Name: Gerar um modelo de câncer de mama metastático murino ortotópico e realizando a mastectomia Radical murino (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 5 s
Description: Aprenda a criar um modelo ortotópico murino de câncer de mama metastático com alta taxa de tumorigênese e baixa recorrência local após mastectomia. Este método utiliza imagem por bioluminescência para quantificar a carga tumoral em tempo real.

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Este trabalho foi apoiado pela concessão de NIH R01CA160688 e Susan G. Komen Fundação investigador iniciou pesquisas concessão (IIR12222224) aos ratos K.T. bioluminescência imagens foram adquiridas pelo recurso compartilhado Imaging translacional recurso compartilhado em Roswell Park Comprehensive Cancer Center, que foi apoiada pelo câncer centro apoio Grant (P30CA01656) e concessão de instrumentação compartilhada (S10OD016450).

Aprovação do Comité de uso e Roswell Park abrangente Cancer Center institucional Animal Care obteve-se para todos os experimentos.
Nota: Nove a doze semanas de idade fêmea BALB/c os ratos são obtidos. 4T1-luc2 células, uma rato adenocarcinoma mamário linhagem celular derivada de camundongos BALB/c que foi projetada para expresso do luciferase, são usadas. Estas células são cultivadas em meio de 1640 Roswell Park Memorial Institute (RPMI) com 10% de soro fetal bovino (FBS).
1. preparação dos instrumentos
<ol><li>Descongele uma mistura congelada proteína gelatinosa (por exemplo, Matrigel) no gelo em uma capa de cultura de tecidos.</li>
	<li>Limpar e autoclave dois conjuntos de instrumentos cirúrgicos (microdissection tesoura pinça Adson e um porta-agulha) antes da cirurgia. Prepare 5-0 esterilizado suturas de seda e secar esterilizante (quando seriais cirurgias são planejadas).</li>
	<li>Cortar o cabelo no peito médio dos ratos usando um clipper e marcar os ratos para identificação, perfurando o ouvido antes do momento da cirurgia.</li>
	<li>
Prepare a mesa de procedimento, que pode ser usada imediatamente para a operação.
	<ol>
<li>Espalhar um absorvente e corrigir os cantos com fita, consertar cones de nariz anestesia com fita, coloque esterilizante e desinfetante (Clorexidina, iodo e 75% de etanol), ao lado do espaço de manobra e coloque os ratos em ordem de funcionamento.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. preparação das pilhas (para 10 ratos)
Nota: As células devem ser inoculadas dentro de 1h após serem soltos do prato para evitar a viabilidade celular diminuída. Especificamente, a suspensão de células deve ser misturada a mistura de proteína gelatinoso dentro de 15min após desanexação das células do prato para manter a sua viabilidade.
<ol><li>Cultura de células 4T1-luc2, uma linhagem de células de adenocarcinoma mamário rato expressando luciferase, na mídia RPMI 1640 com 10% FBS numa incubadora umidificado a 37 ° C em 5% CO2.</li>
	<li>Lave as células aderentes 4T1-luc2 em um prato de 10 cm com fosfato salino (PBS) utilizando uma pipeta sorológica 10ml. Adicione 1 mL de tripsina 0,25%, com uma pipeta P1000 e, em seguida, incubar a amostra a 37 ° C por 5 min. Em seguida, adicione 4 mL de mídia de crescimento (RPMI-1640 com 10% FBS) usando um 5ml serológico Pipetar e transferir a suspensão de células para um tubo cônico de 15 mL em uma capa de cultura de tecidos. Centrifugar a suspensão de eritrócitos a 180 x g por 5 min.</li>
	<li>Aspirar o sobrenadante e ressuspender as células em 2 mL de PBS; em seguida, conte as células usando o hemocytometer.</li>
	<li>Suspenda a 2 x 106 células 4T1-luc2 40 μL de frio PBS (pH 7,4, 4 ° C) do bairro de cultura de tecidos.</li>
	<li>Misture a suspensão de células de 40 μL com 360 μL da mistura gelatinosa da proteína em um tubo de microcentrifugadora de 1,5 mL no gelo do capuz de cultura de tecidos. Nota: A concentração final é 1 x 10520 μL (1:9 PBS: mistura gelatinosa da proteína). Para o modelo ortotópico (sem mastectomia), 1 x 10420 μL da concentração final foi utilizado, para evitar chegar a critérios de eutanásia (tumor tamanho > 2 cm) dentro de duas semanas.</li>
