Name: Replicação do requisitado, biblioteca não redundante de estirpe Pseudomonas aeruginosa PA14 Transposon mutantes de inserção (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-04T13:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 35 s
Description: Aprenda a replicar a biblioteca de mutantes transposon não redundante de Pseudomonas aeruginosa PA14 com este protocolo detalhado. Preserve a integridade da biblioteca e minimize riscos de contaminação durante o processo.

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Gostaríamos de agradecer a Lisa Philpotts da MGH Treadwell Biblioteca Virtual para sua orientação na busca de dados. Este trabalho foi financiado pela Fundação de fibrose cística (YONKER16G0 e HURLEY16G0) e NIH NIAID (BPH e ADE: R01 A1095338).

Os autores relatam que não há conflitos de interesses financeiros. Eliana Drenkard e Frederick Ausubel participaram da criação biblioteca mutante PA14 transposon não redundante. Bryan Hurley e Lael Yonker atualmente casa e distribuem a biblioteca mutante como parte do departamento de Pediatria do hospital geral de Massachusetts.

O P. aeruginosa Conjunto de PA14NR é um recurso valioso para a comunidade científica. De acordo com o conjunto de dados de março de 2017 de banco de dados de indicadores essenciais da ciência de Clarivate do Analytics, et al . Liberati (2006) 37, que descreve a construção de conjunto de PA14NR, é classificado no top 1% das publicações de microbiologia. Google Scholar relata mais de 600 citações da Liberati et al manuscrito original (2006) a partir de agosto de 2...

Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria Gram-negativa fenotipicamente e Leishmania diversificada e adaptável presente no solo, água e ambientes mais humanos, bem como a microflora da pele. Comparado a muitas espécies bacterianas, p. aeruginosa tem um genoma relativamente grande de 5.5-7 Mbp com conteúdo de alto G + C (% de 65-67). Além disso, uma parte significativa dos seus genes estão envolvida na adaptabilidade metabólica e fazem parte de redes de regulação, permitindo uma grande flexibilidade em resposta ao estresse ambiental1. P. aeruginosa expressa uma infinidade de fatores de virulência, apresenta tendência para a forma de biofilmes, possui a habilidade de coordenar as respostas através do quórum de múltiplos caminhos de detecção e exibe uma notável capacidade de desenvolver resistência aos antibióticos e tolerância de2,3,4,5,6,7,8. Esses atributos apresentam desafios significativos no tratamento de infecções causadas por p. aeruginosa.
Crônica infecções de p. aeruginosa podem ocorrer em vários Estados da doença. Fibrose cística (CF), uma doença genética causada pela mutação do gene da Fibrose cística regulador de condutância transmembrana (CFTR) , resulta em secreções infectadas, inspissated dentro das vias aéreas, bronquiectasias progressiva e, finalmente, morte de insuficiência respiratória9. Pela idade adulta, a maioria dos pacientes com FC é cronicamente infectada com p. aeruginosa, que desempenha um papel fundamental na morbilidade e mortalidade associadas a esta doença10. Além disso, pacientes com lesões de queimadura grave11, traqueostomia12, as artroplastias13ou permanência de cateteres14 correm o risco de infecção p. aeruginosa , relacionada com a capacidade das bactérias para formar biofilmes e fuga de acolhimento respostas inflamatórias15. Além disso, colonização ocorre sem concorrência depois uma população tolerante ou resistente aos antibiótico multi é selecionada através do tratamento antimicrobiano de largo espectro, sequencial12,16,17 , 18. melhor compreensão da patogênese de p. aeruginosa terá implicações significativas para inúmeros Estados de doença.
Vários isolados clínicos de p. aeruginosa , incluindo cepas PAO1, PA103, PA14 e PAK, têm sido muito estudados para investigar diferentes características de p. aeruginosa patogênese. Estirpe PA14 é uma clínica isolada que pertence a um dos grupos clonal mais comum no mundo19,20 e não tem sido extensivamente passada no laboratório. PA14is altamente virulento em vertebrados modelos de infecção, com uma notável endotoxina perfil21, pili estrutura22, patogenicidade dos consoles23, tipo sistema do secretion de III (TTSS), citotoxicidade para mamíferos células24 e perfis em antibióticos de resistência e persistência25. Além disso, PA14 também é altamente virulento em numerosos sistemas de modelo do patógeno-hospedeiro, incluindo folha de planta infiltração modelos26,27, infecçãoCaenorhabditis elegans modelos28, 29, inseto modelos30,31, bem como pneumonia rato modelos32,33 e34modelos de queimadura da pele.
Bibliotecas de todo o genoma mutantes são coleções de mutantes isogénicas nos genes não essenciais que constituem ferramentas muito poderosas para compreender a biologia de um organismo, permitindo que a análise da função do gene em escala genômica. Dois perto de-saturação transposon inserção mutante bibliotecas construídas em p. aeruginosa estão atualmente disponíveis para distribuição. Os locais de inserção dos transposões foram determinados para ambas as bibliotecas. Essas bibliotecas não redundante chamadas facilitam estudos de todo o genoma de cepas bacterianas, diminuindo consideravelmente o tempo e custo envolvidos na triagem descaracterizada mutantes transposon aleatório. P. aeruginosa PAO1 transposon mutant biblioteca, construída no MPAO1 isolar de estirpe PAO1 usando transposões ISphoA/ ha e élacZ/ ha35, é comissariada pelo laboratório Manoil, Universidade de Washington. A biblioteca consiste em uma coleção de 9.437 mutantes transposon sequência-verificado que oferece cobertura ampla do genoma e inclui dois mutantes para a maioria dos genes36. Informações sobre a p. aeruginosa PAO1 transposon mutant biblioteca estão disponíveis para o site do laboratório Manoil público, acessível pela internet em http://www.gs.washington.edu/labs/manoil/libraryindex.htm. A p. aeruginosa estirpe PA14 não redundante transposon inserção mutante biblioteca (conjunto PA14NR) construída em tensão PA14 usando transposões MAR2xT7 e TnphoA37 atualmente é distribuída pelo departamento de Pediatria hospital geral de Massachusetts. O conjunto PA14NR é composto por uma coleção de mais de 5.800 mutantes com inserções de transposon único em genes não essenciais37. Detalhes sobre a construção do Set PA14NR são descritos no http://pa14.mgh.harvard.edu/cgi-bin/pa14/home.cgi?section=NR_LIB local público, acessível pela internet, que também contém uma variedade de ferramentas de busca on-line para facilitar o uso da PA14NR Conjunto.
