Name: Síntese de nanotubos de carbono de paredes Multi modificados com nanopartículas de prata e avaliação das suas actividades antibacterianas e propriedades citotóxicas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-10T12:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 19 s
Description: Aprenda a sintetizar nanocomplexos antibacterianos usando nanotubos de carbono de paredes múltiplas e nanopartículas de prata. Este método permite avaliar a atividade antimicrobiana e a citotoxicidade em células humanas.

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Este estudo foi suportado por bolsas de investigação de Universidade Chung-Ang (2016) e pelo programa de desenvolvimento de tecnologia de Nano-materiais através do nacional Research Foundation de Korea(NRF) financiado pelo Ministério da ciência e TIC (n º 2017M3A7B8061942).

1. MWCNT oxidação
<ol><li>Medir 30-50 mg de MWCNT dentro de um frasco de 50 mL. Lentamente, adicionar 8 mL de um H2então4: solução de3 HNO (90% da concentração inicial, 3:1 vol/vol) com uma pipeta com pontas de pipetas de 1 mL. Atenção: Esta preparação deve ser conduzida em uma coifa de química.<ol>
<li>Permita a 30 min. para a reação exotérmica completar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Proceda à sonicação a solução a 60-80 ° C e 160 W para 1 h até MWCNT instala-se na parte inferior do frasco. Atenção: O nível da água no sonicador deve ser menor do que a parte superior do frasco para que a água não será introduzida dentro do frasco.</li>
	<li>Transferi a solução para um tubo de centrifugação.<ol>
<li>Com uma micropipeta, adicione 30 mL de água destilada gota a gota à solução MWCNT-COOH. Atenção: Uma forte reação exotérmica ocorre durante a adição de água destilada. Adicionar a água destilada lentamente e permitir tempo para refrigerar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Centrifugue a solução MWCNT-COOH a 12.000 x g e a temperatura ambiente por 15 min. Cuidado: Ao operar uma centrífuga, certifique-se de que centrífuga permanece equilibrada pela colocação de um tubo com o mesmo peso em frente do tubo de amostra.</li>
	<li>Remova o sobrenadante com uma pipeta e a ponta da pipeta de 1 mL. Adicione 5 mL de etanol com uma pipeta e a ponta da pipeta de 1 mL. Lave as paredes do frasco com etanol pipetado adicional. Centrifugue a solução a 12.000 x g e a temperatura ambiente por 15 min.<ol>
<li>Determine o pH de sobrenadante com papel de pH. Repeti a lavagem e a centrifugação até que o sobrenadante pH neutro.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Remova todos os sobrenadante. Adicione 1 mL de água destilada para precipitar e dispersar MWCNT-COOH uniformemente em solução. Congela a-60 ° C sob vácuo até secar.</li>
</ol>2. deposição de nanopartículas prata na MWCNTs
<ol><li>Coloque 10 mg de MWCNT-COOH em um tubo cónico de 50 mL e diluir com 30 mL de água destilada. Proceda à sonicação solução a 60 ° C e 160 W por 1h.</li>
	<li>Coloque 6 mL de 0.1 N AgNO3 em um tubo cónico de 50 mL e diluir com 18 mL de água destilada. Proceda à sonicação solução a 60 ° C e 160 W por 1h. Atenção: Adicione AgNO3 proporcionalmente à massa total da MWCNTs tais que a massa total do Ag não exceda 20%.</li>
	<li>Adicione a solução de3 AgNO gota a gota à solução com uma pipeta e a ponta da pipeta de 1 mL MWCNTs enquanto sonicating a mistura a 60 ° C e 160 w. Continue sonicating por 1h depois da adição do AgNO3.</li>
	<li>Centrifugue a solução a 12.000 x g e a temperatura ambiente por 15 min e retirar o sobrenadante. Centrifugue a solução e remover o sobrenadante mais duas vezes.</li>
	<li>Adicionar 1 mL de água destilada para a mistura de Ag-MWCNTs e dispersar o precipitado uniformemente na solução. Adicionar 5 mL de etanol e permitir a reação proceder à temperatura ambiente durante 1 h.</li>
	<li>Centrifugue a solução a 12.000 x g e a temperatura ambiente por 15 min e retirar o sobrenadante.</li>
	<li>Determine o pH de sobrenadante com papel de pH. Repeti a lavagem e a centrifugação até pH sobrenadante é neutro.</li>
	<li>Adicionar 1 mL de água destilada para Ag-MWCNTs e dispersar uniformemente em solução. Congela a solução a-70 ° C sob vácuo por 24 h.</li>
</ol>3. zona de inibição teste
<ol><li>Misture 18,12 g de ágar-ágar R2A e 1 L de água destilada num balão. Esterilize a mistura em uma autoclave a 121 ° C por 15 min.</li>
	<li>Permitir que o gel de arrefecer à temperatura ambiente. Coloque 10 mL de gel em placas de Petri antes da têmpera para preparar o meio sólido.</li>
	<li>Lugar de 100 µ l de bactérias em meio sólido. Espalhe as bactérias no meio sólido usando um difusor. Atenção: Este procedimento deve ser conduzido em uma coifa química iluminada com uma lâmpada de álcool.</li>
	<li>Incube os pratos a 30 ° C, durante 48 h.</li>
	<li>Misture 3,12 g de R2A caldo com 1 L de água destilada num balão. Esterilize a mistura em uma autoclave a 121 ° C por 15 min.</li>