</ol>3. inoculação de células de câncer
<ol><li>Coloque os ratos na câmara de indução de anestesia com fluxo de oxigênio de isoflurano e 0,2 L/min 2-4%, até os ratos respirar calmamente (2 – 3 min).</li>
	<li>Segure o mouse e injetar buprenorfina 0,05 mg/kg em seu ombro, por via subcutânea.</li>
	<li>Confirme a anestesia adequada pela falta de reação a uma pitada de dedo do pé. Inserir o nariz do rato no orifício da máscara do mouse, que permite que a anestesia inalatória com isoflurano 2-4% e 2 L/min de fluxo de oxigênio ligado a uma unidade de cilindro do carvão vegetal.</li>
	<li>Conter os membros do rato utilizando fita de laboratório e esterilizar sua pele usando clorexidina, iodo e 75% de etanol, usando cotonetes.</li>
	<li>Faça uma incisão de pele de 5 mm no meio da parede torácica anterior utilizando microdissection estéril tesoura, elevador, o lado direito junto a incisão de pele e retire a pele da parede torácica, usando a tesoura e então, inverta a pele para expor a direita #2 do tecido mamário.</li>
	<li>Cuidadosamente, injete 20 μL da suspensão de células de câncer usando uma seringa de insulina 1 mL com agulha 28,5 G para a almofada de gordura sob visão direta através da ferida. Nota: A agulha atravessa a ferida, não a pele. Mantenha segura a agulha no bloco de gordura para 5 antes de s para puxá-lo para fora, que permite que o tempo para a mistura de proteína gelatinoso para solidificar.</li>
	<li>Feche as incisões na pele por costura, usando suturas não absorvíveis esterilizados 5-0.</li>
	<li>Após a cirurgia, devolver os animais para uma gaiola limpa e monitorá-los até que eles se recuperaram e estão movendo-se livremente (depois de ~ 1-2 min). Se um animal não parece estar em boa saúde até 24 horas após cirurgia, administre a buprenorfina (0,2 mg/kg).</li>
	<li>Remover as suturas sob anestesia (ver passo 3.1) 7D após a cirurgia.</li>
</ol>4. mastectomia
Nota: O momento da mastectomia é muito importante. Se for feito muito cedo, metástase pulmonar não ocorre. Se for feito muito tarde, o tumor primário invadiu vasos sanguíneos, que fazem uma completa ressecção oncológica desafiador. Assim, vários pontos de tempo foram testados para mastectomia determinar a qual ponto de tempo produzido o equilíbrio adequado na espera de metástase antes ressecção tornou-se muito desafiador. Depois de fazê-lo em mais de 50 experimentos de rato, demonstrou-se que a mastectomia em 8 dias após a inoculação de células de câncer (ou quando o tamanho do tumor atinge 5 mm) era o ideal tempo pontos para alcançar o equilíbrio13.
<ol><li>Anestesiar um mouse com 2-4% inalado isoflurano e injetar buprenorfina (consulte as etapas 3.1 e 3.2).</li>
	<li>Conter o mouse e esterilizar sua pele (ver passo 3.4).</li>
	<li>Faça uma incisão de pele de 5 mm 2 mm à esquerda da cicatriz cirúrgica que foi feita para a inoculação de células de câncer inicial, usando a tesoura microdissection. Estender a incisão em direção a raiz do membro anterior para remover o tumor, a pele incluindo a cicatriz cirúrgica e a lesão em contato com o tumor, bem como a bacia linfonodal axilar em que na maioria das vezes não visível do linfonodo existe no momento do mastect e13. Tenha atenção para não danificar a veia axilar.</li>
	<li>Feche os defeitos da pele por costura, usando suturas não absorvíveis esterilizados 5-0 em forma de "Y".</li>
	<li>O mesmo que no passo 3.8, retornar o mouse para uma gaiola limpa e monitor até que eles recuperaram.</li>
	<li>Remover as suturas sob anestesia (ver passo 3.1) 7 dias após a cirurgia.</li>
</ol>5. bioluminescente quantificação do Tumor primário (ortotópico inoculação sem mastectomia) ou metástase pulmonar (modelo de mastectomia)