O conjunto original de PA14NR composta por 5.459 mutantes, selecionados a partir de uma biblioteca abrangente de aproximadamente 34.000 transposon aleatório inserção mutantes, que correspondem a 4.596 genes PA14 previstos, representando 77% do PA14 previu todos os genes37. Desde a construção da biblioteca em 2006 foram adicionados novos mutantes, e atualmente o conjunto de PA14NR inclui mais de 5.800 mutantes38 que representam aproximadamente 4.600 PA14 genes. A maioria dos mutantes transposon PA14 foram gerada no selvagem tipo fundo37. Pormenores relativos a cada membro da biblioteca mutante, incluindo a base genética, estão disponíveis através de pesquisa de banco de dados on-line ou baixando a planilha de biblioteca não redundante, ambos os recursos disponíveis no site PA14 (http:// PA14.MGH.Harvard.edu/cgi-bin/PA14/Home.cgi). A maioria dos mutantes foram criada usando o MAR2xT7 transposon (MrT7), com um pequeno conjunto criado usando o TnPhoA (phoA) transposon37. Cada transposon tem uma gaveta de resistência aos antibióticos, o que permite a seleção de mutantes usando gentamicina (MrT7) ou canamicina (phoA). O conjunto de PA14NR de mutantes é armazenado em sessenta e três placas de 96 poços e inclui controle de 96 poços adicionais duas placas, que consistem de tipo selvagem PA14 inoculadas e não inoculados poços intercalados em um padrão predefinido. O formato da placa de 96 poços emparelhado com as ferramentas de busca on-line muito facilita o desenvolvimento personalizado de ensaios que permitem aos usuários facilmente identificar genes associados com fenótipos mutantes de triagem. As ferramentas de busca on-line também facilitam a busca e seleção de mutantes de relevantes adicionais necessários para estudos adicionais.
As bibliotecas de mutante de transposon PA14 e PAO1 são muito importantes recursos globais para a comunidade científica, e eles se complementam na validação da função dos genes desconhecidos e os caminhos deste patógeno bacteriano. Coincidentemente, desde a construção das bibliotecas de mutação transposon PAO1 e PA14, análise de sequenciamento de DNA completo-genoma dos muitos isolados de p. aeruginosa mostrou que PAO1 e PA14 pertencem a diferentes subclados principais do P. aeruginosa 7,de filogenia39,40,41. Porque isolados clínicos de p. aeruginosa são encontrados distribuídos em toda a filogenia, o fato de que PAO1 e PA14 pertencem a diferentes p. aeruginosa subgrupos aumenta o valor das duas bibliotecas de mutação transposon para comparativo estudos.
Publicações descrevendo a construção e seleção de bactérias mutantes bibliotecas, incluindo p. aeruginosa bibliotecas35,,37,42, estão prontamente disponíveis na literatura. No entanto, o melhor de nosso conhecimento, não há protocolos publicados descrevendo os procedimentos detalhados e técnicas usadas para replicação, manutenção e validação das bactérias mutantes bibliotecas estão disponíveis.
A metodologia descrita nesta publicação descreve um conjunto de três protocolos que facilitam o uso e manutenção do PA14NR Set. O primeiro protocolo descreve a replicação da biblioteca como recomendado aos destinatários da PA14NR Set. O segundo protocolo inclui diretrizes para estrias, crescendo e armazenar individuais mutantes identificados usando o conjunto de PA14NR. O terceiro protocolo descreve técnicas de controle de qualidade, incluindo a amplificação por PCR de fragmentos de mutantes transposon e posterior sequenciamento para confirmar identidade mutante. Este conjunto de protocolos também pode ser adaptado para a replicação e a manutenção de outras bibliotecas mutantes bacterianas ou coleções. A replicação de bactérias mutantes bibliotecas ou coleções é altamente recomendada para preservar a integridade da cópia do"mestre" (cópia original recebida). Replicação de várias cópias do conjunto de PA14NR para uso em laboratório de rotina minimiza a probabilidade de contaminação interwell da cópia mestre.

