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DOI: 10.3791/57978-v
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This article presents a mating-based method to facilitate overexpression screening in budding yeast using an arrayed plasmid library. This technique can provide insights into the toxicity of neurodegenerative disease proteins and can be applied to other cellular processes in yeast.
Este artigo apresenta um método baseado em acasalamento para facilitar a triagem de superexpressão em leveduras brotamento usando uma biblioteca de matriz do plasmídeo.
Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo das doenças neurodegenerativas, como quais fatores genéticos e vias regulam a toxicidade das proteínas associadas à doença. A principal vantagem dessa técnica é que o processo altamente eficiente de acasalamento de leveduras é usado para rastrear modelos de leveduras em relação a uma grande coleção de genes de biblioteca. Embora esse método possa fornecer informações sobre a toxicidade das proteínas de doenças neurodegenerativas, ele também pode ser aplicado ao estudo de outros processos celulares em leveduras, como tolerância a outras condições de estresse.
Comece este procedimento aliquotando cinco microlitros por poço de DNA de plasmídeo de uma biblioteca de plasmídeos dispostos para placas de fundo arredondado de 96 poços. Mantenha as placas a quatro graus Celsius. Em seguida, inocule 150 mililitros de levedura peptona dextrose ou meio YPD em um frasco de 500 mililitros com uma colônia da cepa de levedura haplóide W303 Alpha.
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