	<li>Transferir as colônias crescidas para um meio líquido, usando um loop e agulha e incubá-los numa incubadora a 180 rpm e 30 ° C.</li>
	<li>Registre o valor de OD (densidade óptica) por espectrofotometria UV em 600 nm numa base horária para medir o crescimento bacteriano. Nota: Ágar R2A foi usado neste teste, em vez do padrão Ágar Mueller-Hinton, porque R2A é o ágar preferencial para crescimento de Methylobacterium spp.
</li>
	<li>Lugar 10 mL do preparado ágar R2A em uma placa de Petri para preparar um ágar de fundo.<ol>
<li>Misture 3,12 g de caldo R2A e 8 g de ágar com 1 L de água destilada. Esterilize a mistura em uma autoclave a 121 ° C por 15 min. lugar de 10 mL deste gel no agar inferior.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Carrega 50 µ l de solução de Ag-MWCNTs no disco de papel estéril com uma micropipeta.<ol>
<li>Secar e esterilizar amostra Ag-MWCNTs em uma câmara de vácuo sob UV luz por 30 min.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Amostra de lugar Ag-MWCNTs no ágar.</li>
	<li>Incube a placa de ágar a 30 ° C, durante 48 h.</li>
	<li>Zona de medida de inibição de12. Nota: As instruções para o software usado estão incluídas nas referências.</li>
</ol>4. teste antibacteriano
<ol><li>Repita as etapas de 3.1 a 3.7 para preparar a cultura bacteriana.</li>
	<li>No máximo OD, inocule 100 µ l de bactérias em 3 mL de meio líquido fresco com uma ponta de micro pipeta pipeta e 100 µ l.</li>
	<li>Preparar cinco 50 amostras µ l da solução de controle em tubos cônicos de 15 mL. Adicione o seguinte para cada tubo: 1) metanol; 2) 1000 µ g/mL MWCNT-COOH; 3) 50 µ g/mL Ag-MWCNTs; 4) 40 µ g/mL Ag-MWMWCNTs; 5) 30 µ g/mL Ag-MWCNTs.</li>
	<li>Incube a 180 rpm e 30 ° C até que o controle é maximamente ativo conforme determinado por espectrofotometria UV conforme descrito acima.</li>
	<li>Medir o valor de OD de cada amostra e calcular a concentração de MIC. O valor de OD está diretamente relacionado ao número de células bacterianas em caldo de amostra.</li>
	<li>Espalhe as bactérias cultivadas em meio sólido com um espalhador.</li>
	<li>Incube o prato a 30 ° C, durante 48 h.</li>
	<li>Contagem de colônias bacterianas e os valores da CFU de medida para determinar a atividade antibacteriana12. Nota: As instruções para o software usado estão incluídas nas referências.</li>
</ol>5. ensaio da viabilidade
<ol><li>Depois de remover as células de cultura da incubadora, o médio de sucção e lavar três vezes com uma lavagem gota a gota de 5 mL de PBS.</li>
	<li>Adicione 1 mL de tripsina-EDTA em PBS para a célula lavada e sucção após 1 min.<ol>
<li>Bata a placa para remover células presas.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Adicionar 5 mL de DMEM (médio modificado águia de Dulbecco) e em seguida, retire as pilhas. Centrifugar as amostras a 200 x g por 3 min e retirar o sobrenadante.<ol>
<li>Adicione 1 mL de DPBS e misture.</li>
		<li>Contar as células de 10 µ l da solução com uma máquina automatizada de contagem de células. Nota: Instruções para a máquina de contagem de células utilizadas constam as referências13.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloque 1 × 105 de AML12 células por poço em uma placa de seis contendo solução DMEM. O meio contém antibiótico estéril de 1% e 10% (v/v) de soro fetal bovino.</li>
	<li>Incube a placa para 8-12 h a 37 ° C, em um ambiente de ar 95% 5% CO2.</li>
	<li>Aspire o sobrenadante de poços com um aspirador.<ol>
<li>Adicione a cada amostra composta de controle, NMS-DMSO (Dimetilsulfóxido) e 30-40 µ g/mL Ag-MWCNT a 1 mL de DMEM.</li>
		<li>Incube a 37 ° C, em um ambiente de ar 95% 5% CO2para 8 h.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Remova o sobrenadante e lavar as amostras com 5 mL de PBS.</li>
	<li>Adicione 1 mL do preparado ao vivo/morto kit (20 µ l de 2 mM, EthD-1 com 5 µ l de 4mm calceína AM em DMSO em 10 mL de PBS) gota a gota para a célula.</li>
	<li>Incube a room temperature por 30-45 min ou a 37 ° C por 10 min. fluorescência medida com microscopia de fluorescência padrão 100 X ou 300 X.</li>
</ol>6. ensaio de azul de Trypan
<ol><li>Prepare as amostras de acordo com passos 5.1 através de 5.6.2 acima.</li>
	<li>Remova o sobrenadante.</li>
	<li>Lave a placa com 1 mL de 1 x DPBS e decantar.</li>
	<li>Adicione 1 mL de tripsina a placa e incubar durante 3 min separar as células de cultura. Use o meio de cultura celular para lavar prato e recolher as células. Coloque as células coletadas em um tubo de 15 mL.</li>
	<li>Centrifugar o tubo a 200 x g e 4 ° C por 3 min.</li>
	<li>Descarte o sobrenadante. Adicione 1 mL de meio fresco de centrifugado e re-dispersar as células.</li>
	<li>Adicionar 10 µ l de trypan azul com 10 µ l de células dispersas e contar as células com uma máquina automatizada de contagem de células. Nota: Instruções para a máquina de contagem de células utilizadas estão incluídas nas referências.</li>
</ol>

