Name: Tratamento intracerebroventricular com resiniferatoxina e testes de dor em camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Aprenda a técnica de injeção intracerebroventricular com resiniferatoxin em camundongos para estudar a dessensibilização seletiva do TRPV1 supraespinhal. Este método avança a pesquisa em modulação da dor e neurofarmacologia.

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Todos os protocolos experimentais utilizados aqui foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Musashino. Os ratos ddY machos (SLC, Shizuoka, Japão) foram mantidos por pelo menos 7 dias sob um ciclo claro/escuro de 12 h antes de experimentos com água e ad libitum alimentar. Camundongos de 5 ou 6 semanas foram usados para os experimentos.
1. Preparação de Drogas
<ol><li>
Rtx NOTA: A solução alcoólica RTX pode causar queimaduras graves na pele e danos nos olhos. Certifique-se de usar luvas de borracha e óculos para proteção durante o manuseio. Esta solução de estoque pode ser usada por 6 meses.<ol>
<li>Adicione 500 μL de etanol a 1 mg de RTX.</li>
		<li>Adicione 500 μL de monooleto de sorbitano de polioxime (20) à solução acima e bem ao vórtice.</li>
		<li>Adicione 4 mL de soro fisiológico à mistura e ao vórtice bem.</li>
		<li>Alíquota de 40 μL da solução em tubos de tampa de parafuso de 1,5 mL e armazená-los a -40 °C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Acetaminofeno
	<ol>
<li>Adicione 20% de solução de propilenoglicol a acetaminofeno a uma concentração de 30 mg/mL, e dissolva-se com um sonicator. Uma vez que o acetaminofeno pode precipitar-se à temperatura ambiente várias horas após a dissolução, prepare-se um pouco antes do uso ou mantenha a solução aquecida até o uso.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Injeção subcutânea ou intracerebroventricular de RTX
<ol><li>Descongele a solução estocada preparada em 1.1. acima e diluí-lo a 20 μg/mL em soro fisiológico ou líquido cerebrospinal artificial (ACSF) consistindo (em mM): 119 NaCl, 2,5 KCl, 1 NaH2PO4, 26 NaHCO3, 11 glicose, 1,3 MgSO4, 2,5 CaCl2 equilibrada com 95% O2 e 5% CO2 (pH 7.2).</li>
	<li>Anesthetize camundongos com sal de sódio pentobarbital (60 mg/kg, intraperitoneally) e verifique se há perda do reflexo de retração.</li>
	<li>Para tratamento s.c., injete RTX (20 μg/mL) na parte de trás do pescoço a um volume de 0,1 mL/10 g de peso corporal. Para o grupo controle, injete o veículo (10% etanol, 10% de polioximetileno (20) monooleato de sorbitano e 80% salino) da mesma forma.</li>
	<li>Para tratamento i.c.v., injete 5 μL de RTX (20 μg/mL) no ventrículo lateral direito. Para o grupo controle, injete o veículo (10% etanol, 10% de polioximetileno (20) monooleato sorbitano e 80% ACSF) da mesma forma.<ol>
<li>Passe uma agulha descartável de 27 G através de um tubo de metal (0,8 mm de identidade) para expor a ponta de 3,0-3,5 mm da agulha(Figura 1A).</li>
		<li>Desinfete a cabeça do rato com 70% de álcool, e segure os ossos escamosos do camundongo firmemente com os dedos(Figura 1B). NOTA: Preste atenção às posições das saliências esquamosais, uma vez que essas saliências servirão como marcos para injeção.</li>
		<li>Mova a agulha lateralmente no couro cabeludo, e encontre a sutura sagital enquanto a ponta da agulha está ligada à sutura.</li>
		<li>Mova a ponta cerca de 1 mm para a direita, depois mova a ponta rostrally, e encontre a sutura coronal como com 2.4.3. (Figura 1B).</li>
		<li>Insira a agulha lentamente e verticalmente, injete a solução RTX em cerca de 10 segundos e segure-a por cerca de 10 segundos.</li>
		<li>Retire a agulha lentamente, e devolva o rato para sua gaiola. O sangramento geralmente é mínimo ou ausente. Se ocorrer hemorragia grave, o uso de outro rato deve ser considerado.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Atribuam os camundongos pré-tratados como sujeitos para o teste RTX ou o teste de pressão da cauda (Passo 3 e 4, respectivamente).</li>
</ol>3. Teste RTX
NOTA: O teste é realizado entre 10h e 17h. A sala de testes é mantida em 200 lux e 24-26 °C.
<ol><li>Uma semana após os pré-tratamentos com RTX (Passo 2.), transfira ratos para a sala de testes pelo menos 60 minutos antes de iniciar o teste.</li>
	<li>Pesar e colocar cada rato individualmente em uma gaiola de plexiglass (29,5 × 17,5 × 13,5 cmde altura) pelo menos 30 minutos antes de iniciar o teste, a fim de permitir que ele se aclimata ao ambiente. NOTA: A ordem dos testes deve ser contrabalançada em grupos de pré-tratamento.</li>
	<li>Administre acetaminofeno (300 mg/kg) ao mouse intraperitoneally 20 min antes do teste.</li>
	<li>Segure o mouse livremente em um pequeno saco de pano e insira uma agulha de calibre 30 no calcanhar da pata traseira direita. Avance a agulha subcutâneamente para perto das almofadas de caminhada e injete 20 μL de solução RTX (0,05 μg/mL).</li>
	<li>Meça o período de comportamento de lambida/mordeção na região da pata afetada em cada bloco de 5 minutos.</li>
</ol>4. Teste de pressão da cauda
NOTA: Um medidor de pressão do tipo Randall-Selitto é usado para avaliar o limiar para nocicepção mecânica aguda. O teste é realizado entre 10:00 e 17:00. A sala de testes é mantida em 200 lux e 24-26 °C.
<ol><li>Uma semana após os pré-tratamentos com RTX (Passo 2.), transfira ratos para a sala de testes, e pese e coloque cada rato individualmente em uma gaiola de plexiglass.</li>
	<li>Marque as manchas a 1,5 e 2,5 cm da base da cauda.</li>
	<li>Segure o mouse livremente em um pequeno saco de pano e aplique pressão nos pontos com uma sonda sem cortes. NOTA: Uma pressão de corte de 250 g é imposta para evitar danos teciduais.</li>
	<li>Determine a pressão necessária para provocar o comportamento de fuga (batedor de cauda, torção e guincho), e calcule o limiar nociceptivo, com uma média da pressão determinada nos dois pontos.</li>
	<li>Repita os passos 4.3. para 4.4. a cada 15 minutos.</li>
	<li>Após obter a linha de base, administre acetaminofeno (300 mg/kg) no mouse intraperitoneally. Após a administração, repita as etapas 4.3. e 4,4 a cada 15 minutos.</li>
</ol>

