Name: Indução cirúrgica simples da perda auditiva condutora com verificação usando a visualização do otoscópio e a resposta comportável do startle do clap no rato (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 s
Description: Aprenda a induzir perda auditiva condutora em ratos por punção cirúrgica da membrana timpânica, com verificação por otoscopia e teste comportamental de sobressalto ao estalo. Este método padronizado permite estudar distúrbios auditivos humanos.

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Este trabalho foi apoiado em parte pelo Hong Kong Research Grants Council, Early Career Scheme, Project #21201217 a C. L., para o projeto Brain mapeamento eletrofisiologia guiada com aplicações em audição e pesquisa de poluição sonora. Agradecemos ao Posgrado en Ciencias Biomédicas, ao Instituto de Neurobiologiía da Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), ao Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) México pela Bolsa de Pós-Graduação 578458 à FAM Manno.

O presente estudo e procedimentos foram aprovados pelos comitês de ética em pesquisa animal da Universidade da Cidade de Hong Kong, da Universidade de Hong Kong e do Departamento de Saúde da Região Administrativa Especial de Hong Kong.
1. Animais
<ol><li>Use ratos Sprague-Dawley (SD) de dois meses (N = 90, 200-250 g). NOTA: Roedores foram fornecidos pela unidade animal do laboratório acreditada da universidade de Hong Kong.</li>
	<li>Mantenha os ratos uma temperatura constante de 25 °C e umidade de 60-70% na Unidade de Pesquisa Animal do Laboratório.</li>
	<li>Casa de roedores em 12/12-h luz / ciclos escuros com acesso a alimentos e água potável, ad libitum.</li>
	<li>Aclimata roedores ao ambiente de carcaça no mínimo um dia antes da cirurgia de CHL.</li>
	<li>Pegue o roedor pela nuca e anestesiar o roedor com um coquetel de cetamina e xilacina (80-100 mg/kg: 5-10 mg/kg, respectivamente) via injeção intraperitoneal (combinar 1,0 mL de cetamina com 0,5 mL de xilazine como uma concentração final). NOTA: Use um 1 mL de seringa com uma agulha 23-25G. Injete aproximadamente 0,2 mL por 100 g de peso corporal do rato por 30 min de anestesia.</li>
	<li>Executar a pitada do dedo do pé para verificar a sensação de dor e para corroborar a anestesia adequada. Uma reação à pitada profunda do dedo do pé (pela retirada do membro traseiro) indica anestesia insuficiente.</li>
</ol>2. Configuração cirúrgica
<ol><li>Esterilizar todos os equipamentos em um esterilizador de contas de vidro quente ou autoclave antes do início da cirurgia. Limpe a área cirúrgica com 70% de etanol.</li>
	<li>Use luvas de látex e jaleco antes de iniciar o procedimento.</li>
	<li>Coloque uma cortina cirúrgica estéril no banco limpo(Figura 1A).</li>
	<li>Esterilizar microtesouras e um otoscópio antes da cirurgia para minimizar a infecção do ouvido(Figura 1B).</li>
	<li>Coloque a micro-tesoura e otoscópio na área estéril.</li>
	<li>Coloque o roedor no campo cirúrgico e em alinhamento com o cirurgião.</li>
	<li>Prossiga com a indução cirúrgica de CHL.</li>
</ol>3. Indução cirúrgica de perda auditiva condutiva
<ol><li>Coloque a cauda e a cabeça do roedor alinhadas em uma posição propensa, cabeça mais próxima do cirurgião.</li>
	<li>Visualize a orelha esquerda e direita do roedor o ostocópio para garantir a membrana de tympanic saudável (Figura 2a). Avalie a orelha direita e esquerda de cada roedor para verificar a condição saudável antes da indução de CHL.</li>