<ol><li>Löndahl, J. Physical and Biological Properties of Bioaerosols. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aL%C3%B6ndahl%2C+J+%22Bioaerosol+Detection+Technologies%22">Bioaerosol Detection Technologies</a>. , Springer. 33-48 (2014).</li>
<li>Jennings, S., Moran, A., Carroll, C. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/251238513_Bioaerosols_and_Biofilms">Bioaerosols and biofilms.</a> Biofilms in medicine, industry and environmental biotechnology. , IWA, London. 160-178 (2003).</li>
<li>Flemming, H. -C., Wingender, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biofilm+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The biofilm matrix.</a> Nature Reviews Microbiology. 8 (9), 623-633 (2010).</li>
<li>Lewis, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC90417/">Riddle of biofilm resistance.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 45 (4), 999-1007 (2001).</li>
<li>Doronina, N. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methylobacterium+suomiense+sp.+nov.+and+Methylobacterium+lusitanum+sp.+nov.%2C+aerobic%2C+pink-pigmented%2C+facultatively+methylotrophic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Systematic+and+Evolutionary+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Methylobacterium suomiense sp. nov. and Methylobacterium lusitanum sp. nov., aerobic, pink-pigmented, facultatively methylotrophic bacteria.</a> International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 52 (3), 773-776 (2002).</li>
<li>Seo, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4200021/">Antibacterial activity and cytotoxicity of multiwalled carbon nanotubes decorated with silver nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 9, 4621-4629 (2014).</li>
<li>Chen, X., Schluesener, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanosilver%3A+a+nanoproduct+in+medical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologyletters%22%5BJournal%5D)">Nanosilver: a nanoproduct in medical application.</a> Toxicologyletters. 176 (1), 1-12 (2008).</li>
<li>Singh, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/256463087_Nanotechnology_in_medicine_and_antibacterial_effect_of_silver_nanoparticles">Nanotechnology in medicine and antibacterial effect of silver nanoparticles.</a> Digest Journal of Nanomaterials and Biostructures. 3 (3), 115-122 (2008).</li>
<li>Morones, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bactericidal+effect+of+silver+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">The bactericidal effect of silver nanoparticles.</a> Nanotechnology. 16 (10), 2346(2005).</li>
<li>Martinez-Castanon, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/225152132_Synthesis_and_antibacterial_activity_of_silver_nanoparticles_with_different_sizes">Synthesis and antibacterial activity of silver nanoparticles with different sizes.</a> Journal of Nanoparticle Research. 10 (8), 1343-1348 (2008).</li>
<li>Lok, C. -N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+nanoparticles%3A+partial+oxidation+and+antibacterial+activities%5BTitle%5D)+AND+%22JBIC+Journal+of+Biological+Inorganic+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Silver nanoparticles: partial oxidation and antibacterial activities.</a> JBIC Journal of Biological Inorganic Chemistry. 12 (4), 527-534 (2007).</li>
<li>Ferreira, T., Rasband, W. ImageJ User Guide Home Page. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://imageJ.nih.gov/ij/docs/guide">http://imageJ.nih.gov/ij/docs/guide</a> (2010).</li>
<li>NanoEnTek Inc. Juli Br User Guide. , Hwaseong, Korea. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.nanoentek.com/upload/product/11/JuLI%20Br_User%20manual%20(V.1.6).pdf">http://www.nanoentek.com/upload/product/11/JuLI%20Br_User%20manual%20(V.1.6).pdf</a> (2012).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Aqui, nós relatamos um método simples para a preparação de MWCNTs com nanopartículas de Ag depositadas. Esse nanomaterial contendo prata demonstra substancial atividade antibacteriana e mínimo potencial de absorção descontrolada de nanopartículas de prata no corpo. Demonstramos que 30 µ g/mL de Ag-MWCNTs sintetizados é um nível eficaz de atividade antibacteriana contra Methylobacterium spp. com insignificante citotoxidade de células de fígado de mamíferos. Embora as melhorias adicionais e avaliações de biossegur...

