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DOI: 10.3791/57374-v
Yu Okazawa1,2, Kosuke Mizukoshi1,2, Yu Koyama2,4, Shoki Okubo5, Hiromitsu Komiyama1, Yutaka Kojima1, Michitoshi Goto1, Sonoko Habu3, Okio Hino2, Kazuhiro Sakamoto1, Akira Orimo2
1Department of Coloproctological Surgery,Juntendo University Faculty of Medicine, 2Department of Molecular Pathogenesis,Juntendo University Faculty of Medicine, 3Atopy Research Center,Juntendo University Faculty of Medicine, 4Department of Oral Pathobiological Science and Surgery,Tokyo Dental College, 5Department of Gastroenterology,Juntendo University Faculty of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Para permitir a detecção altamente sensível do câncer colorretal humano divulgação células (CRC) colonizar os tecidos, mostramos aqui um protocolo para transdução eficiente de particulas de Lentivirus de proteína verde fluorescente (GFP) em células de organoides CRC PDX-derivado antes da sua injeção em ratos destinatários, com a observação microscópica de estéreo-fluorescência.
Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da biologia tumoral sobre as micrometástases encontradas em pacientes com câncer de cólon. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite a detecção altamente sensível com micrometástases induzidas por organoides de câncer de cólon derivados de pacientes marcados com GFP nos camundongos. Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades porque pode ser difícil detectar micrometástases derivadas de organoides de tumores de cólon em órgãos distantes em camundongos.
Demonstrando o procedimento com Yu Okazawa estarão Kosuke Mizukoshi e Yu Koyama, ambos estudantes de doutorado e cirurgiões do meu grupo. Para gerar organoides de células de câncer colorretal humano, primeiro adicione 150 microlitros de matriz extracelular artificial por poço a uma placa de 12 poços no gelo. Quando todos os poços tiverem sido revestidos, incube a placa por 30 a 60 minutos em uma incubadora de 37 graus Celsius e 5% de CO2 para solidificar os géis.
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