	<li>Pegue a hélice do ouvido e estenda o canal auditivo externo (ou seja, canal auditivo, carne auditiva externa, canal auditivo) para fazer com que o interior fique obscurecido e enegrecido pela profundidade. Aqui, o canal auditivo é feito perpendicular à superfície do TM. NOTA: Certifique-se de que o cannel auditivo esteja diretamente paralelo agora e a TM forma um ângulo reto com o eixo de inserção da microtesoura. Ele será visualizado como um tubo preto sem luz. Às vezes, o canal auditivo precisa ser inclinado em um ângulo leve, aproximadamente 15° para a superfície planar do crânio. Isso garante que a mão do cirurgião é perpendicular à superfície do TM.</li>
	<li>Introduza a micro-tesoura no centro do canal auditivo prestando atenção para não roçar ou cortar o tecido do canal auditivo e proceder ligeiramente, aproximadamente 5 mm do centro da obscuridade, empurrando para a frente suavemente através do centro da TM. NOTA: A punção de TM pode ser confirmada por um som pop quando as pontas da micro-tesoura perfuram o TM. O som de estalo pode ser ouvido aproximadamente em 2 min 52 s no vídeo. Este não é um som de tesoura; este é um som de punção TM. Medida após a análise, o "pop" é aproximadamente 20 dB SPL maior do que o som de fundo, conforme registrado por um microfone de alta frequência. Não há necessidade de verificar o som "pop" a este ponto, visualização de otoscópio é suficiente. O investigador pode precisar de praticar garantir que um 'pop' seja ouvido durante cada procedimento de CHL.</li>
	<li>Abra imediatamente a micro-tesoura carregada de mola e gire três vezes após a punção do TM para garantir o deslocamento da cabeça do malleus longe do TM (somente se o deslocamento malleus é desejado).</li>
	<li>Retire a micro-tesoura e coloque o roedor o otoscópio para visualização. NOTA: É importante notar que nenhum sangramento significativo deve ocorrer após o procedimento cirúrgico. Eutanásia do roedor e não proceder à avaliação comportamental se ocorrer sangramento.</li>
	<li>Induzir chl bilateral, procedendo como acima no ouvido oposto.</li>
</ol>4. Visualização de otoscópio
<ol><li>Confirme uma cirurgia bem sucedida de CHL com um otoscópio usando um speculum de pequeno diâmetro para visualizar a orelha média do roedor.</li>
	<li>Avalie cada roedor antes e depois do procedimento cirúrgico do CHL debaixo do otoscópio. Garantir a confirmação do TM normal(Figura 2a)e tm danificado após a indução CHL(Figura 2b).</li>
	<li>
Cuidados pós-operatórios para o roedor
	<ol>
<li>Coloque o roedor na gaiola em casa uma lâmpada quente.</li>
		<li>Observe a indução do roedor após o CHL até que o roedor se alegre.</li>
		<li>Injete o roedor com soro de glicose (dextrose/soro soro) para recuperar a consciência e colocar roedores na gaiola para recuperação. NOTA: Use uma agulha 23G com uma seringa de 10 mL para injetar 5 mL de soro para soro após a cirurgia de CHL.</li>
		<li>Injete o roedor via intramuscular com enrofloxacina antibacteriana 0,05 mg/kg duas vezes durante o período de recuperação de 24 h.</li>
		<li>Observe o roedor regularmente para o comportamento ou os sintomas da dor após a cirurgia.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Avaliação comportamental (validação da indução de CHL) - resposta do início do aplauso
<ol><li>Corroborar chl (após a confirmação do otoscópio) 24 h pós-cirurgia com a avaliação comportamental consistindo no clap-startle-teste.</li>
	<li>Coloque o rato induzido chl ao lado de um rato normal em duas gaiolas adjacentes separadas.</li>
	<li>Coloque os roedores em uma sala silenciosa.</li>
	<li>Fique a aproximadamente 0,5 m de distância dos roedores e continue a bater palmas em durações igualmente espaçadas várias vezes (5 palmas foram escolhidas e espaçadas acima de 1 segundo). NOTA: O vermão de palmas produzido pelo aplauso medido - 40 dB SPL maior do que o som de fundo, como registrado por um microfone de alta freqüência.</li>
</ol>

