Caracterização das respostas de isotipo de imunoglobulina Timo-dependentes e Timo-independente nos ratos usando ensaio enzima-lig da imunoabsorção

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da imunologia sobre respostas de anticorpos dependentes e independentes induzidas por imunização de antígenos, bem como ativação de células B e reações do centro germinativo. A principal vantagem dessa técnica é que ela fornece medições confiáveis e quantitativas de resposta ao isotipo de Ig com uma comparação direta da ativação de células B e imunidade humoral em camundongos. Para imunização com polissacarídeo TNP, carregue uma seringa de insulina mililitro por camundongo com 100 microlitros de solução de antígeno recém-preparada e insira a agulha no quadrante inferior direito de cada animal em um ângulo de aproximadamente 30 graus para evitar a injeção no órgão inferior.

Quando todos os camundongos tiverem sido injetados, devolva os animais às suas gaiolas para serem alojados em uma instalação específica livre de patógenos. Nos momentos experimentais apropriados, coletar 150 a 200 microlitros de sangue de cada animal imunizado por sangramento retro-orbital e permitir que as amostras coagulem em temperatura ambiente por uma a duas horas. No final da incubação, centrifugue as amostras de sangue coagulado e transfira o soro transparente do topo de cada coágulo sanguíneo para um tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 mililitro.