Name: Indução de síndrome nefrótica em camundongos por injeção Retrobulbar de doxorrubicina e na prevenção da retenção de Volume por liberação sustentada aprotinina (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Aprenda a induzir síndrome nefrótica experimental em camundongos 129S1/SvImJ por injeção retrobulbar de doxorrubicina. Este modelo replica as características da doença humana e permite estudar mecanismos de retenção de sódio.

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Este estudo foi suportado por uma concessão da Fundação de pesquisa alemã (DFG, AR 1092/2-1).

Todos os métodos foram conduzidos de acordo com os institutos nacionais de saúde guia para o cuidado e uso de animais de laboratório e a lei alemã para o bem-estar dos animais, e que foram aprovadas pelas autoridades locais (Regierungspräsidium Tübingen).
1. indução de síndrome nefrótica Experimental por injeção de doxorrubicina para o seio de Retrobulbar
<ol><li>Prepare uma seringa de 0,5 mL, com uma cânula de 30g montado, marcando a posição de parada do pistão.</li>
	<li>Calcule o volume de injeção de doxorrubicina para macho (7,25 µ l/g peso corporal (PC) igual a doxorrubicina de bw 14,5 µ g/g) e ratos fêmeas (6,9 µ l/g bw igual a doxorrubicina de bw 13,8 µ g/g), de acordo com o peso do corpo de manhã. Nota: A dose dada é adequada para indução de síndrome nefrótica. Pequenas alterações na dosagem originar um curso diferente crucial de nefropatia renal aguda falha (15,4 µ g/g bw a doxorrubicina)7, alcançando de doença renal crônica leve, com apenas pequenas mudanças na taxa de filtração glomerular (doxorrubicina de bw 12.6 µ g/g) 15.</li>
	<li>Aquecer a quantidade calculada de solução de doxorrubicina (2 µ g / µ l) em uma câmara quente de 37 ° C. Cuidado: Doxorrubicina é prejudicial se ingerido e pode causar câncer. Sempre use luvas se trabalhando com doxorrubicina e evitar qualquer contacto com a pele.</li>
	<li>Prefill a seringa com a solução de doxorrubicina, até o ponto de marcação e defina o saldo zero. Encha a seringa com o volume de injeção e verificar o volume por pesagem da seringa.</li>
	<li>Narcotize profundamente o mouse com 5 vol % isoflurano usando um vaporizador e o fluxo de oxigênio de 2 L/min.<ol>
<li>Não use pomada sobre os olhos antes da injeção. O operador precisa de uma visão clara da cavidade orbital para a realização de uma injeção retrobulbar segura e bem sucedida.</li>
		<li>Avaliar o nível de anestesia por reflexo pedal e ajustar anestésica entrega se necessário antes de iniciar a injeção.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Posicione o mouse em uma prostração lateral direita com o dorso voltado para o corpo do operador e sua cabeça virada para mão de injeção do operador. Nota: O procedimento é descrito por uma pessoa destra, para pessoas canhotas, realizando a injeção com a mão esquerda é mais fácil fazer a posição e injeção invertida direita para esquerda.</li>
	<li>Cuidadosamente se projetam globo ocular esquerdo do mouse, da tomada de olho aplicando uma pressão suave para a pele, dorsal e ventral ao olho.</li>
	<li>Punção do seio esquerdo retrobulbar do ângulo interno do olho (comissura palpebral medial). Evite qualquer contacto com o globo ocular mouse´s.</li>
	<li>Ligeiramente, incline a seringa e injetar o volume inteiro de uma só vez. Certifique-se que o volume é injetado sem qualquer resistência e sem quaisquer sinais de extravasamento como exopthalmus ou escapamento do local da injeção.</li>
	<li>Desde que a doxorrubicina é uma substância altamente tóxica, verifique bem estar pelo menos uma vez por dia usando uma folha de Pontuação de acordo com a Morton e Griffiths et al . 16 e pagar atenção especial para o local da injeção. Se há sinais de extravasamento como exopthalmus, fechamento da pálpebra prejudicada ou sinais de necrose como occure de lesões de pele ou inchaço após a injeção ou nos dias seguintes, o rato deve ser sacrificado.</li>
</ol>2. a implantação de Pellets de liberação sustentada contendo aprotinina
<ol><li>Ordem de pelotas com a dose desejada por dia e lançamento duração antecipadamente. Em caso de aprotinina, escolha uma dose de 1 mg por dia para ser lançado durante 10 dias. Nota: Neste estudo, as pelotas de aprotinina contém uma dose de 10 mg.<ol>
<li>Armazenar as pelotas sob condições de seca e evitar qualquer exposição à umidade.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Prepare os itens necessários para a cirurgia, incluindo um par de tesouras de cabelo, um par de tesouras de preparação de pele, um bisturi, uma pinça cirúrgica, dois pares de pinças de tecido, um porta-agulha e 15 cm monofile sutura não absorvível.<ol>
<li>Esterilizar os instrumentos usando um esterilizador calor por 5 min a 240 ° C. Antes de utilizar os instrumentos, espere por 5 min até atingirem a temperatura ambiente.<ol>
<li>Evite qualquer contato de dicas de instrumento esterilizado para superfícies não estéreis.</li>