<ol><li>Shargorodsky, J., Curhan, S. G., Curhan, G. C., Eavey, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Change+in+prevalence+of+hearing+loss+in+US+adolescents%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Change in prevalence of hearing loss in US adolescents.</a> The Journal of the American Medical Association. 304 (7), 772-778 (2010).</li>
<li>Lucas, J. W., Schiller, J. S., Benson, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Summary+health+statistics+for+U.S.+adults%3A+National+health+interview+survey%2C+2001%5BTitle%5D)+AND+%22National+Center+for+Health+Statistics.+Vital+and+health+statistics%22%5BJournal%5D)">Summary health statistics for U.S. adults: National health interview survey, 2001.</a> National Center for Health Statistics. Vital and health statistics. 10 (218), 1-134 (2004).</li>
<li>Gaffney, M., Green, D. R., Gaffney, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newborn+hearing+screening+and+follow-up%3A+Aare+children+receiving+recommended+services%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Health+Reports%22%5BJournal%5D)">Newborn hearing screening and follow-up: Aare children receiving recommended services?</a> Public Health Reports. 125 (2), 199-207 (2010).</li>
<li>Xu, H., Kotak, V. C., Sanes, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conductive+hearing+loss+disrupts+synaptic+and+spike+adaptation+in+developing+auditory+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Conductive hearing loss disrupts synaptic and spike adaptation in developing auditory cortex.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (35), 9417-9426 (2007).</li>
<li>Buran, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+period+for+the+impact+of+hearing+loss+on+auditory+perception%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A sensitive period for the impact of hearing loss on auditory perception.</a> The Journal of Neuroscience. 34 (6), 2276-2284 (2014).</li>
<li>Finck, A., Sofouglu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+sensitivity+of+the+Mongolian+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Auditory+Research%22%5BJournal%5D)">Auditory sensitivity of the Mongolian gerbil.</a> The Journal of Auditory Research. 6, 313-319 (1966).</li>
<li>Finck, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+sensitivity+of+the+Mongolian+Gerbil+%28Merionesunguiculatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Auditory sensitivity of the Mongolian Gerbil (Merionesunguiculatus).</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 41 (60), 1579(1967).</li>
<li>Finck, A., Schneck, C. D., Hartman, A. F. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+auditory+function+in+the+Mongolian+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Development of auditory function in the Mongolian gerbil.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 46 (1A), 107(1969).</li>
<li>Ryan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+sensitivity+of+the+Mongolian+gerbil%2C+Meriones+Unguiculatis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Hearing sensitivity of the Mongolian gerbil, Meriones Unguiculatis.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 59, 1222-1226 (1976).</li>
<li>Dallos, P., Harris, D., Ozdamar, O., Ryan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral%2C+compound+action+potential%2C+and+single+unit+thresholds%3A+relationship+in+normal+and+abnormal+ears%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Behavioral, compound action potential, and single unit thresholds: relationship in normal and abnormal ears.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 64 (1), 151-157 (1978).</li>
<li>Kelly, J. B., Potash, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directional+responses+to+sounds+in+young+gerbils+%28Meriones+unguiculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Psychology%22%5BJournal%5D)">Directional responses to sounds in young gerbils (Meriones unguiculatus.</a> Journal of Comparative Psychology. 100 (1), 37-45 (1986).</li>
<li>Heffner, H. E., Koay, G., Heffner, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+assessment+of+hearing+in+mice--conditioned+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Behavioral assessment of hearing in mice--conditioned suppression.</a> Current Protocols in Neuroscience. , Chapter 8, Unit 8.21D (2006).</li>
<li>Heffner, R. S., Koay, G., Heffner, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Audiograms+of+five+species+of+rodents%3A+implications+for+the+evolution+of+hearing+and+the+perception+of+pitch%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Audiograms of five species of rodents: implications for the evolution of hearing and the perception of pitch.</a> Hearing Research. 157 (1-2), 138-152 (2001).</li>
<li>Lupo, E. J., Koka, K., Thornton, J. L., Tollin, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+experimentally+induced+conductive+hearing+loss+on+spectral+and+temporal+aspects+of+sound+transmission+through+the+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">The effects of experimentally induced conductive hearing loss on spectral and temporal aspects of sound transmission through the ear.</a> Hearing Research. 272 (1-2), 30-41 (2011).</li>
<li>Liberman, M. C., Liberman, L. D., Maison, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+conductive+hearing+loss+leads+to+cochlear+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chronic conductive hearing loss leads to cochlear degeneration.</a> PLoS One. 10 (11), e0142341(2015).</li>
<li>Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conductive+hearing+loss+results+in+a+decrease+in+central+auditory+system+activity+in+the+young+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Conductive hearing loss results in a decrease in central auditory system activity in the young gerbil.</a> Laryngoscope. 109, 1359-1371 (1999).</li>