Nota: Para a quantificação de carga do tumor primário, a bioluminescência é medido 2 x por semana a partir do dia após a inoculação ortotópico. Para a quantificação de metástase pulmonar, a bioluminescência é medido 2 x por semana a partir do dia após a mastectomia.
<ol><li>D-luciferina, dissolva em fosfato salino de Dulbecco (DPBS) a uma concentração final de 15 mg/mL em uma capa de cultura de tecidos. Alíquota-a em luz blindado 1,5 mL microcentrifuge tubos. Armazenar a solução diluída a-80 ° C. Nota: Para um mouse de 20 g, 200 µ l de D-luciferina diluído é necessária.</li>
	<li>Abra o software de imagem e clique em inicializar. Nota: Demora cerca de 15 min para esfriar o dispositivo de carga acoplada (CCD). Quando o CCD atinge a temperatura programada, a cor da barra de temperatura muda de vermelho para verde.</li>
	<li>Anestesiar os ratos com 2-4% de isoflurano em uma câmara de indução dedicado antes da imagem latente (ver passo 3.1).</li>
	<li>Pese os ratos.</li>
	<li>Injete 150 mg/kg D-luciferina intraperitonealmente no ponto do meio do abdômen, usando uma agulha de 28,5 G.</li>
	<li>Cabe a cada rato com um cone de nariz dentro do sistema da imagem latente na posição supina (lugar um máximo de cinco ratos ao mesmo tempo). Manter a anestesia no 1-3% de isoflurano (em 100% de oxigênio) através dos cones de nariz durante a imagem latente.</li>
	<li>
Capture uma imagem a cada 5 min para detectar a bioluminescência de pico por 50 min (ou até a bioluminescência pico confirmado).
	<ol>
<li>Selecione a luminescência como Auto, Binning como meioe o campo de visão como D.</li>
		<li>Clique em Acquire para capturar a imagem.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Retornar os ratos para seus cage(s) e monitorá-los até que eles recuperaram (ver passo 3.8).</li>
</ol>6. pulmão metástase Tumor fardo quantificação por Ex Vivo Imaging
Nota: Quantificação de metástase pulmonar é aplicável para inoculação ortotópico com e sem modelos de mastectomia. No modelo de mastectomia, ex vivo de imagem ou sobrevivência observação é escolhida, dependendo da finalidade. No modelo de inoculação (sem mastectomia) ortotópico, a maioria dos casos produzir critérios de eutanásia de tamanho de tumor primário (> 2 cm) aproximadamente 21 dias após a inoculação.
<ol><li>Quantificar a lesão metastática pulmonar 21 dias após a inoculação de células de câncer por ex vivo de imagem.</li>
	<li>Anestesiar os ratos com 2-4% de isoflurano em uma câmara de indução dedicado (ver passo 3.1).</li>
	<li>Pese os ratos.</li>
	<li>Injetar 150 mg/kg D-luciferina intraperitonealmente (consulte a etapa 5.6).</li>
	<li>Eutanásia em ratos por deslocamento cervical, 15 min após as injeções.</li>
	<li>Abrir o abdômen, cortando a pele e peritônio, no meio do abdômen, usando curvas tesoura de Mayo. Estenda a incisão para tanto à direita como à esquerda. Retire o fígado com pinça até o diafragma é visualizado; em seguida, corte o diafragma.</li>
	<li>Usando a tesoura Mayo curva, corte as costelas bilaterais de caudal (12ª costela) para cefálica (1º costelas) para expor os pulmões lançando a parede anterior do tórax.</li>
	<li>Identificar o esôfago torácico, que se parece com um cabo conectando os pulmões à espinha, levantando os pulmões usando fórceps e, em seguida, corte o esôfago usando a tesoura microdissection.</li>
	<li>Levantar as bilaterais pulmões e coração usando fórceps (aplicação de tração, puxando para baixo, na direção de cefálica à caudal) e, em seguida, cortar a traqueia e grandes vasos para o ápice do pulmão na cefálica, usando tesouras microdissection. Nota: Isto permite o isolamento do pulmão e do coração do corpo.</li>
	<li>Remova o coração o pulmão usando uma tesoura microdissection.</li>
	<li>Colocar os pulmões em uma placa de Petri de 10 cm.</li>
	<li>Capturar a imagem de bioluminescência (consulte as etapas 5.7.1 e 5.7.2) 5 min após eutanásia (20 min após a injeção de luciferina).</li>
</ol>