O objetivo deste estudo é tornar ambientalmente amigáveis nanomateriais antibacterianos que podem inibir o crescimento de bactérias que forma de biofilmes. Desses nanomateriais antibacterianos têm o potencial para superar problemas de resistência a antibiótico e toxicidade de produtos químicos comumente usados ou compostos químicos antibióticos. Um biofilme é uma hidratada extracelular polimérica substância (EPS) que é composta por polissacarídeos, proteínas, ácidos nucleicos e lipídios1,2. Biofilmes impedem a invasão de substâncias estranhas e ajudarem as bactérias a crescer vigorosamente3,4. Biofilmes causam odor e doenças infecciosas crônicas5,6. Methylobacterium spp., por exemplo, cresce, aderindo aos lugares onde a água está sempre presente, ou onde é difícil garantir a erradicação bacteriana em uma base contínua, tais como trocadores de calor ar-condicionado, quartos de banho e dispositivos médicos. Estes tipos de biofilmes causam odor e doenças infecciosas crônicas5,6.
Normalmente, produtos químicos ou antibióticos compostos químicos são utilizados para inibir o crescimento de bactérias que podem formar biofilmes. O surgimento de bactérias resistentes aos antibióticos e preocupações sobre a segurança na vivo de produtos químicos estão conduzindo a necessidade de desenvolver novos materiais para evitar a formação de biofilmes e para inibir o crescimento de bactérias.
Neste estudo, antimicrobianos nanomateriais são sintetizados que são livre de toxicidade e resistência aos antibióticos. A prata é uma substância antimicrobiana conhecida, e desenvolvimentos recentes em Nanociência e nanotecnologia conduziram a investigação sobre os efeitos antimicrobianos de nanopartículas de metal7,8. Estudos recentes têm relatado que o pequeno tamanho e alta proporção de superfície e o volume das nanopartículas resultam em aumento da atividade antibacteriana de10,9,11.
Os nanomateriais apresentados combinam nanopartículas de prata com propriedades antimicrobianas aumentada e nanotubos de carbono com uma proporção elevada, aumentando assim a área de superfície por unidade de volume. O composto de nanotubo de nanopartículas de prata fabricados-carbono apresenta propriedades antimicrobianas substanciais e mínima toxicidade às células humanas e animais. Os processos sintéticos em estudos anteriores usam perigosos agentes redutores tais como4NaBH, formamida, dimetilformamida e hidrazina. O processo é demorado, complicado e perigoso. O processo sintético relatado aqui usa etanol como agente redutor significativamente menos perigoso.
A zona de inibição e concentração bactericida mínima (MBC) para os Ag-MWCNTs foram medidos; Ao vivo/morto e azul Trypan ensaios foram usados para medir a toxicidade e propriedades antibacterianas. Concentração inibitória mínima (CIM) e ensaios de toxicidade mitocondrial (MTT) não foram realizados devido a cor incomum os de nanotubos de carbono que poderia ter interferido com os ensaios. Finalmente, determinou-se a concentração mínima para impedir o crescimento de Methylobacterium spp. sem afetar células de mamíferos.

