Name: Criação e manutenção de longo prazo de Eristalis tenax Hoverflies para estudos de investigação (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: Aprenda a criar e manter populações de Eristalis tenax em cativeiro para estudos de comportamento e neurociência. Este protocolo padronizado permite a manutenção de moscas por mais de um ano em laboratório.

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A pesquisa em nosso laboratório atualmente é financiada pelo Conselho australiano de pesquisa (arco, DP170100008 e DP180100144), nos força aérea escritório de investigação científica (AFOSR, FA9550-15-1-0188) e Stiftelsen Olle Engkvist Byggmästare (2016/348). Agradecemos por membros do laboratório que contribuíram para o desenvolvimento de ações hoverfly, Cederholms Lantbruk e M C & T L verde & filho para acesso a esterco de vaca e hoverflies em suas fazendas, e permite que a Adelaide e Uppsala Botanic Gardens para coleta e suporte contínuo.

1. a criação em cativeiro E. tenax colônia
<ol><li>Estabelecer a colônia através da coleção de larvas maduras (etapa 1.2) ou, alternativamente, através da coleção de hoverflies de voo livre (etapa 1.3).</li>
	<li>
Coleção de larvas maduras
	<ol>
<li>Coletar o segundo e terceiro estádio as larvas dos poços de estrume em fazendas de gado. Nota: As larvas maduras são mais fáceis de encontrar durante o início da sua fase migratória, como eles procuram activamente um ambiente escuro e seco para empupar. Isto tende a ser perto das fronteiras de estrume poços onde o estrume úmido é perto de áreas mais secas, que contém grandes quantidades de palha. Foram coletados sob permissão de uma fazenda de gado, perto de Uppsala, Suécia.</li>
		<li>Conforme descrito no passo 3.2 da retaguarda larvas maduras em estrume de vaca.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Coleção de Hoverflies selvagens
	<ol>
<li>Recolher hoverflies selvagem pela rede no campo, geralmente de jardins botânicos e parques onde há uma abundância de plantas. Nota: Nós coletamos sob permissão de vários locais, incluindo qualquer um dos jardins botânicos Adelaide três, uma fazenda de gado leiteiro, em Myponga, sul da Austrália e em diversos jardins botânicos e parques ao longo de Uppsala, Suécia.</li>
		<li>Campo casa recolhidos hoverflies conforme descrito na etapa 2.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. habitação e a longo prazo de manutenção de Hoverflies
<ol><li>Hoverflies em sacos plásticos de 30 cm x 45 cm para grupos de 20 ou menos, ou em um inseto gaiola de criação da casa (25 x 25 cm x 25 cm) para grupos maiores.</li>
	<li>Providenciar comida e água ad libitum, sob a forma de grãos de 10-20 de abelha pólen e 2-3 mL mel colocada em cima de várias bolas de algodão úmido. Nota: Para a habitação em sacos de plástico, é importante que as bolas de algodão são húmidas mas não excessivamente saturadas, como qualquer acúmulo de água dentro do saco pode ser prejudicial para as taxas de sobrevivência. Por outro lado, para habitação em gaiolas de criação de insetos, os lados de malha permitem evaporação significativa ocorrer. Bolas de algodão, portanto, devem ser colocadas em um recipiente raso e ser totalmente saturadas.<ol>
<li>Deixe hoverflies para alimentar por 6 horas à temperatura ambiente.</li>
		<li>Coloque hoverflies com comida e água na sua habitação, no frigorífico a 8-10 ° C e mantenha-se na mais completa escuridão. Nota: Armazenar hoverflies 8-10 ° c na escuridão faz com que o hoverflies entrar em um estado de hibernação, com uma redução da atividade e a taxa metabólica.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cada 3-4 dias retire hoverflies da geladeira, assim quebrando a hibernação artificial e permitindo tanto alimentação e aliciamento para ocorrer.<ol>
<li>Transferência de hoverflies para um novo saco de plástico ou uma gaiola limpa inseto com alimentos frescos e água. Esta transferência também pode ser feita manualmente, para pequenas quantidades de moscas, ou utilizando phototaxis, para números maiores.</li>
		<li>Para utilizar phototaxis, junte-se a uma gaiola limpa inseto para a antiga, garantir que haja uma abertura para o hoverflies para mover-se livremente entre os dois sem escapar. Cobrir a gaiola de inseto idade com um tecido opaco. O hoverflies se moverá em direção à luz e na gaiola limpa insecto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Permitir que hoverflies alimentar e noivo à temperatura ambiente durante 6 h.</li>
	<li>Retorne hoverflies, com a comida e a água na sua habitação, em geladeira a 8-10 ° C na mais completa escuridão. Isso reinicie a hibernação artificial do hoverflies.</li>
	<li>Continue a quebrar cíclico de hibernação, a cada 3-4 dias, para garantir a saúde e a longevidade de hoverflies para a duração do seu cativeiro.</li>
</ol>3. laboratório crescimento de E. tenax
<ol><li>Traseiras larvas maduras coletadas de fazendas de gado (passo 3.2) ou alternativamente traseira ovos postos por fêmeas capturadas selvagens gravid (passo 3.3).</li>
	<li>
Laboratório de criação de larvas maduras das fazendas de gado
	<ol>
<li>Coloque as larvas coletadas em estrume de vaca de fazendas de gado em baldes de 30 L.</li>
		<li>Coloque o balde, contendo larvas maduras, dentro de uma caixa maior ou saco (volume mínimo de 50-60 L) e coloque as aparas de madeira de 20-30 L até a altura da borda da caçamba. Nota: Isto permite 3rd ínstar larvas para invadir as aparas de madeira e empupar.</li>
		<li>Pendure um mosquiteiro em camadas dobro do teto permitindo que ele fique pendurado as caixas e/ou sacos, garantindo assim que as larvas nem qualquer hoverflies emergentes pode escapar. Nota: Como medida de precaução, fita adesiva dupla face pode ser usada para cercar a configuração, como qualquer escape larvas vão ficar preso e pupate nesta fita. Se isso acontecer, remova as pupas antes da eclosão.</li>
		<li>Tanto as larvas e pupas em temperatura ambiente (21,5 ± 2,5 ° C), da casa e expor ou luz solar indireta, bem como as luzes da sala durante o expediente ou manter-se em um ciclo de luz: escuro de 12 h luz: 12h escuro. Nota: A exposição à luz 24 h pode ser prejudicial para as taxas de sobrevivência. Para larvas coletadas em vez de pupa de fazendas de gado variarão de 1 - 20 dias após a colheita, dependendo de sua maturidade no momento da coleta.</li>
		<li>Fornecer comida e água dentro o enforcamento mosquito net recinto (como preparado no passo 2.2) antes da data esperada eclosão e substituir a cada 2-3 dias. Eclosão ocorrerá de 7 a 10 dias após a pupação.</li>
		<li>Permitir que emergentes hoverflies para alimentar por 6 horas à temperatura ambiente antes de colocá-los na carcaça conforme descrito na etapa 2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Laboratório de criação de ovos postos por Gravid fêmeas selvagens capturados
	<ol>
<li>Verifique hoverfly habitação para ovos, tanto antes de mudar de habitação (etapa 2) e antes de retorná-los para o frigorífico. Oviposição por selvagens capturados gravid fêmeas ocorre em ambos os 8-10 ° C e à temperatura ambiente.<ol>