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</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Na última década, temos vindo a estabelecer vários modelos de murino de câncer, incluindo mama câncer modelos3,7,13,16,20,21. Anteriormente, temos demonstrado que a inoculação de ortotópico de células de câncer de mama no tecido da glândula mamária, sob visão direta produziu um tumor maior com menor variabilidade de tamanho e...

Modelos animais desempenham um papel chave na investigação do cancro. Quando uma hipótese é comprovada in vitro, devem ser testado in vivo para avaliar a sua relevância clínica. Metástase e progressão de câncer muitas vezes melhor capturados por modelos animais em comparação com modelos in vitro, e é essencial para testar uma nova droga em um modelo animal, como um estudo pré-clínicos para desenvolvimento de drogas1,2. No entanto, os detalhes técnicos das experiências com animais muitas vezes não são bem descritos em artigos publicados, tornando-se desafiador para reproduzir o modelo com sucesso. Com efeito, os autores que criaram estes modelos de inoculação e mastectomia ortotópico passaram longos e rigorosos processos de tentativa e erro. A taxa de sucesso de tumorigênese após inoculação de células de câncer é um dos fatores-chave para determinar o sucesso e a eficiência de um animal estudo3. A linha de celular e o número de células para inocular, local de inoculação e a tensão dos ratos são fatores importantes. É sabido que existem enormes variações nos resultados das experiências com animais devido às diferenças individuais, em comparação com técnicas in vitro. Portanto, usar um modelo bem estabelecido com uma norma técnica é importante para obter resultados estáveis, para melhorar a eficiência das experiências com animais e para evitar resultados enganosos.
Este documento fornece técnicas bem estabelecidas4 para gerar modelos de rato mama câncer ortotópico e mastectomia. Os objectivos destes métodos são 1) para imitar a progressão do câncer de mama humano e cursos de tratamento e 2) para conduzir experimentos in vivo com maior eficiência e maiores taxas de sucesso em comparação com outra inoculação de câncer de mama ou técnicas de mastectomia. Em ortotópico inoculação de células de câncer, para imitar a progressão do câncer de mama humano, nós escolhemos a almofada de gordura mamária #2 como um site de inoculação, que está localizado no peito. Na maioria dos estudos, células de câncer de mama são inoculadas subcutaneamente5. Esta técnica não requer cirurgia e, assim, é simples e direta. No entanto, o microambiente subcutâneo é bastante diferente do microambiente da glândula mamária, o que resulta na progressão do câncer diferentes e perfis molecular até6,7. Alguns estudos utilizam a glândula mamária #4, que está localizada no abdômen, como um local de inoculação6. No entanto, uma vez que as glândulas mamárias #4 estão localizadas no abdômen, o padrão mais comum de metástase é Carcinomatose peritoneal7, que ocorre com menos de 10% do câncer de mama metastático8. Câncer de mama, gerado pela técnica apresentada aqui, na glândula mamária #2, metastatiza para o pulmão, que é um do mais comum da mama câncer metastático sites9.
Com esta técnica, o objetivo é também alcançar uma maior taxa de tumorigênese com variabilidade de tamanho de tumor mínima em comparação com outras técnicas de inoculação de câncer de mama. Para isso, células cancerosas, suspendidas em uma mistura gelatinosa da proteína são inoculadas sob visão direta através de uma incisão da parede torácica anterior mediana. Esta técnica produz uma taxa alta de tumorigênese com menor variabilidade no tamanho do tumor e a forma em comparação com injeção subcutânea ou não-cirúrgicos, como relatado anteriormente3,7.
Também apresentamos uma técnica de mastectomia radical de rato em que o tumor de mama ortotópico é ressecado com os tecidos circundantes e linfonodos axilares. Na prática clínica, o padrão de atendimento para pacientes de câncer de mama sem doença metástase é mastectomia10,11. Antes de uma mastectomia, metástase linfonodal axilar é pesquisado por biópsia de linfonodo sentinela e imagens. Se não há nenhuma evidência de metástase linfonodal axilar, o paciente é tratado então com uma mastectomia total ou parcial, em que a ressecção linfonodal axilar é omitida. Mastectomia total é uma técnica de ressecção em bloco, o câncer de mama com o tecido do peito inteiro enquanto mastectomia parcial é a ressecção de câncer de mama, com uma margem de tecido mamário normal apenas, assim conservando o restante tecido mamário normal na paciente. No entanto, pacientes que preservar o restante tecido mamário normal após uma mastectomia parcial requerem radioterapia pós-operatória, para evitar a recorrência local10. Os pacientes que têm metástase linfonodal axilar realizar mastectomia radical, que remove o câncer de mama com normal todos os seios linfáticos tecido e axilar e invadiram os tecidos pt bloco10,11. No modelo de rato, vigilância por radiação de metástase e/ou pós operatório linfonodal axilar não é praticável ou razoável. Assim, utilizamos a técnica de mastectomia radical para evitar metástase linfonodal axilar ou local.
Inoculação de células de câncer através da veia da cauda é o mais comum pulmão metástase do mouse modelo12, o so-called "metástase experimental". Este modelo é fácil de gerar e não requer cirurgia; no entanto, não imitar a progressão de câncer de mama humano que pode resultar em um comportamento diferente de doença metastática. Para imitar o curso de tratamento de câncer de mama humano onde metástase ocorre frequentemente após a mastectomia, o tumor primário é removido após a inoculação de células de câncer ortotópico. Esta técnica produz menos recorrência local em comparação com ressecção simples de tumor, como relatado anteriormente,13e é útil para novela terapêutica, estudos pré-clínicos e para estudos de pesquisa do câncer de mama metastático. As técnicas descritas aqui são aplicáveis para a maioria dos experimentos de modelo mama câncer ortotópico. No entanto, é importante considerar que a mistura de proteína gelatinoso pode afetar o microambiente e cirurgia pode afetar a resposta de stress/imunológico14. Portanto, pesquisadores estudando o microambiente e/ou a resposta imune/stress devem estar cientes do potencial de fatores de confusão.