<li>Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+conductive+hearing+loss+on+gerbil+central+auditory+system+activity+in+silence%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of conductive hearing loss on gerbil central auditory system activity in silence.</a> Hearing Research. 155, 124-132 (2001).</li>
<li>Cook, R. D., Hung, T. Y., Miller, R. L., Smith, D. W., Tucci, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+conductive+hearing+loss+on+auditory+nerve+activity+in+gerbil%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of conductive hearing loss on auditory nerve activity in gerbil.</a> Hearing Research. 164, 127-137 (2002).</li>
<li>Albuquerque, A. A., Rossato, M., Oliveira, J. A., Hyppolito, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+anatomy+of+ears+from+guinea+pigs+and+rats+and+its+use+in+basic+otologic+research%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Otorhinolaryngology%22%5BJournal%5D)">Understanding the anatomy of ears from guinea pigs and rats and its use in basic otologic research.</a> Brazilian Journal of Otorhinolaryngology. 75, 43-49 (2009).</li>
<li>Li, P., Gao, K., Ding, D., Salvi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristic+anatomical+structures+of+rat+temporal+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Otology%22%5BJournal%5D)">Characteristic anatomical structures of rat temporal bone.</a> Journal of Otology. 10, 118-124 (2015).</li>
<li>Judkins, R. F., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+anatomy+of+the+rat+middle+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngology-Head+and+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical anatomy of the rat middle ear.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 117, 438-447 (1997).</li>
<li>Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+the+rat+middle+ear.+A+study+under+the+dissection+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Anatomica+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Anatomy of the rat middle ear. A study under the dissection microscope.</a> Acta Anatomica (Basel). 112, 346-352 (1982).</li>
<li>Albiin, N., Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E., Wirell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+supply+of+the+rat+tympanic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">The vascular supply of the rat tympanic membrane.</a> The Anatomical Record. 212, 17-22 (1985).</li>
<li>Li, P., Ding, D., Gao, K., Salvi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+surgical+approaches+to+ear+surgery+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Otology%22%5BJournal%5D)">Standardized surgical approaches to ear surgery in rats.</a> Journal of Otology. 10, 72-77 (2015).</li>
<li>Johansson, U., Hellström, S., Anniko, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+window+membrane+in+serous+and+purulent+otitis+media.+Structural+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology+%26+Laryngology%22%5BJournal%5D)">Round window membrane in serous and purulent otitis media. Structural study in the rat.</a> Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 102, 227-235 (1993).</li>
<li>Magnuson, K., Hellström, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+structural+changes+in+the+rat+tympanic+membrane+during+pneumococcal+otitis+media%5BTitle%5D)+AND+%22European+Archives+of+Oto-Rhino-Laryngology%22%5BJournal%5D)">Early structural changes in the rat tympanic membrane during pneumococcal otitis media.</a> European Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 251, 393-398 (1994).</li>
<li>Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+site+of+initial+production+and+transport+of+effusion+materials+in+otitis+media+serosa.+A+study+on+rat+middle+ear+cavity%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oto-Laryngologica%22%5BJournal%5D)">The site of initial production and transport of effusion materials in otitis media serosa. A study on rat middle ear cavity.</a> Acta Oto-Laryngologica. 93, 435-440 (1982).</li>
<li>Shen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffolds+for+tympanic+membrane+regeneration+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Scaffolds for tympanic membrane regeneration in rats.</a> Tissue Engineering Part A. 19, 657-668 (2013).</li>
<li>Wang, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+chronic+tympanic+membrane+perforation%3A+Ventilation+tube+with+mitomycin+C+and+dexamethasone%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+PediatricOtorhinolaryngology%22%5BJournal%5D)">Rat model of chronic tympanic membrane perforation: Ventilation tube with mitomycin C and dexamethasone.</a> International Journal of PediatricOtorhinolaryngology. 80, 61-68 (2016).</li>
<li>Stenfeldt, K., Johansson, C., Hellström, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+collagen+structure+of+the+tympanic+membrane%3A+collagen+types+I%2C+II%2C+and+III+in+the+healthy+tympanic+membrane%2C+during+healing+of+a+perforation%2C+and+during+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Otolaryngology--Head+%26+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">The collagen structure of the tympanic membrane: collagen types I, II, and III in the healthy tympanic membrane, during healing of a perforation, and during infection.</a> Archives of Otolaryngology--Head & Neck Surgery. 132, 293-298 (2006).</li>
<li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporary+conductive+hearing+loss+in+early+life+impairs+spatial+memory+of+rats+in+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Temporary conductive hearing loss in early life impairs spatial memory of rats in adulthood.</a> Brain and Behavior. 8, e01004(2018).</li>
</ol>

