Name: Único Sensillum gravações para Locust palpo sensilas Basiconica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Aprenda a realizar gravações de sensilos únicos em palpos de gafanhoto para estudar respostas neuronais olfativas. Este método detalhado utiliza eletrodos de tungstênio para caracterizar dinâmicas de resposta a estímulos químicos.

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Este trabalho é apoiado por uma concessão da Fundação Nacional de ciências naturais da China (No.31472037). Qualquer menção de nomes comerciais ou produtos comerciais neste artigo é exclusivamente com o propósito de fornecer informações específicas e não implica uma recomendação.

1. preparação dos instrumentos e inseto
<ol><li>
Preparando o tungstênio soluções eletrodos e estímulos
	<ol>
<li>Fixar um novo fio de tungstênio (diâmetro de 0,125 mm, comprimento de 75 mm) em um micromanipulador e apontá-lo em uma solução de nitrito (NaNO2) de sódio 10% (p/v) em uma seringa de 10 V fornecida por uma fonte de alimentação por cerca de 1 min sob um estereomicroscópio (ampliação de 40 X).</li>
		<li>Mergulhe o fio de tungstênio afiada repetidamente em solução 10% NaNO2 , cerca de 4 mm em 5 V em < 1 min (figura 1A).</li>
		<li>Examine o diâmetro da ponta afiada tungstênio frequentemente sob o microscópio estereoscópico até é fino o suficiente penetrar a cutícula de um sensillum de olfativo locust ao toque (figura 1B).</li>
		<li>Prepare as soluções de estímulo. Dilua cada um da substância química estímulo em óleo mineral. Dilua 1-nonanol e ácido nonanoico em diluições de 10%. Dilua E-2-hexenal e hexanal em 10-2, 10-3, 10-4e 10-5.</li>
		<li>Preparar Pasteur tubos carregando os estímulos: inserir as tiras de papel de filtro (de 2 cm de comprimento, largura de 0,5 cm) para os tubos de Pasteur, adicione as soluções diluídas de estímulo (cada 10 µ l) para as tiras de papel de filtro e em seguida, conecte os tubos de Pasteur com pontas de pipetas (1 ml).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparar o inseto
	<ol>
<li>Gafanhotos traseiros (Locusta migratoria) com mudas de trigo fresco sob condições de superlotação em um fotoperíodo de 18:6 h (luz: escuro), uma temperatura de 28-30 ° C e uma humidade relativa de 60%. Escolha 1 de 3-dias de idade 5th ínstar ninfas de gafanhoto e remover as antenas com uma tesoura bem para evitar qualquer interferência durante a gravação.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparando o titular do palpo maxilar locust
	<ol>
<li>Use uma lâmina de vidro (25 x 75 mm) como a base do titular do palpo maxilar (MPH). Prenda um pedaço de plástico (1 mm de altura, 10 mm de largura, 35 mm de comprimento) para um canto do vidro slide com fita adesiva dupla-face e finalmente corrigir um tampa de vidro (18 x 18 mm) em cima do pedaço de plástico com fita adesiva dupla-face. Coloque um pequeno pedaço de fita vermelha de borracha sobre o vidro de cobertura como uma camada anti-derrapante. A peça de plástico e o vidro de cobertura constituem a plataforma para o palpo locust. A altura da plataforma é de aproximadamente 1,5 mm.</li>
		<li>Instalar um fio de tungstênio (diâmetro de 0,125 mm, comprimento de 36 mm) a uma distância de 1,5 mm paralelo ao interior borda da plataforma. Fixe as duas extremidades do fio até a plataforma com fita adesiva dupla-face.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. preparação de Locust palpos maxilares
<ol><li>Corte um tubo de centrifugação (1,5 ml) verticalmente ao meio e corte o fundo. Coloque o gafanhoto dentro do tubo preparado. Deixe a região ventral e a cabeça dos locust exposto. Corrigi o assembly para a lâmina de vidro com fita adesiva de dupla face (Figura 2A).</li>
	<li>Puxe o maxilar bem palpável para a plataforma.</li>
	<li>Coloque o fio de tungstênio no segmento quarto do palpo. Coloque a massa adesiva em cada lado do fio de tungstênio, cerca de 2 mm do palpo maxilar (Figura 2A e 2B).</li>
</ol>3. único Sensillum gravações
<ol><li>Coloque a preparação de palpo maxilar locust sob um microscópio em um pequeno aumento (100 X). Ajuste a posição da preparação até o palpo é perpendicular ao eléctrodo de gravação (Figura 3A).</li>
	<li>Introduza o eléctrodo de referência (eletrodo de tungstênio) o olho de gafanhoto usando um micromanipulador. Mova o eletrodo de gravação (eletrodo de tungstênio) perto o palpo maxilar com o micromanipulador (Figura 3B e 3C).</li>
	<li>Ajuste o dispositivo de entrega de odor para cerca de 1 cm do palpo maxilar (Figura 3B).</li>
	<li>Abra o software de gravação automática Spike 32. Defina os parâmetros de gravação como segue: a escala de gravação em 500 mV; o alto corte do filtro em 300 Hz, o corte baixo em 200 Hz; e o pretrigger em 10 s.</li>
	<li>Conecte o eletrodo gravação um 10 x universal AC/DC amplificador.</li>
	<li>Alterne o microscópio para uma alta ampliação (500 X). Insira o eletrodo gravação na base de um sensillum de basiconic sobre o palpo maxilar e ajustar delicadamente o eléctrodo de gravação para obter boas picos espontâneos (Figura 3D).</li>
	<li>Abra o controlador de estímulo para fornecer um fluxo contínuo de ar a 20 ml/s. o tempo de estimulação para 1 s. sinais de registro por 10 s, começando 10 s antes do início do pulso estímulo.</li>
	<li>Use um amplificador de AC/DC 10 x universal para amplificar os sinais. Alimente os sinais em 4 o IDAC. Analise os sinais com o software Auto Spike 32. Sinais de AC são band-pass filtrado entre 200 a 300 Hz. uso Auto Spike 32 para distinguir amplitudes pico-de-cocho de ruídos. Calcule as respostas dos neurônios como os aumentos nas frequências do potencial de ação (picos por segundo) sobre as frequências espontâneas. Realizar uma análise estatística utilizando GraphPad Prism 7.</li>
</ol>