<table><tbody><tr><td>Tesoura de micro dissecação</td><td>Roboz</td><td>RS-5983</td><td>Para inoculação de células cancerígenas e masstectomia</td></tr><tr><td>Adson Forceps</td><td></td><td>Roboz RS-5233</td><td>Para inoculação de células cancerígenas e masstectomia</td></tr><tr><td>Porta-agulha</td><td>Roboz</td><td>RS-7830</td><td>Para inoculação de células cancerígenas e masstectomia</td></tr><tr><td>Mayo</td><td>Roboz</td><td>RS-6873</td> Para <td></td></tr><tr><td>suturas</td> <td>de seda ex vivo 5-0Olhe</td><td>774B</td><td>Para inoculação de células cancerígenas e masstectomia</td></tr><tr><td>Esterilizante seco (Germinador 500)</td> <td>Braintree Scientific</td><td>GER 5287-120V</td><td>Para inoculação de células cancerígenas e masstectomia</td></tr><tr><td>Clipper</td><td>Wahl</td><td>9908-717</td><td>Para inoculação de células cancerígenas e masstectomia</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>Para inoculação de células cancerígenas</td></tr><tr><td>D-Luciferina, sal</td> <td>de potássioGOLD-Bio</td><td>LUCK-1K</td><td>Para quantificação de bioluminescência</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Insitute 1640</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td>Para cultura de células</td></tr><tr><td>Fetal Bovino Serub</td><td>Gibco</td><td>10437028</td><td>Para cultura de células</td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Para cultura de células</td></tr></tbody></table>