<table><tbody><tr><td>Materiais para Replicação de Biblioteca</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Estéril 96-well Tissue-culture tratado, caso de 50</td><td>Corning Life Sciences</td><td>353072</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Sterile 96 Well Clear V-Bottom 2000&mu; L Deep Well Plates, caixa de 25</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3960</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Nunc OmniTray (placas retangulares), caixa de 60</td><td>Thermo Scientific Rochester</td><td>242811</td><td>via Fisher</td></tr><tr><td>Scientific Rectangular Ice Pan, Midi (4L)</td><td>Corning Life Sciences</td><td>432104</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Secure-Gard Cone Mask, caixa de 300</td><td>Cardinal Health</td><td>AT7509</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>AluminaSeal, embalagem de 100</td><td>Diversified Biotech</td><td>ALUM-100</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Membrana Breathe-Easy, embalagem de 100</td><td>Diversified Biotech</td><td>BEM-1</td><td>via Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Sterile, embalada individualmente, 50mL de calha de solução/reservatório de reagente, caixa de 100</td><td>Sorenson</td><td>S50100</td><td>via Westnet Incorporated</td></tr><tr><td>Rolo de placa</td><td>VWR</td><td>60941-118</td><td>via VWR</td></tr><tr><td>Cryo Laser Labels - CRYOLAZRTAG 2,64" x 0,277", embalagem de 16 folhas</td><td>GA International</td><td>RCL-11T1-WH</td><td>via Labtag.com (modelo para impressão também disponível a partir de Labtag.com)</td></tr><tr><td>Replicador de 96 poços</td><td>V & P Científico, Inc.</td><td>Personalizado 407C, diâmetro do pino de 3,18 mm, 57 mm de comprimento</td><td>via V & P Científico, Inc.</td></tr><tr><td>Multitron Pro, incubadora vibratória de 3mm</td><td>Infors HT</td><td>l10003P</td><td>via Infors HT</td></tr><tr><td>Picus 12 Canais 50-1200&mu; L Pipeta Eletrônica</td><td>Sartorius</td><td>735491PR</td><td>via Sartorius</td></tr><tr><td>Filter Tips 50-1200&mu; L, pacote de 960</td><td>Biohit</td><td>14-559-512</td><td>via Fisher Scientific; use pontas eletrônicas compatíveis com multicanal</td></tr><tr><td>Dry Ice</td><td>Fornecedor específico do usuário</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Materiais para Armazenamento Mutante Individual</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Tubos de Microcentrífuga Premium: 1.5mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-130</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Pipetas (P1000, P200, P20, P2)</td><td>Gilson</td><td>F167370</td><td>via Gilson</td></tr><tr><td>Materiais para Controle de Qualidade PCR</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Tubos de Microcentrífuga Premium: 1,5mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-130</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>NanoDrop</td><td>Thermo Scientific</td><td>ND-2000</td><td>via ThermoFisher</td></tr><tr><td>PCR Thermocycler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubos de PCR Omnistrips com tampas abobadadas</td><td>Thermo Scientific</td><td>AB0404</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>ART Barreiras ponteiras de pipeta de baixa retenção (10 uL, 100 uL, 1000 uL)</td><td>Molecular BioProducts, Inc.</td><td>Z676543 (10 uL), Z676713 (100 uL), Z676802 (1000 uL)</td> <td>via Pipetas Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>(P1000, P200, P20, P2)</td> <td>Gilson</td><td>F167370</td><td>via Gilson</td></tr><tr><td>Fisherbrand Tubos de Microcentrífuga Premium: 1,5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-130</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>MasterKit de purificação de DNA puro</td><td>Epicentre</td><td>MCD85201</td><td>via Epicentre Technologies Corp</td></tr><tr><td>GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder, pronto para uso</td><td>Thermo Scientific</td><td>SM1333</td><td>via ThermoFisher</td></tr><tr><td>RediLoad Loading Buffer</td><td>Invitrogen</td><td>750026</td><td>via ThermoFisher</td></tr><tr><td>Chemicals<</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>em>Chemicals for Library and Individual Mutant Storage</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glycerol MB Grade, 1L</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G5516</td><td>via Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>LB Caldo</td><td></td><td></td><td>por 1L dH2O: 10g de triptona, 5g de extrato de levedura, 5g de NaCl, 1ml de NaOH 1N (Protocolos Atuais em Biologia Molecular.&nbsp; Wiley, 1994.)</td></tr><tr><td>Triptona</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T7293</td><td>via Sigma-Aldrich Extrato de</td></tr><tr><td>Levedura</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Y1625</td><td>via Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Cloreto de Sódio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7653</td><td>via Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Hidróxido de Sódio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S8045</td><td>via Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>LB&nbsp; ágar</td><td></td><td></td><td>Veja a preparação acima, adicione 15g de Ágar Bacto</td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5306</td><td>via sulfato de gentamicina Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>, 10g</td><td>BioReagent</td><td>1405-41-0</td><td>via sulfato de</td></tr><tr><td>canamicina</td> Sigma-Aldrich <td>Gibco</td><td>11815024</td><td>via ThermoFisher</td></tr><tr><td>Ethanol, 190 prova</td><td>Decon</td><td>04-355-221</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Chemicals for Quality Control PCR</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Primers</td><td>Fornecedor preferencial do usuário</td><td></td><td>Consulte os primers listados na Tabela 3</td></tr><tr><td>Corning cellgro Molecular Biology Grade Water</td><td>Corning</td><td>46000CV</td><td>via Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Taq Polymerase Buffer</td><td>Invitrogen</td><td>10342020</td><td>via ThermoFisher</td></tr><tr><td>Taq DNA Polimerase,</td><td>Invitrogen</td> recombinante <td>10342020</td><td>via ThermoFisher</td></tr><tr><td>dNTPs</td><td>Invitrogen</td><td>10297018</td><td>via ThermoFisher</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Sigma</td><td>A9539</td><td>via Sigma-Aldrich</td></tr></tbody></table>