			<li>Evite queimadura da pele por instrumentos quentes.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Narcotize rato com isoflurano vol 5% seguido por 1,5% vol, usando um fluxo de 2 L/min vaporizador e oxigênio.</li>
	<li>Coloque o mouse em posição em um dispositivo de aquecimento, coberto com uma camada de gaze para evitar lesões térmicas para o mouse. Temperatura da superfície é de cerca de 37 ° C.</li>
	<li>Protege os olhos com pomada.</li>
	<li>Remover o cabelo no meio, em uma área de aproximadamente 0,5 cm2 usando uma tesoura ou um aparador de pelos e desinfectar a pele sem pelos com um desinfectante adequado para desinfecção da pele. Remova como menos cabelo possível, então fica mais difícil para o mouse atingir a ferida e thread termina mais tarde e para manter a temperatura do corpo.</li>
	<li>Faça uma incisão na pele sem pelos com um bisturi em direção cranio-caudal de um comprimento de aproximadamente 5 mm. Prepare uma bolsa lateral esquerda de cerca de 1 cm de profundidade no tecido conjuntivo subcutâneo utilizando uma preparação sem corte.<ol>
<li>Avaliar o nível de anestesia por reflexo pedal e ajustar anestésica entrega se necessário antes de iniciar a cirurgia.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Insira uma pelota de lançamento de 10 dias a bolsa lateral esquerda preparada usando uma pinça estéril de tecido. Deixe o sedimento no fundo da bolsa em posição plana.<ol>
<li>Evite qualquer contato da pelota, para líquido e umidade até colocado na bolsa do preparado.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Feche a pele com suturas de 2-3. Só deixe pontas de fio muito curto para torná-lo mais difícil para o mouse abrir as suturas roendo.</li>
	<li>Coloque os ratos individualmente para reduzir o desconforto pós-operatório e impedir a abertura das suturas roendo. Manter o mouse no modo de exibição até que recuperou a consciência suficiente após a narcose. Nota: Não há nenhuma necessidade para dor pós-operatória desde que esta intervenção é bem tolerada sem quaisquer sinais de desconforto ou dor. Alternativamente recomendamos analgésicos tópicos, por exemplo, uma gota de bupivacaína na incisão antes da sutura que forneceria até 8 h de analgesia.</li>
</ol>3. avaliação pelo modelo de indução, sinais de síndrome nefrótica e bem-estar
<ol><li>Colete urina da manhã (08:00) em um copo de reação (1,5 mL) todos os dias a partir do dia da injeção por massageando a bexiga.<ol>
<li>Medir a proteinúria por meio de ensaio da proteína de Bradford e normalizar a creatinina. Nota: Para indução de síndrome nefrótica, proteinúria deve atingir um limiar de creatinina 120 mg/mg, entre 7 e 10 dia após a injeção de doxorrubicina.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Olhe para o desenvolvimento de ascite. Seleção para aumento da circunferência abdominal ou pendendo sobre os flancos.</li>
	<li>Pese o mouse, as pelotas de alimento e o frasco bebendo de manhã (08:00) todos os dias.</li>
	<li>Verifique bem estar pelo menos uma vez por dia, usando uma folha de Pontuação de acordo com a Morton e Griffiths et al. 16
</li>
</ol>4. medida da Protease de serina urinária com um ensaio cromogênico
<ol><li>Prepare a solução de substrato trabalho adicionando-se 15 mL de soro fisiológico estéril tamponado de fosfato (PBS) para um frasco de 25 mg de liofilizado substrato cromogênico S-2251, produzindo uma concentração de 2 mM. Dissolva a aprotinina em PBS para obter uma solução de aprotinina com uma concentração de 2 mg/mL.<ol>
<li>Loja preparada soluções a-20 ° C. Isto retarda significativamente a autodegradação de S-2251. Não utilize soluções velhas com um tom forte de amarelo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Usar a solução de trabalho de substrato recém preparada ou descongeladas e aquecê-lo em uma câmara de calor de 37 ° C.</li>
	<li>Descongele as amostras de urina à temperatura ambiente.<ol>
<li>Prevenir a degradação de protease por evitar repetidos congelamentos e descongelamentos. Amostras de urina de armazenamento-20 ° c.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Use uma placa de 96 micropoços adequada para medição fotométrica. Adicionar 3 µ l de urina não diluída em cada um dos dois poços e adicionar 50 µ l de solução de trabalho de substrato com 3 µ l de solução de PBS ou aprotinina nos poços. Cubra o prato com um aferidor de placa.</li>
	<li>Incube a placa coberta de microplacas por 60 min em uma câmara de calor de 37 ° C.</li>
	<li>Medir a densidade óptica de cada poço a 450 nm, utilizando um leitor de microplacas.</li>
	<li>Tome a diferença entre o OD sem aprotinina e com aprotinina como atividade de urinária sensíveis à aprotinina serina protease. Nota: Medição de uma amostra emparelhada com e sem aprotinina aumenta a especificidade do ensaio desde que o substrato também pode ser clivado por outras proteases que não desempenham um papel fisiopatológico.</li>
</ol>