gerar um modelo de câncer de mama metastático murino ortotópico e realizando a mastectomia radical murino

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

Modelos de rato in vivo para avaliar a progressão do câncer de mama são essenciais para pesquisa do câncer, incluindo o desenvolvimentos de drogas pré-clínicos. No entanto, a maioria dos detalhes práticos e técnicos é comumente omitida em artigos publicados e que, portanto, torna difícil reproduzir os modelos, particularmente quando envolve técnicas cirúrgicas. Tecnologia de bioluminescência permite para a avaliação de pequenas quantidades de células de câncer, mesmo quando um tumor não é palpável. Utilizando as células cancerosas do luciferase-expressando, estabelecemos uma técnica de inoculação ortotópico de cancro da mama com uma taxa elevada de tumorigênese. Metástase pulmonar é avaliada utilizando uma técnica ex vivo . Nós, então, estabelecer um modelo de mastectomia com uma taxa baixa de recorrência local para avaliar a carga de tumor metastático. Aqui, descrevemos, em pormenor, as técnicas cirúrgicas de implantação ortotópico e mastectomia por câncer de mama, com uma taxa elevada de tumorigênese e taxas de recidiva local baixo, respectivamente, para melhorar a eficiência de modelo de câncer de mama.

A finalidade do modelo de ortotópico é imitar a progressão do câncer humano (ou seja, o crescimento do tumor primário seguido por metástase linfonodal e metástases de pulmão então distante)15. Após a inoculação de células de câncer, a bioluminescência é quantificada regularmente (duas a três vezes / semana) (figura 1A). A bioluminescência nos pulmões é menor do que a lesão primária e mais profundo. A bioluminescência reflete p...

Apresentamos um modelo de câncer de mama murino ortotópico e modelo de mastectomia radical com tecnologia de bioluminescência para quantificar a carga do tumor para imitar a progressão do câncer de mama humano.

Gerar um modelo de câncer de mama metastático murino ortotópico e realizando a mastectomia Radical murino

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...