Os autores declaram nenhum conflito de interesses financeiroou não financeiro.

Descrevemos uma simples indução cirúrgica de CHL com verificação usando visualização de otoscópio e resposta comportamental de verniz em ratos. Aqui demonstramos o método em rato e anteriormente este método foi aplicado a gerbils e camundongos. O método pode ser facilmente adotado para outros roedores. A indução da CHL permite o estudo de uma forma sutil de perda auditiva que se manifesta em alterações corticais auditivas e achados comportamentais psicofísicos4,5,</sup...

A prevalência da perda auditiva em crianças e adultos é de aproximadamente 19,5%1 e 15,2%2, respectivamente. No entanto, aproximadamente 39,3% de todos os recém-nascidos com triagem auditiva anormal não recebem tratamento corretivo conforme relatado pelo Centers for Disease Control3. A perda auditiva é uma condição amplamente estudada, e o roedor é um modelo robusto para estudar distúrbios normais relacionados à audição e audição4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15. Distúrbios auditivos como perda auditiva condutiva (LE) levam a um aumento da depressão sináptica de curto prazo no córtex auditivo4,o que resulta em inclinações psicométricas mais rasas associadas a limiares de detecção de modulação de frequência 5. Modelos de perda auditiva condutora por remoção/deslocamento cirúrgico do malleus, punção da membrana tympanic (TM) ou tampão de ouvido são facilmente empregados e permitem a rápida indução do modelo de perda auditiva5,14 ,15,16,17,18. O objetivo do protocolo e método atual é demonstrar um modelo CHL simples e reproduzível em roedores.
O protocolo atual é barato (US$ 300 com todas as ferramentas) e prontamente alterado para diferentes atividades de pesquisa. O rato teve avaliações detalhadas da anatomia do ouvido médio19,20,21,22,23, abordagens cirúrgicas24, modelos em otitis media25, 26,27 e regeneração de perfuração TM16,17,18,28,29,30,tornando-se um modelo ideal para estudar perda auditiva. Aqui, um procedimento simples da indução de CHL é descrito com verificação pelo otoscope e pela avaliação com resposta do startle do aplauso no rato, que então pode ser usado para explorar sequelas adicionais da perda de audição. O procedimento de LE é induzido pela punção cirúrgica do TM. A verificação do procedimento de CHL é realizada por visualização de otoscópio para determinar a ausência do TM. A avaliação comportamental é realizada por um alto nível de pressão sonora (DB) (SPL) palmas. Este método foi aplicado previamente em uma variedade de roedores. É fácil de replicar, produz diferenças psicométricas robustas e mudanças nas respostas fisiológicas neurais4,5,16,17,18.

<table><tbody><tr><td>Luvas de látex, polivinil ou nitrilo</td><td>AMMEX</td><td></td><td>Use luvas sem pó Tesoura de</td></tr><tr><td>micromola de 8 mil (ver Fig. 1b)</td><td>RWD Life Science</td><td>S11035-08</td><td>8,0 cm de comprimento total, com aresta cortante de 3,5 mm ou micropinça semelhante. Pinças padrão com ação de mola serão suficientes</td></tr><tr><td>Otoscópio mini 3000</td><td>HEINE&nbsp;</td><td>D-008.70.120M</td><td>O otoscópio LED padrão será suficiente</td></tr> para <tr><td>ratos ou camundongos</td><td>JAX labs</td><td></td><td>Qualquer pequeno roedor&nbsp;</td></tr><tr><td>Gaiola para roedores pequenos</td><td>Tecniplast</td><td>1284L</td><td>Precisa de duas gaiolas para separar o roedor CHL do roedor ouvinte. Se os roedores estiverem em contato direto uns com os outros, eles se assustarão. Dimensões da gaiola 365 x 207 x 140 mm, área do piso: 530 cm2/82,15 pol2</td></tr></tbody></table>

indução cirúrgica simples da perda auditiva condutora com verificação usando a visualização do otoscópio e a resposta comportável do startle do clap no rato

