Hepatectomy parcial de Lobular: Um modelo cirúrgico para regeneração hepática morfológica

O objetivo geral deste procedimento cirúrgico é induzir a regeneração morfológica do fígado por meio de hepatectomia lobular parcial. Este método pode responder a questões-chave nos campos da biologia de células-tronco e medicina regenerativa sobre regeneração morfológica do fígado e células-tronco específicas do fígado. As principais vantagens dessa técnica são que ela é minimamente invasiva e não requer insultos químicos ou cauterização.

Antes de tocar nos animais, esfregue a roupa de cama da gaiola da mãe nas luvas. Em seguida, transfira todos os filhotes e algumas roupas de cama da gaiola da mãe para uma gaiola vazia em cima de uma almofada de aquecimento. Em seguida, coloque um filhote sob um microscópio de dissecação.

Depois de confirmar o nível adequado de sedação por falta de resposta ao beliscão do dedo do pé, use uma pequena gaze para desinfetar a parede abdominal posterior do animal com betadine. Use uma tesoura de microdissecação e uma pinça para fazer uma incisão de meio centímetro hemiclavicular esquerdo imediatamente abaixo da caixa torácica. Use a pinça para separar suavemente a pele.

Em seguida, faça uma segunda incisão mais profunda na cavidade peritoneal e use a borda romba posterior da tesoura de microdissecação e fórceps para aplicar uma leve pressão lateral em ambos os lados do abdômen, forçando o ápice do lobo esquerdo para fora da cavidade peritoneal. Quando o ápice esquerdo do lobo esquerdo estiver visível, ampute a quantidade experimental apropriada de tecido do lobo e coloque o tecido em um tubo de 1,5 mililitro de PBS no gelo. Usando um pedaço de gaze enrolado, retorne suavemente o lobo esquerdo para a cavidade peritoneal.

Remova a gaze quando o sangramento parar e molhe o local da cirurgia e a área circundante com gaze embebida em PBS. Feche o local da cirurgia com suturas e um ponto corrido. Em seguida, role suavemente, mas completamente, uma gaze embebida em PBS sobre o filhote e o local da ferida, garantindo que não haja restos de sangue ou betadina.

Permita que o filhote se recupere perto de compressas de gaze expostas às fezes e urina da mãe. Quando todos os filhotes tiverem sido hepatectomiados, devolva todos os animais e roupas de cama para a gaiola da mãe. Depois de pesar os lóbulos, fixe as amostras de tecido em paraformaldeído a 2% por uma hora em temperatura ambiente.

No final da fixação, transfira os tecidos para moldes de congelamento individuais contendo o meio de temperatura de corte ideal para congelamento em gelo seco. E adquira seções de 7 a 10 micrômetros de cada lóbulo usando qualquer criostato padrão. Verifique os filhotes diariamente por pelo menos 56 dias para confirmar que suas feridas permanecem fechadas e injete analgesia 24 e 48 horas após a cirurgia.

No ponto final experimental apropriado, colha e pese o fígado de cada filhote em bloco. Em seguida, separe cuidadosamente cada lobo individual em sua inserção proximal e compare a massa do lobo esquerdo amputado com a massa de todo o fígado para determinar a extensão da regeneração em cada lobo. A regeneração sutil do lobo esquerdo pode ser observada 7 a 14 dias após a cirurgia e a regeneração completa é frequentemente observada após 56 dias.

Sem diferença significativa nas áreas de hepatócitos no fígado regenerado revelada pela análise histológica. Além disso, injeções de camundongos neonatais com EdU indicam um aumento significativo no número de células em proliferação no lobo esquerdo em regeneração lesionado em comparação com controles não lesionados, sugerindo que a proliferação celular contribui para a regeneração do lobo esquerdo em neonatos. A hepatectomia em camundongos juvenis pós-natal no dia 14 resulta em uma diminuição da regeneração no lobo esquerdo com uma compensação aumentada dos lobos não lesionados.

Indicando que, em 14 dias, a resposta da lesão à ressecção aguda muda da regeneração específica do lobo para a compensação global. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em 15 minutos se executada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante ter o máximo de cuidado possível para não causar estresse extra à mãe ou aos filhotes.

Após este procedimento, outros métodos, como hepatecomias seriadas ou lesões hepáticas crônicas, podem ser feitos para avaliar melhor o potencial regenerativo do fígado. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo da biologia de células-tronco explorarem a regeneração hepática em camundongos neonatais. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como completar uma amputação controlada específica do lobo do fígado de camundongo neonatal.

Não se esqueça de que trabalhar com isoflurano é extremamente perigoso e precauções como máscara facial e luvas devem sempre ser tomadas ao realizar este procedimento.