Este método pode ajudar a responder perguntas-chave no campo do câncer de mama sobre como imitar a progressão e o tratamento do câncer de mama humano em um modelo de camundongos. A principal vantagem deste modelo de câncer de mama de camundongos é que ele tem uma alta taxa de tumorgênese após a implantação ortotópica e uma baixa taxa de recidiva local após a mastectomia. Comece confirmando a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em um rato fêmea anestesiado e gravando os membros do animal em uma placa cirúrgica.O uso de cotonetes estéreis esterilizam a área cirúrgica com clorexidina, iodo e 75% de etanol. E faça uma incisão de pele de cinco milímetros no meio da parede do peito anterior. Em seguida, levante o lado direito da pele adjacente à incisão e use uma tesoura de microdisseção estéril para separar a pele da parede do peito.Inverta a pele para expor o número certo dois almofada de gordura mamária e use uma seringa de insulina de um mililitro equipada com uma agulha calibre 28,5 para injetar cuidadosamente 20 microliters de suspensão celular cancerosa através da ferida na almofada de gordura. Segure a agulha dentro da almofada de gordura por cinco segundos para permitir que a mistura de proteína de células cancerígenas gelatinosas se solidifique antes de remover a agulha, e feche a incisão com suturas nãoabsorbáveis de 5-0. Em seguida, coloque o animal em uma gaiola limpa com monitoramento até a recumedência total.Para realizar a mastectomia oito dias após a inoculação do câncer, prepare o camundongo para cirurgia como acabou de demonstrar, e faça uma incisão de pele de cinco milímetros dois milímetros à esquerda da cicatriz cirúrgica da inoculação da célula cancerosa. Estenda a incisão em direção à raiz do membro dianteiro para remover o tumor, e a pele, incluindo a cicatriz cirúrgica, e a lesão em contato com o tumor, e a bacia do linfonodo axilar em que normalmente não há linfonodos visíveis no momento da mastectomia. Em seguida, feche os defeitos da pele com suturas nãoabsorbáveis de 5-0 na forma de um Y.E devolva o animal à sua gaiola com monitoramento até a incumbência total.Para quantificação de metástase pulmonar 21 dias após a inoculação injetar 150 miligramas por quilograma de IP D-Luciferin 15 minutos antes da eutanásia. E use uma tesoura mayo curva para abrir a pele e o peritônio no abdômen médio. Pressione o fígado até que o diafragma possa ser visualizado, e corte o diafragma e as costelas bilaterais de caudad a cefálica.Gire a parede do tórax anterior para expor os pulmões e levante os pulmões para identificar o esôfago torácico, que parece um cordão ligando os pulmões à coluna. Corte o esôfago com tesoura de microdisseção e use fórceps para puxar os pulmões bilaterais e o coração em direção ao caudad. Em seguida, corte a traqueia e os principais vasos para o ápice pulmonar no cephalad e coloque os pulmões em uma placa de Petri de 10 centímetros para imagens bioluminescentes.Use a tesoura para remover o coração do tecido pulmonar. A partir de cerca de oito dias após a inoculação da célula cancerosa da almofada de gordura mamária, a bioluminescência nos pulmões é cada vez menor do que na lesão primária que reflete a carga tumoral primária em camundongos vivos. A medição do tamanho do tumor com pinças permite a estimativa do volume do tumor in situ.Este modelo de mastectomia também permite o monitoramento da carga tumoral metastática em série sem ter que eutanásiar os animais. A carga tumoral das metástases pulmonares também pode ser quantificada por imagens ex vivo, mas a limitação é que os camundongos devem ser eutanizados. A sobrevivência do rato após o tratamento cirúrgico também pode ser monitorada como um ponto final clínico traduzível.Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores da área do câncer de mama explorarem não apenas o desenvolvimento de novos medicamentos, mas também a pesquisa sobre câncer de mama em geral.

generating-murine-orthotopic-metastatic-breast-cancer-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

O vídeo demonstra a técnica de inoculação ortotópica do câncer de mama em um modelo de camundongo. Esta técnica produz uma alta taxa de tumorigênese com menos variabilidade no tamanho e forma do tumor em comparação com a injeção subcutânea ou não cirúrgica.

Injeção ortotópica: implante de células cancerígenas específicas do tecido em um camundongo adulto

Este vídeo descreve uma técnica de mastectomia radical, que é usada para a remoção cirúrgica de toda a glândula mamária de um camundongo para estudar a progressão do câncer.