Simple Surgical Induction of Conductive Hearing Loss with Verification Using Otoscope Visualization and Behavioral Clap Startle Response in Rat

A perda auditiva condutiva (CHL) é um comprometimento auditivo prevalente em seres humanos. O objetivo do protocolo é descrever um procedimento cirúrgico simples para induzir CHL em roedores. O protocolo demonstra CHL por punção de membrana tympanic. A verificação da cirurgia de CHL foi por exame de otoscópio e avaliação comportamental por resposta ao vermão, tanto replicável quanto confiável, e são métodos simples para demonstrar que a perda auditiva ocorreu. O procedimento simples de CHL é vantajoso devido à sua reprodutibilidade e flexibilidade a diferentes atividades na pesquisa de perda auditiva. As limitações da indução de LCH por abordagem cirúrgica estão associadas à curva de aprendizagem para realizar o procedimento cirúrgico e a confiança no exame audiológico. Induzir uma deficiência auditiva por CHL permite que um estude prontamente as manifestações neurais e os resultados comportamentais da perda auditiva.

O procedimento simples do CHL foi executado em 90 ratos e fora deste grupo 2 teve o sangramento significativo e 2 não teve a perda da audição o next day como avaliado pelo startle comportável do clap. Estes quatro ratos foram descartados. Os ratos devem ser descartados conforme descrito pelas razões da discussão devido a complicações. Induzir a punção e/ou o deslocamento/ou a remoção do malleus do TM(figura 2B)elicia CHL, que conduz às manifestações comportáv...

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer uma indução de perda auditiva condutora replicável por meio de punção cirúrgica da membrana de tympanic e verificação por visualização de otoscópio e avaliação comportamental por verino de gonorreia.

Indução cirúrgica simples da perda auditiva condutora com verificação usando a visualização do otoscópio e a resposta comportável do startle do clap no rato

Conductive hearing loss (CHL) is a prevalent hearing impairment in humans. The goal of the protocol is to describe a simple surgical procedure for ...

O objetivo geral deste estudo é estabelecer uma indução confiável de perda auditiva através de punção de membrana typanica cirúrgica e verificação por visualização otoscópio e avaliação comportamental por um início de bate-palmas. O objetivo da nossa prática é desenvolver um modelo para distúrbios condutores auditivos humanos. Demonstramos na prática, o procedimento cirúrgico de perda auditiva condutiva, que é uma simplificação na remoção de Malleus, o método para verificar a perda auditiva condutiva por visualização do otoscópio, e um simples início de palmas comportamental, que valida que ocorreu perda auditiva condutiva.A principal vantagem do procedimento que descrevemos são procedimentos não invasivos, verificação da perda auditiva condutiva por otoscópio e validação por surto de palmas. O presente estudo e procedimentos foram aprovados pelo comitê de ética em pesquisa animal e pela City University of Hong Kong, pela Universidade de Hong Kong e pelo Departamento de Saúde da Região Administrativa Especial de Hong Kong. Para o protocolo atual, escolhemos ratos, mas você pode escolher qualquer roedor.Pesar animais para garantir anestesia adequada para injeção de IP. Para anestesi

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

A aplicação de um paradigma clássico medo condicionado comportamental para auditivo protético investigação em ratos é descrito. Este paradigma fornece um mecanismo para a identificação de ambos, detecção de e discriminação entre, acústica distinta e estímulos elétricos com freqüência cardíaca como uma medida de resultado.

Determinação do Comportamento da Discriminação do estímulo acústico Par de estímulos auditivos e elétrica usando um condicionamento clássico e da freqüência cardíaca abordagem

Um método rápido e barato para a determinação do comportamento de ouvir parâmetros como limiares auditivos, deficiência auditiva ou percepções fantasmas (zumbido subjetivo) é descrito. Ele utiliza pré-pulso de inibição da resposta de alarme acústico e pode ser facilmente implementado num computador pessoal, utilizando um programável AD / DA-conversor e um sensor piezo.