<ol><li>Carey, A. F., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+olfaction+from+model+systems+to+disease+control%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Insect olfaction from model systems to disease control.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (32), 12987-12995 (2011).</li>
<li>Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+reception+in+insects%3A+roles+of+receptors%2C+binding+proteins%2C+and+degrading+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Entomology%22%5BJournal%5D)">Odorant reception in insects: roles of receptors, binding proteins, and degrading enzymes.</a> Annual Review of Entomology. 58, 373-391 (2013).</li>
<li>Zhang, J., Walker, W. B., Wang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pheromone+reception+in+moths%3A+from+molecules+to+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Molecular+Biology+and+Translational+Science%22%5BJournal%5D)">Pheromone reception in moths: from molecules to behaviors.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 130, 109-128 (2015).</li>
<li>Vosshall, L. B., Amrein, H., Morozov, P. S., Rzhetsky, A., Axel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spatial+map+of+olfactory+receptor+expression+in+the+Drosophila+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A spatial map of olfactory receptor expression in the Drosophila antenna.</a> Cell. 96 (5), 725-736 (1999).</li>
<li>Benton, R., Vannice, K. S., Gomez-Diaz, C., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variant+ionotropic+glutamate+receptors+as+chemosensory+receptors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Variant ionotropic glutamate receptors as chemosensory receptors in Drosophila.</a> Cell. 136 (1), 149-162 (2009).</li>
<li>Vosshall, L. B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+architecture+of+smell+and+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Molecular architecture of smell and taste in Drosophila.</a> Annual Review of Neuroscience. 30, 505-533 (2007).</li>
<li>de Bruyne, M., Foster, K., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+coding+in+the+Drosophila+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Odor coding in the Drosophila antenna.</a> Neuron. 30, 537-552 (2001).</li>
<li>Roelofs, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+pheromone+production+and+perception+in+European+corn+borer+moths+is+determined+by+both+autosomal+and+sex-linked+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Sex pheromone production and perception in European corn borer moths is determined by both autosomal and sex-linked genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84 (21), 7585-7589 (1987).</li>
<li>Larsson, M. C., Leal, W. S., Hansson, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+receptor+neurons+detecting+plant+odours+and+male+volatiles+in+Anomala+cuprea+beetles+%28Coleoptera%3A+Scarabaeidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Olfactory receptor neurons detecting plant odours and male volatiles in Anomala cuprea beetles (Coleoptera: Scarabaeidae).</a> Journal of Insect Physiology. 47 (9), 1065-1076 (2001).</li>
<li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+basis+of+alarm+pheromone+detection+in+aphids%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular basis of alarm pheromone detection in aphids.</a> Current Biology. 27 (1), 55-61 (2017).</li>
<li>Cui, X., Wu, C., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+response+patterns+of+16+olfactory+neurons+from+the+trichoid+sensilla+to+odorant+from+fecal+volatiles+in+the+locust%2C+Locusta+migratoria+manilensis%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Insect+Biochemistry+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological response patterns of 16 olfactory neurons from the trichoid sensilla to odorant from fecal volatiles in the locust, Locusta migratoria manilensis.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 77 (2), 45-57 (2011).</li>
<li>Sharma, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cuticular+hydrocarbon+pheromones+for+social+behavior+and+their+coding+in+the+ant+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Cuticular hydrocarbon pheromones for social behavior and their coding in the ant antenna.</a> Cell Reports. 12 (8), 1261-1271 (2015).</li>
<li>de Bruyne, M., Clyne, P. J., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+coding+in+a+model+olfactory+organ%3A+the+Drosophila+maxillary+palp%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Odor coding in a model olfactory organ: the Drosophila maxillary palp.</a> Journal of Neuroscience. 19 (11), 4520-4532 (1999).</li>
<li>Syed, Z., Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maxillary+palps+are+broad+spectrum+odorant+detectors+in+Culex+quinquefasciatus%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Senses%22%5BJournal%5D)">Maxillary palps are broad spectrum odorant detectors in Culex quinquefasciatus.</a> Chemical Senses. 32 (8), 727-738 (2007).</li>
<li>Lu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+coding+in+the+maxillary+palp+of+the+malaria+vector+mosquito+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Odor coding in the maxillary palp of the malaria vector mosquito Anopheles gambiae.</a> Current Biology. 17 (18), 1533-1544 (2007).</li>
<li>Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+sensillum+recordings+in+the+insects+Drosophila+melanogaster+and+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Single sensillum recordings in the insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae.</a> Journal of Visualized Experiments. 36, e1725(2010).</li>
<li>Grant, A. J., Wigton, B. E., Aghajanian, J. G., O'Connell, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+responses+of+receptor+neurons+in+mosquito+maxillary+palp+sensilla+to+carbon+dioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Physiology+A%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological responses of receptor neurons in mosquito maxillary palp sensilla to carbon dioxide.</a> Journal of Comparative Physiology A. 177 (4), 389-396 (1995).</li>
