Espectrometria de massa folha Spray: Uma técnica de ionização ambiente rápida para avaliar diretamente a metabolitos de tecidos vegetais

A pulverização foliar MS é um método rápido para análise qualitativa e semiquantitativa de tecidos vegetais intactos que tem uma ampla variedade de aplicações. A principal vantagem desta técnica é que o tecido vegetal pode ser analisado diretamente sem praticamente nenhuma preparação de amostra. Embora este método forneça bons insights sobre os alcalóides da mesembrina do Sceletium, ele também pode ser usado para análise de várias outras espécies de plantas e produtos químicos exógenos, como pesticidas.

Indivíduos novos neste método podem achar desafiador porque é necessário otimizar o protocolo para cada espécie de planta, tipo de tecido e composto de interesse. Use uma fonte de nano pulverização modificada para pulverização de folhas MS.As nenhum componente fluídico for necessário para a pulverização de folhas MS, modifique a fonte removendo a sonda de cromatografia líquida da fonte. O fio de espectrometria de massa de pulverização de folhas que aplicará tensão ao tecido da planta tem um pino que foi soldado ao fio em uma extremidade e uma braçadeira que foi soldada na outra extremidade.

Se o sistema tiver sido usado recentemente, deixe-o esfriar ao toque antes de remover qualquer fonte alternativa no cone de varredura. Em seguida, anexe a fonte MS de spray de folha de nano spray. Por fim, crie um arquivo tune e um arquivo de método, conforme descrito no protocolo de texto.

Sempre use luvas e não use tecido vegetal que tenha sido manuseado com as mãos desprotegidas. Caso contrário, íons contaminantes, como o polietilenoglicol, dominarão os espectros. Levar os tecidos vegetais para análise para a mesma sala que o sistema de espectrometria de massa, a fim de permitir uma amostragem rápida.

Para o tecido vegetal que não tem uma ponta naturalmente pontiaguda, use uma lâmina de barbear em uma lâmina de vidro para cortar uma ponta cônica. Corte as folhas de Sceletium tortuosum 10 semanas após a germinação em tiras finas, cada uma com uma extremidade cônica para formar uma ponta. Use uma pinça para selecionar suavemente o tecido vegetal na extremidade que será fixada.

Segurando o tecido com uma pinça, transfira-o cuidadosamente para a pinça. Ajuste o braço flexível e o fio com a braçadeira para posicionar o tecido alinhado com a entrada MS. Consulte o texto para obter a distância ideal da entrada de íons para cada espectrômetro de massa específico.

Se as primeiras tentativas produzirem uma baixa intensidade de sinal, o tecido vegetal pode ser movido para mais perto da entrada de íons. Carregue o arquivo de método. Nomeie o arquivo de dados e defina o local de armazenamento do arquivo.

Em seguida, ligue o sistema MS clicando em jogar e clique em iniciar para começar a adquirir dados. Aplique um solvente usando uma pipeta com uma ponta de carregamento de gel para maximizar a distância entre o alto voltage e as mãos do usuário para proteção. Adquira dados enquanto o sinal persistir ou até que os espectros adequados tenham sido coletados, normalmente de 30 a 60 segundos.

Pare a aquisição de dados e pause o sistema MS. Após a aquisição, remova o lenço de papel e lave a pinça com 100% de metanol em um lenço sem fiapos. Abra o arquivo de dados e inspecione visualmente o cronograma de massa de pico base.

Verifique se a intensidade do sinal é de aproximadamente 10 milhões a 500 milhões. Faça um novo arquivo de método com uma lista de inclusão de M sobre Z até quatro casas decimais. Clique em listas globais e inclusão.

Em propriedades do PRM, selecione a energia de fragmentação e outros parâmetros MS em tandem. Para obter os dados de MS em tandem para alcalóides de mesembrina, fragmente os íons em 276,1583 M sobre Z, 290,1742 M sobre Z e 292,1897 M sobre Z a uma energia de colisão normalizada de 35. Em seguida, carregue o arquivo de método tandem MS e um arquivo de dados nomeado.

Ligue o sistema MS e comece a adquirir dados adicionando um solvente, se necessário. Quando os espectros adequados forem coletados, geralmente após 30 a 60 segundos, interrompa a aquisição. Execute a análise de dados conforme descrito no protocolo de texto.

Resultados representativos do perfil metabólico de Sceletium tortuosum por MS de pulverização foliar e ionização positiva são mostrados com a inserção exibindo 260 a 295 M ao longo Z.In este estudo, um total de nove alcalóides de mesembrina foram detectados por MS de pulverização foliar e identificações puditivas foram feitas. O cronograma de massa de contagem total de íons MS de pulverização foliar representa um experimento MS de pulverização foliar bem-sucedido, onde um sinal estável foi mantido durante toda a duração da aquisição. Para cada pico, o número superior é o tempo em minutos e o inferior é o M sobre Z. Os espectros de massa em tandem foram coletados em ionização positiva feita a partir de uma folha cortada de Sceletium tortuosum com spray de folhas MS. As identificações puditivas dos alcalóides foram feitas a partir de massa precisa e fragmentação de massa para mesembrina M e mesembrenona M isômeros, mesembrina e mesembrina M dihidro.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como usar o MS de pulverização de folhas para detectar metabólitos de plantas. A pulverização foliar MS tem sido usada para detectar compostos endógenos, bem como compostos exógenos, como pesticidas.