<ol><li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li>
<li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor%3A+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li>
<li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), New York, N.Y. 306-313 (2000).</li>
<li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li>
<li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li>
<li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+anxiety%2C+conditioned+fear%2C+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li>
<li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity%3A+Therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li>
<li>Nazıroğlu, M., Övey, İS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li>
<li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li>
<li>Barrière, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690(2013).</li>
<li>Jancsó, G., Kiraly, E., Jancsó-Gábor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li>
<li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li>
<li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li>
<li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021(2009).</li>
<li>Jancsó, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracisternal+capsaicin%3A+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li>
<li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li>
<li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43(2008).</li>
<li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li>
<li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452(2017).</li>
<li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li>
<li>Tjølsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+formalin+test%3A+an+evaluation+of+the+method%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li>
<li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li>
<li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li>
<li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir%2C+an+anti-influenza+virus+drug%2C+in+normal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+%26+clinical+pharmacology+%26+toxicology%22%5BJournal%5D)">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic & clinical pharmacology & toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li>
<li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hot+flash%3A+TRPV+channels+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li>
</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse para declarar

O passo mais crítico nesses experimentos é o sucesso da injeção i.c.v. A técnica de injeção i.c.v. usada aqui é bastante simples, mas requer alguma prática. Antes dos experimentos, recomenda-se a prática com corantes (por exemplo, 0,5% azul trypan em soro fisiológico). Se a injeção for realizada corretamente, uma marca de agulha deve ser evidente na sutura coronal e o corante injetado deve estar presente no ventrículo contralateral e no terceiro ventrículo. Além disso, a inserção forçada deve ser evitada durante a injeçã...