<li>Blaney, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+an+olfactory+sensillum+on+the+maxillary+palps+of+Locusta+migratoria+%28L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of an olfactory sensillum on the maxillary palps of Locusta migratoria (L.).</a> Cell and Tissue Research. 184 (3), 397-409 (1977).</li>
<li>Hassanali, A., Njagi, P. G. N., Bashir, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+ecology+of+locusts+and+related+acridids%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Entomology%22%5BJournal%5D)">Chemical ecology of locusts and related acridids.</a> Annual Review of Entomology. 50, 223-245 (2005).</li>
<li>Chapman, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+chemoreception+in+feeding+by+phytophagous+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Entomology%22%5BJournal%5D)">Contact chemoreception in feeding by phytophagous insects.</a> Annual Review of Entomology. 48, 455-484 (2003).</li>
<li>Chapman, R. F., Sword, G. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF01049149">The importance of palpation in food selection by a polyphagous grasshopper (Orthoptera: Acrididae).</a> Journal of Insect Behavior. 6, 79-91 (1993).</li>
<li>Winstanley, C., Blaney, W. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1570-7458.1978.tb02839.x/abstract">Chemosensory mechanisms of locusts in relation to feeding.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 24, 750-758 (1978).</li>
<li>Blaney, W., Duckett, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+significance+of+palpation+by+the+maxillary+palps+of+Locusta+migratoria+%28L.%29%3A+an+electrophysiological+and+behavioural+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The significance of palpation by the maxillary palps of Locusta migratoria (L.): an electrophysiological and behavioural study.</a> Journal of Experimental Biology. 63, 701-712 (1975).</li>
<li>Blaney, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+responses+of+the+terminal+sensilla+on+the+maxillary+palps+of+Locusta+migratoria+%28L.%29+to+some+electrolytes+and+non-electrolytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological responses of the terminal sensilla on the maxillary palps of Locusta migratoria (L.) to some electrolytes and non-electrolytes.</a> Journal of Experimental Biology. 60, 275-293 (1974).</li>
<li>Jin, X., Zhang, S., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+odorant-binding+and+chemosensory+proteins+and+spatial+map+of+chemosensilla+on+labial+palps+of+Locusta+migratoria+%28Orthoptera%3A+Acrididae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anthropod+Structure+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Expression of odorant-binding and chemosensory proteins and spatial map of chemosensilla on labial palps of Locusta migratoria (Orthoptera: Acrididae).</a> Anthropod Structure & Development. 35 (1), 47-56 (2006).</li>
<li>Zhang, L., Li, H., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+olfactory+pathways+to+detect+aldehydes+on+locust+mouthpart%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Two olfactory pathways to detect aldehydes on locust mouthpart.</a> International Journal of Biological Sciences. 13 (6), 759-771 (2017).</li>
<li>Dweck, H. K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+channels+associated+with+the+Drosophila+maxillary+palp+mediate+short-+and+long-range+attraction%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Olfactory channels associated with the Drosophila maxillary palp mediate short- and long-range attraction.</a> eLife. 5, e14925(2016).</li>
<li>Bohbot, J. D., Sparks, J. T., Dickens, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+maxillary+palp+of+Aedes+aegypti%2C+a+model+of+multisensory+Integration%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochemistry+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The maxillary palp of Aedes aegypti, a model of multisensory Integration.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 48, 29-39 (2014).</li>
<li>Delventhal, R., Kiely, A., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+recording+from+Drosophila+labellar+taste+sensilla%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological recording from Drosophila labellar taste sensilla.</a> Journal of Visualized Experiments. 84, e51355(2014).</li>
<li>Ng, R., Lin, H. H., Wang, J. W., Su, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+recording+from+Drosophila+trichoid+sensilla+in+response+to+odorants+of+low+volatility%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological recording from Drosophila trichoid sensilla in response to odorants of low volatility.</a> Journal of Visualized Experiments. 125, e56147(2017).</li>
<li>Syed, Z., Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+measurements+from+a+moth+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological measurements from a moth olfactory system.</a> Journal of Visualized Experiments. 49, e2489(2011).</li>
<li>Saha, D., Leong, K., Katta, N., Raman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-unit+recording+methods+to+characterize+neural+activity+in+the+locust+%28Schistocerca+Americana%29+olfactory+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Multi-unit recording methods to characterize neural activity in the locust (Schistocerca Americana) olfactory circuits.</a> Journal of Visualized Experiments. 71, e50139(2013).</li>
<li>Liu, F., Liu, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+single+sensillum+recording+to+detect+olfactory+neuron+responses+of+bed+bugs+to+semiochemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Using single sensillum recording to detect olfactory neuron responses of bed bugs to semiochemicals.</a> Journal of Visualized Experiments. 107, e53337(2016).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Insetos dependem de palpos para detectar odores de comida, e seus palpos são acreditados para jogar um papel importante na especiação13,27. Os palpos são simples órgãos olfativos e estão recebendo crescente atenção como um atraente modelo de exploração da neuromolecular redes subjacente chemosensation28.
Inseto labellar e palpo SSRs foram realizados com sucesso em Drosophila melanogaster, Anopheles ...