Mastectomia radical: remoção cirúrgica de toda a glândula mamária de um camundongo para estudar a progressão do câncer

O cancro é uma doença complexa que é influenciada pelo tecido circundante do tumor, bem como pro- local e anti-inflamatórias mediadores. Portanto, os modelos de injeção ortotrópicas, ao invés de modelos subcutâneos pode ser útil para estudar a progressão do câncer de uma forma que melhor mimetiza patologia humana.

Injeção Orthotopic de células cancerosas da mama na mamária Fat Pad de Ratos para o Estudo de crescimento tumoral.

Um modelo de tumor primário do cancro da mama ortotópico e remoção cirúrgica do tumor primário para prolongar a vida do rato para gerar metástase espontânea são descritos. O crescimento do tumor e progressão são monitorados e quantificado por imagens de fluorescência da luciferase.

Um modelo de camundongo ortotópico de câncer de mama espontânea metástase

Para esclarecer o processo de várias etapas de difusão peritoneal de carcinoma dos ovários, o presente estudo apresenta um modelo experimental murino de desenvolvimento do tumor original e metástases através de inoculação peritoneal ortotópico com essas células tumorais.

Murino Experimental Modelo de desenvolvimento do tumor original e Peritoneal Metástase<em&gt; via</em&gt; Ortotópico injetar células do ovário Carcinoma

Não faltam modelos pré-clínicos que avaliam a terapia adjuvante visando metástases de câncer de mama. Para abordar isso, desenvolvemos um modelo murino de metástase de adenocarcinoma mamário pulmonar de novo , em que as terapias administradas na configuração adjuvante (ressecção pós-cirúrgica de tumores primários) podem ser avaliadas quanto à eficácia no impacto de metástases pulmonares previamente semeadas.

Procedimentos cirúrgicos e metodologia para um modelo de murina pré-clínica de De Novo Metástase do câncer mamário

Aqui, apresentamos um protocolo para implante de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de forma simples, menos invasiva e fácil de manusear de maneira, e este modelo de câncer de mama ortotópico rato com um ambiente adequado do tecido mamário pode ser usado para investigar vários aspectos da câncer.

Ortotópico injeção de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de ratos

Este trabalho predefine um protocolo avançado para avaliar com precisão o carregamento de tumores por meio da detecção de sinais de proteína fluorescente verde e bioluminescência, bem como a integração da técnica de detecção molecular quantitativa.

Estudando o câncer de mama triplo negativo usando modelo de câncer de mama ortotópico

Modelos de xenoenxerto derivados da paciente (PDX) e modelos transplantáveis de camundongos geneticamente modificados recapitulam fielmente a doença humana e são modelos preferidos para pesquisas básicas e translacionais sobre câncer de mama. Aqui, um método é descrito para transplantar ortotopicamente fragmentos de tumor de mama na almofada de gordura mamária para estudar biologia tumoral e avaliar a resposta medicamentosa.

Transplante Ortotópico de Tumores mamários como Modelos Pré-Clínicos para o Câncer de Mama

O presente protocolo descreve a injeção de célula de osteossarcoma intratibia para gerar modelos de camundongos com osteossarcoma ortotópico e lesões de metástase pulmonar.

Injeção de células osteossarcoma intratibiais para gerar modelos de osteossarcoma ortotópico e metástase pulmonar

O manuscrito descreve uma metodologia para o estabelecimento, bem como o monitoramento longitudinal do crescimento de metástases pulmonares espontâneas de tumores de mama injetados ortotopicamente, passíveis de intervenção em todos os estágios da cascata metastática.

In vivo Imagem para medir metástase pulmonar espontânea de células tumorais de mama injetadas ortotopicamente

Aprenda a criar um modelo ortotópico murino de câncer de mama metastático com alta taxa de tumorigênese e baixa recorrência local após mastectomia. Este método utiliza imagem por bioluminescência para quantificar a carga tumoral em tempo real.

Gerar um modelo de câncer de mama metastático murino ortotópico e realizando a mastectomia Radical murino

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