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DOI: 10.3791/57688-v
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This article presents a scalable method for generating cardiac progenitors and cardiomyocytes from human pluripotent stem cells using Activin A and Id1-overexpression. The technique allows for the production of cells with defined heart field origins, suitable for various research applications.
Aqui nós descrevemos um método dimensionável, usando uma simples combinação de Activin A e mediada por lentivirus Id1-superexpressão, para gerar a primeiras progenitores cardíaca como campo de coração e cardiomyocytes ventricular, como de células estaminais pluripotentes humanas.
A principal vantagem dessa técnica simples é gerar progenitores cardíacos e cardiomiócitos de origem e subtipos de campo cardíaco definidos. Por sua vez, as células resultantes podem ser usadas para uma ampla gama de aplicações de pesquisa, incluindo biologia básica do desenvolvimento, terapia baseada em células de prova de conceito e estudos de modelagem de doenças cardíacas. Demonstrando o procedimento estarão Sean Spiering e Michael Yu do meu laboratório.
Para começar, cubra poços suficientes de uma placa de 96 poços com 50 microlitros de reagente de revestimento para acomodar as etapas subsequentes de semeadura celular e infecção viral e, em seguida, adicione um mililitro de reagente de dissociação a um poço na placa de seis poços para separar as células-tronco pluripotentes semeadas. Em seguida, use uma pipeta estéril para transferir a suspensão celular em um tubo de centrífuga de plástico de 15 mililitros. No tubo, adicione cinco mililitros de PBS contendo cálcio e magnésio para neutralizar o reagente de dissociação.
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