Uma romance única Animal motricidade sistema usando simples, prontamente disponível Software de rastreamento

O presente estudo visa automatizar a quantificação do déficit motor em ratos. O modelo de avaliação inicial avalia motor perda resultante de uma implantação de microeletrodos intracortical no córtex motor. Nós relatamos no desenvolvimento e utilização de um algoritmo de rastreamento usando facilmente adaptável, simples e facilmente disponível software de codificação.

Este método pode ajudar a melhorar a consistência em testes comportamentais de pequenos animais, criando métricas objetivas da função motora. A vantagem dessa técnica é que, ao contrário dos métodos convencionais, os resultados são quantificados por um sistema de computador que reduz o erro humano, o esforço e o tempo. Demonstrando este procedimento estarão Marina Yu e Sydney Lindner, pesquisadores de graduação do Capadona Lab.

Comece a filmar e coloque o animal no centro da grade, de costas para o pesquisador para iniciar o Teste de Grade. Deixe o animal correr livremente por três minutos enquanto é gravado em vídeo de cima. Pare de filmar quando o período de três minutos terminar e devolva o animal à sua gaiola de origem.

Limpe a grade com um esterilizante à base de dióxido de cloro, tendo o cuidado de secar completamente as superfícies antes do teste. Em seguida, para o Teste de Escada, coloque o animal em uma gaiola temporária limpa. Defina o Aparelho de Escada para abranger duas gaiolas, onde a Gaiola de Partida é uma gaiola limpa e a Gaiola de Fim é a gaiola viva do animal, um incentivo para completar a corrida.

Coloque a câmera em um tripé, centralizado no comprimento da escada. Estenda até o tripé para que a lente da câmera fique na altura do degrau da escada. Posicione a câmera de forma que os degraus fiquem exatamente alinhados com a lente, pois isso é importante para o algoritmo de detecção de deslizamento no código BVAS.

Inicie a gravação de vídeo e permita que o animal comece a corrida segurando as patas dianteiras sobre o primeiro degrau da escada. Permita que o animal suba na escada sem ajuda. Permita que o animal se mova da linha de partida para a linha de chegada em seu próprio ritmo durante as filmagens.

Por fim, termine a gravação do vídeo e remova o animal da escada assim que o animal terminar a corrida. Comece nomeando cada vídeo com a designação do animal para todos os vídeos de teste de grade. Pegue os vídeos agora com o nome de cada animal e coloque os arquivos em sua própria pasta de armazenamento.

Em seguida, crie um novo arquivo de planilha vazio para armazenar os dados de cada modo de estudo e teste. Em seguida, instale a versão mais recente do BVAS clicando duas vezes no ícone do instalador. Após a conclusão da instalação, clique duas vezes no ícone do Programa BVAS para abrir o Menu Principal do BVAS, que permite as seguintes opções: Análise de Grade, Análise de Escada, Revisão de Escada ou Sair.

No Programa BVAS, comece selecionando Análise de grade na tela do menu superior. Em seguida, use o botão Reticências ao lado da caixa de entrada superior para navegar pelo sistema de arquivos e encontrar o arquivo de vídeos a serem analisados. Selecione o botão Reticências ao lado da caixa de entrada inferior para procurar o sistema de arquivos e selecionar o arquivo de planilha no qual armazenar os dados.

Clique em ir para iniciar o Processo de Análise. Examine as imagens de cada vídeo na tela do Revisor. Selecione o botão Editar se não houver linhas verdes ou se a linha verde não parecer estar no quadrado correto ao redor da área de teste.

Para editar os cantos, selecione o botão Editar cantos. Siga as instruções à direita da imagem representativa para selecionar a Área de Teste e pressione Enter para concluir o processo de seleção. Por fim, selecione Concluído para salvar a seleção e retornar à tela Revisor.

Em seguida, selecione o botão central Concluído para iniciar o processo de Análise Completa, uma vez que a Área da Grade para cada vídeo seja selecionada corretamente. Permita que o programa seja executado e, após a conclusão, um prompt de sucesso será exibido. Em seguida, selecione uma Análise de Escada no menu superior para abrir o Menu de Análise de Escada.

Selecione o botão de reticências de entrada superior para selecionar a pasta com os vídeos da escada com o nome de cada animal. Em seguida, selecione o botão de reticências inferior para selecionar um diretório para salvar uma pasta com dados dos vídeos da escada para revisar mais tarde. Selecione Ir para iniciar o Processo de Análise e repita as mesmas etapas para a Análise de Teste de Campo Aberto.

Permita que o programa seja executado e, após a competição, um prompt de sucesso aparecerá. No Programa BVAS, selecione uma Revisão de Imagem de Escada no menu superior para abrir a tela de seleção de arquivo de Revisão de Escada. Selecione o botão de reticências superior para selecionar a pasta de arquivos de dados e selecione o botão de reticências inferior para selecionar o arquivo de planilha criado para o estudo.

Em seguida, pressione Ir para iniciar o processo de revisão manual. Em seguida, visualize o menu Ladder Data Reviewer aberto automaticamente. Se um deslizamento for detectado, use os botões próximo quadro e último quadro para verificar todos os quadros gravados consecutivamente, se disponíveis.

Use o Slip Toggle para indicar qual pé do rato escorregou. Deixe a alternância em Sem deslizamento se a detecção for um falso positivo. Clique em Salvar e Continuar para passar para a próxima detecção.

Em caso de falha, use o botão de alternância para indicar se a falha é devido a Reversão ou Estagnação. Por fim, clique em Salvar e Continuar para passar para a próxima detecção. Na última detecção, clique em Salvar e Continuar para concluir a análise e salvar os dados no arquivo de planilha escolhido anteriormente.

Ignore o aviso de conclusão. Neste estudo, os resultados do Teste de Grade de Campo Aberto mostraram que os Revisores Especialistas foram mais consistentes do que os Revisores Iniciantes, mas ao usar o BVAS, houve variação zero para usuários Especialistas e Iniciantes. Da mesma forma, os resultados do Teste Ladder mostraram que os Revisores Especialistas foram mais consistentes do que os Revisores Iniciantes, mas ao usar o BVAS, houve, novamente, variação zero para usuários Especialistas e Iniciantes.

Para o Teste de Grade de Campo Aberto, foram observadas tendências ao longo do estudo de aumento da Velocidade Máxima alcançada, aumento da Distância Total Percorrida e aumento do número de Linhas de Grade cruzadas. A porcentagem de curvas à direita oscilou amplamente entre 40 e 50%Por fim, para o Teste de Escada, houve uma tendência decrescente no tempo de travessia, seguida de um aumento no tempo, começando por volta da quarta semana. O software detecta e tabula automaticamente o número de deslizamentos de patas durante uma travessia de escada.

E no Processo de Revisão de Vídeo, o usuário pode classificar os deslizamentos detectados em deslizamentos de pata esquerda versus direita, conforme mostrado no gráfico de barras. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em 30 a 40 minutos por animal por sessão de teste. Ao tentar este procedimento, é importante filmar em um ambiente bem iluminado no plano correto e com alto contraste entre o animal e o fundo.

Seguindo este procedimento, Tarefas de Comportamento adicionais podem ser executadas para responder a perguntas específicas em Modelos de Doenças ou Lesãos. Embora usemos esse método para fornecer informações sobre o déficit motor causado pelo implante do dispositivo no cérebro, essa técnica de análise pode ser usada em muitos outros modelos de doenças ou lesões. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como filmar e analisar vídeos comportamentais usando o software BVAS do Capadona Lab, que fornece uma técnica de quantificação de comportamento repetível.