<table><tbody><tr><td>0,1 nitrato de prata</td><td>N SIGMA-ALDRICH</td><td>1090811000</td><td></td></tr><tr><td>nanotubo de carbono,</td><td>Tokyo Chemical Industry Co., LTD</td><td>308068-56-6</td><td></td></tr><tr><td>R2A ágar</td><td>MBcell</td><td>MB-R1129</td><td></td></tr><tr><td>R2A caldo</td><td>MBcell</td><td>MB-R2230</td><td></td></tr><tr><td>Methylobacterium spp.</td><td>KCTC</td><td>12618</td><td>da Coleção da Coreia para Culturas de Tipo Daejeon Korea 12618, Daejon, Korea</td></tr><tr><td>Kit de imagem de células VIVAS/MORTAS</td><td>ThermoFisher SCIENTIFIC</td><td>R37601</td><td></td></tr><tr><td>AML12</td><td></td><td></td><td>da Universidade de Chungnam, Dajeon, Coréia</td></tr><tr><td>humano PBMC</td><td>ATCC</td><td>PCS-800-011</td><td></td></tr><tr><td>TEM</td><td>JEOL</td><td>JEM-2100F</td><td></td></tr><tr><td>XRD</td><td>Rigaku D</td><td>/MAX 2500</td><td>Fonte de fótons K (40kV, 100mA)</td></tr><tr><td>JuLI Br</td><td>NanoEnTek</td><td>JULI-BRSC&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

síntese de nanotubos de carbono de paredes multi modificados com nanopartículas de prata e avaliação das suas actividades antibacterianas e propriedades citotóxicas

Synthesis of Multi-walled Carbon Nanotubes Modified with Silver Nanoparticles and Evaluation of Their Antibacterial Activities and Cytotoxic Properties

Neste estudo, multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) foram tratados com uma solução aquosa de ácido sulfúrico para formar um grupo funcional à base de oxigénio. MWCNTs prata foram preparados pela deposição de prata de uma solução aquosa de AgNO3 sobre os MWCNTs oxidados redutora. Dada a cor original das CNTs, não foi possível aplicá-las para a concentração inibitória mínima ou ensaios de toxicidade mitocondrial para avaliar as toxicidade e antibacteriano Propriedades, desde que eles iria interferir com os ensaios. A zona de inibição e concentração bactericida mínima para as Ag-MWCNTs foram medidos e Live/mortos e azul Trypan ensaios foram usados para medir as toxicidade e antibacteriano Propriedades sem interferir com a cor da CNTs.

Imagens de microscopia eletrônica (TEM) transmissão confirmam a formação de Ag-MWCNTs (figura 1A e 1B). Sua síntese bem sucedida foi confirmado pela mudança na carga de superfície. Calculou-se o tamanho das partículas depositadas sobre os MWCNTs Ag (Figura 1). O tamanho médio da partícula foi aproximadamente 3.83 nm. O padrão XRD dos MWCNTs-Ag-sintetizados como é mostrado na Figura 1</strong...

Neste estudo, nanomateriais antimicrobianos foram sintetizados por oxidação ácida de nanotubos de carbono multiwalled e subsequente deposição redutora de nanopartículas de prata. Antimicrobial atividade e citotoxicidade testes foram realizados com os nanomateriais como preparada.

Síntese de nanotubos de carbono de paredes Multi modificados com nanopartículas de prata e avaliação das suas actividades antibacterianas e propriedades citotóxicas

In this study, multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) were treated with an aqueous sulfuric acid solution to form an oxygen-based functional group. Silver ...