<li>Coloque os ovos em uma 100 x 20 mm placa de Petri contendo 70 mL de água da torneira e manter à temperatura ambiente até que ocorra a eclosão, geralmente 2-3 dias após a oviposição.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Lugar dos ovos as larvas em um balde de 2,3 L contendo 1L de fezes frescas de coelho e 1 L de água da torneira.<ol>
<li>Verifique o chorume cada 2-3 dias e adicionar água da torneira adicional conforme necessário, para garantir que o chorume não secar antes das 3rd ínstar larvas emergem.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Coloque o balde, contendo as larvas no chorume de fezes de coelho, dentro de uma caixa maior (volume mínimo 30 L) contendo 20 L de aparas de madeira. Certifique-se das que aparas de madeira são até a altura da borda da caçamba. Nota: Isto permite 3rd ínstar larvas para invadir as aparas de madeira e empupar.<ol>
<li>Coloque um mosquiteiro duplo em camadas sobre a caixa para garantir que as larvas nem qualquer hoverflies emergentes pode escapar.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Tanto as larvas e pupas em temperatura ambiente (21,5 ± 2,5 ° C), da casa e expor ou luz solar indireta, bem como as luzes da sala durante o expediente ou manter-se em um ciclo de luz: escuro de 12 h luz: 12h escuro. Nota: A exposição à luz 24 h pode ser prejudicial para as taxas de sobrevivência.</li>
		<li>Espera que a pupa de ocorrer após 15-20 dias. Coletar as pupas e coloque em uma gaiola de inseto, permitindo hoverflies para eclose lá.</li>
		<li>Fornecer água e comida (como preparado no passo 2.2), antes da data esperada eclosão - eclosão irá ocorrer de 6 a 10 dias após a pupação - e substituir a cada 2-3 dias.</li>
		<li>Permitir que emergentes hoverflies para alimentar por 6 horas à temperatura ambiente antes de colocá-los em habitação, conforme descrito na etapa 2. Nota: Tanto a pupa de larvas e a eclosão de pupas podem ser adiadas por armazenamento na escuridão a 8-10 ° C. Para essa finalidade, armazene as larvas no chorume de fezes de coelho e pupas em aparas de madeira.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Usando nossas técnicas (Figura 1) hoverflies foram mantidos no laboratório por um período de mais de 1 ano e utilizados com sucesso em experimentos comportamentais após 7 meses em cativeiro39. Com efeito, mesmo que pareça contra-intuitivo, mantendo o hoverflies em um ambiente mais natural, sob a luz de h 12:12 h condições de escuras, à temperatura ambiente, substancialmente diminui sua expectativa de vida de 2-3 meses. Manutenção E. tenax em nosso ciclo de hibernação artificial para mais de um ano é significativamente maior do que o anterior tentativas usando protocolos diferentes (77 dias33, 4 meses9, 18 semanas30). O principal fator que influencia este aumento da longevidade é provável que o uso de hibernação artificial a 8-10 ° C. Ciclicamente quebrando a hibernação, a cada 3-4 dias (etapa 2, Figura 1), permitimos que hoverflies para alimentar e lavamo-nos, mantendo assim o estado nutricional e o bem-estar do hoverflies, como evidenciado por um aumento observado em peso ( Figura 4) e nenhuma alteração na atividade locomotora, mesmo após longos períodos em cativeiro (Figura 3e ver39). Na verdade, relatos na literatura de tentativas malsucedidas de hibernação artificial não quebrar o ciclo de hibernação, levando assim ao aumento da mortalidade e a presença de molde9.
Além disso, existe alguma controvérsia em toda a literatura sobre a prestação de pólen como fonte de alimento. Vários trabalhos afirmam que o pólen de abelha não é suficiente, especificamente para oviposição, e apenas a disposição de pólen seco ou com efeito fresco é adequado9,29. Nossos resultados indicam que complementando o pólen de abelha com mel e água, vemos tanto a longevidade e a oviposição, mesmo após longos períodos de cativeiro, com um aumento de peso, visto em ambos os sexos (Figura 4) e oviposição ainda ocorrem em fêmeas depois de mais de 5 meses em cativeiro39. Este aumento da longevidade nos permite estudar os comportamentos de hoverflies em todas as fases da vida.
No campo, hoverflies femininos são fertilizados antes da hibernação sazonal e permanecem em diapausa reprodutiva, onde o esperma é armazenada e oócitos permanecem subdesenvolvidos, até a primavera de28. Dado que uma fêmea típica é capaz de 3000 ovos em 60 dias29, a criação desses ovos, portanto, é uma maneira rápida e eficiente para aumentar a nossa população em cativeiro. No entanto, nossa compreensão atual dos fatores que levam ao desenvolvimento do oócito após um período de hibernação são limitadas. Temperatura, umidade, intensidade de luz e estado nutricional têm sido sugeridos como jogar um papel no controle reprodutivo diapausa28,40. Manipulação experimental de tais fatores pode levar a uma maior governança da tempestividade de oviposição e taxas.
Da mesma forma, nós com sucesso atrasaram o desenvolvimento das larvas, bem como a eclosão de pupas, pelo armazenamento na escuridão a 8-10 ° C por 2 semanas, apesar de viabilidade pode ser muito mais tempo. Com efeito, Heal30 relataram um aumento de duração pupal de até 37 dias quando a temperatura pupal caiu de 25 ° C a 10 ° C. Empregando estas estratégias e atrasando a produção de ovos e/ou o desenvolvimento de pupas permitiria uma maior manipulação da demografia da população em cativeiro.
Enquanto consistência temporal de abastecimento é da maior importância para os nossos requisitos de grande rendimento, isso pode ser mais importante para outros usos, tais como a polinização em estufas. Achamos que quando usando a nossa técnica com fezes de coelho, temos 163 ± 34 eclosed hoverflies de cada ninhada de ovos (N = 3). Dado que um típica fêmea põe até 200 ovos40, talvez possamos aumentar esse rendimento por qualquer competição decrescente de superlotação e comida, ou ajustando a temperatura, como estas têm sido implicadas como afectando significativamente o crescimento larval9 ,31,40,41. No entanto, não há nenhuma indicação de que a base da mídia influencia grandemente rendimento32. Além disso, ao contrário de fezes de outros animais vertebrados29,30,31,42, fezes de coelho é relativamente odor livre, permitindo que a colônia ser mantido em condições laboratoriais normais sem a necessidade de ventilação adicional. Diminuindo a densidade de larvas nos meios de comunicação, ou adicionando nutricional suplementos tais como fermento, bem como manter uma temperatura constante entre 20-25 ° C, é provavelmente suficiente para plenamente optimizar o rendimento31,32, 40.
Os aspectos práticos de coleta de um número suficiente de livremente voando hoverflies, ou sustentar uma população cativa geneticamente diversificada, são ambos impraticável e tempo restritivos para projectos de investigação em pequena escala. Portanto, a prole de fêmeas acasaladas selvagens de criação e complementando suprimentos com colheita de larvas maduras7, permitir que as opções mais práticas para uso durante todo o ano de E. tenax em um ambiente de pesquisa. Esses métodos são limitados pelas épocas em que coleção pode ocorrer, há uma necessidade de ambos garantindo a longevidade dos adultos hoverflies e criação de ovos postos por capturou as mulheres gravid.

