredura.

Normalmente, no entanto, as configurações padrão fornecerão o nível necessário de precisão. Se os dados de água livre e água total não forem necessários, desative o estágio da água usando a alternância apropriada. Isso acelerará significativamente a verificação.

Agora inicie a varredura selecionando Iniciar digitalização ou pressionando F5 no teclado. Insira todos os dados relevantes sobre o animal e pressione OK ou F5 para iniciar a varredura, que levará cerca de um minuto. Após a coleta dos dados, retorne o animal de volta à sua gaiola.

Sempre limpe com segurança o suporte de acrílico entre os usos, como com água morna e sabão. Mais tarde, depois que todos os animais forem digitalizados, exporte os dados para análise e agrupamento posteriores. Antes de começar, certifique-se de que a máquina esteja ligada há mais de duas horas.

No Sistema de Monitoramento de Animais, abra o programa de controle e selecione a opção de utilitário Oxymax no menu de ferramentas para iniciar as bombas. Em seguida, verifique o dessecante e substitua-o por material fresco e seco, se necessário. Além disso, verifique a condição da armadilha de amônia e cal sodada e substitua-a, se necessário.

Em seguida, conecte o tanque de gás de calibração ao sistema usando um regulador e uma mangueira. Em seguida, abra a válvula e produza de cinco a 10 PSI de gás. Em seguida, no software, selecione Calibração no menu Ferramentas e verifique se os fluxos de amostra e referência estão precisamente em 0,4 litros por minuto.

Em seguida, verifique se o sensor de oxigênio de zircônia está aquecido a 725 graus Celsius, mais ou menos um grau Celsius. Em seguida, certifique-se de que o secador de amostra e referência e as bombas de ar estejam todos ligados e verifique se o gás de calibração está conectado e sintonizado. Agora prossiga com a calibração e, conforme necessário, ajuste levemente o controle OFFSET na frente do sensor de oxigênio de zircônia para obter um valor de proporção de oxigênio dentro dos limites aceitáveis.

Depois de calibrar com sucesso os sensores de oxigênio e dióxido de carbono, desconecte o padrão de gás e leia os níveis de oxigênio do gás atmosférico, que devem ser de cerca de 20,92. Se medir a ingestão de alimentos, considere usar dieta de camundongo em pó. Em seguida, carregue o funil de alimentos pressionando a plataforma com mola.

Em seguida, encha as garrafas de água e organize a comida. Agora pese e inspecione a saúde dos ratos antes de prosseguir com a montagem das câmaras. Em seguida, coloque o funil de alimentos na balança.

Acima dele, coloque a câmara com a plataforma perfurada. Em seguida, coloque cuidadosamente o mouse na câmara e prenda uma tampa usando os clipes frontal e traseiro. Em seguida, aperte a garrafa de água para completar a configuração.

Agora configure o próximo mouse e depois que todos os mouses estiverem prontos, verifique novamente as tampas da câmara, os mouses e a água. Para executar o experimento, selecione Arquivo experimental aberto no menu. Em seguida, selecione o modelo apropriado.

Em seguida, em Setup, defina os parâmetros do experimento que devem ser registrados e desmarque todas as câmaras que não estão em uso. Em seguida, selecione o local para o experimento ser salvo. Se a ingestão de alimentos for medida, tarar a balança.

Em seguida, inicie a captura de dados selecionando Executar no menu Experimento. As primeiras 24 horas podem ser usadas como uma fase de aclamação e as próximas 24 horas mais, usadas para análise de dados. Pelo menos duas vezes por dia, verifique os animais e a coleta de dados.

Certifique-se de que cada um tenha acesso a comida e água e procure sinais de angústia, como cavar o piso perfurado. No software, verifique a coleta de dados em tempo real. Vá para a guia Metabólico para ver o consumo de oxigênio, RER e gasto de energia.

O2IN deve ler entre 20,90 e 20,94, CO2IN deve ler aproximadamente 0,04, RER deve ler entre 0,7 e um, a vazão deve estar constante de 0,5 a 0,6 litros por minuto. Na guia Atividade, os dados em tempo real sobre quebras de viga são exibidos. Nas guias Alimentação, são exibidos dados em tempo real sobre o consumo de alimentos.

Para concluir o experimento, selecione Parar no menu Experimento e exporte os resultados como arquivos CSV para análise. Em seguida, inspecione a saúde dos ratos, pese-os e devolva-os às gaiolas de casa. Nos gráficos a seguir, os quadrados pretos representam camundongos alimentados com dieta rica em gordura e os círculos pretos representam os camundongos alimentados com a dieta padrão de ração.

As alterações nos parâmetros de composição corporal causadas pela alimentação com alto teor de gordura foram medidas por meio de EchoMRI usando os procedimentos descritos. Após uma semana na dieta rica em gordura, houve um ganho de peso significativo que aumentou em três semanas. A mudança de peso pode ser claramente atribuída a uma mudança na massa gorda.

Não foi devido a uma mudança na massa magra, teor de água livre ou teor total de água. Nos gráficos de barras a seguir, as colunas brancas representam os camundongos alimentados com ração e as colunas pretas representam os camundongos alimentados com alto teor de gordura. As medidas de V02 quando normalizadas para a massa animal não mostraram alterações após o período de três semanas.

Da mesma forma, as medições de gasto energético quando normalizadas para a massa animal não mostraram alterações. A atividade física medida por quebras de feixe variou de acordo com a hora do dia, mas foi a mesma para ambos os grupos. O consumo alimentar não foi diferente quando normalizado para massa corporal.

Essa quantidade é significativamente maior ingestão de energia com a dieta rica em gordura. Uma vez estabelecido como não invasivo, a análise da composição corporal pode ser realizada diariamente, se necessário. Embora sessões prolongadas de monitoramento metabólico animal possam ser consideradas mais estressantes para os camundongos devido ao isolamento social, essas análises também podem ser realizadas várias vezes dentro de um As implicações dessas técnicas se estendem à identificação de alvos terapêuticos para obesidade e distúrbios metabólicos, como diabetes tipo dois, pela fenotipagem metabólica cuidadosa de camundongos em relação a manipulações genéticas ou tratamentos medicamentosos.

Em última análise, esses métodos não apenas podem fornecer informações para a obesidade, mas também para outras condições, como modelos de massa de sarcopenia, caquexia do câncer, distrofia muscular ou distrofia widi.