<ol><li>Lee, V. W., Harris, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adriamycin+nephropathy%3A+a+model+of+focal+segmental+glomerulosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+%28Carlton%29%22%5BJournal%5D)">Adriamycin nephropathy: a model of focal segmental glomerulosclerosis.</a> Nephrology (Carlton). 16 (1), 30-38 (2011).</li>
<li>Frenk, S., Antonowicz, I., Craig, J. M., Metcoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+nephrotic+syndrome+induced+in+rats+by+aminonucleoside%3B+renal+lesions+and+body+electrolyte+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Soc+Exp+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Experimental nephrotic syndrome induced in rats by aminonucleoside; renal lesions and body electrolyte composition.</a> Proc Soc Exp Biol Med. 89 (3), 424-427 (1955).</li>
<li>Ichikawa, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+for+intrarenal+mechanisms+in+the+impaired+salt+excretion+of+experimental+nephrotic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Role for intrarenal mechanisms in the impaired salt excretion of experimental nephrotic syndrome.</a> J Clin Invest. 71, (1983).</li>
<li>Deschenes, G., Wittner, M., Stefano, A., Jounier, S., Doucet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collecting+duct+is+a+site+of+sodium+retention+in+PAN+nephrosis%3A+a+rationale+for+amiloride+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Collecting duct is a site of sodium retention in PAN nephrosis: a rationale for amiloride therapy.</a> J Am Soc Nephrol. 12 (3), 598-601 (2001).</li>
<li>Lourdel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperaldosteronemia+and+activation+of+the+epithelial+sodium+channel+are+not+required+for+sodium+retention+in+puromycin-induced+nephrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Hyperaldosteronemia and activation of the epithelial sodium channel are not required for sodium retention in puromycin-induced nephrosis.</a> J Am Soc Nephrol. 16 (12), 3642-3650 (2005).</li>
<li>Seigneux, S., Kim, S. W., Hemmingsen, S. C., Frokiaer, J., Nielsen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+expression+but+not+targeting+of+ENaC+in+adrenalectomized+rats+with+PAN-induced+nephrotic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased expression but not targeting of ENaC in adrenalectomized rats with PAN-induced nephrotic syndrome.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 291 (1), F208-F217 (2006).</li>
<li>Artunc, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum-+and+glucocorticoid-inducible+kinase+1+in+doxorubicin-induced+nephrotic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Serum- and glucocorticoid-inducible kinase 1 in doxorubicin-induced nephrotic syndrome.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 295 (6), F1624-F1634 (2008).</li>
<li>Zheng, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mendelian+locus+on+chromosome+16+determines+susceptibility+to+doxorubicin+nephropathy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A Mendelian locus on chromosome 16 determines susceptibility to doxorubicin nephropathy in the mouse.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (7), 2502-2507 (2005).</li>
<li>Kimura, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8450912">Interstrain differences in murine daunomycin-induced nephrosis.</a> Nephron. 63 (2), 193-198 (1993).</li>
<li>Wang, Y., Wang, Y. P., Tay, Y. C., Harris, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+adriamycin+nephropathy+in+mice%3A+sequence+of+histologic+and+immunohistochemical+events%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Progressive adriamycin nephropathy in mice: sequence of histologic and immunohistochemical events.</a> Kidney Int. 58 (4), 1797-1804 (2000).</li>
<li>Svenningsen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmin+in+nephrotic+urine+activates+the+epithelial+sodium+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology+%3A+JASN%22%5BJournal%5D)">Plasmin in nephrotic urine activates the epithelial sodium channel.</a> Journal of the American Society of Nephrology : JASN. 20 (2), 299-310 (2009).</li>
<li>Passero, C. J., Hughey, R. P., Kleyman, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+role+for+plasmin+in+sodium+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Nephrol+Hypertens%22%5BJournal%5D)">New role for plasmin in sodium homeostasis.</a> Curr Opin Nephrol Hypertens. 19 (1), 13-19 (2010).</li>
<li>Bohnert, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aprotinin+prevents+proteolytic+epithelial+sodium+channel+%28ENaC%29+activation+and+volume+retention+in+nephrotic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Aprotinin prevents proteolytic epithelial sodium channel (ENaC) activation and volume retention in nephrotic syndrome.</a> Kidney Int. 93 (1), 159-172 (2018).</li>