Hoverflies estão emergindo como modelos úteis para investigar uma série de questões científicas, incluindo comportamento de voo1, mecanismos neurais subjacentes movimento visão2, polinização eficiência3,4, 5 , 6 e imunidade microbial7. No entanto, ao contrário de alguns outros modelos frequentes, tais como drosófila8, há não há protocolos padronizados para a criação de laboratório de hoverflies para uso em pesquisa científica. Com efeito, mesmo que a atual literatura descreve métodos para reprodução o hoverfly Eristalis tenax, muitos destes são desenvolvidos para o cultivo em massa de hoverflies para a polinização de culturas, bio-degradação de resíduos orgânicos, ou estudos anatômicos 9 , 10 , 11. assim, eles não aborda a necessidade de um protocolo de fácil que fornece uma fonte consistente de saudável hoverflies robusto, embora mantendo a aptidão genética da população.
Seguindo abelhas e zangões, hoverflies são um dos mais importantes selvagem, generalista polinizador grupos12,13. Há cerca de 6000 hoverfly espécies em todo o mundo14,15, com mais de 300 espécies 75 gêneros na Suécia16 e mais de 300 espécies, 69 gêneros na Índia17,18,19. Por exemplo, a marmelada agricultural importante hoverfly Episyrphus balteatus e a mosca de drone, tenax Eristalis, que enfocamos aqui, são encontrados em toda a Europa, América e Ásia6,16, 17,18,19,20,21,22,23,24,25. Hoverflies não são igualmente ativos durante todo o ano, nem durante todo o dia. Com efeito, não só a temporada e a hora do dia, mas também as flutuações na intensidade da luz, temperatura, umidade e velocidade do vento, afetam os padrões de atividade de hoverflies26,27. No campo, Eristalis pode ser encontrada em qualquer época do ano em climas mediterrânicos11, mas os números de hoverflies ativo são muito mais baixos no inverno. Inversamente, em climas frios e temperadas, Eristalis hibernar durante o inverno e não se encontram comportando-se ativamente no campo de em torno de outubro a março28.
Voar livremente hoverflies pode ser coletado pela rede no campo. Com efeito, em climas temperados eles são encontrados em maior abundância no meados ao final da manhã, acalma em dias de sol, no final do verão e durante todo o outono26,,27. Alternativamente, amadurecem E. tenax larvas, segundo ou terceiro ínstar, pode ser identificada e colhida a partir da decomposição de matéria orgânica, como estrume montões ou córregos poluídos organicamente10,11. De fato, técnicas publicadas para a criação de laboratório de E. tenax são todas baseadas em criar larvas em água poluída organicamente, ou através de alguma forma de matéria fecal ou vegetativo9,10,29, 30 , 31 , 32 , 33. no entanto, coleção de larvas é limitada por temporada e é apenas uma ferramenta viável de coleção do final da primavera ao início do outono,11. Além disso, a abundância de larvas é afetada por padrões climáticos locais, como alterações na temperatura ambiente podem afetar tanto a ocorrência de oviposição e desenvolvimento larval taxas9,28.
Portanto, estratégias para manter estoques saudáveis de hoverflies por larvas e ovos dentro do laboratório de criação são necessários para garantir que as experiências podem ser conduzidas durante todo o ano, independentemente da época ou eventos climáticos locais. Importante, a técnica descrita aqui gera a hoverflies de somente as fêmeas selvagens-acoplado. Isto é importante como um estudo realizado por Francuski, et al 10 descobriu que a diversidade genética de um laboratório de população de hoverflies de raça, originalmente estabelecido de 120 larva madura, foi rapidamente perdida. Por conseguinte, sugeriram que para manter a diversidade genética nas colônias para ser utilizado para fins de polinização de culturas comerciais, estes precisam ser reabastecidos, ou até mesmo completamente restabelecida, com indivíduos de campo coletado cada primavera10.
Quando se trabalha na visão, ou outros sentidos usados no corte e acasalamento, recomendamos, portanto, manter a diversidade genética, por re-estabelecer a colônia ou reabastecer a colônia com indivíduos de campo coletado, regularmente. Isto é importante porque a seleção sexual afeta a deriva genética da população. Com efeito, no selvagem, masculino hoverflies precisa identificar e interceptar companheiros adequados, bem como competir com outros machos para o acasalamento dos direitos, defendendo seus territórios34. Esse processo garante que os machos com a melhor visão e atenção espacial são susceptíveis de ser a mais bem sucedida no acasalamento, e, portanto, essas características são repassadas para a próxima geração. O efeito resultante destes processos em curso é, em parte, demonstrado pela presença de dimorfismos sexuais na via visual de hoverflies35,36. Em cativeiro, os machos não têm os mesmos obstáculos ao sucesso de acasalamento como no campo: em primeiro lugar, as fêmeas estão prontamente disponíveis, e em segundo lugar o recinto pequeno, confinado elimina o efeito de comportamentos territoriais, que atuam para impedir o acesso de acasalamento dos outros machos do competidor. A remoção experimental de seleção sexual em Drosophila melanogaster, foi mostrado para ter um efeito significativo sobre as populações em cativeiro com uma diminuição no tamanho total do corpo, tamanho de testículos e esperma produção37e taxas reduzidas de macho comportamentos de namoro38. Assim, um reprodução programa, sem qualquer consideração de seleção sexual, em cativeiro pode ter um efeito profundo em ambos os estudos visuais e comportamentais realizados posteriormente.
Aqui descrevemos uma solução simples e econômica que fornece uma fonte consistente de hoverflies saudável. O protocolo é flexível e fácil de re-iniciar e/ou upscale, dependendo das exigências de investigação.