A configuração de Baixo Custo para audiometria comportamental em roedores

Este vídeo demonstra um método para registrar as respostas auditivas do tronco encefálico (ABRs) de filhotes de ratos. Ele descreve as etapas para colocação de eletrodos, aplicação de estímulo sonoro e análise de processamento de sinal no tronco encefálico para avaliar as respostas neurais.

Registrando as respostas auditivas do tronco encefálico em um filhote de rato

Este vídeo demonstra o procedimento para implantar um dispositivo coclear em um camundongo surdo e aplicar estímulos elétricos para registrar as respostas auditivas do tronco encefálico. Esse procedimento permite entender os mecanismos básicos da audição elétrica e pode contribuir para avanços na tecnologia de implante coclear e na neurociência auditiva.

Registro de respostas auditivas do tronco encefálico evocadas eletricamente em um camundongo surdo

Revestimentos de eletrodos diferentes afetar o desempenho de gravação neural através de alterações nas propriedades eletroquímicas, químicas e mecânicas. Comparação de eléctrodos in vitro é relativamente simples, no entanto Comparação in vivo da resposta é tipicamente complicada pelas variações de distância entre os eléctrodos / neurónio e entre animais. Este artigo fornece um método robusto para comparar eletrodos de registro neurais.

Um Método para Sistemática de Eletroquímica e eletrofisiológica Avaliação do Neurais gravação Eletrodos

O implante coclear (IC) permitem ouvir pela estimulação elétrica direta do nervo auditivo. No entanto, a má frequência e intensidade resolução limita a qualidade de ouvir com CIs. Aqui descrevemos estimulação optogenética do nervo auditivo em ratos como uma estratégia alternativa para a investigação auditiva e desenvolvimento de futuros ICs.

A estimulação optogenética do nervo auditivo

Apresentamos uma técnica para administração localizada de drogas através da rota trans-timpânicas na cóclea. Entrega da droga através desta rota não iria interferir com a eficácia de anticâncer dos medicamentos quimioterápicos tais como a cisplatina.

Entrega de trans-timpânicas drogas para o tratamento da ototoxicidade

Este protocolo descreve métodos para gravar a resposta auditiva do tronco encefálico de filhotes pós-natal. Para examinar o desenvolvimento funcional de células exteriores do cabelo, o procedimento experimental da braçadeira do remendo de células inteiras gravação em células isoladas de cabelo exteriores é descrito passo a passo.

Auditivo de tronco encefálico e exterior cabelo célula célula inteira Patch Clamp gravação em ratos pós-natal

Este protocolo descreve o vestibulotóxicos cirúrgico de um rato, que é um método útil para o estudo do sistema vestibular.

Vestibulotóxicos cirúrgico do rato para estudar o sistema Vestibular

Modelos animais de implantes cocleares podem avançar o conhecimento das bases tecnológicas de tratamento de perda de audição neurossensorial permanente com estimulação elétrica. Este estudo apresenta um protocolo cirúrgico para agudo ensurdecedor e implante coclear de uma matriz de eletrodo em ratos, bem como a avaliação funcional com auditivo de tronco encefálico.

Cirurgia de implante coclear e gravações de resposta eletricamente evocado auditivo do tronco encefálico em camundongos C57BL/6

Apresentamos um protocolo para um modelo de perda auditiva induzida por ruído (PAIR) em camundongos. Para induzir a PAIR, desenvolvemos um dispositivo novo e simples usando plástico corrugado, uma gaiola armadilha para ratos e um alto-falante. O potencial evocado auditivo de tronco encefálico e a imagem de imunofluorescência foram empregados para avaliar a função auditiva e o dano às células ciliadas externas, respectivamente.

Condições experimentais modificadas para perda auditiva induzida por ruído em camundongos e avaliação da função auditiva e lesão das células ciliadas externas

Aprenda a induzir perda auditiva condutora em ratos por punção cirúrgica da membrana timpânica, com verificação por otoscopia e teste comportamental de sobressalto ao estalo. Este método padronizado permite estudar distúrbios auditivos humanos.

Indução cirúrgica simples da perda auditiva condutora com verificação usando a visualização do otoscópio e a resposta comportável do startle do clap no rato (Vídeo) | JoVE Journal

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