<li>Pippin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+rodent+models+of+acquired+podocyte+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Inducible rodent models of acquired podocyte diseases.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 296 (2), F213-F229 (2009).</li>
<li>Bohnert, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+phosphorus+restriction+and+vitamin+D-substitution+on+secondary+hyperparathyroidism+in+a+proteinuric+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Blood+Press+Res%22%5BJournal%5D)">Impact of phosphorus restriction and vitamin D-substitution on secondary hyperparathyroidism in a proteinuric mouse model.</a> Kidney Blood Press Res. 40 (2), 153-165 (2015).</li>
<li>Morton, D. B., Griffiths, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+on+the+recognition+of+pain%2C+distress+and+discomfort+in+experimental+animals+and+an+hypothesis+for+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Rec%22%5BJournal%5D)">Guidelines on the recognition of pain, distress and discomfort in experimental animals and an hypothesis for assessment.</a> Vet Rec. 116 (16), 431-436 (1985).</li>
<li>Beath, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+aprotinin+concentrations+during+cardiac+surgery%3A+full-+versus+half-dose+regimens%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Plasma aprotinin concentrations during cardiac surgery: full- versus half-dose regimens.</a> Anesth Analg. 91 (2), 257-264 (2000).</li>
<li>Kanter, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+toxicology+study+of+liposome+encapsulated+doxorubicin+%28TLC+D-99%29%3A+comparison+with+doxorubicin+and+empty+liposomes+in+mice+and+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo%22%5BJournal%5D)">Preclinical toxicology study of liposome encapsulated doxorubicin (TLC D-99): comparison with doxorubicin and empty liposomes in mice and dogs.</a> In Vivo. 7 (1), 85-95 (1993).</li>
<li>Ma, L. J., Fogo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+of+robust+induction+of+glomerulosclerosis+in+mice%3A+importance+of+genetic+background%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Model of robust induction of glomerulosclerosis in mice: importance of genetic background.</a> Kidney Int. 64 (1), 350-355 (2003).</li>
<li>Kren, S., Hostetter, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+course+of+the+remnant+kidney+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">The course of the remnant kidney model in mice.</a> Kidney Int. 56 (1), 333-337 (1999).</li>
<li>Mizuno-Horikawa, Y., Mizuno, S., Tamura, S., Kurosawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+glomerulosclerosis+is+reversible+in+nephrotic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Advanced glomerulosclerosis is reversible in nephrotic mice.</a> Biochem Biophys Res Commun. 284 (3), 707-713 (2001).</li>
<li>Friberger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromogenic+peptide+substrates.+Their+use+for+the+assay+of+factors+in+the+fibrinolytic+and+the+plasma+kallikrein-kinin+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Clin+Lab+Invest+Suppl%22%5BJournal%5D)">Chromogenic peptide substrates. Their use for the assay of factors in the fibrinolytic and the plasma kallikrein-kinin systems.</a> Scand J Clin Lab Invest Suppl. 162, 1-298 (1982).</li>
<li>Haerteis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+kallikrein+activates+the+epithelial+sodium+channel+in+vitro+but+is+not+essential+for+volume+retention+in+nephrotic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica%22%5BJournal%5D)">Plasma kallikrein activates the epithelial sodium channel in vitro but is not essential for volume retention in nephrotic mice.</a> Acta Physiologica. , (2018).</li>
<li>Schork, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+Plasminuria+with+Overhydration+in+Patients+with+CKD%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Association of Plasminuria with Overhydration in Patients with CKD.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 11 (5), 761-769 (2016).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Aqui, demonstramos que a injeção de doxorrubicina através da injeção de sinus retrobulbar induz síndrome nefrótica experimental em ratos 129S1/SvImJ com proteinúria, retenção de sódio, hypoalbumenia e hiperlipidemia. No entanto, existem dois problemas críticos que devem ser levadas em conta ao usar este modelo. Em primeiro lugar, a indução de modelo estritamente é dose dependente e desvios da dose de doxorrubicina tão pequena quanto 0,3 µ g/g afetam a resposta dos ratos15. Quando injetado com uma ...