<table><tbody><tr><td>Pólen de abelha</td><td>Floresta Super Alimentos</td><td></td><td>qualquer marca de pólen de abelha é adequada</td></tr><tr><td>Honey</td><td>Bramwells</td><td></td><td>qualquer marca de mel líquido é adequada</td></tr><tr><td>Fezes</td><td></td><td></td> de coelho <td>podem ser substituídas por esterco de vaca ou porco transformado em pasta</td></tr><tr><td>BugDome</td><td>Australia Suprimentos Entomológicos</td><td>EM42222</td><td></td></tr><tr><td>Sacos Plásticos</td><td>Woolworths Homebrand</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rede mosquiteira</td><td>Clas Ohlson</td><td>34-1113</td><td></td></tr><tr><td>Bolas de Algodão</td><td>Woolworths Select</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fridge</td><td>A geladeira Hisense</td><td></td><td>precisa manter um 8-10&deg estável; C&nbsp;</td></tr><tr><td>Baldes (2-3L)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Grandes banheiras de plástico (30L)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Aparas de madeira</td><td>Pollards Suprimentos de serragem</td><td>MaxiFlake (75)</td><td></td></tr><tr><td>Clipes para sacos</td><td>IKEA</td><td>Bevara 303.391.70</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri (100mm x 20mm)</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr></tbody></table>

