Um modelo de peito fechado para induzir a constrição da aorta transversa em ratos

O objetivo geral deste procedimento é realizar a constrição transversa da aorta, em modelo murino de tórax fechado, induzindo hipertrofia miocárdica do ventrículo esquerdo. Esta técnica minimamente invasiva, ajuda a reduzir os problemas respiratórios, e a minimizar a resposta inflamatória. Este método pode nos ajudar a responder a perguntas-chave, no campo da imunologia, por exemplo, a resposta da macrofagia cardíaca no desenvolvimento da hipertrofia ventricular esquerda.

A principal vantagem desta técnica é que a caixa torácica permanece intacta e, portanto, o trauma é minimizado. Como os espaços e volumes correntes são adaptados ao peso corporal, esse protocolo pode ser usado em camundongos de diferentes tamanhos. Também reduz o trauma cirúrgico e diminui o desvio nos valores de medição.

Depois de anestesiar um mouse, de acordo com o protocolo de texto, mova o mouse para uma mesa de operação com temperatura controlada e retire o nariz que está conectado à caixa de indução de anestesia para manter a narcose. Com uma sutura de náilon, fixe os incisivos superiores do mouse. Aperte a cauda para garantir a ausência de reflexo.

Use fita adesiva para fixar as extremidades. Depois de inserir uma sonda retal, aplique o creme depilatório na garganta e na parte superior do tórax, de acordo com as instruções do fabricante, e deixe agir por um minuto. Em seguida, limpe o creme e repita se necessário.

Com as configurações do ventilador ajustadas aos parâmetros fisiológicos e o animal sob um microscópio cirúrgico, faça uma incisão na pele na linha média cerca de três milímetros sob a mandíbula até a segunda costela. Identifique a linha média e os tecidos conjuntivos da glândula submandibular. Em seguida, use duas pinças angulares para dividir a glândula na linha média de maneira suave e contundente e explore o músculo traqueal.

Prepare suavemente a traqueia, separando sem rodeios os músculos paratraqueais. Use uma pinça para puxar a língua para endireitar a garganta para facilitar a intubação e insira suavemente uma cânula de intubação dentro da traqueia. Confirme a intubação por visualização direta do tubo dentro da traqueia e verificando o movimento torácico adequado.

Prepare ambas as artérias carótidas, que ficam juntas à traqueia, usando uma pinça para separar suavemente o tecido conjuntivo. Aplique gel de ultrassom na ponta da sonda doppler de 20 hertz e coloque a ponta da sonda na artéria carótida direita e esquerda, em um ângulo inferior a 45 graus. Gire lentamente a sonda para movê-la lateral e medial para encontrar um sinal doppler e, em seguida, incline a sonda para otimizar o sinal.

Usando um novo conjunto de luvas e tesouras estéreis, expanda a incisão da pele até o segundo espaço intercostal. Em seguida, com a ponta da pinça, abra o segundo espaço intercostal e insira os afastadores. Com 200% de aumento, identifique a linha média e os tecidos conjuntivos.

Em seguida, use uma pinça angular para dividir suavemente o timo. Remova o tecido adiposo até que o arco aórtico possa ser visto claramente. Com pinça de polegar angulada, prepare um túnel sob a aorta transversa, entre a artéria braquiocefálica e a artéria carótida comum esquerda.

Em seguida, usando uma pinça fina, segure uma sutura 6-0 e passe o fio sob o arco aórtico. Com a segunda pinça, pegue o fio do outro lado do arco. Coloque cuidadosamente o espaçador paralelo à aorta transversa.

Prepare um nó duplo solto no espaçador e garanta o posicionamento ideal do espaçador em paralelo à aorta. Em seguida, dê o primeiro nó e faça rapidamente um segundo nó contrário, antes de remover imediatamente o espaçador. A etapa mais crítica de todo o procedimento é amarrar os dois nós com rapidez e firmeza e remover o espaçador imediatamente.

Feche o segundo espaço intercostal, com uma sutura de polipropileno 6-0, e preste atenção especial aos vasos subclávios durante a ligadura. Em seguida, usando uma sutura de polipropileno 6-0, costure a pele em um padrão de sutura contínua. Confirmar a ligadura e realizar os cuidados pós-operatórios, de acordo com o protocolo de texto.

Essas medições de velocidade de fluxo doppler validam um TAC bem-sucedido, que causa um aumento da velocidade sanguínea na artéria carótida direita, devido à pressão elevada no ventrículo esquerdo e na aorta, enquanto causa velocidade de fluxo sanguíneo atenuada pós-estenótica na artéria carótida esquerda. Conforme mostrado neste gráfico, as proporções de peso cardíaco e peso corporal aumentaram significativamente em camundongos TAC, em comparação com camundongos sem bandas, seis dias após a cirurgia. Essa proporção foi quase constante após 21 dias.

A frequência cardíaca tem um efeito significativo na contratilidade ventricular esquerda e no débito cardíaco. Este gráfico revela que não houve diferenças nas frequências cardíacas de camundongos com banda aórtica e sem banda aórtica, após 21 dias. Como demonstrado aqui, uma bandagem constante da aorta foi comprovada por um aumento da pressão arterial sistólica, medida por meio de um cateter ventricular esquerdo após 21 dias.

Sabe-se que os camundongos C57 black six desenvolvem hipertrofia excêntrica com disfunção sistólica após o TAC. Foi encontrado um aumento do diâmetro do ventrículo esquerdo, que também parece significativo nas medidas de volume de pressão. Como resultado, os volumes sistólico e diastólico finais aumentaram significativamente.

Uma vez dominada, essa técnica pode ser executada em menos de 10 minutos, se for feita corretamente. Por fim, esse procedimento fornece uma análise otimizada da resposta imune na hipertrofia ventricular esquerda, pois o trauma cirúrgico mínimo restringe a indução inespecífica do sistema imunológico. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar a constrição aórtica transversa minimamente invasiva padronizada.