Animais têm evoluído de uma gama de órgãos chemosensory que detetam sugestões químicas exógenas. Em insetos, os mais importantes órgãos de chemosensory são as antenas e os palpos. Nestes órgãos, diversos tipos de cabelos chemosensory, chamados chemosensory sensilas, são inervados pelos neurônios chemosensory (CSNs) dentro os pelos. CSNs em chemosensory sensilas reconhecem sugestões químicas específicas através de transdução de sinal de estímulos químicos para potenciais eléctricos que posteriormente são transferidos até o sistema nervoso central1,2,3 .
CSNs expressam vários receptores chemosensory [por exemplo, receptores de odorante (ORs)], geleificação receptores (IRs) e receptores gustativos (GRs) em suas membranas, que codificam exógenas sugestões químicas associadas com diferentes tipos de chemosensation 4,5,6. A caracterização da CSNs é a chave para a elucidação dos mecanismos celulares e moleculares de inseto quimiorecepção. Agora gravação única sensillum (SSR) é uma técnica amplamente utilizada para a caracterização de insecto CSNs nos sensilas antenais de muitos insetos, incluindo moscas7, traça8, besouros9, pulgões10, gafanhotos,11, e formigas,12. No entanto, poucos estudos têm aplicado um SSR a inseto palpos13,14,15,16,17, porque as estruturas particulares da suas sensilas fazem um gravação eletrofisiológicas difícil18.
Enxames de gafanhotos (Orthoptera) muitas vezes causam danos à lavoura grave e perda econômica19. Os palpos são acreditados para jogar um papel importante na seleção alimentar de gafanhotos20,21,22,23,24. Dois tipos de sensilas chemosensory são investigados por um microscópio eletrônico de varredura (MEV). Geralmente, chaetica 350 sensilas e 7-8 sensilas basiconica são observados em cada cúpula dos locust palpos18. Chaetica de sensilas são sensilas gustativas que detetam sugestões químicas não-volátil, enquanto sensilas basiconica têm uma função olfativa, sensoriamento sugestões químicas voláteis.
Em palpos de locust, os diâmetros das tomadas de cabelo da basiconica de sensilas (ca. 12 µm), são muito maiores do que aqueles de sensilas chaetica (ca. 8 µm)18,25. A parede cuticular do basiconica de sensilas sobre os palpos é muito mais espessa do que a de sensilas antenais18. Além disso, a cúpula do palpo tem conteúdo líquido dentro de uma cutícula altamente flexível. Estas características significam que uma penetração com um microeléctrodo e uma aquisição de sinais eletrofisiológicos boas é mais difícil do que para sensilas antenais. Neste trabalho, um protocolo SSR detalhado e altamente eficaz para locust palpo sensilas basiconica é apresentado com um vídeo.