criação e manutenção de longo prazo de eristalis tenax hoverflies para estudos de investigação

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

Com cerca de 6000 de espécies em todo o mundo, hoverflies são ecologicamente importantes como polinizadores alternativos para as abelhas domesticadas. No entanto, eles também são um modelo científico útil para estudar a dinâmica de visão e voo de movimento em um ambiente controlado do laboratório. Como as larvas se desenvolvem em água poluída organicamente, eles são modelos úteis para investigar o investimento na imunidade microbial. Enquanto em grande escala comercial fértil para a agricultura já ocorre, há não há protocolos padronizados para a manutenção de populações cativas para estudos científicos. Isto é importante, como programas de reprodução em cativeiro comercial com foco em massa de saída durante a polinização de pico períodos podem não apresentar uma população consistente, estável e robusto ao longo do ano, como é muitas vezes necessário para outros fins de investigação. Portanto, um método para estabelecer, manter e atualizar uma população em cativeiro de investigação é necessário. Aqui, descrevemos a utilização de um ciclo de hibernação artificial, além das exigências nutricionais e habitação, para a manutenção de longo prazo de Eristalis tenax. Usando estes métodos, têm aumentado significativamente a saúde e a longevidade de populações cativas de tenax E. em comparação com os relatórios anteriores. Além disso, vamos discutir métodos de criação de pequena escala e opções para otimizar o rendimento e manipular dados demográficos da população.