Os animais recebem vários estímulos físicos e químicos de seu ambiente através de sensores nos nervos periféricos. O receptor transitório potencial vanilloide tipo 1 (TRPV1) é um dos canais de cáção termosensíveis e não seletivos que atuam como sensores de calor1,,2, e ativação e/ou modulação do TRPV1 é conhecido por ser um passo fundamental para a nocicepção em contextos normais e inflamatórios3. Embora o padrão geral de expressão seja controverso, a expressão do TRPV1 também tem sido sugerida em regiões supraspinais, estando envolvida em diversas atividades cerebrais (incluindo nocicepção4, termoregulação5,ansiedade6,transtorno do déficit de atenção hiperatividade7e epilepsia8). Além disso, recentemente foi sugerido que o acetaminofeno, um analgésico amplamente utilizado, media a ativação do TRPV1 central para provocar sua ação analgésico9,,10.
A administração do agonista TRPV1 em excesso, incluindo capsaicina e resiniferatoxina (RTX) em animais, leva à morte de neurônios trpv1 positivos e à dessensibilização de longa duração aos agonistas TRPV111,12. Combinada com a aplicação local (intrathecal13,14, intracisternal15,16,17e intraganglional18), esta abordagem de ablação química forneceu uma maneira alternativa de investigar as funções fisiológicas do TRPV1. Recentemente, relatamos que a injeção intracerebroventricular (i.c.v.) de RTX inibe o efeito analgésico do acetaminofeno em camundongos, sugerindo dessensibilização TRPV1 extra-seletiva supraspinal19. Neste manuscrito, apresentamos o protocolo preciso para injeção i.c.v. e testes subsequentes de dor.
A injeção direta de drogas nos ventrículos do cérebro torna possível estudar seus efeitos centrais enquanto minimiza quaisquer efeitos periféricos. O procedimento de injeção i.c.v. apresentado aqui é uma modificação do método relatado por Haley e McCormick20. Este método é simples envolvendo a inserção de uma agulha de injeção nos ventrículos laterais através da sutura coronal e não requer nenhum equipamento especial ou procedimentos cirúrgicos para a cannulação.
A aplicação local periférica de agonistas TRPV1 evoca uma sensação de dor ardente e inflamação neurogênica. Camundongos que são tratados sistematicamente com RTX, e camundongos TRPV1-KO, são insensíveis a esta estimulação13. Realizamos injeção intraplantar de RTX (teste RTX) para confirmar a preservação do TRPV1 periférico em RTX-i.c.v. Ratos. Este método é uma modificação do teste de formalina convencional21.
Foi relatado que camundongos tratados sistematicamente com camundongos RTX e TRPV1-KO mostram um limiar normal para estímulos mecânicos11,,13,22. Aqui apresentamos um procedimento para o teste de pressão da cauda para testar alterações no efeito analgésico do acetaminofeno.
Todos esses procedimentos são ortodoxos e versáteis, e podem ser aplicados em estudos de outras drogas.

<table><tbody><tr><td>Resiniferatoxina</td><td>LKT Laboratories</td><td>R1774</td><td>usado para pré-tratamentos s.c./i.c.v. e o teste RTX</td></tr><tr><td>Paracetamol</td><td>IWAKI SEIYAKU</td><td></td><td>presenteado de IWAKI SEIYAKU</td></tr><tr><td>Sal de sódio de pentobarbital</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>P0776</td><td>usado para anestesia</td></tr><tr><td>Etanol (99.5)</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>057-00456</td><td>usado para dissolver RTX</td></tr><tr><td>Polioxietileno (20) Monooleato de Sorbitano</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>161-21621</td><td>usado para dissolver RTX</td></tr><tr><td>25 &# 956; L microsseringa</td><td>Hamilton</td><td>1702LT</td><td>usada para injeção i.c.v.</td></tr><tr><td>100 &#956; L microsseringa</td><td>Hamilton</td><td>1710LT</td><td>usada para injeção intraplantar</td></tr><tr><td>agulha descartável de calibre 26</td><td>TERUMO</td><td>NN-2613S</td><td>usada para injeção i.c.v.</td></tr><tr><td>agulha descartável de calibre 30</td><td>NIPRO</td><td>01134</td><td>usada para injeção intraplantar</td></tr><tr><td>Medidor de pressão</td><td>Ugo Basile</td><td>Analgesy-Meter Tipo 7200</td><td>usado para teste de pressão de cauda</td></tr></tbody></table>

tratamento intracerebroventricular com resiniferatoxina e testes de dor em camundongos