O objetivo geral deste procedimento é produzir nanocomplexos antibacterianos que consistem em nanotubos de carbono com nanopartículas de prata sintetizadas nas superfícies do nanotubo. Este método pode ser usado no desenvolvimento de novos nanomateriais bacterianos que têm baixa toxicidade para humanos, ao mesmo tempo em que têm fortes propriedades sépticas para diversos tipos de bactérias e biofilmes. O protocolo descreve a avaliação de nanocomplexos na erradicação de bactérias, mantendo sua biocomparabilidade com humanos.Para iniciar o procedimento, coloque 30 a 50 miligramas de MWCNTs em um frasco de 50 mililitros. Usando uma micropipeta equipada com pontas de pipeta de um mililitro, adicione lentamente oito mililitros de uma solução de três para um em volume de ácido sulfúrico e ácido nítrico aos MWCNTs. Aguarde 30 minutos para que a reação exotérmica termine e, em seguida, sonice a solução a 60 a 80 graus Celsius e 160 watts até que os MWCNTs assentem no fundo do frasco, o que geralmente leva cerca de uma hora.Transfira a mistura para um tubo de centrífuga. Use uma micropipeta para adicionar cuidadosamente 30 mililitros de água destilada gota a gota aos MWCNTs funcionalizados com ácido carboxílico, fazendo uma pausa para permitir que a mistura esfrie conforme necessário. Em seguida, centrifugue a mistura a 12 000 g durante 15 minutos.Remova o sobrenadante com uma pipeta equipada com uma ponta de pipeta de um mililitro. Adicione cinco mililitros de etanol ao sólido e enxágue as paredes do frasco com etanol adicional. Centrifugar novamente a mistura com as mesmas regulações e verificar o pH do sobrenadante com papel de pH.Continuar a lavar os sólidos por centrifugação em etanol até que o pH do sobrenadante seja neutro, depois remover o sobrenadante e adicionar um mililitro de água destilada ao precipitado. Disperse os MWCNTs funcionalizados com ácido carboxílico na água e liofilize a dispersão a menos 60 graus Celsius sob vácuo. Coloque 10 miligramas de MWCNTs funcionalizados com ácido carboxílico liofilizado em um tubo de centrífuga cônico de 50 mililitros.Adicione 30 mililitros de água destilada ao tubo. Combine seis mililitros de nitrato de prata normal 0,1 e 18 mililitros de água destilada em outro tubo cônico de 50 mililitros. Sonicar ambas as misturas a 60 graus Celsius e 160 watts por uma hora.Em seguida, enquanto ainda sonica a dispersão MWCNT a 60 graus Celsius e 160 watts, adicione a solução de nitrato de prata gota a gota à dispersão MWCNT usando uma pipeta equipada com uma ponta de pipeta de um mililitro. Uma vez concluída a adição, continuar a sonicar a mistura durante uma hora, centrifugar a mistura durante 15 minutos a 12 000 g à temperatura ambiente e retirar o sobrenadante. Disperse novamente os MWCNTs de prata em 30 mililitros de água destilada por sonicação a 24 graus Celsius por 30 minutos.Repetir a centrifugação em 30 mililitros de água destilada e retirar o sobrenadante duas vezes. Em seguida, dispersar os MWCNTs de prata lavados em um mililitro de água destilada por sonicação por cinco minutos. Adicione cinco mililitros de etanol à dispersão e mexa a mistura em temperatura ambiente por uma hora.Em seguida, centrifugar a mistura durante 15 minutos a 12 000 g à temperatura ambiente e verificar o pH do sobrenadante. Remover o sobrenadante e voltar a dispersar a mistura em cinco mililitros de etanol por vórtice. Continuar a lavar o precipitado em etanol por centrifugação até que o pH sobrenadante seja neutro.Finalmente, disperse os MWCNTs de prata lavados em um mililitro de água destilada. Liofilizar a dispersão a 70 graus Celsius negativos sob vácuo durante 24 horas e armazenar a dispersão num recipiente selado. Para começar a preparar o teste, misture e autoclave 18,12 gramas de ágar R2A e um litro de água destilada.Deixe o gel esfriar em temperatura ambiente. Quando o gel estiver pronto para derramar, coloque 10 mililitros de gel em placas de Petri de 90 milímetros e deixe o ágar endurecer. Em uma capela de exaustão, use um laço e uma agulha esterilizados em chama de álcool para listrar 100 microlitros de uma mistura de espécies de metilobactéria na superfície do meio de cultura.Incube os pratos a 30 graus Celsius por 48 horas, depois misture 3,12 