Temos desenvolvido uma estratégia de três vias que mantém uma população saudável de estudos visuais e comportamentais (resumidas na Figura 1). Nosso método começa com a coleção de hoverflies do selvagem (etapa 1, Figura 1). Em nosso laboratório, hoverflies estão alojados em gaiolas de insetos ou sacos de plástico, sob um ciclo de hibernação artificial (etapa 2, Figura 1), substancialmente prolongar sua vida útil. Para números aumentados, prole pode ser criados das fêmeas selvagens-acoplado (etapa 3, Figura 1).
Encontramos que pegar um grande número de selvagens hoverflies é um esforço intensivo de tempo, mesmo quando ambientais as condições são favoráveis. Em contraste, a criação bem sucedida de larvas maduras colhidas das fossas de estrume de gado fazendas é uma maneira muito mais eficiente para um grande número de fonte de hoverflies selvagem (etapa 1, Figura 1), com nos coletando até 700 larvas em 0,03 m3 de estrume. Além disso, nossas técnicas de traseiras ovos postos por fêmeas gravid capturadas provaram para ser bem sucedidos (etapa 3, Figura 1). As fêmeas capturaram em um clima mediterrânico (Adelaide) durante o outono e meses de inverno colocou vários lotes de ovos, com 24 clusters observados 19 fêmeas em um período de 20 semanas. Esses lotes de ovo, 10 foram colocados em água, os quais eram férteis e resultou na eclosão das larvas. 3 grupos de larvas foram então tomados além deste ponto e colocados no chorume de fezes de coelho, resultando em 163 ± 34 (média ± DP, N = 3) surgiram hoverflies, com nenhum viés de gênero observadas (Figura 2).
A saúde destes hoverflies de laboratório criado foi determinada por uma comparação do peso e atividade locomotora de hoverflies feminino, em comparação com indivíduos de campo capturado. Atividade motora geral foi avaliada usando um sistema de monitoramento da atividade locomotora (LAMS), conforme descrito anteriormente,39. Não há diferenças significativas no peso(Figura 3)ou atividade (Figura 3B) foram observadas entre o laboratório criados e selvagens capturados hoverflies após 4 meses em cativeiro sob nossa hibernação artificial ciclo. Quando E. tenax foram mantidos no laboratório sem o uso de um ciclo de hibernação artificial, vimos uma diminuição significativa na longevidade, com uma vida útil de 2,5-3 meses (73 ± 7 dias para 5 fêmeas) e 79 ± 4 dias para 11 machos. Quando os hoverflies foram mantidos em estado de hibernação artificial eles podiam viver mais de 12 meses.
Além disso, o efeito de longo prazo manutenção, usando nossos métodos descritos, mais foi avaliado por uma comparação dos pesos ao longo do tempo para ambos os sexos de laboratório criado hoverflies. Observamos um aumento significativo no peso ao longo de um período de 4 meses para ambos os sexos, com fêmeas consistentemente pesando mais do que suas contrapartes masculinas (p &lt; 0,0001, ANOVA de duas vias, N = 12, Figura 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig1.jpg"> Figura 1: Diagrama de fluxo descrevendo os métodos para a manutenção da população em cativeiro saudável de Tenax E.. (1) o procedimento descrito aqui começa com a coleção de qualquer larva madura de esterco de vaca (etapa 1.2) ou voando livremente hoverflies (etapa 1.3). (2) os hoverflies estão alojados em gaiolas de insetos ou sacos de plástico, dependentes de números. Eles são mantidos em um ciclo de hibernação artificial a 8-10 ° C, que é quebrado a cada 3-4 dias. (3) coletadas larvas são mantidas em seu esterco de vaca (passo 3.2). Os ovos postos no laboratório são colocados em uma pasta de fezes de coelho (passo 3.3). Quando atingir a maturidade, 3rd ínstar larvas rastejam a pó de serra circundante onde eles empupar. Eclosão ocorre depois de 6 a 10 dias, e os hoverflies de eclosed são colocados na carcaça (etapa 2). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57711/57711fig1large.jpg">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig2v3.jpg"> Figura 2:   Número e proporção sexual da tenax E. criados com sucesso de lotes individuais ovo. O dados mostram os números da tenax E. aquela eclosed de pupas desenvolvidos a partir de 3 lotes de ovos estabelecidas em nosso laboratório. Os ovos foram postos por fêmeas selvagens capturados. Os dados são cor codificada para o sexo das moscas. Não há nenhuma diferença significativa na proporção.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig3v3.jpg"> Figura 3:   Criados de avaliação da saúde da população em laboratório e campo coletados hoverflies feminino após o cativeiro de longo prazo. (A) comparação de peso entre o campo e laboratório criados capturado hoverflies feminino após 4 meses em cativeiro sob hibernação artificial (N = 12). Campo e (B) os níveis de atividade de laboratório-criados capturaram hoverflies feminino após 4 meses em cativeiro sob hibernação artificial. Atividade locomotora do hoverflies foi medida em um sistema de atividade locomotora por eles quebrando um feixe infravermelho durante o movimento. Como anteriormente, nós média a atividade de 6,7 horas no meio do dia, no segundo dia completo o sistema de Monitor de atividade locomotora39 (Ncampo pegou= 9, Nlaboratório criados= 12). A marca central de cada boxplot mostra a mediana, as bordas da caixa 25th para 75th percentis dos dados e os bigodes estendem-se desde o mínimo até o máximo dos dados.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig4v3.jpg"> Figura 4:   Comparação do efeito de manutenção de longo prazo no peso do laboratório criados hoverflies de ambos os sexos. Os dados mostram o peso hoverfly em função do tempo, mantido em cativeiro sob hibernação artificial. Como todos os hoverflies foram criados de ovos colocados em nosso laboratório (N = 12 em cada ponto de dados) e t = 0 é igual a da eclosão pupal, o tempo em cativeiro é o mesmo que a idade dos animais. A marca central de cada boxplot mostra a mediana, as bordas da caixa 25th para 75thpercentis dos dados e os bigodes estendem-se desde o mínimo até o máximo dos dados.

O objetivo geral desses procedimentos é para estabelecer, manter e atualizar uma população em cativeiro de Eristalis tenax em um ambiente de pesquisa.

Criação e manutenção de longo prazo de Eristalis tenax Hoverflies para estudos de investigação

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are ...