Síndrome nefrótica é caracterizada por hiperlipidemia, hipoalbuminemia, edema e proteinúria pesada e pode ser considerada como a manifestação mais extrema da doença renal de contraste. Em roedores, síndrome nefrótica experimental pode ser induzida por injeção única de antraciclinas ou puromicina que leva a danos podocyte e assemelha-se a doença humana mudança mínima e glomeruloesclerose segmentar (FSGS)1. Após sua primeira descrição em 1955 por Frenk et al. 2, nefrose de puromicina nucleosídeos (PAN) em ratos tornou-se um modelo padrão para investigar a fisiopatologia da síndrome nefrótica em numerosos estudos3,4,5,6. Nos ratos, o modelo correspondente pode ser induzido pela doxorrubicina regime7. No entanto, há uma forte tensão-dependência que é geneticamente determinada pelo menos dois loci genéticos8. Além disso, existem diferenças na resposta de contraste e curso da síndrome nefrótica9,10. Usando ratos 129S1/SvImJ e injeção intravenosa rápida de doxorrubicina através do seio retrobulbar, respostas proteinúria atingem valores que são suficientes para induzir as características típicas da síndrome nefrótica, particularmente de retenção de volume caracterizada por ascite e quase livre de sódio urina7. Retenção de sódio na síndrome nefrótica experimental tem sido presume-se que o resultado da ativação do canal de sódio epitelial (ENaC) no túbulo distal por proteases de serina aberrantly filtrado como plasmina causando proteólise de sua subunidade de γ-4 ,11,12. Recentemente, este conceito foi comprovado em ratos nefrótico que estavam protegidos de ativação proteolítica do ENaC e retenção de sódio pelo tratamento com a aprotinina de inibidor de protease serina que foi igualmente eficaz como o bloqueador de ENaC amilorida13. Para garantir a entrega contínua para o túbulo distal, aprotinina foi administrada através de liberação sustentada por via subcutânea implantado Pelotas. Futuros estudos são necessários para identificar as proteases de serina que são responsáveis pela ativação proteolítica do ENaC em síndrome nefrótica que é pensado para a situação humana em paralelo. Para este efeito, síndrome nefrótica induzida por doxorrubicina é um modelo valioso que pode ser usado em ratos do selvagem-tipo ou expandido para camundongos geneticamente modificados. Suas vantagens incluem o baixo custo da droga, menor complexidade de gestão e de boa reprodutibilidade14.
Neste artigo, demonstramos a indução de síndrome nefrótica experimental por injecção intravenosa rápida de doxorrubicina para o seio de retrobulbar e implantação de pellets de liberação sustentada contendo aprotinina para inibir urinária serina protease atividade, medida com um ensaio cromogênico.