gramas de caldo R2A com um litro de água destilada e autoclave o meio a 121 graus Celsius por 15 minutos. Use uma alça esterilizada e uma agulha para transferir as colônias para o meio de crescimento R2A. Incubar a amostra em uma incubadora agitada a 30 graus Celsius e 180 RPM.Meça a densidade óptica em 600 nanômetros por hora até que a densidade óptica seja maior que 0,7. Em seguida, prepare outra placa de Petri contendo 10 mililitros de ágar R2A. Em seguida, misture 3,12 gramas de caldo R2A e oito gramas de ágar com um litro de água destilada.Autoclave a mistura a 121 graus Celsius por 15 minutos. Misture 100 microlitros da cultura de metilobactéria na mistura de ágar. Despeje 10 mililitros do gel contendo metilobactéria sobre a camada inferior do ágar R2A na placa de Petri e, em seguida, prepare uma dispersão da concentração desejada de MWCNTs de prata liofilizados em água destilada.Use uma micropipeta para carregar 50 microlitros dessa dispersão em um disco de papel estéril de seis por um milímetro. Aplique água destilada em outro disco de papel estéril como controle. Seque e esterilize ambos os discos em uma câmara de vácuo sob luz ultravioleta por 30 minutos.Em seguida, coloque a amostra MWCNT de prata e o controle no ágar e incube a placa de ágar a 30 graus Celsius por 48 horas. Meça a zona de inibição ao redor da amostra MWCNT de prata quando terminar. Antes do teste, autoclave água triplamente destilada a 121 graus Celsius por 15 minutos.Prepare uma dispersão de 1000 microgramas por mililitro de MWCNTs funcionalizados com ácido carboxílico e dispersões de 50 microgramas por mililitro, 40 microgramas por mililitro e 30 microgramas por mililitro de MWCNTs de prata nesta água estéril. Para iniciar o procedimento de teste antibacteriano, prepare uma cultura de metilobactéria conforme descrito anteriormente e monitore sua densidade óptica em 600 nanômetros. Quando a densidade óptica estiver no máximo, inocular 100 microlitros da cultura de metilobactéria em três mililitros de meio de cultura R2A fresco.Coloque 500 microlitros desta solução em cada um dos cinco tubos cônicos de 15 mililitros. Adicione 100 microlitros de metanol a um dos tubos para preparar a amostra de referência de metanol. Preparar uma amostra para cada uma das quatro dispersões da mesma maneira.Incubar as amostras e a cultura de controle de metilobactéria restante a 180 RPM e 30 graus Celsius até que a densidade óptica do controle indique atividade máxima. Use um espalhador esterilizado para espalhar cada amostra em gel de ágar R2A sólido em placas de Petri. Incube os pratos a 30 graus Celsius por 48 horas.Contar as colónias bacterianas resultantes e determinar a concentração bacteriocida mínima. MWCNTs de prata foram sintetizados com sucesso usando o procedimento descrito. O tamanho médio das partículas de prata depositadas foi de aproximadamente 3,83 nanômetros.O crescimento de metilobactérias não foi observado quando cultivado com dispersões de 50 microgramas por mililitro ou 40 microgramas por mililitro de MWCNTs de prata. A população bacteriana foi reduzida 100.000 vezes em relação à amostra de controle quando cultivada com uma dispersão de 30 microgramas por mililitro de MWCNTs de prata. Uma zona de inibição foi observada em torno de uma amostra preparada a partir de uma dispersão de 10 microgramas por mililitro de MWCNTs de prata.Nenhuma zona de inibição foi observada para uma amostra preparada a partir de uma dispersão de um micrograma por mililitro. Alguma citotoxicidade foi observada quando uma dispersão de 40 microgramas por mililitro de MWCNTs de prata foi adicionada. Nenhuma citotoxicidade significativa foi observada quando uma dispersão de 30 microgramas por mililitro foi adicionada.Um ensaio de azul de tripano confirmou que havia citotoxicidade mínima quando uma dispersão de 30 microgramas por mililitro de MWCNTs de prata foi adicionada. Este protocolo ajudaria os pesquisadores na preparação de nanocomplexos que possuem nanopartículas metálicas que atuam diretamente sobre nanomateriais de carbono. Seguindo este protocolo, os pesquisadores também seriam capazes de avaliar as propriedades antibacterianas dos nanocomplexos preparados.

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