O objetivo geral desses procedimentos é estabelecer, manter e atualizar uma população em cativeiro de Eristalis tenax em um ambiente de laboratório. Este método permite a manutenção a longo prazo da mosca-das-flores, Eristalis tenax. As moscas-das-flores estão emergindo como modelos úteis para investigar uma série de questões científicas, incluindo o comportamento da mosca, a eficiência da polinização e os mecanismos neurais subjacentes à visão em movimento.Embora a criação comercial em larga escala para a agricultura já ocorra na Europa, não existe um protocolo padronizado para manter as populações em cativeiro para estudos científicos. Usando nossos métodos, Eristalis tenax pode ser mantido com sucesso por mais de um ano em cativeiro, e tanto os ovos quanto as larvas coletadas podem ser criados para estabelecer ou refrescar populações em cativeiro. Para iniciar uma colônia em cativeiro, moscas-das-flores adultas ou larvas maduras precisam ser coletadas.Larvas de segundo e terceiro ínstar foram encontradas anteriormente nos poços de esterco de fazendas de gado. Eles são mais fáceis de encontrar durante o início de sua fase migratória, pois estão procurando ativamente um ambiente escuro e seco para pupar. Isso tende a ser perto das bordas dos poços de esterco, onde o estrume úmido está próximo a áreas secas contendo grandes quantidades de palha.As larvas coletadas podem então ser criadas até a idade adulta em laboratório. As moscas-das-flores adultas podem ser coletadas por redes no campo, geralmente em jardins botânicos e parques onde há abundância de plantas com flores. As moscas-das-flores são mais fáceis de capturar quando estão paradas, por exemplo, quando estão se alimentando de flores ou tomando sol.Uma gaiola de insetos ou um saco plástico devem ser usados para abrigar. Isso depende do número de moscas alojadas. Menos de 20 moscas-das-flores podem ser armazenadas em um saco, enquanto números acima de 20 devem ser armazenados em uma gaiola de insetos.As moscas são alimentadas com uma mistura de pólen de abelha e mel, que é colocada em cima de bolas de algodão úmidas. Mergulhe as bolas de algodão, remova o excesso de líquido e coloque o mel e o pólen de abelha por cima. Para alojar em sacos plásticos, é importante que as bolas de algodão estejam úmidas, mas não excessivamente saturadas, pois qualquer acúmulo de água dentro do saco pode ser prejudicial às taxas de sobrevivência.Por outro lado, para alojar em uma gaiola de insetos, os lados da malha permitem que ocorra uma evaporação significativa. Como tal, as bolas de algodão podem ser colocadas em um recipiente raso e precisam estar totalmente saturadas para evitar a secagem excessiva. Depois de permitir que as moscas-das-flores se alimentassem por um mínimo de quatro horas em temperatura ambiente, elas foram colocadas na geladeira a oito a 10 graus Celsius e mantidas na escuridão total.Esta faixa de temperatura induz a hibernação artificial. Para garantir a longevidade, nosso protocolo exige uma rotina de manutenção rigorosa, que envolve quebrar a hibernação artificial e permitir que as moscas-das-flores se alimentem e se limpem. A cada três a quatro dias, as moscas-das-flores eram levadas à temperatura ambiente, transferidas para um novo saco plástico ou gaiola de insetos limpa, fornecidas com comida e água frescas e mantidas em temperatura ambiente por seis a oito horas.Isso permitiu que a alimentação e a higiene ocorressem. A transferência de moscas-das-flores foi feita manualmente para pequenos números, como demonstrado aqui, ou utilizando fototaxia para números maiores. Idealmente, esta etapa deve ser feita nos primeiros minutos após a remoção das moscas-das-flores da geladeira, pois elas ainda estarão em estado de hibernação e muito mais fáceis de manusear.Para utilizar a resposta fototática de Eristalis tenax e mover com eficiência um grande número de moscas-das-flores, primeiro conecte a gaiola antiga a uma gaiola de insetos nova e limpa, prepare os alimentos frescos e coloque-os dentro da gaiola. Prenda as duas gaiolas juntas, garantindo que haja espaço suficiente para as moscas-das-flores rastejarem. Cubra a gaiola velha com tecido opaco, tomando cuidado para dobrá-la nas laterais e evitar a entrada de luz.As moscas-das-flores se movem rapidamente em direção à luz e entram na gaiola limpa dos insetos. A oviposição pode ocorrer na geladeira ou na hora da alimentação, em temperatura ambiente. Imediatamente após a identificação dos ovos, coloque-os em uma pequena placa de Petri com água da torneira.Os ovos normalmente eclodem ao longo de dois a três dias. O movimento será muito aparente entre as larvas de primeiro ínstar recém-eclodidas. O movimento também é uma indicação de que os ovos estão prontos para serem transferidos para a configuração de criação.Os ovos chocados devem ser transferidos para uma pasta de fezes de coelho e água. Para criar a pasta, forre um balde com um saco plástico para garantir fácil descarte após o uso. Três quartos enchem o balde forrado com fezes de coelho.Despeje água sobre o espaço restante até que o balde esteja quase cheio. A pasta precisará ser verificada a cada dois ou três dias para garantir que a mistura ainda esteja úmida. Complete a pasta com água da torneira adicional se a mistura parecer seca.Coloque o balde dentro de uma banheira de plástico maior cheia de aparas de madeira. As aparas de madeira devem envolver completamente o balde e se estender até a borda, permitindo assim que as larvas do terceiro ínstar rastejem para dentro da serragem para se transformarem em pupas. A configuração agora está pronta para que as larvas recém-eclodidas do primeiro ínstar sejam transferidas.Feito isso, cubra a configuração com um mosquiteiro de camada dupla para evitar que larvas ou moscas-das-flores recém-emergentes escapem. As larvas de Eristalis tenax são comumente conhecidas como larvas de cauda de rato. Isso se deve à estrutura semelhante a uma cauda em sua extremidade posterior.Na verdade, este é um tubo de respiração especializado chamado sifão. Isso pode se estender várias vezes o comprimento do corpo para permitir que as larvas respirem ar mesmo permanecendo completamente submersas. O sifão que perfura a superfície, ou as larvas ocasionais que se alimentam no topo, são frequentemente visíveis dentro da pasta.Observe também que há uma mudança na consistência da pasta. Isso ocorre porque as larvas se desenvolveram e ajudaram na decomposição da mistura de fezes de coelho. Também podemos ver os sinais reveladores de que as larvas do terceiro ínstar estão rastejando para fora da lama e para as aparas de madeira para se transformarem em pupas.Isso é aparente, pois há muitas trilhas visíveis na borda do balde e uma descoloração significativa das aparas de madeira. Esperamos ver essas mudanças 15 a 20 dias após as larvas recém-eclodidas serem colocadas na pasta. Esses sinais são uma boa indicação de que é hora de começar a procurar pupas.Retire o balde e peneire as aparas de madeira, removendo as pupas. Coloque as pupas em um recipiente seco com algumas aparas de madeira e, em seguida, em uma gaiola de insetos equipada com comida e água. Dentro de seis a 10 dias após a pupação, a eclosão ocorrerá e as moscas-das-flores recém-emergentes poderão ser vistas.Após a eclosão, as asas não estarão totalmente funcionais. No entanto, dentro de algumas horas, as asas se desenrolarão e secarão. As moscas-das-flores em breve serão capazes de voar.Uma vez que isso tenha ocorrido e os adultos recém-emergidos tenham tido um mínimo de seis horas para se alimentar e limpar, eles podem ser colocados em um alojamento limpo com comida e água e colocados na geladeira para induzir o ciclo de hibernação artificial. Nossas técnicas para criar ovos postos por fêmeas grávidas capturadas provaram ser bem-sucedidas com três lotes de ovos criados até a conclusão, resultando em uma média de 163 mais ou menos 33,65 moscas-das-flores emergidas sem viés de gênero observado. A saúde dessas moscas-das-flores criadas em laboratório foi então determinada por uma comparação do peso e da atividade locomotora das moscas-das-flores fêmeas em comparação com os indivíduos capturados em campo.Não foram observadas diferenças significativas de peso ou atividade entre as moscas-das-flores criadas em laboratório e capturadas na natureza. Além disso, o efeito da manutenção a longo prazo usando nossos métodos descritos foi avaliado por uma comparação de pesos ao longo do tempo para ambos os sexos de moscas-das-flores criadas em laboratório. Observamos um aumento significativo de peso em um período de quatro meses para ambos os sexos, com as fêmeas pesando consistentemente mais do que seus colegas masculinos.Desenvolvemos uma estratégia de três vias que mantém uma população saudável para estudos visuais e comportamentais, capturando e mantendo com sucesso moscas-das-flores adultas, colhendo larvas maduras de fazendas de gado e criando a prole de fêmeas selvagens acasaladas.