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

O receptor transitório potencial vanilloide tipo 1 (TRPV1), um canal termosensível de ção, é conhecido por desencadear dor nos nervos periféricos. Além de sua função periférica, seu envolvimento em funções cerebrais também tem sido sugerido. A resiniferatoxina (RTX), um agonista ultrapotente TRPV1, é conhecida por induzir a dessensibilização a longo prazo do TRPV1, e essa dessensibilização tem sido uma abordagem alternativa para investigar a relevância fisiológica das células que expressam TRPV1. Aqui descrevemos um protocolo para tratamento intracerebroventricular (i.c.v.) com RTX em camundongos. Os procedimentos são descritos para testar a nocicepção à estimulação TRPV1 periférica (teste RTX) e à estimulação mecânica (teste de pressão da cauda) seguida. Embora as respostas nociceptivas dos camundongos que tinham sido administrados RTX i.c.v. fossem comparáveis às dos grupos de controle, os camundongos administrados pela RTX-i.c.v. eram insensíveis ao efeito analgésico do acetaminofeno, sugerindo que o tratamento RTX pode induzir a dessensibilização TRPV1 extraicional-seletiva. Este modelo de mouse pode ser usado como um sistema experimental conveniente para estudar o papel do TRPV1 na função cérebro/supraspinal. Essas técnicas também podem ser aplicadas a estudos das ações centrais de outras drogas.

Os camundongos tratados com i.c.v. não apresentam anormalidades aparentes em sua aparência, atividades espontâneas, peso corporal19 e temperatura corporal do núcleo (grupo tratado com veículos, 38,4 ± 0,3 °C, n = 6; Grupo tratado com RTX, 38,7 ± 0,2 °C, n = 6).
Figura 2A-B mostram a capacidade de resposta dos camundongos tratados com s.c.- ou i.c.v.para a inj...

O receptor transitório potencial vanilloide tipo 1 (TRPV1) na região supraspinal tem sido sugerido para desempenhar alguns papéis na função cerebral. Descrito aqui é um protocolo para injeção intracerebroventricular de resiniferatoxina para dessensibilização trpv1 supraspinal em camundongos. Procedimentos para alguns exames de dor também são apresentados.

Tratamento intracerebroventricular com resiniferatoxina e testes de dor em camundongos

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

O objetivo geral deste pré-tratamento é gerar camundongos e que os canais TRPV1 sejam dessensibilizados em regiões supraspinais. Este método pode ajudar a responder perguntas-chave no campo neurofarmológico. A principal vantagem dessa técnica é que a dessensibilização trpv1 seletiva supraspinal pode ser induzida de forma bastante simples.Para iniciar este procedimento, anestesia um rato com sódio pentobarbital intraperitoneal e verifique se há perda de reflexo de retração. Para tratamento subcutâneo, injete RTX a 20 microgramas por mililitro na parte de trás do pescoço a um volume de 0,1 mililitro por 10 gramas de peso corporal. Para o grupo controle, injete o veículo da mesma forma.Passe uma agulha de calibre 27 descartável através de um tubo de metal para expor a ponta de 3 a 3,5 milímetros da agulha. Em seguida, segure os ossos esquamosais do rato firmemente com os dedos. Mova a agulha lateralmente sobre o couro cabeludo e encontre a sutura sagital enquanto a ponta da agulha está ligada à sutura.Mova a ponta cerca de um milímetro para a direita, em seguida, mova a ponta rostrally para encontrar a sutura coronal. Depois, insira a agulha devagar e verticalmente. Injete a solução R

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Neuroscience

Neurociência

Este vídeo demonstra um método para estabelecer um modelo de neuropatia de pequenas fibras em camundongos usando o agonista TRPV1 resiniferatoxina (RTX). Ele descreve as etapas envolvidas na administração de RTX a camundongos e explica como o RTX induz a morte neuronal em neurônios sensoriais de pequeno diâmetro, estabelecendo assim o modelo de neuropatia.