<table><tbody><tr><td>supplies</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Micro FINE + U-40 (0,30 mm x 8 mm)</td><td>BD Deutschland GmbH, Heidelberg, Alemanha</td><td>PZN: seringa 07468060</td><td></td></tr><tr><td>ETHILON*II (5/0, 16 mm, 3/8c, 45 cm)</td><td>Johnson& Johnson Medical GmbH, Ethicon Deutschland, Norderstedt, Alemanha)</td><td>EH7823H</td><td>sutura</td></tr><tr><td>Nome</strong</td><td>>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>reagentes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>aprotinina (6000 KIU/mg)</td><td>LOXO, Heidelberg, Alemanha</td><td>CAS 9087-70-1</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen, Augen- und Nasensalbe</td><td>Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Alemanha</td><td>PZN:</td><td>pomada</td>1578681</tr><tr><td>Chromogenix S-2251</td><td>HAEMOCHROM DIAGNOSTICA GmbH, Essen, Alemanha</td><td>82 0332 39</td><td>substrato cromogênico</td></tr><tr><td>doxorrubicina (2.0 &micro; g/&micro; L)</td> <td>Cell Pharm, Bad Vilbel, Alemanha</td><td>CAS 25316-40-9</td><td>doxorrubicina</td></tr><tr><td>isofluran CP (1 mL / mL)</td> <td>CP-Pharma, Burgdorf, Alemanha</td><td>CAS 26675-46-7</td><td>pellets de isofluran</td></tr><tr><td>com liberação sustentada acionada por matriz (feito sob medida)</td> <td>Innovative Research of America, Sarasota, FL</td><td>X-999</td><td>pellet</td></tr><tr><td> Nome</td> <td> Empresa </td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ELx808 Absorbance Mikroplate Reader</td><td>BioTek, Bad Friedrichshall, Alemanha</td><td>ELx808</td><td>leitor de microplacas</td></tr><tr><td>MICROSTERIL - 436</td><td>B.M.S., Trescore Balneario, Itália</td><td>Esterilizador GAL/436</td><td></td></tr><tr><td>Forno de hibridização/ agitador</td><td>GE Healthcare UK Limited, Amersham LIFE SCIENCE, Little Chalfont, Reino Unido</td> Câmara <td>de calor</td><td>RPN 2511</td></tr><tr><td>Thermo MAT Pro 10 W, 15x25 cm, Lucky Reptile</td><td>Import Export Peter Hoch GmbH, Waldkirch, Alemanha</td><td>61201</td><td>dispositivo de aquecimento de mouse</td></tr></tbody></table>