<table><tbody><tr><td>Fio de tungstênio</td><td>ADVENT</td><td>W559504</td><td>Usado para fazer o eletrodo e fixar o palp</td></tr><tr><td>NaNO2</td><td>Sigma-aldrich</td><td>563218-25G</td><td>Usado para afiar o fio de tungstênio</td></tr><tr><td>Fonte de alimentação CA</td><td>Syntech</td><td>A2-70</td><td>Fornecendo a tensão na afiação do fio de tungstênio</td></tr><tr><td>Estereoscópio</td><td>Motic</td><td>SMZ-163</td><td>Usado para observar o afiação de fio de tungstênio</td></tr><tr><td>Microscópio</td><td>Olympus</td><td>W-51</td><td>Usado para observar a sensila no palpo maxilar de gafanhotos</td></tr><tr><td>Controlador Inteligente de Aquisição de Dados</td><td>Syntech</td><td>IDAC-4</td><td>Exibição na tela em tempo real de todos os sinais antes e durante a gravação</td></tr><tr><td>Controlador de estímulo</td><td>Syntech</td><td>CS-55</td><td>Usado para controlar a aplicação de estímulo</td></tr><tr><td>Eletrônico micromanipulador</td><td>C.M.D.T</td><td>CFT-8301D</td><td>Usado para pequenos movimentos do eletrodo de gravação</td></tr><tr><td>Micromanipulador</td><td>Narishige</td><td>MN-151</td><td>Usado para pequenos movimentos do eletrodo de referência</td></tr><tr><td>Alto-falante</td><td>EDIFIER</td><td>R101T06</td><td>Conectado com IDAC-4 e fornecendo som para o sinal</td></tr><tr><td>Base magnética</td><td>PDOK</td><td>PD-101</td><td>Usado para segurar o eletrodo e o tubo de entrega de estímulos</td></tr><tr><td>Mesa de isolamento de vibração</td><td>TianHe</td><td>HAP-100-1208</td><td>Usado para isolar a vibração do equipamento</td></tr><tr><td>Corrediça de vidro</td><td>CITOGLAS</td><td>ZBP-407</td><td>Usado para fazer a base para o MPH</td></tr><tr><td>Blu-tack</td><td>Bostik</td><td>Blu-tack-45g</td><td>Fixação do fio de tungstênio</td></tr><tr><td>Tubo de Pasteur</td><td>YARE</td><td>WITEG</td><td>Colocação do papel de filtro contendo soluções de estímulo de estímulos</td></tr></tbody></table>