Estabelecendo um modelo de camundongo de neuropatia de fibras pequenas usando resiniferatoxina

Fonte: Fukushima, A., et al. Tratamento Intracerebroventricular com Resiniferatoxina e Testes de Dor em Camundongos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra o procedimento de injeção intracerebroventricular de resiniferatoxina em camundongos para dessensibilizar os receptores TRPV1 no cérebro.

Tratamento intracerebroventricular com resiniferatoxina para dessensibilização de TRPV1 no cérebro de camundongos

Fonte: Martinez, E., et al. Farmacoterapia intracraniana e ensaios de dor em roedores. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demonstra a administração intracraniana de um analgésico em um rato anestesiado com uma cânula guia pré-implantada no córtex pré-frontal. Um medicamento analgésico adicional é co-administrado por via intraperitoneal. Após a recuperação, a resposta térmica à dor do rato é avaliada usando o aparelho de Hargreave, onde a latência de retirada da pata é medida para avaliar os efeitos...

Efeito sinérgico da administração intracraniana e intraperitoneal de medicamentos analgésicos na resposta térmica à dor em um rato

Apresentamos um protocolo para medir a captação de [14C]-iodoantipirina (IAP) e avaliar a ativação de substratos neurais envolvidos na dor central pós-AVC (CPSP) em um modelo de roedor.

Medidas autoradiográficas de [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine no cérebro de um rato Seguindo Central pós-AVC Dor

Este estudo estabelece um modelo experimental de neuropatia de pura fibra pequena com reductase (RTX). Uma única dose de RTX (50 µ g/kg) é ideal para o desenvolvimento de um modelo de neuropatia de pequenas fibras que imita as características do pacientes e pode ajudar a investigar o significado molecular nociceptivo subjacente a dor neuropática.

Estabelecer um modelo de Mouse de uma neuropatia de pura fibra pequena com o ultrapotente agonista do Receptor transitório potencial Vanilloid tipo 1

Neste artigo nós fornecemos detalhes para os métodos de produção e controle de qualidade de uma proteína de fusão recombinante IL4-10. Também mostramos como testar a eficácia desta proteína para resolver a dor em um modelo do rato da dor inflamatória.

Desenvolvimento de proteínas recombinantes para tratar a dor crônica

Aqui nós apresentamos um protocolo para realizar experimentos farmacológicos intracranianas, seguidos de ensaios de comportamento de dor em roedores. Este protocolo permite que os pesquisadores entregar alvos moleculares e celulares no cérebro, por agentes farmacológicos no tratamento da dor.

Farmacoterapia intracraniana e ensaios de dor em roedores

O sintoma mais notável da enxaqueca é a dor severa na cabeça, e é supor que isso é mediado por neurônios sensoriais que inervam as meninges. Aqui, apresentamos um método para aplicar localmente substâncias à dura de forma minimamente invasiva ao usar a hipersensibilidade facial como saída.

Estimulação dural e teste periorbital von Frey em camundongos como um modelo pré-clínico de dor de cabeça

A ligadura parcial do nervo ciático induz dor neuropática crônica de longa duração, caracterizada por respostas exageradas a estímulos térmicos e mecânicos. Este modelo murino de dor neuropática é comumente usado para estudar terapias inovadoras para o tratamento da dor. Este artigo descreve em detalhes o procedimento cirúrgico para melhorar a padronização e reprodutibilidade.

Ligadura parcial do nervo ciático: um modelo murino de dor neuropática crônica para estudar o efeito antinociceptivo de novas terapias

O Vermicelli e Testes Handling Capellini de destreza forepaw aproveitar a inclinação natural dos roedores para manipular alimentos usando forepaw hábil e movimentos dígito. Os animais são filmados durante o manuseio cadeias curtas de massas secas cozidas. Reprodução de vídeo em câmera lenta permite a quantificação dos ajustamentos de pata.

O Vermicelli e Testes Handling Capellini: Simple medidas quantitativas da função forepaw dexterous em ratos e camundongos

Aprenda a técnica de injeção intracerebroventricular com resiniferatoxin em camundongos para estudar a dessensibilização seletiva do TRPV1 supraespinhal. Este método avança a pesquisa em modulação da dor e neurofarmacologia.

Tratamento intracerebroventricular com resiniferatoxina e testes de dor em camundongos

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