indução de síndrome nefrótica em camundongos por injeção retrobulbar de doxorrubicina e na prevenção da retenção de volume por liberação sustentada aprotinina

Induction of Nephrotic Syndrome in Mice by Retrobulbar Injection of Doxorubicin and Prevention of Volume Retention by Sustained Release Aprotinin

Síndrome nefrótica é a manifestação mais extrema da doença renal contraste e caracterizado por pesados proteinúria, hipoalbuminemia e edema devido à retenção de sódio e hiperlipidemia. Para estudar a fisiopatologia desta síndrome, desenvolveram-se modelos de roedores baseiam na injeção de substâncias tóxicas como doxorrubicina, causando danos podocyte. Em camundongos, apenas algumas cepas são suscetíveis a este modelo. Em sua 129S1/SvImJ ratos, a administração de doxorrubicina por injeção intravenosa rápida para o seio de retrobulbar induz a síndrome nefrótica experimental que apresenta todos os sintomas das doenças humanas, incluindo edema e retenção de sódio. Após o início da proteinúria, exposição de ratos aumentou a atividade de protease de serina urinária que leva à ativação do canal de sódio epitelial (ENaC) e retenção de sódio. Inibição farmacológica de proteases de serina urinária pelo tratamento com liberação sustentada aprotinina revoga ativação ENaC e evita a retenção de sódio. Este modelo é ideal para estudar a fisiopatologia da proteasuria, i. e., a excreção de ativo Serina proteases que causam ENaC ativação pela proteólise de sua subunidade γ-. Isto pode ser considerado como o principal mecanismo de ativação ENaC e retenção de sódio na doença renal de contraste.

Após a indução de isoflurano narcose, doxorrubicina rapidamente foi injetada através do seio esquerdo retrobulbar. Todo o volume de 7,25 µ l/g bw foi injetado sem qualquer resistência e extravasamento provando corrigir localização venosa da cânula. O mouse recuperou de narcose rapidamente e não tinha nenhuma imparidade naquele dia e depois disso. Particularmente, não havia nenhum sinal de danos no olho esquerdo. Depois de doxorrubicina injeção, comida e líquido consumo caiu sobre os 3 pri...

Aqui, descrevemos a indução de síndrome nefrótica experimental em ratos 129S1/SvImJ por injeção retrobulbar rápida de doxorrubicina. Também tratamos nefrótico ratos com pelotas de liberação sustentada contendo aprotinina para inibir a atividade de protease de serina urinária e evitar a retenção de sódio.

Indução de síndrome nefrótica em camundongos por injeção Retrobulbar de doxorrubicina e na prevenção da retenção de Volume por liberação sustentada aprotinina

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due ...

O objetivo geral deste modelo de camundongo da síndrome nefrótica experimental é apresentar todas as facetas da síndrome conhecidas de pacientes humanos, o mais importante, retenção de sódio e formação de edema. Este modelo pode ajudar a elucidar os mecanismos de retenção de sódio na síndrome nefrótica. Como será mostrado neste artigo, a retenção de sódio é causada pela excreção de proteases séricas ativas na urina, que denominamos proteasúria.As principais vantagens deste modelo são que ele é fácil de induzir e que apresenta todas as facetas da síndrome nefrótica humana e da doença renal crônica. Durante o segmento de implantação do protocolo, o Dr. Bohnert, um pesquisador, demonstrará essa técnica. Para começar, aqueça a doxorrubicina em uma câmara de 37 graus Celsius.Em seguida, prepare a seringa para injeção. Marque a posição de parada do pistão na seringa para fornecer a dose necessária de doxorrubicina usando uma solução de dois microgramas por microlitro. Em seguida, zere a massa de uma seringa preparada e coloque-a na seringa até o ponto marcado.Para confirmação do volume, pese novamente a seringa. Esta injeção deve ocorrer aproximadamente 30 segundos após a narcose. Depois

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Este vídeo demonstra um procedimento para denervação simpática da artéria renal em um modelo de camundongo hipertenso induzido por angiotensina II, usando fenol para interromper a função nervosa simpática e reduzir a pressão arterial.

