Comparação de alta resolução de frequências de conjugação bacteriana

Este método pode ajudar a responder perguntas-chave no campo da microbiologia sobre a frequência com que o DNA plasmídeo pode ser espalhado entre diferentes bactérias. A principal vantagem dessa técnica é que, reduzindo o fundo, podemos detectar pequenas diferenças na frequência de conjugação com alta resolução. Demonstrando o procedimento será Kosuke Yanagiya, um estudante de pós-graduação do meu laboratório.

Para calcular a frequência de conjugação pelo número mais provável, filtrar um mililitro de uma cultura de doadores durante a noite com um mililitro de uma cultura receptora durante a noite por 45 minutos a 30 graus Celsius, como apenas demonstrado. Enquanto a co-cultura está incubando, dilui seriamente as culturas originais de doadores e receptores para chapeamento em triplicado no caldo de Luria doador, ou LB, mais kanamycin, ou lb receptor mais placas de gentamicina para uma cultura de dois dias a 30 graus Celsius. No final da incubação, resuspenque a cultura no filtro em LB estéril contendo kanamycina e gentamicina para diluição serial em uma placa de cultura celular de 96 poços em quadruplicato.