Um modelo do rato de obstrução Intestinal parcial

O objetivo geral deste procedimento cirúrgico é produzir obstruções intestinais de forma confiável e consistente em camundongos que facilitem o estudo das alterações moleculares e fenotípicas no tecido gastrointestinal que ocorrem em resposta às obstruções. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo gastrointestinal em torno dos mecanismos celulares subjacentes às alterações fenotípicas resultantes da obstrução intestinal. As principais vantagens dessa técnica é que ela é confiável, replicável e econômica.

A implicação dessa técnica se estende para a terapia da obstrução intestinal, pois mimetizam as condições fenotípicas observadas em patologias humanas causadas por obstrução intestinal. Demonstrando este procedimento estarão Se Eun Ha, um pós-doutorado, e Lai Wei, um estudante de pós-graduação, ambos do nosso laboratório. Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé, aplique pomada nos olhos do animal e coloque o mouse em uma almofada de aquecimento.

Retire os pelos do abdômen com creme depilatório e limpe a pele exposta com etanol 70%. Desinfete o local cirúrgico com solução de iodopovidona e cubra o animal com um papel estéril de 25 por 50 centímetros com uma abertura de 2,5 por 2,5 centímetros para a área cirúrgica. Prenda o campo com tiras estéreis nos limites da abertura e da pele e use uma lâmina de bisturi número 15 para fazer uma incisão longitudinal na pele de três centímetros.

Usando fórceps e tesouras cirúrgicas, separe cuidadosamente a pele da camada musculoperitoneal sem incisar o tecido e localize a linha alba. Em seguida, use micro pinças e tesouras para cortar dois centímetros ao longo da linha alba para expor a cavidade intraperitoneal e localizar cuidadosamente o ceco. Use a micropinça para mover lenta e suavemente o ceco, o cólon proximal e o íleo de dentro da cavidade intraperitoneal para o campo estéril e umedeça imediatamente o tecido intestinal com gaze embebida em solução salina estéril a 0,9%.

Localize o mesentério entre o íleo e o cólon proximal e faça uma incisão de um centímetro no mesentério paralela e logo abaixo do íleo, tomando cuidado para evitar cortar qualquer vasculatura. Corte longitudinalmente para abrir o vaso mesentérico e use micro fórceps para abrir um anel de silicone esterilizado autoclavado de tamanho apropriado. Insira uma extremidade do anel através da incisão e coloque a extremidade do anel em contato com a primeira extremidade para retornar o instrumento à sua forma original.

Confirme se o anel está completamente ao redor do íleo e feche o anel com uma sutura. As incisões no mesentério devem ser grandes o suficiente para que o anel se encaixe, mas pequenas o suficiente para que nenhum vaso sanguíneo seja incisado. Certifique-se também de que o anel seja colocado no íleo, não no cólon.

Retorne cuidadosamente os intestinos à sua localização anatômica original e use uma sutura absorvível em um ponto contínuo simples para fechar a camada musculoperitoneal ao longo da linha alba. Limpe qualquer sangramento com gaze embebida em solução salina estéril a 0,9% e use uma nova sutura de náilon e um ponto contínuo simples para fechar a pele. Em seguida, desinfete o local da ferida com iodopovidona e injete antibióticos antes de colocar o animal em um portão de aquecimento com monitoramento até a decúbito total.

Neste experimento, o intestino delgado foi parcialmente preenchido e distendido oito dias após a cirurgia de obstrução parcial e totalmente preenchido e distendido aos 13 dias após a cirurgia de obstrução parcial em comparação com animais operados de forma simulada controle. Além disso, a formação de pelotas fecais no cólon dos camundongos do oitavo e 13º dias após a cirurgia de obstrução parcial foi reduzida em comparação com os animais de controle. A camada de músculo liso do íleo logo a montante do anel foi hipertrofiada oito dias após a cirurgia de obstrução parcial, com hipertrofia adicional observada no dia 13.

As células musculares lisas cresceram a taxas progressivamente rápidas em todas as três camadas de tecido oito e 13 dias após a cirurgia de obstrução parcial, conforme avaliado por análise imunoquímica, enquanto as células intersticiais de Cajal degeneraram dentro das camadas intra e intermuscular. Os subconjuntos de células alfa positivas do receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas, também conhecidos como células alfa PDGFR, foram remodelados dinamicamente dentro das camadas intermusculares de camundongos com obstrução parcial com crescimento observado oito dias após a cirurgia que degenerou no dia 13. Além disso, as células neuronais também foram significativamente perdidas nas regiões inter e intramusculares de camundongos com obstrução parcial nos dias oito e 13 após a cirurgia.

Uma vez dominada, essa técnica deve ser concluída em 30 minutos para garantir a sobrevivência do mouse. Ao tentar este procedimento, é importante tratar o tecido de forma rápida e delicada. Após este procedimento, outros métodos, como o teste de tendência gastrointestinal, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre como as obstruções alteram o peristaltismo intestinal.

Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo da pesquisa gastrointestinal explorarem as consequências da obstrução intestinal em camundongos. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como colocar rápida e adequadamente um anel ao redor do íleo do camundongo para a criação de obstrução parcial intestinal. Não se esqueça de que trabalhar com ferramentas cirúrgicas e agulhas pode ser extremamente perigoso, portanto, tome as devidas precauções.

Além disso, certifique-se de usar luvas estéreis e praticar técnicas assépticas ao realizar este procedimento.