Único sensillum gravações para locust palpo sensilas basiconica

Single Sensillum Recordings for Locust Palp Sensilla Basiconica

Os palpos das peças bucais locust são considerados órgãos gustativos convencionais que desempenham um papel importante na seleção de alimentos de um gafanhoto, especialmente para a detecção de não-volátil sugestões químicas através de sensilas chaetica (anteriormente denominado terminais sensilas ou crista sensilas). Há crescente evidência de que estes palpos também têm uma função olfativa. Um receptor de odorante (LmigOR2) e uma proteína ligadora de odorante (LmigOBP1) foram localizadas nos neurônios e células de acessório, respectivamente, na basiconica de sensilas dos palpos. Sensillum única gravação (SSR) é usado para gravar as respostas dos neurônios receptores de odorante, que é um método eficaz para ligantes ativos sobre os receptores específicos odorante de triagem. SSR é usado em estudos funcionais de receptores de odorante no sensilas palpo. A estrutura do basiconica de sensilas localizado na cúpula dos palpos difere um pouco da estrutura das pessoas sobre as antenas. Portanto, ao realizar um SSR eliciado odorantes, alguns conselhos específicos podem ser útil para a obtenção de melhores resultados. Neste trabalho, é apresentado um protocolo detalhado e altamente eficaz para um SSR de inseto palpo sensilas basiconica.

Dois subtipos de sensilas (pb1 e pb2) sobre o palpo maxilar locust são identificados com base em dinâmica de resposta diferente de químicos odorantes (10% 1-nonanol e ácido nonanoico de 10%). Os neurônios no pb1 produzem significativamente mais picos de até 1-nonanol do ácido nonanoico enquanto os neurônios em pb2 são significativamente que menos ativado por 1-nonanol comparado com ácido nonanoico (Figura 4). Hexanal e E-2-Hexenal podem evocar um palpo locust...

Este artigo descreve um protocolo detalhado e altamente eficaz para gravações de único sensillum do basiconica de sensilas sobre os palpos de peças bucais de insetos.

Único Sensillum gravações para Locust palpo sensilas Basiconica

The palps of locust mouthparts are considered to be conventional gustatory organs that play an important role in a locust&#39;s food selection, especially ...

O objetivo geral deste procedimento é introduzir um protocolo detalhado e altamente eficaz para fazer gravações únicas de sensillum do palpo de inseto Sensilla Basiconica. Uma vez dominado, pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo da quimiorrecepção de dissecação. Permitindo o receptor de odor específico na sensila palpável.A principal vantagem disso é que usar um gravador Sensilla Basiconia de gafanhoto dos palpos. Para preparar os eletrodos de tungstênio, primeiro conecte um novo fio de tungstênio em um micro manipulador e observe-o com uma ampliação de 40 vezes. Agora afie o fio fornecendo 10 volts a ele enquanto usa uma seringa para aplicar nitrito de sódio a 10%.Em seguida, reduza a potência para cinco volts e, ao longo de um minuto, mergulhe repetidamente quatro milímetros do fio afiado na solução de nitrito de sódio. Quando em uso, a ponta deve ser fina o suficiente para penetrar na cutícula de um gafanhoto palpar sensillum olfatório. Em seguida, prepare as soluções de estímulo.Dilua cada uma das substâncias de estímulo químico em óleo mineral. Faça diluições de 10% de 1-nonanol e ácido nonanóico em óleo mineral. Em seguida, faça uma série de diluições seriais de d

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Respostas eletrofisiológicas de neurônios sensoriais olfativos de odores pode ser medido em insetos usando gravações sensillum único. Neste artigo vamos demonstrar de vídeo como realizar gravações sensillum única nas antenas da mosca do vinagre...