Denervação simpática de artérias renais em um modelo de camundongo com hipertensão induzida por angiotensina II

Descrevemos modelos de lesão renal por isquemia e reperfusão induzida moderada e grave em que os ratos submetidos a clampeamento do pedículo renal unilateral seguido de nefrectomia contralateral simultânea ou tardia, respectivamente. Estes modelos consistentemente dar origem a uma disfunção renal e fibrose pós-lesão, mas a gravidade da lesão e sobrevivência dependem de fundo, idade e equipamento cirúrgico mouse.

Isquemia-reperfusão modelo de lesão renal aguda e Pós Lesão fibrose em camundongos

Este manuscrito fornece um procedimento cirúrgico de duas etapas detalhadas para executar o rato 5/6th nefrectomia parcial (PNx) com ligadura de polo. Quatro semanas após a cirurgia, em comparação com a operação de ratos, os ratos PNx desenvolveram insuficiência renal, anemia, hipertrofia cardíaca, Fibrose cardíaca e diminuição da função sistólica e diastólica do coração.

Um Mouse 5/6th nefrectomia modelo que induz a miocardiopatia urêmica Experimental

Este protocolo descreve um rim completo check-up que deve ser realizado em modelos do rato da doença glomerular. Os métodos permitem análise detalhada funcional, estrutural e mecanicista da função glomerular, que pode ser aplicada a todos os modelos do rato da doença glomerular.

Avaliação da função renal em modelos do rato da doença Glomerular

Aqui, apresentamos um protocolo para denervação simpática renal (RDN) em camundongos com hipertensão induzida por infusão de Angiotensina II. O procedimento é repetível, conveniente e permite estudar os mecanismos regulatórios da RDN na hipertensão e hipertrofia cardíaca.

Denervação renal melhorada Hipertensão Mitigada Induzida por Infusão de Angiotensina II

Este protocolo descreve a implantação consecutiva de uma bomba osmótica para induzir aneurisma aórtico abdominal por angiotensina II liberação em camundongos deficientes apolipoprotein E (ApoE) e de uma porta de acesso vascular com cateter venoso jugular para tratamento medicamentoso repetido. O monitoramento do desenvolvimento de aneurisma por ultrassom 3D é efetivamente realizado apesar dos implantes dorsais.

Tratamento medicamentoso por Cateter Venoso Central em um Modelo de Camundongo de Angiotensin II Aneurisma Abdominal Induzido anótico e monitoramento por ultrassom 3D

Este artigo fornece um protocolo e um vídeo de acompanhamento para a injeção de seio retrobulbar de até um volume total de 150 μL para camundongos adultos pós-natais, juvenis e runados. Este procedimento é particularmente adequado para a injeção de camundongos pequenos (15 g) quando a injeção da veia da cauda não é viável.

Tratamento sistêmico para camundongos adultos pós-natais, juvenis e runados por injeção de seio retrobulbar

Este relatório detalha o método de injeção localizada de vetores AAV através da pelve renal para transferência eficaz e segura de genes para o rim de camundongo.

Entrega de genes eficaz e segura ao rim de camundongo por meio de injeção lenta e retrógrada da pelve renal de vetores de vírus adeno-associados

Nós descrever o protocolo para realizar um teste de estresse cardíaco induzido por dobutamina e monitorado por cateterismo cardíaco em ratos normais. Também vamos mostrar a sua aplicação para desmascarar doença cardíaca subclínica em alto teor de gordura da dieta induzida ratos obesos.

Teste de estresse cardíaco induzido por dobutamina e Monitorado por cateterismo cardíaco em ratos

Criação de descolamento de retina experimentais com uma altura reprodutível e sustentada de desapego, e sem hemorragia sub-retiniana, é importante para o estudo da fisiopatologia da perda de células fotorreceptoras da retina na doença e avaliar intervenções terapêuticas potenciais. Relatamos tal método em detalhes.

Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

Aprenda a induzir síndrome nefrótica experimental em camundongos 129S1/SvImJ por injeção retrobulbar de doxorrubicina. Este modelo replica as características da doença humana e permite estudar mecanismos de retenção de sódio.

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