replicação do requisitado, biblioteca não redundante de estirpe pseudomonas aeruginosa pa14 transposon mutantes de inserção

Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants

Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria Gram-negativa fenotipicamente e Leishmania diversificada e adaptável onipresente em ambientes humanos. P. aeruginosa é capaz de formar biofilmes, desenvolver resistência aos antibióticos, produzem fatores de virulência e evoluir rapidamente no decurso de uma infecção crônica. Assim, p. aeruginosa pode causar tanto aguda e crônica, difícil de tratar infecções, resultando em morbidade significativa em certas populações de pacientes. Estirpe de p. aeruginosa PA14 é um humano isolado clínico com uma estrutura de genoma conservada que infecta uma variedade de hospedeiros mamíferos e nonvertebrate fazendo PA14 uma estirpe atraente para estudar este patógeno. Em 2006, uma biblioteca de mutantes de inserção do transposon não redundante contendo 5.459 mutantes correspondente previsto 4.596 PA14 genes foi gerada. Desde então, a distribuição da biblioteca PA14 permitiu a comunidade de pesquisa compreender melhor a função de genes individuais e complexos caminhos de p. aeruginosa. Manutenção da integridade da biblioteca através do processo de replicação requer técnicas adequado manuseio e precisas. Para o efeito, este manuscrito apresenta protocolos que descrevem detalhadamente as etapas envolvidas em replicação de biblioteca, biblioteca de controle de qualidade e armazenamento adequado dos mutantes individuais.

Doze novas cópias da PA14NR Set foram replicadas usando protocolo I e uma avaliação de controle de qualidade das cópias do novas gerado foi realizado utilizando protocolo III.
PA14NR conjunto placas mutantes, juntamente com as placas de controle, que consistem de tipo selvagem PA14 inoculado e não inoculadom poços intercalados em um padrão predefinido (Figura 4A), foram replicadas na sequência metho...

Pseudomonas aeruginosa infecção causa morbidade significativa em hosts vulneráveis. A biblioteca de mutantes de inserção transposon não redundante da estirpe de p. aeruginosa PA14, designado como PA14NR definida, facilita a análise da funcionalidade do gene em inúmeros processos. Apresentado aqui é um protocolo para gerar cópias de alta qualidade da biblioteca mutante PA14NR definido.

Replicação do requisitado, biblioteca não redundante de estirpe Pseudomonas aeruginosa PA14 Transposon mutantes de inserção

Pseudomonas aeruginosa is a phenotypically and genotypically diverse and adaptable Gram-negative bacterium ubiquitous in human environments. P. aeruginosa ...

O objetivo geral deste protocolo é gerar cópias de alta qualidade da biblioteca mutante de transposon ordenada e não redundante da cepa PA14 de Pseudomonas aeruginosa conhecida como conjunto PA14NR. Este protocolo preserva a integridade do conjunto PA14NR durante a replicação, gerando cópias de alta qualidade desta biblioteca. A principal vantagem deste protocolo é que ele fornece uma descrição detalhada de todas as etapas envolvidas na replicação da biblioteca, controle de qualidade e armazenamento adequado de mutantes individuais.Embora este protocolo tenha sido projetado para replicar o conjunto P14NR, ele pode ser adaptado para replicar outras bibliotecas bacterianas. Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades devido ao risco de contaminação durante o processo de replicação. Portanto, este protocolo fornece instruções detalhadas passo a passo para reduzir esse risco.Nosso laboratório distribui o conjunto PA14NR para a comunidade científica global. E recomendamos que as bibliotecas sejam replicadas pelo usuário final. Para fornecer orientação, oferecemos um protocolo detalhando como gerar cópias de alta qualidade da biblioteca.A demonstração visual desse pro

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Fonte: Kazi, M. I., et. al., Gerando bibliotecas de inserção de transposons em bactérias Gram-negativas para sequenciamento de alto rendimento. J. Vis. (2020)Este vídeo demonstra a seleção, quantificação e preservação de bactérias receptoras Gram-negativas portadoras de inserções de transposons com base na resistência à canamicina.