Único Recordings Sensillum na Insetos Drosophila melanogaster E Anopheles gambiae</em

Inseto sistemas olfativos fornecem oportunidades únicas para a gravação odorant induzida por respostas nas formas de electroantennograms (EAG) e gravações sensillum simples (SSR), que são somadas as respostas de todos os neurônios olfativos receptor (ORNS), localizado na antena e daqueles alojados em individuais sensilla, respectivamente.

Medidas eletrofisiológicas partir de um sistema olfativo Traça

Este artigo descreve um método eletrofisiológico para isolar a estimulação química sensilla individuais via extracelular, tip-gravações sob óleo mineral.

Eletrofisiologia da Scorpion Peg sensilla

Neste vídeo, uma mosca Drosophila viva é montada em um tubo para estudos eletrofisiológicos. Os eletrodos são posicionados na base do sensillum para registrar respostas neuronais específicas aos feromônios com os neurônios receptores olfativos da mosca.

Registros eletrofisiológicos de Drosophila Sensilla em resposta a odores voláteis

Nós demonstramos as variações da técnica de gravação extracelular de multi-unidade para caracterizar odor evocadas respostas nas três primeiras etapas da via olfactiva invertebrado. Estas técnicas podem ser facilmente adaptados para examinar a actividade conjunto de outros sistemas neurais também.

Multi-unidade Métodos de gravação para caracterizar a atividade neural no Locust (<em&gt; Schistocerca Americana</em&gt;) Circuitos olfatórias

Este protocolo descreve gravação extracelular das respostas potenciais de ação disparados pelos neurônios do gosto labellar em Drosophila.

Eletrofisiológica Gravação De<em&gt; Drosophila</em&gt; Labellar Prove sensilla

Os percevejos dependem de neurônios receptores olfativos alojados em sua sensila olfatória antenal para detectar semioquímicos no ambiente. Utilizando a gravação de um único sensor, demonstramos um método para avaliar a resposta dos percevejos aos semioquímicos e explorar o processo de codificação envolvido.

Usando Individual Sensillum Gravação para detectar respostas Olfativo Neurônio de percevejos para Semioquímicos

Este artigo descreve um protocolo de hibridação in situ ARN detalhado e altamente eficaz, particularmente para genes de receptores de odorantes (OR) de baixo nível, bem como outros genes, em antenas de insetos usando sondas marcadas com digoxigenina (DIG) ou marcadas com biotina.

Localização de Genes de Receptor de Odorantes em Antenas de Locustídeo por RNA<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridação

O objetivo geral deste protocolo é demonstrar como apresentar odorantes de baixa volatilidade para a gravação de sensibilidade única a partir de neurônios receptores olfativos de Drosophila que respondem a feromonas cuticulares de cadeia longa.

Gravação eletrofisiológica de<em&gt; Drosophila</em&gt; Sensilla Tricoide em resposta aos odorantes de baixa volatilidade

Para observar a ultraestrutura da sensilla de insetos, foi apresentado o protocolo de preparação de amostras de varredura e transmissão (SEM e TEM), respectivamente) no estudo. O Tween 20 foi adicionado ao fixativo para evitar a deformação amostral na microscopia de fluorescência SEM. Foi útil para melhorar a precisão do corte na TEM.

Método de preparação de amostras de microscópio eletrônico de varredura e transmissão para os apêndices do Besouro Woodboring

Um método raramente usado de registro eletrofisiológico, o registro de base, permite a análise de características da codificação do sabor que não podem ser examinadas pelos métodos convencionais de registro. O registro de base também permite a análise das respostas gustativas a estímulos hidrofóbicos que não podem ser estudados usando métodos eletrofisiológicos tradicionais.

Gravação de base: uma técnica para analisar as respostas dos neurônios gustativos em Drosophila

Aprenda a realizar gravações de sensilos únicos em palpos de gafanhoto para estudar respostas neuronais olfativas. Este método detalhado utiliza eletrodos de tungstênio para caracterizar dinâmicas de resposta a estímulos químicos.

Único Sensillum gravações para Locust palpo sensilas Basiconica

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