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Um procedimento para a criação de moscas estáveis (Stomoxys calcitrans) é apresentado. O procedimento usa materiais localmente disponíveis para suprimentos, equipamentos e componentes de dieta.

Laboratório de criação de moscas estáveis e outros Muscoid Diptera

Aqui, apresentamos protocolos para 1) a propagação em cativeiro laboratorial da borboleta azul miami ameaçada pelo governo federal(Cyclargus thomasi bethunebakeri) e 2) avaliando informações básicas da história da vida, como tempo de desenvolvimento imaturo e número de estádios larvais. Ambos os métodos podem ser adaptados para uso com outros programas de conservação ex situ.

Programas de propagação em cativeiro de borboletas em risco para melhorar o conhecimento da história da vida e técnicas eficazes de conservação ex situ

Este protocolo usa impressoras tridimensionais (3D) e cortadores a laser encontrados em espaços maker, a fim de criar um design de moinho de voo mais flexível. Usando essa tecnologia, os pesquisadores podem reduzir custos, aumentar a flexibilidade do design e gerar trabalhos reprodutíveis na construção de suas fábricas de voo para estudos de voo de insetos amarrados.

Construindo uma usina de voo aprimorada para o estudo do voo de insetos amarrados

O presente protocolo descreve o método de criação de insetos de peste tortricida nos laboratórios. Os procedimentos para distinguir o sexo dos insetos e extrair ácidos nucleicos para sequenciamento de alto rendimento são estabelecidos usando duas pragas tortricidas.

Criação em massa e estudos moleculares em insetos de peste de Tortricidae

Este artigo descreve a manutenção laboratorial (incluindo acasalamento e alimentação) da mosca díptera inferior Bradysia (Sciara) coprophila.

Manutenção laboratorial da Bradisia (Sciara) coprophila da mosca dos dípteros inferiores: um novo / antigo organismo modelo emergente

Aprenda a criar e manter populações de Eristalis tenax em cativeiro para estudos de comportamento e neurociência. Este protocolo padronizado permite a manutenção de moscas por mais de um ano em laboratório.

Criação e manutenção de longo prazo de Eristalis tenax Hoverflies para estudos de investigação

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