Isolamento de bactérias Gram-negativas com inserções de transposons genômicos

Aqui nós descrevemos um protocolo com o marinheiro mutagênese mini-himar1 mediada por transposon para gerar uma biblioteca de mutantes de inserção de alta densidade para a tela, isolar e identificar novos reguladores de alginato no protótipo PAO1 cepa Pseudomonas aeruginosa.

Identificação de novos genes associados com alginato de Produção em<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Usando Mini-<em&gt; Himar1</em&gt; Mutagênese Mariner Transposon mediada

Enterobacter sp. YSU cresce em meio de sais mínimos de glucose. Auxotrofos são geradas através da transformação com um transposome qual se insere aleatoriamente no genoma do hospedeiro. Os mutantes são encontrados pela réplica de placas a partir de meio complexo para meio mínimo. Genes interrompidos são identificados por socorro e seqüenciamento genético.

Geração de Enterobacter Sp. YSU auxotrofos Usando Transposon Mutagênese

Aqui, o poder de uma inserção aleatória de um elemento de DNA não-codificante, mediada por transposon foi usado para resolver a sua posição ideal cromossômica.

Determinação da localização cromossômica ideal para um elemento de DNA em Escherichia coli usando uma nova abordagem mediada por Transposon

Apresentado aqui é um método simples para criar uma biblioteca de inserção alta densidade transposon em Escherichia coli ou Shigella flexneri usando conjugação bacteriana. Este protocolo permite a criação de uma coleção de centenas de milhares de mutantes exclusivos nas bactérias através da inserção de genômica aleatória de um transposon.

Criação de um denso Transposon inserção biblioteca usando bacteriana conjugação em entérobactérienne cepas tais como Escherichia Coli ou Shigella flexneri

Aqui descrevemos uma técnica que combina o mutagenesis transposon com sequenciamento de alto rendimento para identificar e quantificar os mutantes leptospiral de transposon em tecidos após um desafio de hamsters. Este protocolo pode ser usado para mutantes de tela para a sobrevivência e disseminação em animais e também pode ser aplicado aos estudos em vitro .

Elevado-throughput sequenciamento paralela à medida Fitness de Leptospira interrogans Transposon inserção mutantes durante a Golden sírio Hamster infecção

Aqui nós apresentamos um método experimental para testar o papel de plasmídeos multicópia na evolução da resistência aos antibióticos.

Testando o papel de plasmídeos multicópia na evolução da resistência aos antibióticos

Descrevemos um método para gerar bibliotecas mutantes transposon saturadas em bactérias Gram-negativas e preparação subsequente de bibliotecas de amplicon de DNA para sequenciamento de alto rendimento. Como exemplo, focamos no patógeno ESKAPE, Acinetobacter baumannii,mas este protocolo é agradável para uma ampla gama de organismos Gram-negativos.

Gerando Bibliotecas de Inserção Transposon em bactérias gram-negativas para sequenciamento de alto rendimento

Este protocolo apresenta um método rápido e eficiente para identificar fatores genéticos envolvidos em vários tipos de motilidades em Pseudomonas aeruginosa.

Método de alto rendimento para observação de fenótipos de motilidade em Pseudomonas aeruginosa

Protocolo que descreve a aplicação de um sistema de célula de fluxo para o cultivo e análise de biofilmes microbianos para Microscopia Confocal Laser Scanning (CLSM).

Pseudomonas aeruginosa e Saccharomyces cerevisiae Biofilme em Células de Fluxo

Aprenda a replicar a biblioteca de mutantes transposon não redundante de Pseudomonas aeruginosa PA14 com este protocolo detalhado. Preserve a integridade da biblioteca e minimize riscos de contaminação durante o processo.

Replicação do requisitado, biblioteca não redundante de estirpe Pseudomonas aeruginosa PA14 Transposon mutantes de inserção

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